waters e2695高效液相色谱
反相高效液相色谱法测定盐酸普萘洛尔片中盐酸普萘洛尔的含量
天津药学 Tianjin Pharmacy 2021年 第33卷 第1期93 刘睿，段金廒,李友宾，等•水牛角主要药效学评价及解热活性物质 基础研究[J ].南京中医药大学学报,2007,23(5):297-301.4耿笑雁•犀角地黄汤加减治疗小儿过敏性紫瘢47例[J ].河北中医， 2002,24(3)：196.5韩世荣，张小琴，张玉梅•犀角地黄汤加味治疗过敏性紫瘢60例[J ].陕西中医,2002,23(11)： 996-997.6 康景华.犀角地黄汤加味治疗过敏性紫瘢35例[J ].天津中医，2001,17(3)：47.7王文兰•犀角地黄汤治疗顽固性皮肤瘙痒症[J ].四川中医,2002,20( 1) 67.7丛培华.犀角地黄汤加减治疗带状疱疹[J ].山东中医杂志,2002,21( 6): 370.9郑建本，王光富•加味犀角地黄汤治疗座疮70例[J ].实用中医药杂志，2004，20(1):17-19.10蔡之幸，王重卿•水牛角治头痛作用初探[J].上海中医药杂志,016,50( 9): 69-71.11吴飞，张继全，阮克锋，等.三七生粉入药灭菌工艺的选择[J ].中国医药导报,2016,13(19):35-37.反相高效液相色谱法测定盐酸普蔡洛尔片中盐酸普蔡洛尔的含量郑风敏，王繁华，李彬(鹤壁市食品药品检验检测中心，河南458030)摘要目的:建立反相高效液相色谱法测定盐酸普萘洛尔片中盐酸普萘洛尔的含量。
方法:Waters e2695高效液 相色谱仪,waters 2998二极管阵列检测器，Agilent 20Rbax C j 7色谱柱(250 mm x 4.6 mm,5 "m ),流动相为乙睛-水(含1%庚烷磺酸钠)(45 : 55),检测波长为290 nm ，进样体积:20 "1,流速：1.0ml/min ,柱温：35 $。
结果：盐酸普萘洛尔在5.84~246.47 "g/ml 浓度范围内线性关系较好(r = 0.999 9),平均回收率99.92%,RSD 为0.17%。
Waterse2695高效液相验证方案
Waters e2695高效液相色谱仪验证方案编码：TS-52-01有限责任公司验证立项申请表参加验证人员验证方案审批表有限责任公司目录1．目的2．范围3．责任4．验证4．1．公用系统检查4．2运行确认4．2．1目的4．2．2方式4．2．3内容4．2．3．1设备使用原理4．2．3．2确认标准操作规程的可行性4．2．3．3确认设备正常运行的项目4．3性能确认4．3．1输液系统4．3．1．1泵流量设定值误差与流量稳定性误差4．3．1．2定性、定量测量重复性误差4．3．1．3系统适用性试验4．3．2紫外检测器性能4．3．2．1基线漂移与基线噪声5．拟订验证周期6．验证结果评价与结论7．附件为确认Alliance e2695型高效液相色谱仪测试数据准确可靠，性能稳定，特制订本验证方案，对高效液相色谱仪进行验证。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案变更申请及批准书，报验证小组批准。
2 范围：适用于美国Waters 公司Alliance e2695型高效液相色谱仪系统的验证。
3 责任：3．1验证小组3．1．1负责验证方案的批准。
3．1．2负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。
3．1．3负责验证数据及结果的审核。
3．1．4负责验证报告的审批。
3．1．5负责发放验证证书。
3．1．6负责验证周期的确认。
3．2设备部。
3．2．1负责建立设备档案。
3．2．2负责仪器、仪表的校正。
3．3质量部3．3．1负责制定验证方案。
3．3．2负责验证的实施。
3．3．3负责拟定验证周期。
3．3．4负责收集各项验证、试验记录，起草验证报告，报验证小组。
4．1 公用系统检查4．2运行确认4．2．1目的试验并证明设备的各部分及整体，能在预期的及设计范围内准确的运行，并能完全达到规定的技术指标和使用要求。
4．2．2方式通过对输液系统、紫外检测器性能的检测，确认本机器运行正常。
4．2．3内容4．2．3．1设备概述4．2．3．1．1本仪器为Waters公司Alliance2695型高效液相色谱仪，包括四元梯度泵，e2695检测器和自动进样器、柱温箱、empower色谱管理工作站组成。
e2695高效液相色谱仪
仪器功能介绍：
Waters e2695可进行有机化合物的定性定量分析，尤其是沸点较高和热稳定性
较差的化合物的分析。
具有分离效能高、检测灵敏度高、选择性高、分析速度快的特点。
仪器主要技术参数：
四元梯度泵带脱气机：流速精度≤0.075％RSD ，流速准度±1％，梯度精度≤0.15％RSD，系统滞后体积＜650μl，不随后压变化
柱温箱：4 –60℃
控温自动进样器：4 –40℃
仪器使用注意事项：
1.使用本仪器需要预约，使用者请与仪器负责人联系，请不要擅自使用该仪器。
2.样品请标明样品名称、待测成分名称和结构、待测成分重要理化性能（溶解性、沸点、光谱特征）参数；
3.液体样品不少于1mL，0.45um膜过滤；固体样品不少于2mg。
Waters_e2695_Alliance_HPLC操作手册
1.0Review and Approval审核与批准Written By: ________________________________ Date: ____________________ 起草人日期Approved By: ________________________________ Date: ____________________ 批准人 Department Head or Designee 日期部门负责人或指定人员Approved By:________________________________ Date: ____________________ 批准人 Quality Assurance 日期质量保证部2.0Purpose目的2.1本标准规定了的Waters e2695型液相色谱仪的使用、维护保养和校验。
3.0Scope范围3.1本标准适用于位于XXXXXXXQC实验室的的使用、维护保养及校验。
4.0Responsibilities职责4.1QC人员对系统的维护以及本规程的使用负责。
5.0References/Associated Documents参考文件/相关文件5.1Waters e2695操作员指南5.2Waters2998操作员指南5.3Waters2489操作员指南5.4Empower工作站使用手册6.0Definitions定义N/A7.0Procedure规程7.1设备7.1.1四元泵，Waters e26957.1.2控温自动进样器7.1.3紫外可见光检测器，Waters24897.1.4二级阵列管检测器，Waters29987.1.5柱温箱7.1.6溶剂脱气机7.1.7装有Empower工作站的电脑7.2维护7.2.1灌装及清洗系统7.2.1.1当真空脱气机第一次使用或当真空管是空的，或当改变溶剂，且当前溶剂与真空管中溶剂不相溶时，应当灌装清洗系统7.2.1.2如果使用易挥发的混合溶剂或改变溶剂时，若系统长时间关机（比如，隔夜）灌装系统推荐将泵的流速控制在高水平（3-5ml/min）。
Waters e2695型高效液相色谱仪标准操作程序终稿
标题Waters e2695型高效液相色谱仪标准操作程序起草日期颁发部门：研发事业部页数审核日期分发部门：QA审核日期批准日期生效日期变更记载：原文件号批准日期生效日期变更原因及目的：文件系统修订。
1 目的：Waters e2695型高效液相色谱仪的一般标准操作程序。
2 范围：Waters e2695型高效液相色谱仪。
3 责任人：相关实验人员4 设备部件及名称4.1 Waters e2695分离单元．4.2 2998型二极管阵列检测器．4.3 Empower色谱工作站．各部件可独立操作或通过色谱工作站控制，色谱数据处理由色谱工作站完成，其操作系统为Windows XP Profesional SP3，工作站软件为色谱管理软件。
5 标准操作程序5.1 开机前准备5.1.1 检查桌面是否清洁、整齐。
5.1.2 检查设备是否清洁，连接管线是否正常，色谱柱是否需要更换。
5.1.3 检查电源线有无破损。
5.1.4 接通电源，检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常。
5.1.5 准备好超声过的流动相和流路冲洗溶剂。
流动相和纯水应用微孔滤膜过滤（纯有机相或含一定比便例有机相的用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的用水系滤膜）。
一次制得的纯水或缓冲盐流动相应在连续24小时内使用完，如未使用完也应弃去不用，并重新配制新鲜的流动相。
如需使用，应重新过滤。
流动相的pH值应在色谱柱填料允许的范围内。
该泵带有真空脱气机，可不超声，但要在泵电源开启后，等脱气机停止工作后（约需5分钟）再进行泵的其它操作。
5.1.6 准备样品。
为延长层析柱使用寿命，建议使用流动相溶解样品，如果不是，一定要做预试验，确保样品在流动相溶液中不出现沉淀。
如果样品中成份复杂，特别含有强保留成分，建议过C18 小柱预处理。
样品在进样前必须经0.45μm的微孔滤膜滤过，根据溶剂性质选择合适的滤膜。
过滤完毕后，置于样品盘上，记录样品所放的位置号。
5.2 开机接通稳压电源，待电压稳定在220V时，依次打开下列仪器的电源：高压泵、柱箱、系统控制仪、色谱工作站。
Waters高效液相色谱系统操作
02
Alliance系统基本操作
开机流程
准备试剂
打开电脑
Alliance开机
检测器开机
电脑登陆软 件
注意事项： a.需先开电脑，再开Alliance系统，仪器，最后登录软 件。b.带制冷功能的柱温箱有单独电源开关，需将其打 开。
alliance
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高效液相色谱系统 如何工作？
流动相 泵
进样器 色谱柱 检测器 色谱数据系统
色谱柱
色谱图溶剂瓶 （流ຫໍສະໝຸດ 相）自动进样器样品
泵 溶剂输送系统
检测器
数据 系统
废液
仪器 介绍：
Alliance e2695 分
离单元
溶剂托盘及 容器
前面板显示 屏和键盘
样品室
泵-溶剂输 送单元
检测器 进样器
柱温箱
溶剂配比单 元
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起始点
流动相
流动相 X分钟后
色谱柱 固相
液相色谱法的分类：
按流动相和固定相的相对极性分 正相色谱（Normal Phase Chromatography） ＊固定相的极性大于流动相 反相色谱（Reversed Phase Chromatography） ＊固定相的极性小于流动相
极性 水 甲醇
异丙醇 乙腈 THF 乙酸乙酯 CH2Cl2 CHCl3 己烷
Waters高效液相色谱标准操作 Alliance 系列
目录
Contents
01 液相色谱原理及系统硬件介绍 02 Alliance系统基本操作 03 数据采集 04 数据处理 05 报告输出
01
液相色谱原理及系统硬件 介绍
液相色谱法原理：
是利用混合物中各组分在不同的两相中溶解、分配、吸附等化学作用性能的差异，当两相作相对运动时，使 各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离。
Waters e2695高效液相色谱仪操作规程
Waters e2695下效液相色谱仪支配规程之阳早格格创做1 手段指挥战典型Waters e 2695下效液相色谱仪的支配.2适用范畴该支配规程适用于Water e 2695下效液相色谱仪的支配.3工做考验员应按支配规程举止仪器支配，品量监督员控造监督该支配规程的粗确实止.4支配本仪器由Waters e 2695分散单元、Waters 2998两极管阵列检测器、Waters ELSD 2424挥收光集射检测器、Empower3色谱处事站战挨印机组成. Waters e2695分散单元包罗四元梯度洗脱的溶剂输支系统，四通道正在线实空脱气，可容纳120个样品瓶的自动分散单元，柱温箱，内置的柱塞杆稀启垫荡涤系统，溶剂瓶托盘；隐现器，键盘用户界里.4.1.2.1依次交通Waters e 2695分散单元、检测器、估计机战挨印机的电源.4.1.2.2交通Waters e2695分散单元后，约20s仪器开初自检，约3mn内各部件的初初化完成，待主屏幕上圆题目区出现“Idle”时，仪器加进待命状态.确认所有溶剂管路皆充谦溶剂，按[Menu／Status】，加进“Status(1)”屏幕，光标选“Degasser”，按[Enter】.当色谱仪流路不溶剂大概系统中有气氛时，需举止搞灌注(DryPrime)，注进震动相.可则，举止干灌注(Wet Prime)以驱除气泡.搞灌注：按主机里板上[Menu／Status】，加进“Status(1)”隐现，按[Direct Function】，采用“Dry Prime”，选溶剂通道，如Open A，选“DurationIIi按数字键输进5分钟，按”COntinue”，待规定时间中断后，沉复支配，使所需的溶剂通道注谦震动相.干灌注：加进“Status(1)”隐现，选溶剂通道，输进100％，按[DirectFunction]，选“Wet Prime”，按【OK】，根据里板提示树坐流速即时间(默认流速为7．5ml／min，普遍不必变动，时间可树坐为5min)，按【0K】.正在“status(1)”，屏幕下，光标选“Composition”，输进震动相的组成.按【Direct Function]，光标选“Purge Injector”，按【Enter]，隐现“Purge Injector”屏幕，输进“Sam ple Loop Volumes6．0”，光标下移“Compression Check”，按任性数字键，按【OK].正在主屏幕下，按【Diag]，隐现“Diagnostics”屏幕，按【Prime Ndl Wash】，隐现“Prime Needle Wash”屏幕，按[Start]，30s内应睹溶剂从兴液排搁心流出.按【Close】、【Exit】.正在主屏幕下，按【Diag]，隐现”Diagnostics”屏幕，按【Prime Seal Wash】，隐现“Prime Seal Wash”屏幕，按[Start]，30s内应睹溶剂从兴液排搁心流出.按【Close】、【Exit】.待排搁心有火流出，按【Half】、【Close】、【Exit】.挨开样品舱门，隐现"Door is Open"屏幕，将样品盘与出，把样品瓶拔出样品盘后，拆进样品盘，按【Next】直至所有样品盘拆毕，关好舱门.换上考验所需的色谱柱战震动相，加进"Status(1)”隐现，采用流路、设定流速、柱温，按【Enter】开初注进震动相，常常情况下约1 5～30分钟色谱柱可达到仄稳，不妨开初进样，支集数据.5 Empower 3硬件的应用5.1 建数据支集要领5.1.1单打电脑屏幕上的"Empower"快速图标，出现Empower登录界里，输进用户名战暗号.5.1.2单打下档键，采用用户典型战QuickStart界里.5.1.3采用QuickStart界里，面打“决定”，而后采用选定的支配名目以及色谱系统(仅查看数据可采用色谱系统中的“不系统”)，单打“决定”.5.1.4登录Empower的QuickStarlt界里.5.2 编写仪器要领战要领组（以e2695_2998为例）.5.2.1．支集栏单打“要领组编写背导”：5.2.2采用“新建”选项.5.2.3弹出仪器要领编写器.5.2.4单打“2695”，弹出2695编写界里.5.2.4.1 Aliance系统(包罗2695、2795战2695D)通用编写页里中，可采用“单次输支体积”，请针对于分歧的流速选定适合的单次输支体积，以保证最好的流速粗度与准度.5.2.4.2查看脱气选项，确认树坐粗确.5.2.4.3流量选项中树坐“泵模式”、“总流量”以及震动相配比.5.2.5单打2998，弹出2998编写界里.5.2.5.1 3D数据支集：正在通用栏中采用开用3D数据，输进检测波少的范畴；5.2.5.2支集2D数据，面打“2D通道”，最多可共时支集8个分歧波少的通道的数据.5.2.6面打“文献”，采用“另存为”：输进仪器要领称呼，面打“保存”；面打“文献”，采用“退出”.5.2.7正在被选项中采用所需的仪器要领称呼，面打“下一步(N)”.5.2.8正在下推菜单中采用所需的处理要领战报告要领（如果不符合的要领采用“无处理”、“无报告”)，面打下一步.5.2.9输进要领组称呼，单打“完成”.面打加进“仄稳系统／监视基线”界里，采用相映的仪器要领，面打“仄稳／监视器，正在监视窗心监视基线至系统仄稳，停止系统监视状态，面打“进样”.5.3.1．单进样：面打，加进“定义单进样参数”编写界里，输进样品名、功能、要领组等参数，面打“进样”.5.3.2使用背导建坐样品组战样品组要领.5.3.2.1采用“运止样品”，而后单打“样品行列”，加进样品列表.5.3.2.2单打“新建样品组背导”，建坐样品组.5.3.2.3采用创造样品组要领典型为“Lc大概PDA”，而后面打“定义样品板”.5.3.2.4正在“采用尺度进样正在何处开初”中采用符合的选项.查看开初加载样品瓶的位子是可粗确，面打“下一步”.5.3.2.5正在形貌标样中需要树坐一下实量：样品组中的标样数：×；每瓶标样进样次数：X；进样体积：x；运止时间：XX；要领组XXX；面打“选项”：输进下一进样延缓时间X；面打下一步.5.3.2.6样品数：X；每瓶样品进样次数：X；进样体积：X；运止时间：X；要领组X；面打选项：输进下一进样延缓时间X；面打下一步.5.3.2.7正在辨别尺度样界里中，输进标样称呼，删量后缀使用1．正在辨别样品界里中，输进样品称呼，删量后缀使用a.面打下一步.5.3.2.8运止模式选项中采用“只尝试”.查看纲要，面打下一步.【注：弹出组分编写器，输进标样中每个组分的称呼(内标不需要输进含量).不妨直交关关该窗心，正在处理数据的时间再增加】.5.3.2.9面打完成，正在菜单栏中采用文献.5.3.2.10为要领组命名并保存样品组要领.5.3.2.11单打“样品行列”，挨开运止样品窗心，面打运止目前样品组要领键，采用运止.5.3.2.11采用需运止的样品组称呼，面打运止.5.3.2.13样品组运止历程中，正在“正正在运止”栏中正正在运止以及运止完成的样品以红色隐现.(注：以背导建坐的样品组尾止功能普遍为扫除矫正，普遍正在运止样品前简略该止大概改为“仄稳”.)5.4.1 2D数据处理要领5.4.1.1单打“欣赏名目”键，正在“样品组”中采用目标样品组.5.4.1.2正在样品组上面打鼠标左键采用“查看相关→通道”，样品组正在单个通道中隐现.5.4.1.3采用定最矮浓度的标样，面打鼠标左键，采用下推菜单中的查看，会隐现已处理的色谱图形.5.4.1.4面打处理要领背导快速键，采用创造新处理要领，面打决定.5.4.1.5确认处理典型为LC，积分办法可采用为保守，再面打使用处理要领背导，采用决定.5.4.1.6常按鼠标左键，采用色谱图上最窄峰.(注：正在色谱图天区圆不妨搁大某个需要监测的峰.面打鼠标左键齐视图不妨还本色谱图.)5.4.1.7正在色谱图的积分界里采用一段典型基线动做积分的阈值，面打下一步.5.4.1.8常按鼠标左键，正在基线上采用积分的起止时间面.5.4.1.9提议采用最小峰下，采用所要积分的下度最小峰(大概键进相映数值).小于此峰下90％的峰将不被积分.面打下一步.5.4.1.10定量要领采用里积，组分疑息采用含量，矫正典型采用线性.面打下一步.5.4.1.11跨通道内标样界里面打可.5.4.1.12果为采用的是标样，面打峰1不妨瞅到一个下推菜单采用相映的组分称呼大概者键进运止样品相映的称呼.增加组分称呼相匹配的尺度含量，而后面打下一步.5.4.1.13如果是多面矫正样品，跳过增加含量的窗心直交面打下一步.(单面矫正可正在那里增加含量).5.4.1.14采用中标法：5.4.1.15采用简单内标样，需要正在下推菜单中采用大概键进内标相映的称呼，而后面打下一步.5.4.1.16采用多沉内标需要输进所有内目标称呼.5.4.1.17为处理要领命名，面打完成.色谱图界里会隐现该处理要领应用后的色谱结果，包罗积分.5.4.1.18如需为积分要领增加积分事变，鼠标左键面打色谱图窗心，采用增加积分事变.积分事变所示功能会坐刻应用于处理要领中.5.4.1.19编写处理要领的下档功能需要采用快速键.有所有变动均需再次保存处理圆法.5.4.1.20面打峰表底部可预览2D通道战峰.5.4.1.21面打“欣赏名目”键，采用“通道”大概“样品组”标签栏，左键面打目标样品组大概通道并采用处理.5.4.1.22正在处理界里，采用使用指定的处理要领，采用相映的处理要领称呼，面打浑除矫正，采用矫正并定量.5.4.1.23面打决定，数据处理，爆收截止.可正在截止栏中查看.5.4.2.1面打“欣赏名目”键，正在“样品组”中采用目标样品组.5.4.2.2正在样品组上面打鼠标左键采用查看相关通道，样品组中各个数据正在单个通道中隐现.5.4.2.3采用定量最矮浓度的标样，面打鼠标左键，采用下推菜单中的查看.5.4.2.4正在预览界里采用“表面线”标签栏，会隐现已处理的表面图.5.4.2.5从处理大概左键下推菜单中采用提与色谱选项.5.4.2.6键进所需要提与的波少，按回车键，得到该波少的色谱图.5.4.2.7面打处理要领快速键，采用创造新处理要领，确认处理典型为PDA，积分办法可采用为保守，再面打使用处理要领背导，面打决定.5.4.2.8常按鼠标左键，采用色谱图上最窄峰.(注：正在色谱图天区内不妨搁大某个需要监测的峰.面打鼠标左键采用齐视图不妨还本色谱图.)5.4.2.9正在色谱图的积分界里采用一段仄滑的基线动做积分的阈值，面打下一步.5.4.2.10常按鼠标左键，正在基线上采用积分的起止时间面.5.4.2.11提议采用最小峰下，采用所要积分的下度最小峰(大概键进相映数值).小于此峰下90％的峰将不被积分.面打下一步.5.4.2.12定量要领采用里积，组分疑息采用含量，矫正典型采用线性.面打下一步.5.4.2.13跨通道内标样界里面打可.5.4.2.14果为采用的是标样，面打峰1不妨瞅到一个下推菜单采用相映的组分称呼大概者键进运止样品相映的称呼.增加组分称呼相匹配的尺度含量，而后面打下一步.5.4.2.15如果是多浓度面的一组标样，跳过增加含量的窗心直交面打下一步.(简单浓度不妨正在那里增加含量).5.4.2.16采用中标法：5.4.2.17采用内标法简单内标样矫正，需要正在下推菜单中采用大概键进内标相映的称呼，而后面打下一步.5.4.2.18采用多沉内标需要输进所有内目标称呼.5.4.2.19 PDA杂化及匹配选项：5.4.2.20为处理要领命名，面打完成.色谱图界里会隐现该处理要领应用后的色谱结果，包罗积分.5.4.2.21正在“文献”下推菜单中采用“另存为”要领组，将该处理要领存进要领组.(注：3D数据必须用要领组处理.)5.4.2.22如需为积分要领增加积分事变，鼠标左键面打色谱图窗心，采用增加积分事件.积分事变所示功能会坐刻应用于处理要领中.5.4.2.23编写处理要领的下档功能需要采用快速键.5.4.2.24面打“欣赏名目”键，采用“通道”大概“样品组”标签栏，左键面打目标样品组大概通道并采用处理.5.4.2.25正在处理界里，采用使用指定的处理要领，采用相映的处理要领称呼，面打浑除矫正，采用矫正并定量.5.4.2.26面打决定，数据处理，爆收截止.可正在截止栏中查看.6查看截止战视图筛选6.1采用“截止”标签栏，使用视图筛选器从下推菜单中采用即日.6.2采用需查看的截止，左键面打采用查看.6.3查看截止面打快速键，查看每个组分的矫正直线.切换至主窗心面打.7预览截止并创造报告要领7.1面打“预览名目”切换回截止表隐现状态.7.2选中一个大概多个截止，面打鼠标左键采用预览.7.3若采用一个截止，正在预览窗心采用使用一下要领：使用缺省单个报告，单打决定.7.4预览报告并查看数据.面打“编写要领”键建改报告要领.7.5单打色谱图大概峰截止表编写报告属性.7.6面打文献，采用保存，为新建的报告要领命名.面打预览报告.7.7如需将报告保存为PDF要领，面打.8要领组的建坐以上道解了怎么样建坐仪器要领、处理要领战报告要领，推拢不妨得到一个要领组.8.1监视区单打要领组编写背导：8.2弹出新要领组：采用仪器要领界里.采用相映的仪器要领，面打下一步.8.3采用缺省要领界里采用相映的处理要领战报告要领，导出要领缺省.面打下一步.8.4命名要领组，面打完成.8.5正在运止样品时，要领组／报告要领中调用该要领组，不妨自动完成支集、处理、报告数据过程.9数据管造9.1.1正在QuickStart界里，采用菜单“管造一备份目前名目”.9.1.2出现“名目备份背导”，面打下一步.9.1.3出现“名目备份背导一采用手段天’’通过欣赏采用手段天，提议采用正在非支配系统拆置的硬盘分区内.采用完成，单打“决定”关关后，回到名目备份窗心，单打“下一步”.9.1.4出现“名目备份背导一备份隐现”.确认数据的复造已经乐成，再单打“下一步”.9.1.5出现备份数据背导一开初界里.面打完成，中断备份. 9.2.1正在QuickStart界里，采用菜单“管造”，下推菜单中采用“还本名目”.9.2.2出现“还本名目背导”.通过“欣赏”采用被还本的名目天圆的路径，单打“确定”.9.2.3单打下一步.9.2.4如出现类似以下实量的对于话框(名目名test已经被使用.请输进另一个名目名)，则需为还本的名目另起一个名字.9.2.5正在“输进磁盘空间配额’’页中，输进名目名，并注意此处的“表空间配额”应不得小于欲还本的名目本有的配额(数据文献大小)，而后单打“下一步”.9.2.6如果需要，不妨正在此页里中，采用该名目是可属于某个女名目.9.2.7正在“还本隐现’’中，如果出现如下对于话框(还本的名目需要被革新到下一个版本)，单打“决定”.(注：当还本由Millennium大概Empower的先前版本创造的名目时，需要为该名目采用时区.)9.2.8正在“还本隐现”中，等待数据还本中断后，单打“完成”.(注：提示：正在沉拆Empower硬件之后，不妨通过还本名目将相关的名目数据举止还本.) 10名目管造10.1.1加进到Empower3的QuickStart界里.正在菜单中采用“管造一创造新名目”.10.1.2出现“新名目背导”的对于话框，采用新建名手段女名目：10.1.3单打“下一步”，弹出“新建名目背导一表空间”，表空间50MB为默认树坐，可根据需要删减.10.1.4出现“新建名目背导一选项”页.采用用于本名手段选项，如果无法决定适合的树坐，请交受默认选项.单打“下一步”.10.1.5新建名目背导一考察统造：根据需要采用树坐对于您所创造的名目具备考察权力的用户战用户组，大概者交受缺省的选项，而后单打“下一步”.10.1.6新建名目背导一复造所选项：需要采用复造的名目，普遍采用Defaults名目.(注：此页的复造是指从另一个名目复造现有树坐，不妨复造名手段“视图筛选器”、“黑定义字段”、“要领”战“参数”.所以，普遍不允许变动大概使用Defaults名目中的所有数据.)正在建坐了新名目以去，不妨根据需要正在分歧的名目之间举止切换.10.2.1加进Empower3的Quick$tart界里，采用菜单“管造一改变系统／名目”.10.2.2改变系统／名目：根据需要举止采用名目大概者采用系统(如果存留两个大概者两个以上的系统).采用完成后，单打决定.如果采用了“正在该窗心切换名目／系统”，目前的名目／系统会被新选中的名目／系统所代替，如果采用了“为名目／系统挨开新窗心”，则会为选中的名目沉新挨开其余一个QuiekStart的界里.10.2.3正在新的名目／系统的QuickStart界里内即可举止下一步的支配.10.3.1正在QuickStart界里，采用菜单“视图一系统”，查看系统.10.3.2出现系统疑息窗心.正在该窗心中，不妨正在天面栏中查看隐现的天面是可与仪器的树坐相共.别的，可从“仪器”选项卡里的“仄常?”一栏中查看仪器状态，正在仄常状态下，应隐现“是”字样.如有仪器正在“仄常?”一栏出现“可”，可单打“扫描仪器”举止查看.如查看后隐现“是”，即回复仄常.(注：当仪器联机出现过失，大概者出现“仪器堕落”字样的时间，即可通过支集服务器属性去查看仪器状态，推断大概引起该问题的本果.)10.3.3.1正在QuickStart界里，选菜单“管造一新建系统”. 10.3.3.2出现“新建色谱系统背导一输进典型”页里，采用系统典型为“新建系统”.而后单打“下一步”.10.3.3.3出现“新建色谱系统背导一采用系统”页里，正在“可用仪器”组中，选中新系统的组件，而后用鼠标拖拽至左侧“新系统仪器”组中.采用完成，单打“下一步”.如有误选，则如法，将误选的新系统仪器，用鼠标拖拽回“可用仪器”组中.(注：可沉复使用已摆设系统中的仪器，但是一次只可有一个使用共享仪器的系统不妨正在线.)10.3.3.4出现“新建色谱系统背导一考察统造”页里.(注：您创造系统时，您即为系统的所有者.系统创造后，不妨建改系统的属性及变动所有者、考察权力战摆设等仔细疑息.) 11关机11.1使用完成，按确定用适合的溶剂浑洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针战柱塞杆稀启垫，保证2695分散单元已实足浑洗搞洁后，关关电源开关.11.2数据支集完成后，关关所用检测器的电源开关.11.3数据处理并挨印报告后，关关估计机战挨印机电源开关.11.4考查中断，正在仪器使用记录表上备案，仪器管造人员考查签名.12仪器维护与调养12.1屡屡使用前后，查看分散单元上各溶剂瓶中溶剂的量，即时补充各瓶中相映的溶剂.12.2屡屡使用前后，挨开分散单元最底下的分散泵的舱门，查看各管路交心，有无慢冲盐析出的情况.如出现红色盐渍，应拆下其天圆的部件，先后用火战甲醇超声荡涤，并安拆好.12.3随时查看仪器的使用记录.12.4如万古间不使用该仪器，则需每半年依照《下效液相色谱仪功夫核查规程》查看一次，并搞好维护记录.。
Waters e2695高效液相色谱仪操作规程
Watｅrs e2６95高效液相色谱仪操作规程1 目得指导与规范Ｗaters e2６９5高效液相色谱仪得操作。
２适用范围该操作规程适用于Wａter e 26９5高效液相色谱仪得操作。
３职责检验员应按操作规程进行仪器操作,质量监督员负责监督该操作规程得正确执行。
4操作４、1仪器组成与开机4．1.1仪器组成本仪器由Watｅrs e 26９5分离单元、Waｔers2998二极管阵列检测器、Ｗaters ELＳD ２42４蒸发光散射检测器、Ｅｍpoｗeｒ3色谱工作站与打印机组成。
Wａtｅｒｓe269５分离单元包括四元梯度洗脱得溶剂输送系统,四通道在线真空脱气，可容纳120个样品瓶得自动分离单元,柱温箱,内置得柱塞杆密封垫清洗系统,溶剂瓶托盘;显示器,键盘用户界面。
４．1.2开机4.1.2、1依次接通Waters e 2695分离单元、检测器、计算机与打印机得电源。
4．1.２、2接通Waterｓe2695分离单元后,约２0s仪器开始自检,约3ｍn内各部件得初始化完成,待主屏幕上方标题区出现“Iｄle”时,仪器进入待命状态。
４、2溶剂管路系统得准备4.2.1流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂,按［Mｅnｕ/Stａtus】,进入“Ｓｔａｔｕｓ(1)”屏幕,光标选“Degassｅｒ”,按［Enteｒ】。
4.2.2灌注当色谱仪流路没有溶剂或系统中有空气时,需进行干灌注（DryPriｍe),注入流动相。
否则,进行湿灌注(WeｔＰｒiｍe)以驱除气泡。
干灌注:按主机面板上［Menu／Sｔａｔus】,进入“Ｓtatus（1）”显示,按[Direct Fuｎｃtion】,选择“Dry Prime”,选溶剂通道,如Ｏｐｅn A，选“DｕｒａｔionＩIi按数字键输入5分钟，按”ＣOntｉｎｕe”,待限定时间结束后,重复操作,使所需得溶剂通道注满流动相。
湿灌注:进入“Ｓｔaｔuｓ(１)”显示,选溶剂通道，输入100%，按[DirectFunction],选“Wｅt Ｐrｉme”，按【OK】,根据面板提示设置流速及时间(默认流速为7、5ml ／min,一般不用更改,时间可设置为5ｍin),按【０K】。
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Waters e2695 型高效液相色谱仪操作方法
仪器组成及开机 溶剂管理系统的准备 样品管理系统的准备 运行样品 数据采集 报告打印 关机
Waters e2695 型高效液相色谱仪操作方法
仪器组成及开机 1 仪器组成
Waters e2695 分离单元 2498型紫外检测器 色谱管理工作站
打开真空脱气机（degasser）
Wet prime（执行湿灌注）
流动相平衡色谱柱
同理温度、流速都可在此控制面板设定！
流动相特性
（1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变， 极性改变，可显著改变组分分离状况； （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定 相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。 （3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非 极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环 > 四氢呋喃> 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷> 氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)
色谱图 参数基本概念
峰面积 － Peak Area 峰与峰底之间的面积,又称响应值 标准偏差；σ － Standard Error 0.607倍峰高处所对应峰宽的一半 拖尾峰 － Tailing Pea
前伸峰 － Leading Peak 前沿较后沿平缓的不对称峰
溶剂管理系统的准备
流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按 【 Menu/Status 】，进入“ Status （ 1 ）”屏幕
溶剂管理系统的准备
必须用色谱纯有机溶剂，水或缓冲盐要用超纯水；
水相流动相需要每48h重新配制，特别是100%含水流 动相；
检查6根管子是否均在液面下，必须保证6根管子全部 插到溶剂瓶底部。
打印机
四元梯度洗脱的溶剂输送系统 四通道在线真空脱气机 可容纳 120 个样品瓶的自动进样系统
柱温箱
液晶显示器
内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘
键盘用户界面及软盘驱动器
2 开机
打开电源至on位置，开机依次接通 2695 分离单元、检测 器、计算机和打印机的电源。接通后，约 20s 仪器开始自 检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化。
高效液相色谱如何工作
检测器连接计算机数据站，高效液相色谱系统单元先记录电信号，再 将电信号转换为色谱图，在显示屏上展现出来。
定性和定量样品内溶物浓度。
由于样品中化合物性质差异很大，几种类型的检测器被开发出来。 如果一个化合物能吸收紫外光，可使用紫外吸收检测器。 如果这个化合物发荧光，可使用荧光检测器。 如果该化合物没有上述性质之一，可使用更广泛的检测器，如蒸发光 散射检测器[ELSD]。 最强大的方式是顺序使用多个检测器。例如，紫外和/或蒸发光检测器 可和质谱仪[MS]联用来分析色谱分离的组分。这样，从一次进样，可 得到分析物的更多综合的信息。将质谱与高效液相色谱系统耦合称之 为液质联用.
色谱柱的使用及操作
流动相的转换要缓慢 流速(压力)的变化幅度较小，比较稳定 温度的变化幅度 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求
记 住 ∶ 拿 到 一 根 从 未 用 过 的 色 谱 柱 时 一 定 要 先 看 其 使 用 说 明 ！
样品管理系统的准备
装载样品盘（loading carousels）： 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置，打 开样品仓门，显示“ Door is Open ”屏幕，装入样品 盘，按【 Next 】，直至所有样品盘装毕，关仓门。
高效液相色谱如何工作
一个储液瓶装有溶剂[称为流动相，因为溶剂是流动的]。 一个高压泵[溶剂传输系统或称溶剂管理器]用来产生和计量流动相的 流速，一般是毫升/分钟。 一个进样器[样品管理器或自动进样器]可以将样品导入[注射]连续的流 动相 ，并由流动相携带样品进入高效液相色谱柱。 色谱柱装有能获得分离效果的填料。这种填料称为固定相因为它被柱 硬件包围住。 检测器用来查看化合物流出色谱柱时被分开的谱带[大多数化合物没有 颜色，所以人眼观察不到]。 流动相流出检测器可被送至废液瓶，或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带，高效液相色谱可以收集含有纯 化的化合物的该洗脱组分，用于进一步分析。 注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元，形 成流动相、样品和化合物分离谱带的通路。
色谱图 参数基本概念
死时间，t0 － Dead time 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的时间
保留时间，tR － Retention time
组分从进样到出现峰最大值所需的时间 死体积，V0 － Dead volume
不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
Waters e2695 型
高效液相色谱仪 操作方法
主讲人：马贵红 日期：2010-07-17
什么是高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography
高效液相色谱法，简称：HPLC
是一种基于仪器方法的高效能分离手段：
高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵 敏度的检测器……
定的检测器的参数的设置→设置好选另存为保存此仪器方法
→关闭）此时上述编辑的仪器方法出现在列表中
运行样品
在浏览项目中打开你的项目，通过“新建方法组” 来设定具体仪器方法、处理方法、报告方法→另 存为“方法组”，设置方法名（与刚才的仪器方法 名相统一）→完成。
在“运行样品”中打开设定的仪器方法， 并在设针时选定设定的方法组来对样品进 行分析。
峰底 － Peak Base
峰的起点与终点之间连接的直线 峰高 － Peak Height 峰最大值到峰底的距离 峰宽 － Peak Width 在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离 半（高）峰宽 － Peak Width at Half Height
通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离
鬼峰 － Ghost Peak
并非由试样所产生的峰；亦称假峰
色谱图 参数基本概念
基线 － Baseline 在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的曲线 基线飘移 － Baseline Drift 基线随时间定向的缓慢变化 基线噪声；N － Baseline Noise 由各种因素所引起的基线波动 谱带扩展 － Band Broadening 由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中 谱带宽度增加的现象
广泛应用于各个领域：
医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业……
在技术，理论及应用上仍处于发展阶段
什么是高效液相色谱法
定量分析主要基于与标准品的比较
是其最大应用领域
定性分析；不是色谱的强项
基于样品的保留时间比较 借助于和其联用的紫外、质谱或其他检测器
对定量及定性分析的要求
灵敏度、精度及准确度的要求 样品量的要求；复杂样品的分析能力 容易使用
样品方面要求
溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除 由于污染对分析结果的影响。 色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小 颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。 仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也 会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。 除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度,如样品的溶剂不是流动相，一定要确 保样品在流动相中不析出。 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用。
标，选好后点“文件”下的“另存为”→“方法组”，设定即可。
至此选好处理方法。
结果处理：选好数据，右键选处理→选好方法组（上面设定好的）
点结果即可给出处理好的数据
注：通道无论什么时候给出的都是未处理数据。
FD数据处理： 点“处理方法向导”图标→新建处理方法→在新方法 （方法类型中选LC）→新建处理方法→峰1、峰2→积分区域（选定 要积分的峰）→给出条件剔除不要的峰→→→……→处理方法名→完 成（然后又出现主窗口，处理结果自动给出） →至此选好处理方法。
流动相方面要求
除去微粒 纯度的要求
超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低（建议走空白 检验） 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内 缓冲液（盐）的浓度 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂 有机溶剂或水的比例
流动相对样品的溶解度
保留体积，VR － Retention volume 组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
报告打印
在结果中，选择图谱点打印，报告打印时，选择 设定好的报告模式，或者选择 “缺醒单个报告”模式 打印，在待打印的模式下可以编辑报告显示的信息， 比如表头，色谱图的显示范围，表格中所需内容等。
关机
色谱图：HPLC图形结果（Chromatogram）
色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信 号对时间的曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留 时间。
← 色谱峰 峰高
峰宽
基线 ↓ 保留时间（分）