CpG ODN的基本研究
CpG ODN协同小鼠肝癌细胞裂解物对小鼠原位移植性肝癌的抑制作用研究
doi：10.3969/j.issn.l000484X.2020.23.006CpG ODN协同小鼠肝癌细胞裂解物对小鼠原位移植性肝癌的抑制作用研究①孙鹏②李欢欢王卫芳窦瑶周晓晶(长春中医药大学临床医学院，长春130117)中图分类号R730.51文献标志码A文章编号1000-484X（2020）23-28424）4[摘要]目的:研究CpG ODN与小鼠肝癌细胞（H22）裂解物（TCL）联用对小鼠原位移植性肝癌的抑制作用及机制初探。
方法:制备H22细胞裂解物和建立BALB/c小鼠原位移植性肝癌模型。
将模型鼠随机分为四组PBS、TCL、CpG ODN和CpG ODN+TCL,观察各组小鼠肿瘤生长情况及小鼠的生存期。
采用细胞毒性淋巴细胞（CTL）杀伤实验观察各组小鼠淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤情况。
用ELISA方法检测CpG ODN协助TCL诱导Th1型细胞因子分泌水平。
结果:与其他组相比CpG ODN+TCL明显抑制了肿瘤生长、延长了荷瘤鼠的生存期（P<0.05）o体内外实验显示，CpG ODN能协同TCL刺激小鼠产生Th1型细胞因子和诱导CTL反应。
结论：以CpG ODN为佐剂的TCL具有抑制小鼠原位移植性肝癌的作用，且这种作用可能由于CpG ODN协同TCL诱导小鼠产生的Th1型细胞因子和CTL反应实现的。
[关键词]肿瘤细胞裂解物;免疫刺激性寡聚脱氧核苷酸;肝癌;Thl型免疫反应Effect of CpG ODN on assisting TCL from liver cancer cells to induce immune response against orthotopic-transplantated liver cancer in miceSUN Peng,LI Huan-Huan,WANG Wei-Fang,DOU Yao,ZHOU Xiao-Jing.Clinical Medical College,Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun130117,China[Abstract]Objective:To study the effect of CpG ODN on assisting TCL from H22cells to induce immune response against or-thotopic-transplantated liver cancer in mice and to explore the mechanism.Methods:We prepared TCL from H22cells and built BALB/c mice with orthotopic-transplantated liver cancer.The model mice were injected divided into PBS group,TCL group,CpG ODN group and CpG ODN+TCL group randomly.The mice were monitored for tumor growth and recoding the survival.CTL killing experiment was used to observe the killing of liver cancer cells by lymphocytes in each group.ELISA was used to detect CpG ODN assisting TCL to induce Th1cytokine secretion level.Results:Compared with other groups,CpG ODN+TCL significantly inhibited the growth of orthotopic transplantation liver cancer cells and prolong survival in mice（P<0.05）.In vivo and vitro experiments,CTL response and Th1-biased cytokine also induced by CpG ODN adjuvanted TCL.Conclusion:TCL with CpG ODN as an adjuvant has the effect of inhibiting orthotopic liver cancer in mice,and this effect may be realized by CpG ODN and TCL-induced Th1cytokine and CTL response in mice.[Key words]TCL；CpG ODN;Liver cancer；Th1immune response肝癌是最常见的肝脏原发恶性肿瘤，其致死率极高［1］。
卡介菌多糖核酸
卡介菌多糖核酸卡介菌多糖核酸的研究正在不断拓展，其在免疫学领域的重要性逐渐被人们认识和重视。
本文将围绕卡介菌多糖核酸的结构、功能和应用展开阐述。
卡介菌多糖核酸是一种复杂多糖物质，由丝状DNA和酸性多糖组成。
其主要功能是参与机体的免疫应答过程，并发挥着重要的生物学作用。
通过模式识别受体的识别，卡介菌多糖核酸能够启动机体的先天免疫反应，促进免疫细胞的活化、增殖和分化等。
卡介菌多糖核酸的结构非常复杂，它主要由核苷酸和糖组成。
其中，核苷酸是生命体内的基本遗传信息传递单元，包括脱氧核苷酸（DNA）和核糖核苷酸（RNA）两种。
糖则是构成核酸的另一个基本组成成分，包括脱氧核糖和核糖两种。
卡介菌多糖核酸中的核苷酸和糖通过磷酸酯键连接形成链状结构，进一步组装成二级和三级结构。
卡介菌多糖核酸在免疫学研究中起到了重要的作用。
首先，它能够通过与机体免疫系统的相互作用来增强机体的免疫力。
研究表明，卡介菌多糖核酸能够激活树突状细胞和巨噬细胞等免疫细胞，促进抗原递呈和免疫细胞的活化，从而增强机体对病原体的防御能力。
同时，卡介菌多糖核酸还可以刺激免疫细胞产生多种细胞因子，如干扰素、肿瘤坏死因子等，进一步调节机体的免疫应答。
此外，卡介菌多糖核酸还具有一定的抗肿瘤活性。
研究发现，卡介菌多糖核酸可以直接作用于肿瘤细胞，抑制其生长和增殖，诱导肿瘤细胞凋亡。
此外，它还可以通过增强机体的免疫应答来抑制肿瘤的转移和复发。
因此，卡介菌多糖核酸被认为具有潜在的抗肿瘤治疗价值。
卡介菌多糖核酸的应用正在不断扩展。
目前，已有一些卡介菌多糖核酸药物被开发出来，并在临床上得到应用。
例如，卡介菌多糖核酸类似物（CpG ODN）被广泛研究作为免疫佐剂，被用于治疗病毒感染、肿瘤、过敏症等免疫相关疾病。
此外，卡介菌多糖核酸还可以作为疫苗的辅助成分，增强疫苗的免疫效果。
总之，卡介菌多糖核酸作为一种重要的免疫调节剂，在免疫学研究和临床应用中发挥着重要的作用。
近年来，科学家们对卡介菌多糖核酸的研究取得了许多进展，但仍然有很多问题需要进一步深入研究，以进一步揭示卡介菌多糖核酸的机制和应用潜力。
CpG ODN在治疗呼吸道变应性疾病中的研究进展
、
诊断及治疗等方面存在广泛 的相似或相 同之处。其 严重 影 响 了人 们 的生 活质 量 ， 已成 为 亟 待 解 决 的 全 球性 健康 问题 。变 应性 疾 病 主 要 的治 疗 方 法为 药 物 治疗 ， 现有治 疗 方 法 的 不 足 和 变 应 性 疾 病 发 病 率 但 的逐 年增 高 ， 给变应 性疾 病 的治 疗 带来 了新 的挑 战 ， 细胞 和分 子生 物学 的迅 猛 发 展 为 治疗 呼 吸道 变 应 性 疾病 提供 了新 的治 疗靶 点 和方 法 。１９ ９ ５年 ， ｒ ｇ等 Ｋｉ ｅ 发现不 仅 细菌 Ｄ Ａ， Ｎ 而且 某 些 人 工 合 成 的寡 聚脱 氧 核苷酸均具有免疫刺激作用 ， 这些具有免疫刺激 活 性 的 Ｄ Ａ都具 有 共 同 的特征 序 列 ， Ｃ Ｇ基序 。对 Ｎ 即 ｐ 含 Ｃ Ｇ基 序 的寡 聚脱 氧核苷 酸 （ ｙｏｉｅ— ｈｓｈｔ ｐ Ｃ ｔｓ ｎ ｐ ｏｐ ａ ｅ ｇ ａｉｅｏ ｇｄ ｏｙ ｕ ｌ ｔ ｅ Ｃ Ｇ Ｏ Ｎ） 研 究 引 ｕ ｎｎ ｌ ｏｅｘ ｎ ｅｅ ｉ ， ｐ Ｄ 的 ｉ ｏｄ 起 了人 们极 大 的兴趣 ， 在 治疗 感 染 性 疾 病 、 其 肿瘤 和 变应 性 疾病 中显 示 出 良好 的应 用前 景 。
Ｉ Ｉ Ａ ＭＥ Ｉ Ａ Ｏ Ｒ Ａ － Ｎ Ｎ Ｄ Ｃ Ｌ Ｊ Ｕ Ｎ Ｌ Ｉ Ａ
CpG ODN抑制EB病毒复制的体外研究的开题报告
CpG ODN抑制EB病毒复制的体外研究的开题报告
题目：CpG ODN抑制EB病毒复制的体外研究
背景与意义：
微生物ODN（oligodeoxynucleotides）是指由5'-3'连接的寡聚核苷酸，在免疫应答与炎症中具有重要的调节作用，并且被广泛应用于体内免疫治疗。
研究表明，特定的阿德诺酸脱氨酶（ADARs）和RNA后转录修饰（RNA editing）介导EB病毒免疫逃逸。
因此，我们预计CpG ODN（含有CpG二核苷酸序列的ODN）能够抑制EB病毒复制，从而减少免疫逃逸的现象。
研究目的：
本研究旨在探究CpG ODN对EB病毒复制的影响，以期为EB病毒的免疫治疗提供理论依据。
研究内容：
1. 确定EB病毒复制的细胞模型（如LCL等）。
2. 提取EB病毒RNA，并筛选出ADARs和RNA后转录修饰的关键区域。
3. 合成含有CpG二核苷酸序列的ODN，以四氯化碳和技术级钠盐为媒介将ODN 导入细胞。
4. 观察CpG ODN对EB病毒复制的作用，并评估其效果。
5. 利用荧光定量PCR技术检测EB病毒RNA的表达。
6. 对研究结果进行统计学分析并探究其机制。
期望结果：
CpG ODN可以抑制EB病毒复制，从而减少免疫逃逸的现象，为EB病毒的免疫治疗提供理论依据。
CpGODN的免疫作用与哮喘的治疗
垦丛匡堂壁咝墨箕坌堑！！！！生箜；！鲞笙！塑曼！生墨！！巫！墨！！里！！！逗呈坚型兰生！壁２：！！！！：∑！！：！！：丛！：！ＣｐＧＯＤＮ的免疫作用与哮喘的治疗黄静杨远林勇早年发现，肿瘤患者注射天然细菌制品后可以明显减轻其症状，后来证实是细菌ＤＮＡ介导了抗瘤作用。
随后的多项研究也发现了细菌ＤＮＡ的免疫刺激作用口］。
细菌ＤＮＡ特定序列中存在非甲基化的ＣｐＧ二核苷酸序列（几率为１／１６）可激活机体免疫系统产生免疫应答；而哺乳动物ＤＮＡ中存在此序列的几率仅１／６４，且多以甲基化状态为主，因此不会激活自身免疫口］。
含非甲基化胞嘧啶一鸟嘌呤的寡核苷酸链（ＣｐＧｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｌｅｏｔｉｄｅｓ，ＣｐＧＯＤＮ）又称免疫刺激序列（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ＩＳＳ）或ＣｐＧ基序（ＣｐＧｍｏｔｉｆｓ），是模仿细菌的此ＤＮＡ序列而合成的，它能够刺激机体产生多种细胞因子及表面黏附分子，诱导细胞及体液免疫，在治疗免疫性疾病、肿瘤及疫苗研究等方面有独特价值。
１ＣｐＧ的基本结构及种类ＣｐＧ基本骨架为５＇－ＰｕＰｕＣＧＰｙＰＹ一３’，其中核心碱基ＣＧ为该序列免疫刺激活性所必须，如果将之倒转或替代，其免疫活性将丧失口］。
该基序免疫活性有种属特异性：５，＿ＧＴＣＧＴＴ一３’可刺激包括人在内的多个物种淋巴细胞增殖，如羊、马、猪、狗、猫、鸡等，而５，＿ＧＡＣＧＴＴ一３７则只对近交系兔和鼠有作用［１］。
另有研究发现，不同结构的Ｄ型和Ｋ型ＣｐＧＯＤＮ可刺激人体外周血单核细胞产生不同免疫效应：Ｄ型作用于类浆细胞产生ＩＦＮ—ａ、作用于单核细胞促进活性树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌ，ＤＣ）功能的成熟、作用于自然杀伤细胞（ｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌ，ＮＫｃｅｌｌ）分泌ＩＦＮ—ｙ；Ｋ型刺激Ｂ细胞及单核细胞增殖和分泌ＩｇＭ，ＩＬ一１０和（或）ＩＩ。
－６Ｌ４Ｊ。
２ＣｐＧＯＤＮ的免疫作用ＣｐＧＯＤＮ模仿细菌ＤＮＡ片段可被天然免疫系统识别，引起后续免疫反应。
新型放射增敏剂CpG ODN107在小鼠体内的药代动力学研究
但是 ，对 于外界刺 激诱 导 自噬形成 过程 中 ，ＶＰ Ｓ ３ ４所起 的调节 作用 尚未完全 阐 明。
我们研究 发现 ，在 外界 的刺激 所诱导 细胞 自噬形成 过程 中，热休克蛋 白 ７ ０（ ｈ ｅ ａ ｔ ｓ ｈ ｏ ｃ ｋ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ，ＨＳ Ｐ ７ ０ ）起到了很关键的作用。在外界 的刺激下 ，ＨＳ Ｐ ７ ０ 被 乙酰化修饰 ，乙酰化修饰 （ 尤其在 １ ５ ９ 位）后 的 Ｈ Ｓ Ｐ ７ ０ 不仅能够与 Ｖ Ｐ Ｓ ３ ４ 一 Ｂ ｅ ｄ ｉ ｍ 复合体结合 ，增强该复合体的稳定性 ，
除加术后放射治疗。但是 ，由于大多数胶质瘤对放射线不敏感或者放射治疗一段时问后对放射 线 的敏感性降低 ，即使提高照射剂量仍不 能取得满意疗效 。因此 ，研制高效 的放射增敏剂 ，增
加 射线 对肿 瘤细 胞 的杀伤作 用 ，对提 高脑胶 质 瘤 的治 愈率 、延 长 生存 期 具有 重 要 意义 。含 １ ２个 碱 基 的硫代 寡核 苷酸 Ｃ ｐ Ｇ Ｏ ＤＮ１ ０ ７（ Ｃ ｐ Ｇ ｏ ｌ ｉ ｇ ｏ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｏ ｔ ｉ ｄ ｅ １ ０ ７ ，５ ’ 一 Ｔ ３ ’ ）是本
体 内的药代动力学特征。 方法 ：采用三重 四级杆 串联质谱测定不 同样本 中的药物浓度，用 Ｄ Ａ ｓ ３ ． ０软件计算主要药
代 动力 学参 数 。 结果 ：小 鼠单 次静脉 注射三个 剂 量 （ ２ ． ５ 、５ 、１ ０ ａ ｒ ｇ ／ ｋ ｇ ）Ｃ ｐ Ｇ Ｏ Ｄ Ｎ１ ０ ７ 后 ，经 Ｄ Ａ Ｓ软件进 行 房 室模型 拟合 ，结果表 明 Ｃ ｐ Ｇ Ｏ Ｄ Ｎ１ ０ ７在小 鼠体 内药 动学过 程 符合 静脉 注射 的三 室 模 型 ；统计 矩
疫苗佐剂CpG ODN的研究进展
疫苗佐剂CpG ODN的研究进展摘要：CpG ODN是指含有非甲基化的胞嘧啶和鸟嘌呤二核苷酸为核心序列的核苷酸序列，人工合成的CpG ODN是根据细菌DNA的结构特性及免疫特性而定的。
CpG ODN通过TLR9可以直接激活B细胞和树突细胞引起直接的Th1型免疫反应。
CpG ODN因其可以提高疫苗的反应速度，增强疫苗的反应强度以及免疫耐受力而被认为是一种有效的佐剂。
例如CpG ODN联合OV A免疫可以明显的提高A V A的抗感染能力。
CpG ODN联合多种疫苗均可以增强相应的体液免疫和细胞免疫，同时增强灵长类和啮齿类对病毒的抵抗能力。
临床试验证明CpG ODN是一种对人类安全有效的佐剂，可以增强对疫苗的特异性反应。
关键词：CpG ODN；作用机制；佐剂；黏膜佐剂Abstract：Synthetic oligodeoxynucleotides (ODN) containing unmethylated CpG motifs mimic the immunostimulatory activity of bacterial DNA. CpGODN directly stimulate B cells and plasmacytoid dendritic cells (pDC),promote the production of Th1 immune responses through Toll-like receptor 9. CpG ODN are finding use as vaccine adjuvants,where they increase the speed,magnitude and duration of vaccine-specific immune responses. For exampl e, CpG ODN significantly prolong the protection induced by A V A (Anthrax Vaccine Adsorbed). Co-administering CpG ODN with a variety of vaccines has improved the resultant humoral and/or cellular immune responses, culminating in enhanced protective immunity in rodent and primate challenge models. Ongoing clinical studies indicate that CpG ODN are safe and well-tolerated when administered as adjuvants to humans, and that they can support increased vaccinespecific immune responses.Key Words：CpG oligodeoxynucleotides；Mechanism；Adjuvant；Mucosal adjuvant 免疫佐剂概念最早在1924年由Ramon提出，至今已有近百年的深入研究，但是临床应用的疫苗佐剂还仅限于几种如弗氏佐剂，铝佐剂等，人用疫苗佐剂主要还是铝胶佐剂。
CpG—ODN加强树突状细胞疫苗治疗小鼠膀胱肿瘤的实验研究
Ａｂ ｔａ ｔＯｂｅｔ ｅ Ｔｏｉｖ ｓｉａｅｗｈ ｔ ｅ Ｇ ｉｏ ｅ ｘ ｎ ｃｅ ｔ ｅ（ Ｇ－ ｓｒｃ ： ｊｃｉ ｖ ｅ ｔ ｔ ｅｈ ｒＣｐ ｏＩ ｄ ｏ ｙ ｕ ｌｏｉ Ｃｐ ＯＤＮ）ｃｎａｆｃ ｈ ｍｍｕ ｏ ｈ ｒｐ ｕｉ ｆｅｔ ｆ ｎ ｇ ｇ ｄ ａ ｆ ｔ ｅｉ ｅ ｔ ｎ ｔ ｅａ ｅ ｔ ｅｆｃｓｏ ｃ
Ｃ ８ 、 Ｄ ６表 达 水 平 ， 合 治 疗 组 略 高 于 Ｃ Ｇ （Ｄ 组 ， 异 无 统 计 学 意 义 （ ０ ０ ）但 均 显 著 高 于 Ｐ Ｓ对 照 组 和 Ｄ Ｄ ０Ｃ ８ 联 ｐ －） Ｎ 差 Ｐ＞ ． ５ ， Ｂ Ｃ疫 苗 组
（ ＜ ００ ） Ｐ ． ５ 。结 论 Ｃ Ｇ Ｏ ｐ ＤＮ 可 增 强 负载 肿 瘤 抗 原 的 Ｄ Ｃ疫 苗 对 膀 胱 肿 瘤荷 瘤 小 鼠 的 抑 瘤 效 应 和 生 存 期 延 长作 用 ， 机 制 主要 其
（ ｐ ｒｍｅ ｔ Ｊ Ｕｒｌｇ Ｉ ｓｉｕｅｏ ｕ ｇｅｙＲｅｅ ｒｈ， ｐｉｇ Ｈｏ ｐ ｔ ｌ Ｄｅ ａ ｔ ｎ ｏｏ ｙ， ｎ ｔ ｔ ｆ Ｓ ｒ ｒ ｓａ ｃ Ｄａ ｎ ｓ ｉａ ， ｏ ｔ
Ｔｈｉｄ ｉｉａｒ ｅ ｃ ｌ Ｕｎｉ ｒ ｉｙ ， ｏｎ ｒ Ｍ ｌｔ ｙ Ｍ ｄｉ ａ ｖｅ ｓｔ Ｃｈ ｇｑｉ ００ ２， ｎｇ ４ ０４ Ｃｈｉ ｎａ）
Ｓ ｕ ｎ ｎｃ ｍ ｅ ｆＤＣ ａ ｃｎ ｏ ｍ ｕ ｉ ａ ｅ ａ ｃ ｎ ｍ ａ ｂｙＣｐＧ ｌｇ ｄ Ｏ ｙ ｃｅ ｔｄ ｔ ｄｙｏｎ ｅ ｈａ ｅ ｎｔｏ ｖ ｃ ｉｅ ｔ ｒｎｅｂｌｄｄ ｒｃ ｒ ｉ ｏ ｏｉ Ｏ ｅ ｘ ｎｕ ｌＯ ｉｅ
Ｎ Ｉ Ｚｈｉｌｎ， Ａ Ｎ Ｇ ｉｈ Ｈ ＵＯ ｅ — ａｎ， ｔａ１ Ｅ ｉ ＬＩ Ｐｅ — ｅ， Ｗ ｎ ｑｉ ｅ ．
CpG ODN诱导人PBMC对结肠癌细胞体外杀伤作用的研究
中 图分 类 号 ：７ ５３ ５ Ｒ ３ ．
Ａｎ ｉ ｒｏ ｆｅｔｏ ｕ ｎ Ｐ Ｍ Ｃ ｎ ｃ ｌｎ ｃ ｒ ｉｏｌ ｅｌ ｉｄ ｃｄ ｂ Ｇ ｔｕｎ ｒｅ ｃ ｆｈ ｍａ Ｂ ｔ ｏ ｏｏ ａ ｃｎ ｉａ ｃｌ ｎ ｕ ｅ ｙ Ｃｐ ＯＤＮ ｌ ｓ
Ｃ Ｇ Ｏ Ｎ Ｉ－ 与肿瘤抗原共 同刺激能有效提高人 Ｐ ＭＣ的杀伤活性 。 ｐ Ｄ 、 ２ Ｌ Ｂ
文 献标 识 码 ： Ａ
删 Ｇ 嘴 ， ｉ－ｏｇ， ｌ ｎ －ｕ． Ｈ Ｊｎｌｎ Ｊａ Ｍｉｇ ｋ
对肿瘤 细胞的杀伤活性 。结果 以 Ｃ ＧＯ Ｎ刺激人 Ｐ ＭＣ 的细胞 ， ｐ Ｄ Ｂ 组 其对 肿瘤 细胞的杀伤活性 明显高于对照组 （ Ｐ＜
（ｈ ｅｏｄＨ ｓｔ ｉｎＵ ｉｒｔ ， ｈｎｃｕ ３０ １ Ｃ ｉ ） ｔ Ｓｃｎ ｏ ｉｌｆＪ ｉ ｎ ｅ ｉ Ｃ ａｇｈｎ １０ ４ ， ｈ ａ ｅ ｐａ ｏ ｌ ｖ ｓｙ ｎ
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ｃ ｎ ｅ ｅｌ ． ｅｈ ｄ Ｓ ｍｕ ａｅＰ ＭＣ ｆ ｅ ｌ ｄ ｌ ｎ ａｉｎｓｓ ｆ ｒ ｄｆｏ ｃ ｃ ｒ ｉ ｕ ｒ ｎ ｇ ｎ Ｉ － ＴＣ Ｇ Ｏ ｄ ａ ｃ ｒｃ ｌ Ｍ ｔ ｏ ｓ ｓ ｉ ｔ ｌｔ Ｂ ｓｏ ｈ ａｔ ａ ｕｔ ａ ｄ ｐ ｔ ｔ ｕ ｅｅ ｒｍ ａ ｅ ｔ ｍｏ ｔ ｅ ．Ｌ ２ ｏ ｐ ＤＮ ａ ｈ ｓ ｅ ｎ ｗ ｈｔ ａｉ ｎ ｄ ｔｒ ｎ ｈ ｅｒ ｉ ｉｇ ａ ｔ ｉ ｔ ｈｅ ｃ ｃ ｒｃ ｌ ． ｓ ｌ Ｔ ｅｃ ｌ ｐｏｉ ｒｔ ｎ ａ ｔ ｔ ａｕ ｆ Ｃ Ｇ Ｏ ｔ ｌｔ ｒｕ ｓ ｉｈ ｅ ｍｉｅｔ ｉ ｋｌ ｎ ｃｉ ｔ ｏｔ ａ ｅ ｅ ｓ Ｒｅ ｕ ｔ ｅ ｌ ｖｙ ｎ ｌ ｓ ｈ ｅ ｒｌ ｅａｉ ｃｉ ｙ ｖ ｌｅｏ ｏ ｆ ｏ ｉ ｖ ＤＮ ｓ ｍｕ ａｉ ｇ ｏ ｐｉ ｈ ｇ — ｉ ｇ ｎ
CpG-ODN的免疫刺激作用
CPG提高 提高PBMC中Th1细胞 提高 中 细胞
Th1占淋巴细胞百分比 Th1占淋巴细胞百分比
CPG提高 提高PBMC中Th1 、Tc1 提高 中 细胞百分率
16 14 12 10 8 6 4 2 0 Th1 Tc1 对照 Th2 CPG-ODN
* *
*：与对照组比较，P<0.05
CPG刺激 刺激BPMC分泌细胞因子 刺激 分泌细胞因子
CpG-ODN的免疫刺激作用 CpG-ODN的免疫刺激作用
陈军浩 南京大学医学院附属鼓楼医院
CPG概念 概念
为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重 复序列， 基序。 复序列，即CpG 基序。 一种免疫佐剂 作用靶点TLR9 作用靶点TLR9 细胞免疫，体液免疫 细胞免疫，
Th1免疫应答 免疫应答
慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下 HBV免疫耐受， HBV免疫耐受，持续感染 免疫耐受 肿瘤微小残留病的清除
80 70 60 50 40 30 20 10 0 IFN-γ IL-2 对照组 IL-4 CPG- ODN组 CPG- ODN 组 IL-10
*
*：与对照组比较，P<0.05
CPG诱导 诱导PBMC杀伤靶细胞 诱导 杀伤靶细胞
1. 2.
收集CPG活化的 活化的PBMC 收集 活化的 细胞毒性实验：效应细胞为 细胞毒性实验：效应细胞为CPG活化的 活化的 PBMC；靶细胞为 预染的K562细胞。 细胞。 ；靶细胞为CFSE预染的 预染的 细胞 对照组效应细胞为未经CPG活化的 活化的PBMC。 对照组效应细胞为未经 活化的 。 效：靶＝20：1，混合培养 。流式细胞术 ： ，混合培养2h。 检测靶细胞死亡率。 检测靶细胞死亡率。
CFSE染色靶细胞 染色靶细胞
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Results
1. Combination of M-M and CpG 1826 Inhibited B16-MUC1 Growth in Mice
All of these findings indicated that CpG 1826 was a good adjuvant for the antitumor vaccine M-M.
Introduction
Mucin 1 (MUC1) is a tumor-associated antigen that is expressed on the apical surface of epithelial cells. In cancers, such as lung, breast, ovarian, prostate, and pancreatic cancer, as well as in several malignant hematological tumors, it is aberrantly overexpressed. Different modes of expression between normal and aggressive forms make them ideal targets for immunotherapy .
Thank you
CpG ODN1826 as a Promising Mucin1-MaltoseBinding Protein Vaccine Adjuvant Induced DC Maturation and Enhanced Antitumor Immunity
汇报人： 2018.6.4
Abstract
Mucin 1 (MUC1): being an oncogene, is an attractive target in tumor immunotherapy. Maltose binding protein (MBP) : a potent built-in adjuvant to enhance protein immunogenicity. a recombinant MUC1 and MBP antitumor vaccine (M-M) was constructed in our laboratory. CpG oligodeoxynucleotides 1826 (CpG 1826), To enhance the antitumor immune activity of M-M
thus,arecombinant MUCI-MBP protein vaccine (M-M) consisting of the human geneMUC1 and MBP was constructed by inserting seven tandem repeats encoding the human MUC1 gene into the pMCpG 1826 Enhance the Antitumor Response by Inducing MUC1Specific Humoral and Cellular Immune Responses A-E
F-I
It can be seen that M-M + CpG 1826 also produces antitumor immune response.
3. M-M Combined with CpG 1826 Promote DC Maturation In Vivo and In Vitro 4. Combination of M-M and CpG 1826 Promotes the Th1 Polarization of CD4+ T Cell CoCultured with BMDCs 5. Combination of M-M and CpG 1826 Enhanced the Prophylactic and Therapeutic Antitumor Immune Activity
TLRs are a class of pattern recognition receptors that play an important role in the activation of innate immunity CpG oligodeoxynucleotides (CpG) mimic the immunostimulatory activity of bacterial DNA and TLR9 signaling. CpG is a chemically-synthesized compound and its quality control is superior to that of BCG CpG is a kind of vaccine adjuvant that promotes Th1 immune responses and enhances the immunogenicity of many vaccines with high safety in some clinical research
A-type (CpG 1585) and B-type (CpG 1826) CpG are well known. A-type is especially potent in activating human plasmacytoid dendritic cells (pDCs) produce high amounts of IFN-α and induce lymph node cDCs to mature, B-type more importantly stimulates strong B cell, NK cell, and pDCs activation;
The combination of M-M and CpG 1826 significantly inhibited MUC1-expressing B16 cell growth and prolonged the survival of tumor-bearing mice.
It induced MUC1-specific antibodies and Th1 immune responses, as well as the Cytotoxic T Lymphocytes (CTL) cytotoxicity in vivo.
Further studies showed that it promoted the maturation and activation of the dendritic cell (DC) and skewed towards Th1 phenotype in vitro.
Keywords
CpG ODN 1826 antitumor vaccine MUC1-MBP dendritic cells
3. M-M Combined with CpG 1826 Promote DC Maturation In Vivo and In Vitro
4. Combination of M-M and CpG 1826 Promotes the Th1 Polarization of CD4+ T Cell CoCultured with BMDCs
BCG causes severe local and systemic side effects, even though it is the most effective treatment for high-risk noninvasive bladder cancer . In addition, the stability problems associated with bacterial vaccines are difficult to control . Therefore, it is difficult to control in drug development. These problems with the application of BCG motivated us to identify an alternative adjuvant that is considerably safer and more effective.
5. Combination of M-M and CpG 1826 Enhanced the Prophylactic and Therapeutic Antitumor Immune Activity
1. Combination of M-M and CpG 1826 Inhibited B16-MUC1 Growth in Mice 2. M-M and CpG 1826 Enhance the Antitumor Response by Inducing MUC1Specific Humoral and Cellular Immune Responses