病毒学的几个概念：PFUMOITCID50
TCID50 MOI PFU意义及其换算
/viewthread.php?tid=7423&page=1Multiplicity of infection (MOI)The multiplicity of infection (abbreviated MOI) is the average number of phage per bacterium. The MOI is determined by simply dividing the number of phage added (ml added x PFU/ml) by the number of bacteria added (ml added x cells/ml). The average number of phage per bacterium in the population could be 0.1, 1, 2, 10, etc, depending upon how you setup the experiment.Although the MOI tells you the average number of phage per bacterium, the actual number of phage that infect any given bacterial cell is a statistical function. For example, if the MOI is 1, some cells will get infected with one phage but some cells may be infected with 0 phage and other cells infected with two phage. The proportion of cells in a population infected by a specific number of phage (n) can be calculatedfrom the Poisson distribution.PFU:plaque forming unit，空斑形成单位。
TCID50与moi值的计算.doc
实验四病毒感染力的滴定（TCID的测定）50一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。
二、测定病毒感染力的方法( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数致死量LD50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞半数细胞培养物感染量TCID50来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）的操作步骤四、TCID501、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。
2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。
3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。
（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。
6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法的计算方法五、TCID501、Reed-Muench两氏法CPE：Cytopathic effect距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.6-50）/（91.6-40）＝ 0.8lgTCID=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数50=0.8×(-1)+(-3)=-3.8=10-3.8/0.1mlTCID50含义：将该病毒稀释103.8接种100µl可使50%的细胞发生病变。
TCID50与moi值的计算
实验四病毒感染力的滴定（TCID的测定）50一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。
二、测定病毒感染力的方法( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数致死量LD50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞半数细胞培养物感染量TCID50来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）的操作步骤四、TCID501、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。
2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。
3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。
（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。
6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法的计算方法五、TCID501、Reed-Muench两氏法CPE：Cytopathic effect距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（）/（）＝lgTCID=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数50=×(-1)+(-3)==TCID50含义：将该病毒稀释接种100µl可使50%的细胞发生病变。
2、Karber法=L-dlgTCID50L：最高稀释度的对数D：稀释度对数之间的差S：阳性孔比率总和=-1-1× =lgTCID50=TCID50含义：将该病毒稀释接种100µl可使50%的细胞发生病变。
TCID50与moi值的计算
实验四病毒感染力的滴定（TCID的测定）50一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。
二、测定病毒感染力的方法( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数致死量LD50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50（50% tissue culture infective dose)：用细半数细胞培养物感染量TCID50胞来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）的操作步骤四、TCID501、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。
2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。
3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。
（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。
6、结果的计算，按Reed-Muench 两氏法或Karber 法 五、TCID 50的计算方法 1、Reed-Muench 两氏法CPE ：Cytopathic effect距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.6-50）/（91.6-40） ＝ 0.8lgTCID 50=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数 =0.8×(-1)+(-3) =-3.8 TCID 50=10-3.8/0.1ml含义：将该病毒稀释103.8接种100µl 可使50%的细胞发生病变。
TCID50-MOI-PFU意义及其换算
Multiplicity of infection (MOI)The multiplicity of infection (abbreviated MOI) is the average number of phage per bacterium. The MOI is determined by simply dividing the number of phage added (ml added x PFU/ml) by the number of bacteria added (ml added x cells/ml). The average number of phage per bacterium in the population could be 0.1, 1, 2, 10, etc, depending upon how you setup the experiment.Although the MOI tells you the average number of phage per bacterium, the actual number of phage that infect any given bacterial cell is a statistical function. For example, if the MOI is 1, some cells will get infected with one phage but some cells may be infected with 0 phage and other cells infected with two phage. The proportion of cells in a population infected by a specific number of phage (n) can be calculatedfrom the Poisson distribution.PFU:plaque forming unit，空斑形成单位。
TCID50与moi值的计算
实验四病毒感染力的滴定（TCID的测定）50一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。
二、测定病毒感染力的方法( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数致死量LD50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞半数细胞培养物感染量TCID50来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）的操作步骤四、TCID501、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。
2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。
3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。
（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。
6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法的计算方法五、TCID501、Reed-Muench两氏法CPE：Cytopathic effect距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.6-50）/（91.6-40）＝ 0.8lgTCID=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数50=0.8×(-1)+(-3)=-3.8=10-3.8/0.1mlTCID50含义：将该病毒稀释103.8接种100µl可使50%的细胞发生病变。
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实验四病毒感染力的滴定（TCID的测定）50一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。
二、测定病毒感染力的方法( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数致死量LD50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞半数细胞培养物感染量TCID50来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）的操作步骤四、TCID501、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。
2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。
3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。
（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。
6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法的计算方法五、TCID501、Reed-Muench两氏法CPE：Cytopathic effect距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.6-50）/（91.6-40）＝ 0.8lgTCID=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数50=0.8×(-1)+(-3)=-3.8=10-3.8/0.1mlTCID50含义：将该病毒稀释103.8接种100µl可使50%的细胞发生病变。
几个病毒学的基本概念MOI、TCID50、PFU
几个病毒学的基本概念: MOI、TCID50、PFUMult iplicity of infection (MOI)The multiplicity of infection (abbreviated MOI) is the average number of phage per bacterium. The MOI is determined by simply dividing the number of phage added (ml added x PFU/ml) by the number of bacteria added (ml added x cells/ml). The average number of phage per bacterium in the population could be 0.1, 1, 2, 10, etc, depending upon how you set up the experiment.Although the MOI tells you the average number of phage per bacterium, the actual number of phage that infect any given bacterial cell is a statistical function. For example, if the MOI is 1, some cells will get infected with one phage but some cells may be infected with 0 phage and other cells infected with two phage.The proportion of cells in a population infected by a specific number of phage (n) can be calculated from the Poisson distribution.PFU:plaque forming unit，空斑形成单位。
病毒滴度测定
病毒滴度测定有很多名词都用来描述病毒溶液的滴度。
1． VP（病毒颗粒）或OPV（光学颗粒单位）2． GTU（基因转移单位）或转导颗粒（BFU即蓝点形成单位，与GTU类似）3． PFU（空斑形成单位）4． TCID50（50%组织培养感染剂量）不同的概念缘于不同的滴度测定方法，这些方法包括2类：物理方法（VP）和生物学方法（GTU、PFU、TCID50）。
1．测定VP的方法是测定病毒颗粒在260nm处的吸光度（病毒DNA和蛋白的总吸光度中主要为DNA），1个OD值相当于1.1×1012个病毒颗粒。
用这种方法进行测定在各个实验室中都较为稳定，但它不能区分感染性和缺陷性病毒颗粒。
因此这种方法只能提供病毒的量，至于质，比如是否含有缺陷性颗粒则没有考虑在内。
2． GTU则测定感染后能表达报告基因的细胞数量。
这个过程中，病毒将DNA转入细胞，在一个感染周期结束前立即测定表达报告基因的细胞。
如果重组腺病毒含有报告基因如GFP 或LacZ等则可以用这种方法进行测定，病毒保存液通常不用这种方法来进行描述。
3． PFU是测定腺病毒滴度最早的标准方法，主要测定单层细胞培养中病毒裂解空斑的形成。
空斑形成需要许多个感染周期，得到最终结果通常需要三个星期。
一般来说，这种方法得到的结果很少能在其它实验室重复，即使在同一实验室内，不同技术员操作也很少能得到相同的结果。
4． TCID50已被用于测定许多种病毒的滴度，但以前并不用于腺病毒。
病毒稀释液与细胞在96孔板进行培养，然后监测每孔是否CPE。
TCID50方法相对PFU方法而言有几个优点，如速度是PFU的2倍，结果更具预料性，在不同操作个体间也更稳定。
所有生物学方法所得到的结果在不同实验室之间往往有所差异，它主要与病毒感染方法有关。
许多因素如加入的病毒储存液的量、管子的类型、培养的时间、细胞和培养液的量等都会影响结果。
最近，出现了两种测定病毒滴度的改良方法。
一种是用更小体积的病毒液进行感染并在感染过程中不断晃动培养板（Mittereoler等，1996）；另一种方法则在感染时将培养板进行离心（1000 RCF90分钟）（Nyberg-Hoffman等，1997）。
病毒学的基本概念及研究方法
病毒学的基本概念及研究方法病毒是一种微生物体，其体积非常小，需要显微镜才能观察到。
病毒不是真正的细胞，它没有细胞器，只有一个包覆着遗传物质的蛋白质壳。
病毒体外没有生命活动，只有侵入寄主细胞后才能复制自身。
由于病毒的特殊性质，研究病毒需要特殊的实验方法。
本文将从病毒学的基本概念和研究方法两个方面进行探讨。
一、病毒学的基本概念1. 病毒的结构病毒的结构非常简单，只有一个蛋白质壳和遗传物质。
壳由蛋白质构成，包裹着遗传物质，起到保护和传递遗传物质的作用。
遗传物质可以是 DNA 或 RNA，不同的病毒遗传物质的形式有所不同。
2. 病毒的分类病毒根据遗传物质的类型、壳的类型、宿主范围、病原性等特征进行分类。
常见的病毒有 DNA 病毒和 RNA 病毒两大类，分别以 DNA 或 RNA 作为遗传物质。
还有单链病毒和双链病毒之分。
3. 病毒的传播途径及病原性病毒可以通过空气、飞沫、血液、性接触等途径传播。
在这些传播途径中，病毒能够对宿主产生不同的危害，例如感冒、流感、艾滋病、乙肝等。
二、病毒学的研究方法病毒学的研究方法主要分为病毒培养、病毒传染实验和病毒分离实验。
以下将对这三种方法进行介绍。
1. 病毒培养病毒培养是病毒学研究的一项重要基础。
常见的病毒培养方法主要有动物体内培养、动物体外培养和细胞培养。
其中，细胞培养方法是目前应用广泛的一种病毒培养方法。
在细胞培养中，研究人员将病毒接种到特定的细胞上，通过观察细胞与病毒的交互反应，了解病毒的传播和感染机制。
2. 病毒传染实验病毒传染实验是一种通过感染实验动物或人体细胞，观察病毒的传递和感染机制的实验。
该实验可以研究病毒的感染过程及其与宿主细胞的相互作用，丰富病毒学的基础理论和实践应用。
该实验需要特别注意安全问题，以确保实验者的身体健康。
3. 病毒分离实验病毒分离实验是一种通过分离、纯化和鉴定病毒的实验。
它可以帮助研究人员了解病毒与宿主细胞的关系，轨迹受到求知者的鉴定，从而了解病毒的分类、结构和生命特征，在疾病预防和治疗方面有较大的应用价值。
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*** 病毒学的几个概念：PFU MOI TCID50
PFU:plaque forming unit ，空斑形成单位。
感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml 。
由于测定pfu 往往重复性较差，因此近些年许多研究又开始采用TCID50 方法来计算病毒的感染单位。
因此建议也可使用TCID50 法。
MOI :multiplicity of infection ，感染复数。
传统的MOI 概念起源于噬菌体感染细菌的研究。
其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。
噬菌体的数量单位为pfu 。
一般认为MOI 是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell 。
后来MOI 被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量
的比值。
然而，由于病毒的数量单位有不同的表示方式，从而使MOI 产生了不同的含义。
能产生细
胞裂解效应的病毒例如单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu 表示病毒数量，因此其MOI 的含义与传统的概念相同。
传统意义上的MOI 的测定，其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件，遵循Poisson 分布规律，可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数（MOI ）。
其公式为：
P = 1- P(0) ,P(0) = e-m 或m = -InP （0）。
其中：
P 为被感染细胞的百分率
P(0) 为未被感染细胞的百分率
m 为MOI 值
例如，如果要感染培养皿中99% 的培养细胞，则：
P(0) = 1% = 0.01
m = -In(0.01)= 4.6 pfu/cell 。
TCID50 Protocol ：
1：制备96 孔板单层细胞
2：将病毒做系列稀释，横向接种单层细胞板，每稀释度重复 3 孔
3：每日观察细胞病变，记录高于50 和低于50％病变孔的病毒稀释度，
4：计算比距，获得TCID50
计算比距：
（高于50％的病变率－50％）/（高于50％病变率－小于50％病变率）＝比距；
比距与接近50% 病变率的病毒的稀释度的指数相加，就获得了指数。
比如：比色计算或者显微镜观察病毒的TCID50 在10 的负7 和8 次方之间，那么，指数－8 与比距相加，获得的新的指数，就是TCID50 的指数，TCID50=10 的-7.几次方
TCID50 与PFU 换算: PFUs＝0.7 ×TCID50 的滴度。