扬州市结核分枝杆菌利福平耐药基因突变分析
利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题研究
利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题研究利福平是一种广泛应用于结核病治疗的抗生素药物，属于氨基酸合成酶抑制剂，对于耐药结核分枝杆菌具有一定的杀菌作用。
近年来电阻耐药结核病的发生率逐渐增加，利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题也逐渐凸显。
利福平是一种抗生素药物，其治疗效果和耐药性与药物浓度呈正相关。
由于利福平的药物代谢动力学特点，个体差异较大，导致血药浓度的变异性较大，这种不稳定的药物浓度可能影响了利福平的治疗效果。
利福平的药物间相互作用也较多，与其他抗结核药物的联合使用可能导致药物浓度的变化，进而影响治疗效果。
耐药性是利福平应用过程中的另一个重要问题。
耐药结核分枝杆菌是指对于利福平及其他抗结核药物产生耐药的菌株，这些菌株在利福平治疗中的杀菌效果大大降低，导致治疗失败。
研究表明，耐药结核分枝杆菌的发生与多种因素有关，包括患者个体差异、药物剂量和使用方法、病毒性和基因突变等。
如何减少利福平耐药性的发生，提高治疗效果，是一个亟待解决的问题。
研究表明，利福平耐药结核分枝杆菌治疗中的问题与菌株的敏感性有关。
利福平产生耐药的机制主要包括靶点突变、药物代谢和外排机制的改变等。
耐药分枝杆菌产生的突变位点主要集中在基因上共有约20个位点，其中rpoB基因突变是最常见的耐药突变位点。
通过研究耐药突变位点的分布规律和影响因素，对于指导利福平的合理使用和防治耐药性具有重要意义。
利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的副作用也是一个值得研究的问题。
利福平的主要副作用包括肝脏损害、视神经损伤和心律失常等，这些副作用可能给患者的生活质量和治疗反应带来一定的影响。
在利福平的治疗中，如何减少副作用的发生和减轻副作用的程度，也是一个需要研究的问题。
利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题研究
利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题研究作者：赵梁来源：《中国实用医药》2019年第32期【摘要】目的分析利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题。
方法 130株结核分枝杆菌株，其中20株结核分枝杆菌株对于乙胺丁醇、异烟肼、利福平和链霉素敏感， 2株H37Rv结核杆菌株，;64株对于剂量为250 μg/ml利福平表现出耐药（R250）， 44株对于剂量为50μg/ml利福平表现出耐药（R50），均开展DNA序列分析。
结果在108株耐利福平结核分枝杆菌中，发生rpoB基因突变92株（85.2%），250 μg/ml利福平表现出耐药（R250）耐利福平结核分枝杆菌基因突变率78.1%明显低于50 μg/ml利福平表现出耐药（R50）耐利福平结核分枝杆菌的95.5%，差异具有统计学意义（P<0.05）。
R250耐利福平结核分枝杆菌基因位置主要以531密码子为主，突变率为58.0%（29/50）;基因位置在511密码子突变率为16.0%（8/50）。
R50耐利福平结核分枝杆菌基因突变位置主要以533密码子为主，突变率为23.9%（11/42）;其次基因位置在531、562密码子，突变率均为19.0%（8/42）。
结论绝大部分对于利福平耐药的结核分枝杆菌均存在rpoB基因突变现象，而对于利福平高耐药结核分枝杆菌的rpoB基因之中，主要突变特征为531位密码子突变和多个密码子联合突变。
其对于利福平低耐药结核分枝杆菌的rpoB基因内突变位置呈现出了散在性分布现象。
【关键词】利福平;耐药结核分枝杆菌;rpoB基因;基因突变DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2019.32.108当前在治疗结核疾病过程中，结核分枝杆菌（MTB）高耐药性问题已然成为了最近几年结核疾病控制中的重要难题，其也为结核病恶化的主要因素[1]。
利福平为一类快速杀菌剂，能够明显缩短结合疾病的治疗疗程，其在短程化疗中起到了相当重要的作用。
结核杆菌耐利福平分子机制的研究和rpoB基因突变快速检测方法的探讨
结果一、菌种生化鉴定结果所有５８株细菌经生化初步鉴定为结核分支杆菌，未见牛分支杆菌等其他非结核分支杆菌。
二、药敏测定结果５８株结核分支杆菌中，利福平耐药株３６株，敏感株２２株。
耐药株中对利福平高度耐药的有２０株，低度耐药的有１６株。
３６株利福平耐药株均至少对另一种其他的一线药物也耐药，其中有３２株对利福平耐药的结核分支杆菌同时对异烟肼耐药，其比例高达８８．９％。
结核分支杆菌的耐药类型以及耐多药株的耐药谱见表１—４，利福平耐药与耐多药之间的关系见图１．１。
表１－４结核分支杆菌的耐药类型注：Ｘ：ＩＮＨ、ＳＭ或ＥＭＢ中的任何～种：Ｙ为ＳＭ或ＥＭＢ。
Ｈ１．Ｉ利丰ｆ１１’ｒ耐药’ｏ时多鲋之川的天系Ｒ：ＲＦＩ’：Ｉ：［ＮＩＩ：Ｓ：ＳＭ：Ｅ：ＥＭＢ：Ｘ：Ｉ！此ｓ戏Ｅ：Ｙ：Ｓ！止Ｅ．，ｒｐｏＢ基因片段的扩增与序列分析目』ｊ１『可以通过Ｉｎｔｅｍｅｔ在ＧｅｎｅＢａｎｋ（Ｌ２７９８９）罩查到ｒｐｏＢ基因的全序列（１０６５。
４５９８），共３５３４ｂｐ。
下面列出了包含核心突变区的部分基因序列。
ＳｅｑｕｅｎｃｅｏｆｒｐｏＢ［ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ．３８（４），８０５—８１１（１９９４）】０６５０８１１４１２０ｌ２０４ｌ２１０１２１６１２２２ｌ２２８ｔｔｃｔｔｇｇｃａｇａｇｔｔｃｃｔｃｇａａａａｃｃａｃｔｔ．ｇａａｇｃｃｃａｔｃａｃｔｃｃｇｃｔｔｇｃａａａａｃｃｇａｃｇａａａａａｃｃａｇａｔｃｃｃａｇｇａｃｇｔＧｔｇｃｔｇｔｔｃｃｃｇｃｃａｇａｇｃａａａａｃａｇｃｃｇｃｔａｇｔｃｃｔａｇｔｃｃｇａｇｔｔａａｃｔｃｃｇｔａｃｃｃｇｇａｇｃｇｃｃａａａｃｃｇｇｇｔｃｔｃｃｔｔｃｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｇｇａｃｔｃｃｔｔｇａｃｇｔｃｃａｇａｃｃｇａｔｔｃｇｔｔｃｇａｇｇｔｃｇｔｃｇａｃｇｃｇａｇｇｇｔｃａｇｃａｔｃｇａｃｃａｃｃｃｇｇｇｔｃｇｇｃｇｇａｇｇｃｇａｔｃｃｔｇａｃｃｇａａｇａｃｃａｃｇａｔｇａｔｔｃｇｇｃａａｃｃａｔｇｔｃｇｃｇｇａａｃａｃｃｇｃａｇａｇａａｇｇａｔｇｃａｃｇｃｃｃｇｃａａａａａｇｃｔｇｃｇｃｇｔｇｇｃｔｇａｔｃｇａａｇａｃｇｔｃｇｔｇｇｃｃａｃｃａｔｃｇａａｔａｔｃｔｇｇｃｃｇｔｔｃｃｇｇｇｃｇｇｃｇｔｃｇａｇｇｔｇｃｃｇｇｔｇｇｇｃｃｇｃｃｔｇｃｇｔａｃｇｇｔｃｇｇｃｇａｇｃｔｇａｔｃｃｔｇｇａｇｃｇｇｇｔｇｇｔｃｃｇｇｇａｇｃｇｇａｔｇａｃｃａｃｇｔｔ还画玉玉亟夏五虱ｇｃｃｇ２４６１ａｇｃｇｔｇｃｃｇｇｇｃｔｇｇａｇｇｔｃｃｇｃｇａｃｇｔｇｃａｃｃｃｇｔｃｇｃａｃｔａｃｇｇｃｃＩｄｒ———————］２５２１ｌｔｃｇａａａｃｃｂｃｔｇａｇｇｇｇｃｃｃａａｃａｔｃｇｇｔｃｔｇａｔｃｇｇｃｔｃｇｃｔｇｔｃｇｇｔｇｔａｃｇｃｇｃｇｇｇ２５８１ｔｃａａｃｃｃｇｔｔｃｇｇｇｔｔｃａｔｃｇａａａｃｇｃｃｇｔａｃｃｇｃａａｇｇｔｇｇｔｃｇａｃｇｇｃｇｔｇｇｔｔａｇｃｇ２６４１ａｃｇａｇａｔｃｇｔｇｔａｃｃｔｇａｃｃｇｃｃｇａｃｇａｇｇａｇｇａｃｃｇｃｃａｃｇｔｇｇｔｇｇｃａｃａｇｇｃｃａａｔｔ２７０１ｃｇｃｃｇａｔｃｇａｔｇｃｇｇａｃｇｇｔｃｇｃｔｔｃｇｔｃｇａｇｃｃｇｃｇｃｇｔｇｃｔｇｇｔｃｃｇｃｃｇｃａａｇｇｃｇｇ４３８４４４４５０４５６ｔｃａａｇｇｇｔｇａａａｃｔｇｃａｇｔｃｔｇｃｇｃｇａａｇｇｃｃｃｇｃａａｃｇａｇａａｃａｔｃｃｃｇｇｃｔｇｔｇｃｃｔｃｔｇａｇｇａｃｇａｇａｔｃｃｇｃａａｇｔｇａｇｃｃｇｇｇｃａａａｃｇｔｃｇａｇｇｇａｃｃｔｇｇａｇｃｔｔｃｇａｇｇａｔｃｔｃｃｃｃｇａｇｔｃｇｔｔｃａａｇｇｔｇｃｔｇｃｔｃａａａｇｔｇｃｔａｔｃｇａｇｔｇａｃｇｇｔｇｃｇｇｃｇａｔｃｇａａｃｇｇｇｃｃｇｃｇｇｃｃａａｃｃｔｇｇｇａａｔｃａａｔｃｔｇｔｔｔｇｃｇｔａＡｒｐｏＢ全基因序列共３５３４ｂｐ（１０６５—４５９８），其中２３７０～２４３８共６９ｂｐ的片段为核心突变区（有底纹部分），本部分研究的引物分别为其上游的２３１６—２３３５区和下游的２５２８．２５０９区的序列（带边框部分）。
快速方法检测耐利福平结核分枝杆菌基因突变的研究
５ ０株 结 核 分 枝 杆 菌 均来 自 ２ ０ ０５
ｏ ｍｉ，４℃ ３ ，０ ｏ ０Ｓ７ Ｃ ３ ， ４ Ｃ４ ｎ９ ０ｓ６ ３ ，２ｏ ０ｓ共 ０个 Ｃ
利 福平 （ Ｆ ） 临 床 主要 抗 结核 药物 之 一 ， ＲＰ 是 结
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杆菌对 Ｒ Ｐ耐药与其 Ｄ Ａ依 赖性 Ｒ Ａ聚合 酶 Ｂ Ｆ Ｎ Ｎ 亚单位编码基因（ｐＢ 突变有关 Ｊ ｒ ） ｏ 。传统 的检测 药物 敏感 性 的方 法需 要 ２—３个月 时 间 ， 不利 于疾 病
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特异性 探 针 （ 见表 １ 。引物及 探 针 由上海 生工有 限 ）
公 司合 成 。③实 时 Ｐ Ｒ检 测 ： 引物 与探 针 用双 蒸 Ｃ 将 水 溶解 ， 终 浓 度 为 １ ｍｏ Ｌ 使 ０Ｉ ｌ 。按 照 每 个 反 应 管 ｘ ／ 检 测 １个标本 １ 突变 位点 来 配 制 Ｐ Ｒ反应 液 ， 个 Ｃ 即 每 个反 应管 里都 有 １ 结核 杆菌 特异 性探 针和 １条 条
１ 材 料 和方 法
利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题研究
利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题研究耐药结核分枝杆菌（Drug-Resistant Tuberculosis，简称DR-TB）是指对两种或两种以上一线抗结核药物耐药的结核分枝杆菌感染。
这种耐药性对于结核控制构成了巨大威胁，因为它使得治疗结核病变得更加困难，并增加了传播该疾病的风险。
而利福平作为目前用于治疗耐药结核分枝杆菌感染的重要药物，其在治疗中存在着一系列问题需要深入研究。
利福平治疗的主要问题是耐药性的出现。
随着利福平的广泛应用，已经出现了利福平耐药和多药耐药结核分枝杆菌（MDR-TB）的病例。
这些耐药菌株拥有使其对利福平不敏感的特征基因，引发了利福平治疗失败的问题。
研究耐药性的发生机制，找出耐药性的特征基因，对于制定更有效的利福平治疗方案至关重要。
利福平在治疗中存在着毒副作用的问题。
虽然利福平属于一线抗结核药物，但其毒副作用较大，导致患者出现恶心、呕吐、头痛等不良反应。
而在耐药结核分枝杆菌感染的治疗过程中，患者需要长期服用利福平，这使得毒副作用的出现更为频繁。
需要研究如何减轻利福平的毒副作用，提高患者的耐受性，从而增加治疗的成功率。
利福平的耐药性检测方法也是研究的重点。
当前常用的利福平耐药性检测方法主要是荚膜法和药敏试验，但这些方法存在着操作复杂、耗时长、结果不稳定等问题。
研究更快速、准确的检测方法，可以为耐药结核分枝杆菌的早期发现和治疗提供有力支持。
利福平与其他抗结核药物的联合应用是研究的重点之一。
利福平作为组成抗结核联合治疗的重要成分，其与其他抗结核药物的相互作用对于治疗效果具有重要影响。
研究利福平与其他抗结核药物的药物相互作用，为制定更合理的联合治疗方案提供依据。
利福平的药物代谢和药动学研究也是需要深入研究的问题。
目前已有研究表明，个体代谢差异可能与利福平治疗的临床效果存在相关性。
研究利福平的药代动力学特征，探究其在不同个体中的代谢差异，并结合基因多态性的研究，可以为个体化治疗提供科学依据。
利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题研究
利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题研究耐药结核分枝杆菌（MDR-TB）是一种对传统抗结核药物耐受的结核分枝杆菌株，其治疗相对复杂且存在许多问题。
本文将重点讨论利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题研究。
利福平是一种世界卫生组织推荐的二线抗结核药物，被广泛应用于耐药结核分枝杆菌的治疗中。
虽然利福平具有较高的杀菌活性和药代动力学特性，但其在临床应用中也存在一些问题和挑战。
耐药结核分枝杆菌的耐药机制是多样化的，其中一种常见的机制是通过突变的方式产生靶点的结构改变，从而使利福平失去对分枝杆菌的杀菌活性。
这种耐药机制的存在使得利福平的治疗效果难以预测，进一步增加了治疗难度。
利福平在治疗过程中容易产生耐药突变。
研究表明，在利福平治疗过程中出现利福平耐药突变的患者比例较高，约为10-30%。
这种耐药突变不仅会导致原本对利福平敏感的菌株变得耐药，也会降低治疗效果，导致治疗失败。
利福平在临床应用中也存在一些不良反应。
其中最为常见的不良反应是神经系统毒性，表现为头晕、震颤和共济失调等症状。
这些不良反应不仅会影响患者的生活质量，还可能导致治疗中断或失败。
针对以上问题，目前的研究主要集中在以下几个方面：研究人员致力于寻找利福平的新应用方式和剂量方案，以提高其在耐药结核分枝杆菌治疗中的疗效。
研究表明将利福平与其他抗结核药物联合应用可以提高其杀菌活性，并减少耐药突变的产生。
研究人员也在探索利福平耐药机制的研究，以便更好地理解利福平耐药的发生机制。
这不仅有助于指导临床应用中的利福平治疗，还可以为开发新的抗结核药物提供依据。
利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中存在着一系列问题，但通过对其治疗机制和耐药机制的研究，以及寻找新的应用方式和剂量方案，我们可以更好地应对这些问题，提高耐药结核分枝杆菌的治疗效果。
结核分枝杆菌常见耐药基因突变的检测及分析
广州医学院硕士研究生学位论文结核分枝杆菌常见耐药基因突变的检测与分析Detection and evaluation of common drug-resistance gene mutations in Mycobacterium tuberculosis专业名称: 临床检验诊断学研究生: 杨辉导师: 吴爱武教授陈心春教授二0一三年三月·广州目录中文摘要~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~1 英文摘要~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~4 英文缩略词~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 7 前言~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~8 第一部分利福平耐药结核分枝杆菌rpoB 基因的检测与分析~~~~~~~~~~~~ 111.材料和方法~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 112.结果~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~163.讨论~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~184.小结~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~20 第二部分异烟肼耐药结核分枝杆菌相关耐药基因的检测与分析~~~~~~~~~~~211.材料和方法~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 212.结果~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~273.讨论~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~304.小结~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~31 第三部分HRMA技术检测结核分枝杆菌利福平与异烟肼耐药~~~~~~~~~~~~ 321.材料和方法~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 322.结果~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~363.讨论~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~424.小结~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~44 全文总结~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 45 参考文献~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 46 综述~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~51 附录~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~59 攻读学位期间取得研究成果~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 61 致谢~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~63 学位原创性声明~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~64 学术论文知识产权声明~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~64 关于学术论文使用授权的说明~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~64结核分枝杆菌常见耐药基因突变的检测与分析研究生：杨辉导师：吴爱武教授陈心春教授中文摘要研究背景及目的结核分枝杆菌（结核菌，Mycobacterium tuberculosis，MTB)是引起结核病的病原菌，至今仍然是单一感染因素导致死亡率最多的疾病之一。
利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题研究
利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题研究引言：耐药结核分枝杆菌（MDR-TB）是一种由对抗结核药物产生耐药性的细菌所引起的结核病，给全球卫生健康带来了极大的挑战。
利福平是一种主要用于治疗结核病的药物，然而对于MDR-TB的治疗来说，利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题成为了研究的焦点之一。
本文将通过对利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题进行研究，探讨其在治疗中的作用、问题和可能的解决方案。
一、利福平的作用机制及其在MDR-TB治疗中的重要性利福平是一种氨基糖苷类抗生素，常用于治疗结核病，特别是多重耐药结核病。
其作用机制是干扰菌体的蛋氨酸合成，从而干扰蛋白质的合成。
利福平可以有效地抑制结核菌的生长，对于传统治疗无效的MDR-TB患者来说，利福平是一种重要的替代药物。
由于其广谱的杀菌作用和较强的抗耐药性能力，利福平在MDR-TB治疗中具有重要的作用。
尽管利福平在MDR-TB治疗中具有重要的作用，但其也面临着一些问题，这些问题主要包括：1. 药物耐药性：近年来，利福平耐药性的问题日益凸显，尤其是在治疗MDR-TB的过程中，大量的患者出现了利福平耐药的情况。
这一现象使得利福平的治疗效果受到了较大的影响。
2. 不良反应：利福平在治疗中还会引起一些不良反应，如耳毒性、肾毒性和神经毒性等，这些不良反应会对患者的生活质量和治疗效果产生负面影响。
3. 用药剂量：在MDR-TB治疗中，利福平的用药剂量也是一个较为复杂的问题，如何在均衡治疗效果和减少不良反应之间寻求平衡，是一个亟待解决的问题。
三、可能的解决方案和未来展望针对利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中面临的问题，有一些解决方案值得探讨：1. 综合治疗方案：针对利福平在MDR-TB治疗中的问题，可以采取综合治疗方案，即将利福平与其他抗结核药物进行联合治疗，以提高治疗效果和降低耐药性。
2. 研发新的利福平类似物：随着科学技术的不断发展，可以研发新的利福平类似物，以增强其对MDR-TB的杀菌作用，降低耐药性的产生。
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扬州市结核分枝杆菌利福平耐药基因突变分析
发表时间：2019-05-28T10:05:48.223Z 来源：《医药前沿》2019年9期作者：戴洁1 曾方林1 王金富（通讯作者）1,2 [导读] 目的：了解本地区结核分枝杆菌利福平耐药基因的突变特征。
（1扬州市第三人民医院江苏扬州 225025）（2扬州大学人兽共患病学重点实验室江苏扬州 225002）【摘要】目的：了解本地区结核分枝杆菌利福平耐药基因的突变特征。
方法：利用基因芯片检测346例经鉴定为结核分枝杆菌的菌株利福平耐药基因，分析本地区利福平耐药基因突变特征。
结果：346例结核分枝杆菌中利福平耐药基因发生突变的例数为58例（16.7%）。
利福平rpoB基因耐药位点分布如下：531位点为58.6%，526位点为31.1%，511位点为6.9%，516位点为3.4%。
结论：本地区MTB对利福
平耐药rpoB基因耐药位点以531位点最多，526位点次之。
【关键词】结核分枝杆菌；基因突变；利福平【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）09-0223-02 利福平（RFP)是从利福霉素B得到的一种半合成抗生素，能抑制细菌DNA转录合成RNA，达到杀菌作用。
绝大多数的RFP耐药相关基因是rpoB（RNA聚合酶 β亚基），rpoB基因的突变会引起RFP与细菌RNA聚合酶的亲和力降低，导致细菌对RFP耐药[1]。
rpoB基因的突变主要是密码子507到533（RNA聚合酶（rpoB)β-亚单位的81-by）热点区域。
514位和533位密码子突变是引起低水平耐药的常见突变位点。
D516V，H526Y, H526D,S531L，这4个位点的突变是引起高水平耐药的常见突变[2]。
某些密码子突变引起的rpoB基因突变并不会导致细菌对RFP耐药。
本研究利用基因芯片技术对扬州地区结核分枝杆菌RFP耐药基因突变位点特征进行了分析，现报道如下。
1.资料与方法
1.1 一般资料
收集我院2017年经传统固体培养，并经鉴定为结核分枝杆菌的菌株共346例。
1.2 仪器与试剂
仪器：基因芯片仪器、试剂由北京博奥生物有限公司提供；固体培养和药敏试剂由珠海贝索生物有限公司提供。
基因芯片检测RFP rpoB基因6个位点，共13种突变型：511位CTG→CCG，513位CAA→CCA、CAA→AAA，516位GAC→GTC、GAC→TAC、GAC→GGC，526位CAC→GAC、CAC→TAC、CAC→CTC、CAC→CGC，531位TCG→TTG、TCG→TGG，533位CTG→CCG。
1.3 方法
1.3.1痰液化处理将痰标本用4%的氢氧化钠（NaOH）溶液液化，液化好的上清液用于接种固体培养基和核酸提取。
1.3.2传统培养及鉴定培养严格按《结核病实验室检测操作规程》的要求进行，采用PNB和TCH进行鉴定，并定期用H37RV进行质控。
1.3.3核酸提取煮沸法提取核酸。
1.3.4基因芯片核酸进行PCR扩增，产物用杂交缓冲液处理后进行杂交，再用芯片洗干仪进行洗涤和甩干，最后用芯片判别系统进行扫描和结果判读，并详细记录芯片信息判读结果。
2.结果
346例结核分枝杆菌中耐利福平例数为58例（16.7%）。
58例利福平耐药标本中，RFP耐药相关基因rpoB基因的531（TCG→TTG）突变位点为34例（58.6%），526（CAC→TAC）突变位点为12例（20.7%），526（CAC→CGC）突变位点为5例（8.6%），526（CAC→GAC）突变位点为1例（1.7%），516（GAC→GTC）突变位点为1例（1.7%），516（GAC→TAC）突变位点为1例（1.7%），511（CTG→CCG）突变位点为4例（7.0%）。
3.讨论
MTB耐药性的增加，导致耐药结核病感染率逐年上升，加大了结核病防治的难度。
许多研究表明，耐药基因突变导致是导致MTB耐药的主要原因，通过检测相关耐药基因是否发生突变，从而可推断该MTB是否发生耐药。
基因芯片技术是近些年比较流行的一种基因检测的分子技术，其通过PCR技术对待测菌的基因片段进行扩增，将扩增片段与芯片杂交，即可得到基因突变位点和突变类型。
该法具有快速、高通量、灵敏等特点[3]，近来在MTB耐药检测中应用广泛，我们前期的研究[4]也验证了基因芯片在MTB异烟肼耐药检测中具有较好的应用效能。
RFP主要作用于结核分枝杆菌DNA依赖的RNA聚合酶的β亚单位，干扰转录的开始及RNA延伸，发挥抑菌和杀菌作用。
绝大多数MTB 对RFP产生耐药是由于rpoB基因507-533位发生了突变。
rpoB基因507-533位区域称为利福平耐药决定区（RRDR），约85%的耐药菌株出现531位Ser位点、526位His和516位Asp的变异。
本次实验采用博奥公司生产的结核分枝杆菌耐药试剂盒检测rpoB基因RRDR的531、526、516、511、533位密码子，结果显示扬州地区531、526突变位点为优势突变位点，其中531位占58.6%，526位占31.0%，最常见突变位点为531（TCG→TTG）突变位点（58.6%）和526（CAC→TAC）突变位点（20.7%），与相关文献结果相似[5,6]。
另外据相关报道最近在RFP 耐药菌株中发现了两个新的rpo B突变（Ser531Gly和 Asp516Thr），以及一个不属于rpo B基因的突变位点（Ile572Phe）[7]。
然而博奥结核分枝杆菌耐药检测试剂无法包含上述所有突变基因和突变形式，在检测的结果中，有可能出RFP实际上耐药而结果敏感的情况，因此该方法检测的RFP敏感只能作为参考，并不能明确诊断，是该方法的缺点。
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基金项目：扬州市社会发展项目（YZ2016088）；扬州大学人兽共患病学重点实验室资助课题（R1702）。