01植物组织培养校本教材
高二生物校本教材《植物组织培养技术》
校本课程开发方案植物组织培养技术绪论教学目的与要求1．掌握组织培养的概念和培养的类型2．掌握组织培养的特点3．一般掌握组织培养发展历史4．初步掌握组织培养在农业实践上的应用教学重点与难点植物组织培养的概念；植物组织培养技术和理论基础一、组织培养的概念高等植物的组织培养(tissue culture)技术是指分离一个或数个体细胞或植物体的一部分在无菌条件下培养的技术。
•通常我们所说的广义的组织培养，是指通过无菌操作分离植物体的一部分(即外植体explant)，接种到培养基上，在人工控制的条件进行培养，使其生成完整的植株。
•二、组织培养的类型组织培养按培养对象可分为：1.植株培养(plant culture)2.器官培养(organ culture)3.组织或愈伤组织培养(tissue or callus culture)•为狭义的组织培养，是对植物体的各部分组织进行培养，如茎尖分生组织、形成层、•木质部、韧皮部、表皮组织、胚乳组织和薄壁组织等等；或对由植物器官培养产生的愈伤组织进行培养，二者均通过再分化诱导形成植株。
4.细胞培养 (cell culture )5.原生质体培养(proplast culture )是用酶及物理方法除去细胞壁的原生质体的培养。
三、植物组织培养的基本理论（一）植物细胞的全能性植物组织培养的理论依据是细胞全能性。
所谓细胞全能性就是指植物体的任何一个有完整细胞核的活细胞都具有该种植物的全套遗传信息和发育成完整植株的潜在能力。
植物细胞的全能性是潜在的，要实现植物细胞的全能性，必须具备一定的条件：①体细胞与完整植株分离，脱离完整植株的控制；②创造理想的适于细胞生长和分化的环境，包括营养、激素、光、温、气、湿等因子。
（二）植物的再生性在植物分化根、茎、叶等器官的过程中，某处组织受到一定的损伤，则在受伤部位往往会产生新的器官，长出不定芽和不定根，从而形成新的完整植株。
脱分化：是指成熟细胞或已分化的细胞转变成为分生状态的过程，即诱导成为愈伤组织的过程。
《植物组织培养》电子教案
《植物组织培养》电子教案第一章：引言1.1 课程介绍本课程旨在让学生了解和掌握植物组织培养的基本原理、技术和应用。
通过学习，学生将能够进行简单的植物组织培养实验，并应用于植物繁殖、遗传改良和生物技术等领域。
1.2 教学目标了解植物组织培养的定义和发展历程。
掌握植物组织培养的基本原理和步骤。
培养学生的实验操作能力和科学思维。
1.3 教学方法讲授与互动讨论相结合，引导学生深入理解植物组织培养的相关概念。
通过实验操作，培养学生的实践能力和创新精神。
第二章：植物组织培养的基本原理2.1 植物细胞的全能性介绍植物细胞具有全能性的概念和证据。
解释植物细胞全能性的原因和机制。
2.2 植物组织培养的激素调控介绍植物激素在组织培养中的作用和重要性。
解释植物激素平衡对组织培养的影响。
2.3 植物组织培养的营养需求介绍植物组织培养中所需的无机和有机营养成分。
探讨不同营养成分对植物组织培养的影响。
第三章：植物组织培养的技术与方法3.1 外植体的选择与处理介绍外植体的选择标准和处理方法。
强调外植体处理对组织培养成功的重要性。
3.2 愈伤组织的诱导与增殖介绍愈伤组织的诱导方法和培养条件。
探讨不同植物激素对愈伤组织增殖的影响。
3.3 胚状体的诱导与分化介绍胚状体的诱导方法和分化条件。
分析不同植物激素对胚状体分化的作用。
第四章：植物组织培养的应用4.1 植物繁殖的新途径介绍植物组织培养在植物繁殖中的应用实例。
探讨组织培养对植物繁殖的影响和优势。
4.2 遗传改良与基因工程介绍植物组织培养在遗传改良和基因工程中的应用。
解释组织培养对植物遗传特性的影响。
4.3 植物生物技术的展望探讨植物组织培养在生物技术领域的未来发展。
激发学生对植物组织培养研究的兴趣和热情。
第五章：实验操作与实践5.1 实验材料与设备列出进行植物组织培养实验所需的材料和设备。
强调实验材料和设备的选择和准备的重要性。
5.2 实验操作流程详细描述植物组织培养的实验操作流程。
《植物组织培养》课件PPT第1章植物组织培养基本知识
②生长周期短，繁殖率高
由于人为控制培养条件，因此生长较快，一般20—30d为一个周期。植物 材料按几何级数繁殖生产，总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致 的优质种苗或脱病毒种苗。
③管理方便，利于工厂化生产和自动化控制
植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿 度、营养、激素等条件，既利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利 于自动化控制生产。它是未来农业工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、 田间栽培等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫害等一系列繁杂 劳动，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。
愈伤组织（callus）:在人工培养基上由外植体上形成的一
团无序生长状态的薄壁细胞。
愈伤组织
二、植物组织培养的类型
• 按培养方法分为 固体培养 液体培养 看护培养 微室培养 包埋培养
二、植物组织培养的类型
3.按培养过程分为：
• 初代培养（Primary culture）(无菌培养物)
将从植物体上分离下来的第一次培养。
4.4 组织及细胞培养生产有用物质
Arregnin和bonner在1950年首先进行了培养橡胶茎愈伤组织获 取橡胶的尝试。
近50年来飞速的发展。从400多种植物培养细胞中分离到600多种 次级代谢产物，其中60多种在含量上超过或等于其原植物，20种 以上干重超过1％。 在日本，人参细胞培养已达130600L发酵罐；德国用1000L发酵罐 培养毛地黄细胞；在我国，人参细胞培养技术也已实现产业化。 利用培养细胞的生物转化能力生产高值化合物，德国科学家进行 了出色的研究。他们在毛地黄细胞的培养中加入生物合成途径的 中间化合物毛地黄毒素和一甲基毛地黄毒素，培养细胞以几乎 100％的转化速率使之羟基化，变为医药强心剂地高辛。
植物组织培养教学大纲(生物)
《植物组织培养》教学大纲适用专业：高职应用生物技术等专业总学时：86学时１．课程的性质和任务：植物组织培养是现代植物生物技术的重要分支之一，是人们在无菌条件下利用人工培养基对植物细胞、组织或器官的培养。
这项技术目前已在科研和生产上取得了令人瞩目的进展，该学科在我国高等农林院校植物生产类专业中已被列为一门重要的专业基础课程。
由此可见，不论在理论研究上或在生产实践上，植物组织培养都日益显示出十分重要的作用。
通过对植物组织培养的基础理论和基本方法的学习，使学生较能准确地掌握这门技术并能应用于自己的学习和工作中。
２．教学基本要求：根据《植物组织培养》课程的特点，结合本专业的实际情况，要求以理论教学（即课堂讲授）和实践相结合的教学方式完成该课程的教学任务。
理论教学重点讲授基本概念、基本原理和基本方法（总论）。
至于一些典型植物（主要是园艺作物或观赏植物）的组培理论和组培方法则放在课程实习时加以概述，具体的培养技术有待于同学们在以后的工作中实践。
课堂讲授要求重点突出，条理清晰，层次分明，详略得当。
与此同时，植物组织培养也是一门与生产实际结合比较紧密的课程，相应的实验和实习环节是不可缺少的。
通过参加一定的实验和实习，能进一步提高学生对所学知识的理解，培养和锻炼学生的动手能力和实践技能。
３．理论教学内容第1章绪论教学目的和要求本章要求学生了解植物组织培养的发展简史及研究现状，理解和掌握植物组织培养的有关概念，深刻认识植物组织培养在科学研究与生产实践中的重要作用和地位。
植物组织培养的一般概念教学重点难点植物组织培养概念教学内容§1-1植物组织培养的发展简史1．探索阶段2．奠基阶段3．迅速发展阶段§1-2植物组织培养在科学研究和生产实践中的地位与作用第2章实验室的设计、基本设备及一般操作技术教学目的和要求通过对本章的学习，要求学生对植物组织培养实验室的基本组成、基本设备及基本操作技术能有一个较全面的认识。
植物组织培养教学大纲
中等职业学校《植物组织培养》教学大纲一、课程性质与任务本课程是高等农业院校生物类专业本科学生的专业选修课程。
本课程主要向学生传授组织培养技术的实验室设计，培养基制备，灭菌和培养驯化基本技能，以及各种器官的接种培养，无毒苗接种培养，原生质体的接种培养，及草本花卉接种培养，水果植物的接种培养和经济类作物的接种培养等。
通过本课的学习，使学生掌握组织培养的基本理论和相关操作原理和操作规范，并能较比较熟练地操作组织培养的相关技能，最后达到掌握系统的组织培养技术，为未来从事相关工作奠定牢固的理论和实践基础。
二、教学目标通过本课程的学习使学生了解植物组织培养在农业科学研究和生产中的作用及国内外植物组织培养的发展概况和发展趋势。
学习植物组织培养的原理、基本操作技术和主要培养类型，掌握现代植物组织培养技术的一般操作程序和自主研究的工作方法。
本课程遵循“充实更新教学内容，加强应用能力培养”的原则，在教学内容上力求先进，反映国内外植物组织培养技术的新近发展状况，把最新的进展和可能的发展趋势介绍给学生，引导学生的发散性思维；要求学生自己上网查找相关资料，发表自己的看法。
改变以往教学中“不注重学生独立自主研究能力的培养”，在有限的学时中向学生介绍较为丰富、实用的植物组织培养技术，并让学生获得较多的实验机会，为学生在今后的科研和工作岗位熟练运用这项技术奠定坚实的基础。
提高学生综合运用知识的创新能力。
三、教学内容结构1.植物组织培养的基本技术2.植物组织器官培养3.茎尖分生组织培养4.单倍体细胞培养5.植物离体繁殖技术四、教学内容及教学要求(一) 理论教学大纲及学时分配绪论第一节植物组织培养的原理和发展概况1.植物组织培养的原理2.植物组织培养的发展简史3.国内植物组织培养的发展状况第二节植物组织培养在农业科研生产中的应用1.在植物育种上的应用2.在植物脱毒和离体快繁上的应用3.在次生代谢产物生产上的应用4.在植物种质资源保存上的应用本章重点、难点：重点是掌握细胞的全能性和植物再生性特点和愈伤组织的发生和形态建成培养基成分的特点；难点是掌握细胞的全能性和植物再生性产生的原理和愈伤组织的发生和形态建成的原理。
植物组织培养教科书
植物组织培养教科书
目前市场上有很多植物组织培养教科书可以选择。
以下是一些常见的植物组织培养教科书，供您参考：
1. 《植物组织培养学》：作者刘义光，北京大学出版社出版。
这本教科书涵盖了植物组织培养的基础理论、实验技术与方法等方面的内容，适合初学者入门和进阶学习。
2. 《植物细胞与组织培养》：作者倪玉泉，中国农业出版社出版。
这本教科书包括了植物细胞与组织的分离培养、植物体胚发生与发育、植物组织器官的再生与培养等内容，适合有一定基础的学习者。
3. 《植物组织培养技术与方法》：作者张敬学，科学出版社出版。
这本教科书详细介绍了常用的植物组织培养实验技术和方法，包括培养基的配制、组织切割和接种等操作步骤，适合实验操作方面的学习者。
4. 《植物组织培养与转基因技术》：作者叶红蕾、司明恒，高等教育出版社出版。
这本教科书将植物组织培养与转基因技术相结合，综合介绍了转基因植物的培育与评价、基因工程技术在植物育种中的应用等内容，适合对转基因技术感兴趣的学习者。
这些教科书覆盖了植物组织培养的基础理论、实验技术与方法
以及应用方面的内容，可以根据自己的需求选择适合的教科书进行学习。
此外，建议您在选购教科书时可以参考一下网上的书评和评分，以获取更多的信息。
《植物组织培养》课程说课文稿
《植物组织培养》课程说课文稿《植物组织培养》是我院园林、烟草技术专业的核心课程。
在课程团队的共同努力下，经过几年的课程改革与建设,目前这门课程取得了以下四个方面的成绩:1、专业建设园林技术专业2009年被我院教务处批准为教学改革重点专业, 这为《植物组织培养》精品课程的建设提供了一个很好的专业平台。
2、实训基地校内实训基地 2008年课程团队申报了国家级生物技术实训基地，获得中央财政和地方财政支持资金320万。
校外实训基地我们与贵州省亚热夏带研究所、贵州省黔西南州农业科学研究所、吉仁堂生物技术中心等12家单位建立了长期的合作关系。
一方面这些科研院所、企业完全可以满足本课程的学生实训、顶岗实习以及教师的交流与合作，另一方面我们也为他们输送了组培方面的专业技术人才。
这些校内、外实训基地为本课程的建设提供坚强有力的实训保障条件。
3、教师队伍本课程的教师队伍专业技术水平高，社会服务意识强。
5名专任教师中有在读博士生研究生2名，硕士研究生1名。
课程负责人近年来发表相关论文10篇，其中以第一作者发表的核心期刊论文4篇；多次参与部、省、州相关科研项目，在行业内具有一定的影响力。
本团队的教师近年来参与校外以及周边地区的技术服务多个目项，取得了较好的社会效益和经济效益。
4、《植物组织培养》采用基于“工作过程系统化”的模式,院、所、企业结合共同完成课程开发，为我院其它课程的开发起到了很好的示范作用。
本课程之所以取得这些成绩,主要是教学团队从以下六个方面进行课程的整体设计与创新。
一、课程的开发背景1、现代农林生产的需要21世纪是生物技术迅速发展的年代,植物组织培养因其技术比较成熟，设备相对简单，经济效益十分可观，已经广泛应用于农业、林业等领域，也成为当代生物技术中最有生命力的一门实用科学技术。
《植物组织培养》的核心技术是植物的离体无性快繁技术。
人才市场需求的调查表明，苗木生产和科研单位非常需要植物组织培养方面的专业技术人才。
植物组织培养课程教学大纲
《植物组织培养》课程实验教学大纲课程名称：植物组织培养实验课程性质非独立设课课程属性专业选修教材及实验指导书名称《植物组织培养实验指导》学时学分：总学时 36 总学分 2 实验学时 18 实验学分 1应开实验学期四年级七学期先修课程植物学、植物生理学一、课程简介及基本要求本课程以动手操作为主，根据课程的性质、任务、要求及学习的对象，课程内容全为综合性实验。
这样，学生不但能了解植物组织培养实验室的构造，试验所必需具备的实验仪器设备；更重要的是，亲手操作后，更容易掌握各个试验仪器设备的使用方法、实验中的注意的事项、植物组织培养一般具备的几个阶段、，领会并真正做到无菌操作。
通过该方式的学习训练后，学生应达到下列要求：1．掌握植物组织培养实验室的构造，试验必需具备哪些实验仪器设备及其使用方法和注意事项。
2．掌握实验器具的洗涤、外植体的前处理和灭菌、各种培养基的正确配制、接种和转接等的正确方法。
3．能掌握各个试验的正确操作方法和步骤，并通过查阅资料或相互讨论，分析试验中存在的各种问题。
4．能思考怎样在今后的科学研究或社会生产中利用植物组织培养技术。
5．课前做好预习，课间正确熟练操作，课后独立完成作业。
二、课程实验目的要求《植物组织培养》实验是和《植物组织培养》理论课程同时开设的非独立实验课程，是理论教学的深化和补充，具有较强的实践操作性，是一门重要的技术基础课，可作为与植物相关专业及其生物科学专业的选修课。
植物组织培养是现今植物生物技术中应用最广泛的技术，是植物生物工程技术中的基本研究手段。
学生不但因该熟练掌握其理论知识，还应该动手操作，将理论和实践相结合，为以后从事植物组培工作及植物生物工程研究打下良好的基础。
三、适用专业蚕学、生物技术四、主要仪器设备：超净工作台、高压灭菌锅、酸度计、人工气候培养箱、微波炉。
五、实验方式与基本要求1．本课程为非独立设课，实验和理论并重，所以开课后，任课教师需向学生讲清课程的性质、任务、要求、课程安排和进度、平时考核内容、期末考试办法、实验守则及实验室安全制度等。
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植物组织培养目录一.植物组织培养综述1.1概念1.2 研究历史1.3技术原理1.4培养特点二. 实验实施预先准备2.1培养基贮备液配制2.2各种植物激素配制2.3各种培养基配制和灭菌三、植物组织培养过程3.1接种过程3.2试管苗的培养3.2.1丛生芽诱导培养3.2.2继代增殖培养3.2.3生根诱导培养3.2.4 移栽定植植物组织培养一.植物组织培养综述1.1概念植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
狭义组织培养是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
1.2 研究历史如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活；1902年，德国植的预言。
近几十年来植物组织培养技术已经发展成为一项新兴无性繁殖技术。
1.3技术原理植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株。
1.4培养特点1.4.1培养条件可以人为控制组培采用的植物材料完全是在人为提供的培养基和小气候环境条件下进行生长，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。
1.4.2生长周期短，繁殖率高组培是由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长较快。
另外，植株也比较小，往往20-30天为一个周期。
所以，虽然组培需要一定设备及能源消耗，但由于植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。
1.4.3管理方便，利于工厂化生产和自动化控制植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件，极利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利于自动化控制生产。
它是未来农业工厂化育苗的发展方向。
它与盆栽、田间栽培等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。
二.实验实施预先准备2.1培养基贮备液配制2.1.1培养基简述培养基是植物组织培养中离体植物材料赖以生存的“土壤”。
不同组织培养类型、外植体需要的培养基配方不同，组织培养是否成功，培养基的选择具有重要作用。
目前常用的培养基有MS、B5、White等。
无论何种培养基，都由矿物营养、维生素、碳源、植物激素、有机附加物等无类物质组成。
在植物组织培养中应该培养植物的种类和部位，选择最适的培养基，才能获得植物组织培养的成功。
本实验以MS为基本培养基。
2.1.2 仪器试剂仪器和用具分析天平、恒温水浴锅、电炉、量筒、移液管、烧杯、容量瓶、试剂瓶等试剂MS培养基、植物激素BA、植物激素NAA2.1.3步骤1）根据扩大倍数和配制母液量计算每种化合物称取量；2）称取大量元素化合物，分别溶解后顺次逐个加入并混合，加水定容止所需体积；3）称取微量元素化合物，分别溶解后顺次逐个加入并混合，加水定容止所需体积；4）称取FeSo4 .7H2O和Na2—EDTA，分别溶解后混合，加水定容止所需体积；5）称取各种维生素和氨基酸，分别溶解后混合，加水定容止所需体积；6)称取25mgBA先溶解于1mol/L HCL中，再加水定容至25ml（1mg/ml）；7）称取25mgNAA，用NaOH溶解后再加水定容至25ml（1mg/ml）。
附表：MS培养基母液配制表2.1.4注意事项1)注意大量元素母液配制的程序：除钙盐外，其他大量元素分别称量并按顺序融于蒸馏水中，钙盐单独配置，组合混合后，用蒸馏水定容；2)微量元素母液配制的小窍门：因其用量小，为称量方便及精确起见常配置成100或1000倍母液；3)注意不同母液的储存方法：激素母液装入棕色试剂瓶中，铁盐，有机母液，激素母液放于4度冰箱中，大量元素和微量元素母液常温下保存于柜子中，NaOH瓶子的瓶塞上应缠一圈纸。
2.2各种植物激素配制2.2.1植物激素配制方法总结原则植物激素：每种激素必须单独配制成母液，浓度为0.1mg/ml，0.5mg/ml，1.0mg/ml，激素浓度的表示方法多种，ppm（mg/L）、mol/L、mg/ml，用时根据需要取用。
●可高压灭菌: IBA，NAA ，6-BA，2,4-D;、KT●不可高压灭菌:ZT、2-IP 、IAA，GA3●配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。
●细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。
●配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。
2.2.2植物组培中，有些植物激素不能加入培养基中随之高压蒸汽灭菌，那么这些激素该如何加入培养皿中？过滤灭菌后，在无菌条件下将其加入到高压灭菌后的温度下降到约50至60度的未凝固的培养基中，或者适当加热（如50~70°C水浴加热）使之溶解后的培养基中，摇匀，待培养基冷却凝固再接种培养物。
2.3各种培养基配制和灭菌2.3.1愈伤组织诱导培养基（丛生芽诱导培养基）配制1）计算各种母液用量（按配置1000mlMS培养基计算）2）每组取50ml的烧杯一只，按上述用量用量筒或移液管（不能混用），量取或吸取各种母液，放于烧杯中，同时加上激素BA（浓度2mg/l）备用；3）每组取1000ml的烧杯一只，加300ml蒸馏水，加入琼脂6g，在石棉网上加热溶解，称取30g蔗糖放入溶解的琼脂中，同时加入各种取好的母液，用玻璃棒不断搅拌混合，并加蒸馏水至1000ml；4）调整pH:将培养基搅匀，用pH试纸或pH计测其pH值，可用一定浓度的HCL和NaOH调节至5.8；5）培养基分装、封口：把配置好的培养基趁热分装到培养瓶中，培养基应占试管或三角瓶的1/4-1/3左右为宜，注意不要将培养基沾在管壁上，以免引起污染，分装后立即用封口膜或其他封口物品包扎瓶口，注明培养基名称及配制时间等。
2.3.2继代培养基配制1）计算各种母液用量（按配置1000mlMS培养基计算）2）每组取50ml的烧杯一只，按上述用量用量筒或移液管（不能混用），量取或吸取各种母液，放于烧杯中，同时加上激素备用；附表：各组植物激素用量3）每组取1000ml的烧杯一只，加300ml蒸馏水，加入琼脂6g，在石棉网上加热溶解，称取30g蔗糖放入溶解的琼脂中，同时加入各种取好的母液，用玻璃棒不断搅拌混合，并加蒸馏水至1000ml；4）调整pH:将培养基搅匀，用pH试纸或pH计测其pH值，可用一定浓度的HCL和NaOH调节至5.8；5）培养基分装、封口：把配置好的培养基趁热分装到培养瓶中，培养基应占试管或三角瓶的1/4-1/3左右为宜，注意不要将培养基沾在管壁上，以免引起污染，分装后立即用封口膜或其他封口物品包扎瓶口，注明培养基名称及配制时间等。
2.3.3生根培养基配制1）计算各种母液用量（按配置1000mlMS培养基计算）2）每组取50ml的烧杯一只，按上述用量用量筒或移液管（不能混用），量取或吸取各种母液，放于烧杯中，同时加上激素备用；附表：各组植物激素用量3）每组取1000ml的烧杯一只，加300ml蒸馏水，加入琼脂6g，在石棉网上加热溶解，称取30g蔗糖放入溶解的琼脂中，同时加入各种取好的母液，用玻璃棒不断搅拌混合，并加蒸馏水至1000ml；4）调整pH:将培养基搅匀，用pH试纸或pH计测其pH值，可用一定浓度的HCL和NaOH调节至5.8；5）培养基分装、封口：把配置好的培养基趁热分装到培养瓶中，培养基应占试管或三角瓶的1/4-1/3左右为宜，注意不要将培养基沾在管壁上，以免引起污染，分装后立即用封口膜或其他封口物品包扎瓶口，注明培养基名称及配制时间等。
2.3.4培养基灭菌.全自动立式高压蒸汽灭菌锅操作步骤：1）检查灭菌锅内的水位，应当浸没加热圈并不要高于套桶底部，可以通过底部隔板中心的孔观察到有水即可。
若水量不足请加入蒸馏水或去离子水使得加热圈被浸没；若不慎加入过量的水，请使用底下带有绿色扳手的排液阀排出多余的水后使水位合适。
灭菌锅在使用以前排液阀必须关闭。
2）检查左侧下方排气管，使其浸在水盆里，并确保管口一定浸在水面以下。
3）将要进行高压灭菌的物品放入灭菌金属筐内，再放入灭菌锅内进行灭菌。
4）将灭菌锅的顶盖转到正上方并旋紧，当仪表盘上“LOCKED”变红色时表示OK；5）关上安全阀；打开电源，选择已设定好的模式，比如U01等。
6）顺时针关闭出气旋纽，长按START键，仪表盘显示“STER”红色，开始高压灭菌；7）灭菌结束，灭菌锅开始发出五声警报声，将根据设定的模式进行降温减压过程。
8）如果需要末凝固前添加植物激素，则温度降低到80°C、压力表读数为零时，关闭总电源后开启顶盖。
开启时操作者应头部略微后仰，缓慢地打开盖后，先让蒸气散去、锅内物品稍微冷却后再取出。
注意事项：1）灭菌前请注意灭菌锅内的水位是否合适；顶盖是否已经盖紧；安全阀是否已关闭；左侧下方排气管是否浸在水面以下。
2）打开灭菌锅顶盖一定确定压力表显示压力为零；3）使用后应当用蒸馏水或去离子水清洗灭菌锅，将清洗液经排液阀排出干净，备用。
4）液体灭菌时，至多不超过容器3/4体积的空间，防止沸腾的液体溢出；5）灭菌时要把容器的盖子松开，防止容器内压力过大而破裂；取出时要拧紧容器的盖子，防止与空气接触容器内染菌。
三、植物组织培养过程3.1接种过程：无菌操作技术3..4.1 准备用品超净工作台、75％的酒精、95％的酒精、盛有培养基的培养瓶、接种器械（主要指解剖刀、剪刀、镊子等）、酒精灯、培养材料（根、茎、叶或种子等）、0.1％的升汞（或漂白粉）、无菌水等；3.4.2方法步骤（1）在接种前4h用甲醛与高锰酸钾混合薰蒸接种室，并打开紫外灯照射30min；高锰酸钾甲醛熏蒸消毒操作过程①按照甲醛（40%）10毫升／立方米、高锰酸钾5克／立方米计算用量。
不同情况下，用量有所不同，但比例为2：1。
②盛药容器要大、耐热、耐腐蚀：一般用陶瓷或玻璃容器，因为高锰酸钾和甲醛都具有腐蚀性，且混合后反应剧烈，释放热量。
③房间要密闭：这样熏蒸效果才会好。