绵羊白介素6IL-6酶联免疫分析ELISA
白介素6化学发光
白介素6化学发光白介素6（Interleukin-6，简称IL-6）是一种细胞因子，它在免疫系统中发挥着重要的调节作用。
除了免疫系统，IL-6还参与了多个生理和病理过程，包括炎症反应、细胞增殖、分化和存活等。
近年来，研究人员发现IL-6还具有化学发光的特性，这为生物医学研究和临床诊断提供了新的工具和方法。
化学发光是指在某些特定条件下，物质能够发出可见光或紫外光的现象。
通常情况下，化学发光需要通过外界能量激发物质，使其处于激发态，然后在返回基态的过程中释放出光子。
而IL-6的化学发光是通过特定的化学反应来实现的。
IL-6化学发光的原理是利用酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）的基本原理。
ELISA是一种常用的生化分析方法，用于定量检测特定蛋白质或其他生物分子在样品中的含量。
而IL-6化学发光ELISA则在传统的ELISA基础上进行了改进，使其能够发出可见光信号。
IL-6化学发光ELISA的具体步骤如下：首先，将含有待测IL-6的样品加入特定的试剂盒中，并与盒内的抗体结合。
然后，加入特定的底物，底物在酶的作用下发生化学反应，产生可见光。
最后，使用专用的发光仪器测量发出的光信号的强度，根据光信号的强弱来确定样品中IL-6的含量。
IL-6化学发光ELISA具有许多优点。
首先，它具有高灵敏度和高特异性，能够准确地检测到极低浓度的IL-6。
其次，它的操作简便，不需要复杂的仪器和昂贵的试剂，适用于大规模的样品检测。
此外，IL-6化学发光ELISA还可以同时检测多个样品，提高工作效率。
IL-6化学发光在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用。
在生物医学研究中，IL-6化学发光可用于研究IL-6在免疫系统中的调节机制，以及其在炎症、肿瘤和自身免疫性疾病等疾病中的作用。
在临床诊断中，IL-6化学发光可用于早期诊断和监测炎症性疾病、肿瘤和感染等疾病的进展。
白细胞介素-6定量方法研究进展
I n s p e c t i o n/检验检测白细胞介素-6定量方法研究进展燕茹，林婧(南京市计量监督检测院，江苏南京210049)摘要：细胞介素-6 (IL-6)是一种重要的细胞因子，在机体病理和生理活动中发挥着多种作用。
因此需要高 准确度测定丨L-6的水平。
文章综述了近年来国内外IL-6不同定量方法的研究进展，包括酶联免疫法、免疫 放射法、电化学免疫法，讨论了 IL-6不同定量方法的特点，并展望了其发展趋势。
关键词：白细胞介素-6;检测方法1弓丨言白介素6 (Interleukin-6, IL-6)是一种炎症因 子，由212个氨基酸组成的糖蛋白，健康人体内一般 小于7 pg/m L,当机体受到细菌感染时，含量急剧升 高，其含量与感染程度呈正相关。
IL-6在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与 分化及在炎症反应中起重要作用。
检测IL-6有助于 评价糖尿病、心血管病、炎症性疾病和感染性疾病等。
患者IL-6的连续监测，有助于评估炎症反应的严重 程度，脓毒症及其预后情况；日本指南推荐将IL-6 用于脓毒症辅助诊断，IL-6可以作为脓毒症的早期 预警指标。
研究发现，2019-n C o V感染的患者血清中IL-6 等炎症细胞因子显著升高。
患者血清中IL-6的含量 有助于新型冠状病毒肺炎的临床分型及预测疾病严重 程度和患者预后。
《新型冠状病毒肺炎诊疗方法（试 行第七版）》将外周血炎症因子IL-6进行性上升作 为新型冠状病毒肺炎重型、危重型临床预警指标。
IL-6作为感染性疾病的早期诊断、病情评估、疗效监控和预后判断的诊断指标。
IL-6的准确测定 具有重要意义。
为准确地测定血清中IL-6的含量，提高检测结果准确性，本文对IL-6的定量方法进行 综述。
2丨L-6定量检测方法根据IL-6的检测原理及方法的不同，对IL-6的 检测分为：免疫学方法、生物学检测方法。
2.1免疫学方法免疫分析方法的原理为利用特定抗体与抗原发生 的特异性识别和结合，对待测抗体或者抗原进行分析 测定的方法。
白介素-6(IL-6)测定试剂盒(荧光免疫层析法)产品技术要求
白介素-6（IL-6）测定试剂盒（荧光免疫层析法）
结构组成：
预期用途：用于体外定量测定人血清、血浆样本中的白介素-6的含量。
2.1.物理性状
2.1.1.外观
试剂卡外观平整，材料附着牢固；
样本稀释液为无色透明液体，无悬浮物及沉淀物；
2.1.2.净含量
样本稀释液净含量应在标示值的90%～110%之间。
2.1.
3.膜条宽度
膜条宽度应不小于3.9mm。
2.1.4.液体移行速度
液体移行速度应不低于25mm/min。
2.2.空白限
空白限≤3pg/mL。
2.3 .线性范围
试剂的线性范围为[3，1000]pg/mL，在此线性范围内，线性相关系数r 应不小于0.990。
2.4.测量精密度
2.4.1.重复性
用质控品重复测试，所得结果的变异系数（CV）≤15%；
2.4.2.批间差
用质控品重复测试3个批号的试剂盒，所得结果的变异系数（CV）≤15%。
2.5.准确度
回收率在85%～115%之间。
2.6 .稳定性
试剂在4℃～30℃密封避光保存，原包装存放的试剂有效期为12个月；取效期末的样品检测外观、膜条宽度、液体移行速度、空白限、线性范围、重复性、准确度，应分别符合2.1.1、2.1.3、2.1.4、2.2、2.3、2.4.1、2.5的要求。
2.7.溯源性
根据GB/T21415-2008的要求提供含有产品校准曲线信息的数据卡，本产品校准曲线信息可溯源至企业工作校准品。
牛白细胞介素6IL-6)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
牛白细胞介素6（IL-6）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.5ng/L - 17ng/L使用目的：本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素6（IL-6）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛白细胞介素6（IL-6）水平。
用纯化的牛白细胞介素6（IL-6）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素6（IL-6），再与HRP标记的白细胞介素6（IL-6）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素6（IL-6）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛白细胞介素6（IL-6）浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（32ng/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
16ng/L 5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液8ng/L 4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液4ng/L 3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液2ng/L 2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液1ng/L 1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
绵羊白介素6IL-6酶联免疫分析ELISA
绵羊白介素6(IL-6)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定其它血清，血浆及相关液体样本中白介素6(IL-6)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中绵羊白介素6(IL-6)水平。
用纯化的绵羊白介素6(IL-6)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素6(IL-6)，再与HRP标记的白介素6(IL-6)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白介素6(IL-6)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中绵羊白介素6(IL-6)浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
用ELISA试剂盒检测人白介素6IL-6的浓度
双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-6的浓度人IL-6简介：白介素6（IL-6）是一类多功能的蛋白，在宿主防御，急性期反应，免疫反应，造血功能，神经系统等方面起到重要的作用。
白介素6根据来源不同是分子量从21到28kDa不同的单链蛋白。
白介素6在多种细胞中都有表达，如T细胞、巨噬细胞、纤维原细胞、肝细胞、血管内皮细胞等。
由于IL-6具有不同的活性，所以IL-6也被称为干扰素β2(IFN-β2)、B细胞刺激因子-2(BSF-2)、杂交瘤细胞生长因子、肝细胞刺激因子、毒性T细胞分化因子、巨噬细胞粒细胞诱导因子(MGI-2A)。
白细胞介素6在B-细胞向Ig分泌细胞的转化过程起到重要的作用，参与了淋巴细胞和单核细胞的分化，诱导神经细胞在B-细胞，T-细胞，肝细胞，造血干细胞以及中枢神经系统的分化作用。
此外，肌肉运动收缩作用后白细胞介素6会被释放到血液中，进而能促进脂肪的分解并改善机体的胰岛素耐受性。
检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-6的浓度。
IL-6捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IL-6会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
当加入生物素化的抗人IL-6抗体后，抗人IL-6抗体与IL-6接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。
生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
最后加入显色剂，若样本中存在IL-6将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。
通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，IL-6浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-6浓度。
标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作：A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；D.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
不同方法学白介素6标准
不同方法学白介素6标准白介素6检测的不同方法学探讨白介素6（IL-6）是一种多功能细胞因子，在免疫调节、炎症反应以及多种疾病的发生和发展过程中起着重要作用。
因此，准确检测白介素6的含量对于基础研究和临床应用具有重要意义。
本文将探讨几种不同的白介素6检测方法，并分析其优缺点。
1. 酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附法是一种常用的检测白介素6的方法，其原理是利用酶标记的抗体与待测样本中的白介素6结合，形成酶-抗体-抗原复合物，然后通过底物显色反应来定量检测白介素6的含量。
这种方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于大批量样本的检测。
但是，ELISA方法也存在一些局限性，如操作过程中容易受到温度、时间等因素的影响，导致结果的不稳定性。
2. 放射免疫分析法（RIA）放射免疫分析法是一种利用放射性同位素标记的抗体来检测白介素6的方法。
这种方法具有灵敏度高、准确性好的特点，尤其适用于微量白介素6的检测。
然而，由于RIA方法涉及到放射性物质的操作和处理，对实验条件和操作人员的要求较高，且存在一定的安全隐患，因此在一般实验室中的应用受到一定限制。
3. 化学发光免疫分析法（CLIA）化学发光免疫分析法是一种基于化学发光原理来检测白介素6的方法。
该方法利用化学发光物质标记的抗体与白介素6结合后产生的化学发光信号进行定量检测。
CLIA方法具有灵敏度高、线性范围宽、操作简便等优点，且无需使用放射性物质，因此在实际应用中得到了广泛推广。
但是，CLIA方法的试剂成本相对较高，且发光信号的稳定性可能受到多种因素的影响。
4. 荧光免疫分析法（FIA）荧光免疫分析法是一种利用荧光标记的抗体来检测白介素6的方法。
该方法通过荧光信号的强弱来定量检测白介素6的含量，具有灵敏度高、特异性好的特点。
同时，FIA方法还可以实现多色荧光的同时检测，适用于复杂样本中多种细胞因子的同时测定。
但是，FIA方法需要专业的荧光检测设备，且荧光信号可能受到光漂白等因素的影响。
白介素—6(IL—6)测定试剂(荧光免疫层析法)产品技术要求万孚
1.性能指标
1.1外观检查
外观应平整，标识清晰，各组分齐全，液体无渗漏。
1.2物理检查
膜条宽为 4.0±0.5mm；液体移行速度应不低于10mm/min。
1.3准确度
用参考品作为样本进行测定，其测定结果的相对偏差（B ias）不应超过±15%。
1.4最低检出限
应不大于3pg/mL。
1.5线性
在3pg/mL～4000pg/mL 的范围内，线性相关系数r≥0.9900。
1.6精密度
1.6.1批内精密度
用同一批号的试剂分别测定 2 个不同浓度的样本，其测定结果的变异系数（CV）应不大于15%。
1.6.2批间精密度
用三个不同批号的试剂分别测定2 个不同浓度的样本，其测定结果的变异系数（CV）应不大于15%。
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绵羊白介素6(IL-6)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用
目的：本试剂盒用于测定其它血清，血浆及相关液体样本中白介素6(IL-6)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中绵羊白介素6(IL-6)水平。
用纯化的绵羊白介素6(IL-6)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素6(IL-6)，再与HRP标记的白介素6(IL-6)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白介素6(IL-6)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中绵羊白介素6(IL-6)浓度。
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收
集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存
过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000
转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保
存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别
加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L，150ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待
测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后
备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，
如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光
显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加
终止液后15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间
最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
100ng/L -2000ng/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。