Waters 515高效液相色谱仪使用方法
Waters高效液相色谱系统操作规程
Waters高效液相色谱系统操作规程1. 目的规范Waters高效液相色谱系统的使用和维护。
2. 范围本规程适用于Waters高效液相色谱系统的使用和维护。
3. 职责质检室仪器分析员负责Waters高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4. 系统组成本系统由Waters 600E多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、Waters在线脱气机、Rheodyne 7725i 手动进样阀、Waters 2487双通道紫外检测器、Millennium32色谱工作站/电脑等组成，另外还包括打印机、断电保护器和通风柜等辅助设备。
5. 程序5.1. 准备5.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45μm滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
5.2. 开机和泵操作5.2.1. 开机5.2.1.1. 接通断电保护器的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
5.2.1.2. 打开Millennium32软件，按「Login...」，输入用户名和密码，按「OK」注册进入系统主界面。
在Project档内选择所需的项目，右击『Run Samples』图标，选择色谱系统“600_2487”后打开QuickSet窗口。
5.2.2. 更换溶剂5.2.2.1. 打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN位置；5.2.2.2. 将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；5.2.2.3. 按［Direct］键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min（梯度配比阀在0ml/min时不工作）；5.2.2.4. 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100%，其它为0%；5.2.2.5. 将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；5.2.2.6. 逆时钟转动手柄至DRAW位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂；5.2.2.7. 再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；5.2.2.8. 转动手柄至RUN位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。
1waters高效液相色谱仪操作标准
【目的】：制定高效液相色谱仪的操作标准，确保操作人员正确操作。
【范围】：本标准适用于高效液相色谱法进行的检测。
【责任】：高效液相色谱仪的操作人员。
【内容】：1 组成: 高压输液泵、柱箱、检测器、系统控制器、数据工作站及打印机。
2 使用要求：2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室高效液相色谱仪检定规程（JJG705-90）”的规定作定期检定，应符合规定。
2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。
2.3 仪器的一般要求及系统适用性试验见“高效液相色谱法检验操作标准”项下规定。
2.4 若需要梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。
2.5 使用前详细参阅各操作说明书。
3 操作方法：3.1 基本操作说明3.1.1 将溶剂输半空塑料管置溶剂瓶内液面下，打开电源开关，机器开始作自我检查，注意是否有任何故障讯息出现，屏幕出现在设定“FLOW”的界面上。
3.1.2 以反时钟方向转松“溶剂抽取阀门”，以10ml针筒插入阀门洞口，抽取约20ml，然后在阀门下方放置一小烧杯，准备接废液。
3.1.3 在“FLOW”设定界面上，按一下“EDTT/ENTER”键，数字光标开始闪烁，连续按压“▲▼”键设定流速至8.0ml/min，再按一下“RUN/STOP”键，启动PUMP流速来挤压排除气泡。
3.1.4 约等待30秒钟后，再按一下“RUN/STOP”键，停止PUMP流速，然后再将“溶剂抽取阀门”以顺时针方向转紧。
3.1.5 按上色谱柱，调整FLOW设定，逐步递增流速至所需条件，平衡稳定系统。
3.2准备工作：3.2.1 流动相的配制：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法项下对溶剂的要求进行检查，应符合要求。
水应为新鲜配制的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水；凡规定PH值的流动相应使用精密PH计进行调节。
waters超高效液相色谱仪操作步骤
第一部分：仪器准备1. 确保waters超高效液相色谱仪处于正常工作状态，检查仪器是否连接电源，是否有故障指示灯显示。
2. 打开色谱仪软件，检查仪器参数设置是否符合实验要求，包括流速、温度、检测波长等。
3. 准备所需的色谱柱、色谱柱连接器、进样器以及其他实验所需的耗材。
第二部分：样品准备1. 准备实验所需的样品，确保样品已经滤过或者处理过以去除杂质。
2. 根据实验要求，将样品溶解在适当的溶剂中，并进行稀释或者稀释。
第三部分：超高效液相色谱仪操作步骤1. 开始操作前，先进行系统平衡。
具体操作步骤为：将色谱柱连接至色谱柱连接器上，然后连接至色谱仪，用洗脱液平衡色谱柱。
2. 设置色谱仪的操作参数，包括流速、温度、检测波长等。
3. 进行样品进样，具体操作步骤为：将进样器连接至色谱仪，将稀释好的样品注入进样器中，设置好进样量。
4. 开始进行实验，监控色谱图谱的变化，记录实验数据。
5. 实验结束后，对色谱柱和色谱仪进行清洗和维护，确保仪器干净、整洁。
第四部分：数据处理和分析1. 对实验获得的数据进行处理和分析，比对标准曲线，计算样品中所含物质的浓度或者纯度。
2. 对实验结果进行统计分析，进行数据呈现，如绘制色谱图谱、制作数据统计图表等。
3. 通过数据处理和分析，得出实验结论，对实验结果进行解释和讨论。
第五部分：实验安全及注意事项1. 在操作过程中，注意个人安全，避免发生化学品溅泼或者接触有害物质。
2. 操作过程中需严格按照实验要求和操作规程进行，如有疑问请及时向实验指导老师或专业人士请教。
3. 实验结束后，及时清理实验台面和仪器设备，妥善存放试剂和耗材。
通过以上步骤的操作，可以保证在使用waters超高效液相色谱仪进行实验时，能够得到准确、可靠的实验结果，为科研工作和学术研究提供有力支持。
第六部分：精密控制与调试1. 在进行实验操作前，要确保色谱仪的各项参数已经精确调试完毕。
这包括流速、温度、压力、检测波长等参数的精准控制。
高效液相色谱仪的操作步骤
高效液相色谱仪的操作步骤高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术。
它利用液体流动相和固定相之间的相互作用，将样品中的混合物分离出来，并通过检测器进行定量分析。
本文将介绍高效液相色谱仪的具体操作步骤。
1. 准备工作在进行高效液相色谱仪的操作之前，首先需要进行一些准备工作。
检查色谱柱是否安装正确，确保色谱柱是干净的，并检查流动相的配制是否准确。
2. 样品制备根据需要分析的物质，准备好待测样品。
样品制备可以包括溶解样品、过滤样品等步骤，以确保样品的纯净度和稳定性。
3. 仪器开机将高效液相色谱仪接通电源，打开仪器的电源开关。
等待仪器初始化，并确保仪器各个部分正常工作。
4. 设置参数在仪器上设置分析所需的参数。
包括选择适当的检测器类型和检测波长、设置流量、温度等。
5. 启动系统启动高效液相色谱仪系统，等待系统稳定。
通常需要一段时间使得流动相在管路中充分平衡，并确保流量稳定。
6. 校正进行色谱柱的校正。
校正过程包括流量校正、波长校正等。
通过校正可以保证仪器输出结果的准确性和可靠性。
7. 注射样品将样品通过注射器引入色谱柱中，控制样品的注射量，通常在微升至毫升的量级。
确保样品的注射量稳定和准确。
8. 分离分析开始运行高效液相色谱仪系统，进行样品的分离与分析。
在此期间，流动相通过色谱柱，将样品中的化合物根据它们与固定相之间的相互作用进行分离。
9. 监测结果通过检测器对分离后的化合物进行监测。
根据检测器的信号，可以得到每个化合物的峰面积、保留时间等数据。
10. 数据处理将监测到的信号输入到数据处理软件中，进行结果的计算和分析。
通常可以得到各个化合物的峰高、峰面积等数据，从而实现对样品的定量分析。
11. 关机分析结束后，关闭高效液相色谱仪的电源开关，并进行必要的清洗和维护工作。
确保仪器的正常运行，并延长其使用寿命。
总结：高效液相色谱仪的操作步骤涵盖了仪器准备、样品制备、仪器设置、校正、样品注射、分离分析、结果监测和数据处理等多个方面。
Waters 515高效液相色谱仪使用方法
Waters 515高效液相色谱仪使用方法一、打开仪器与工作站：1.按要求配制流动相，经过滤、超声波脱气后装入贮液瓶中，然后将恒流泵上末端带有过滤器的输液管分别插入对应贮液瓶中。
2.打开电脑及色谱输液泵、二极管阵列检测器电源开关，在输液泵控制面板中，按向上或向下箭头，找到“Local”，按“Edit”进入可编辑状态，再按向上或向下箭头，调至“Rem.”状态，按“Edit/Enter”确认，按下面板左面的“Run/Stop”，此时屏幕右上角“Local”与“Run”相继闪动。
（接通电源前，应先用专用注射器从排液阀抽去泵前管路中可能存在的气泡）。
3.双击电脑桌面上“Empower”图标，输入用户名“system”与密码“manager”，确定，进入工作站主窗口。
二、运行样品：1.在主窗口中点击运行样品，选择采集数据的项目与色谱系统后，点击“确定”打开运行样品窗口。
2.运行样品窗口中，在左面写入样品名称与合适的运行时间，左下部分上下两个按钮分别为“改变流速”与“停止流液”，右下部分的“仪器方法”的下拉框中可以选定仪器方法，“编辑”可以对选定仪器参数进行编辑，“设置”用于将编辑好的仪器参数下载到色谱主机，“监视器”用于察看色谱基线情况，色谱图在窗口右侧显示。
3.分析样品之前应设定压力上限，以保护色谱柱。
4.设置各参数后，待基线平直才可进样。
5.将进样阀手柄置于“Load”(右上)位置，用微量注射器吸取一定量的试样溶液，插入进样口(插到底)并将试样溶液缓慢推入。
6.点击运行窗口左半部分中右侧的按钮“进样”，待窗口下面的状态栏中出现“等待进样”时，扳下进样阀手柄，进样运行即开始。
7.运行时间结束后自动停止运行，或可以单击上面的红色快捷按钮“停止运行”用以手动停止。
三、测定数据的察看1.在工作站主窗口中点击浏览项目，在右侧窗口选定相应方法组后确定，打开数据列表，在表中第一行选定“进样”，在表中找到相应数据，双击打开。
Waters高效液相色谱仪使用及维护
• 待系统平衡后，单击“中断” 监视基线。
，终止
单进样
• 待系统平衡好，在此页面输入进样信息，
点击
进样
序列进样
确认样品组名称正确，其他选项保持默认值，点击运行
• 跳出该窗口，点击确定，进行修改序列。
• 修改完毕点击
继续运行样品组。
•
图谱处理
•
图谱打印
图谱处理
• 选择所要处理的项目名称，点击确定
• 30%磷酸溶液，超声30分钟
一、每周一次，仪器面板操作。
• Purge Injector：面板操作: 打开状态 (Statas)画面→ →按右下角Direct Function功能键→ →选Purge Injector命令 → →选OK即可进行注射器的排气。
• Seal Wash：面板操作: 打开状态(Statas) 画面→ 按下面板上Menu/ Statas 键→按右 下角Diiag功能键→ →选Prime Seal Wash 命令→ →选Start即可，默认运行10分钟。
出现如下窗口
• （2.）编辑仪器方法 • （3.）保存方法：
• （4.）关闭“仪器方法编辑器”窗口
• 6.创建方法组：①选中所要的仪器方法，单 击“下一步” ②出现如下窗口选择处理方法、
报告方法以及导出方法，单击“下一步”
• ③命名
方法调用及平衡基线
•在
选择仪器方法，并点击
“监视器”，平衡系统监视基线
创建项目
• 在此对话框下需要确定项目根目录下还是项目层次结构的 一部分（作为父项目的一个子项目）。这种层次结构允许 将多个项目组织在一个公用项目结构中。
• 注：要将项目创建为新的顶级项目（父项目），单击“项 目”文件夹；要将项目创建为现有项目的子项目，单击现 有父项目的文件夹。
Waters超高效液相色谱仪操作规程f
浙江省制药工程重点实验室超高效液相色谱仪安全操作规程一、自检开主机和二极管阵列检测器（PAD），仪器进入自检阶段，自检完成后打开Empower软件。
二、配置系统管理数据（相当于新建文件夹），鼠标右键选新建，设定项目名（设定后将出现在运行样品中）。
三、运行样品在采集数据项目栏中选定项目（即将此次实验数据选择存放位置）→确定左栏可以设置有关样品的信息（样品名，功能，方法组，样品瓶，进样体积，运行时间）右栏出图，左下栏给出仪器信息，最下栏显示仪器状态。
步骤：创建方法组→选择仪器方法（新建→编辑仪器方法，包括主机和选定的检测器的参数的设置→设置好选另存为保存此仪器方法→关闭）此时上述编辑的仪器方法出现在列表中→下一步→出现“缺省方法项”对话框，点下一步→出现“命名方法组”，设置方法名（与刚才的仪器方法名相同）对话框→完成。
返回“运行样品”对话框，选方法组和仪器方法。
选定好仪器方法后即可监视基线，基线稳定后→中断按钮→仪器空闲后→点运行按钮，出现运行样品组对话框，设置好后点运行。
（运行过程中可以点中断按钮，也可在编辑下拉菜单中选“改变正在测试的样品”）→运行完后点文件中的“退出”。
四、数据处理点开“浏览项目”，选定要要浏览的项目，确定后进入的界面中有如下内容：样品组、进样、通道、方法、结果组、结果等。
“通道”里存的是原始的数据，这些数据要经过处理后才能得到“结果”，有结果才能打印报告。
PDA数据处理点“通道”→双击要处理的原始数据（点查看图标）→进入查看主窗口（此时点窗口中的工具栏可以看到等高图或3D图）→提取光谱图，找到最大吸收波长→提取色谱图→点“处理方法向导”图标→新建处理方法→用建立的处理方法处理→点“方法组”图标，选好后点“文件”下的“另存为”→“方法组”，设定即可。
至此选好处理方法。
注意事项：每隔24至48小时制备一次新鲜的水溶性流动相；样品进样前要用0.2µm的滤膜过滤以充分去除颗粒杂质；如果所使用的流动相中含有缓冲盐，用10倍柱体积的95%乙腈水溶液冲洗柱子；1。
Waters高效液相色谱系统操作规程
Waters高效液相色谱系统操作规程一. 准备1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制）。
2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
3. 接通电源，依次打开1525泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
4. 打开Breeze软件，进入系统主界面。
二. 操作步骤1.更换流动相。
2.在主界面中点击“Manage Breeze”按钮，选择system选项，出现系统连接示意图，观察各个部件是否连接好。
若未连接好，则需点击“Diagnostics/Reconfigure”进行诊断。
3.回到主界面，选择“Manage Breeze”中的project选项，单击“Make a new project”，“Next”，在“Project Name”中输入名称，单击“Finish”。
单击“Change a project/User”，在“Project”中选择输入的名称，单击“OK”。
4.单击“View Method”按钮，点击“Pump”图标，设置泵的参数。
点击“UV Det”图标，设置紫外检测器的波长。
单击“Save Method”按钮保存设置方法。
5. 打开泵的抽液阀，使用灌注注射器抽取一定量的洗脱剂。
单击Purge图标，出现“Purge Wizard”对话框，选中“Purge Pump”选项，点击“Next”“Next”，调节A、B泵的流量分别为约3ml/min。
打开泵的参考阀，点击“Next”。
Purge结束后关闭参考阀。
6.点击主界面中的“press to equilibrate system/ monitor baseline”按钮，平衡系统0.5－1h，直至基线稳定。
7.点击“press to make a single injection”按钮，进入“Specify Single Inject Parameters”对话框，设置参数，点击“inject”。
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Waters 515高效液相色谱仪使用方法
一、打开仪器与工作站：
1.按要求配制流动相，经过滤、超声波脱气后装入贮液瓶中，然后将恒流泵上末端带有过滤器的输
液管分别插入对应贮液瓶中。
2.打开电脑及色谱输液泵、二极管阵列检测器电源开关，在输液泵控制面板中，按向上或向下箭头，
找到“Local”，按“Edit”进入可编辑状态，再按向上或向下箭头，调至“Rem.”状态，按“Edit/Enter”
确认，按下面板左面的“Run/Stop”，此时屏幕右上角“Local”与“Run”相继闪动。
（接通电源前，应先用专用注射器从排液阀抽去泵前管路中可能存在的气泡）。
3.双击电脑桌面上“Empower”图标，输入用户名“system”与密码“manager”，确定，进入工作站主窗
口。
二、运行样品：
1.在主窗口中点击运行样品，选择采集数据的项目与色谱系统后，点击“确定”打开运行样品窗口。
2.运行样品窗口中，在左面写入样品名称与合适的运行时间，左下部分上下两个按钮分别为“改变流
速”与“停止流液”，右下部分的“仪器方法”的下拉框中可以选定仪器方法，“编辑”可以对选定仪器参数进行编辑，“设置”用于将编辑好的仪器参数下载到色谱主机，“监视器”用于察看色谱基线情况，色谱图在窗口右侧显示。
3.分析样品之前应设定压力上限，以保护色谱柱。
4.设置各参数后，待基线平直才可进样。
5.将进样阀手柄置于“Load”(右上)位置，用微量注射器吸取一定量的试样溶液，插入进样口(插到底)
并将试样溶液缓慢推入。
6.点击运行窗口左半部分中右侧的按钮“进样”，待窗口下面的状态栏中出现“等待进样”时，扳下进
样阀手柄，进样运行即开始。
7.运行时间结束后自动停止运行，或可以单击上面的红色快捷按钮“停止运行”用以手动停止。
三、测定数据的察看
1.在工作站主窗口中点击浏览项目，在右侧窗口选定相应方法组后确定，打开数据列表，在表中第
一行选定“进样”，在表中找到相应数据，双击打开。
2.在数据显示窗口中，中间上半部分为等高图区，中间下半部分为色谱图区，右上部分为光谱图区；
点菜单“处理”－“提取色谱”后，等色谱图区中出现一白色数据框，上下拖动或双击－输入相应波长值－回车后，在色谱图区出现相应色谱图；点菜单“处理”－“提取光谱”，可以在窗口色谱图区中出现一白色数据框，左右拖动或双击－输入相应波长值→回车后，光谱图区出现相应光谱图；
中间最下面的部分是峰表，表中有峰号、保留时间、峰面积、峰高等项目。
四、关机：
1.在运行样品窗口中，点击左下方两个按钮中的“停止流液”钮，退出工作站。
2.依次关闭检测器与输液泵电源，关闭电脑及其它相关电源。
3.冷却10min后，盖上仪器罩。
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