生菜遗传转化受体体系的建立
黄瓜高效遗传转化体系的建立和嫩果白皮基因w的图位克隆与功能分析
一、植物基因图位克隆的技术原理和应用
植物基因图位克隆是一种基于基因组图谱的基因克隆技术，其基本原理是在 基因组图谱中找到与目标基因相关的DNA片段，然后通过分子生物学方法克隆出 该基因。该技术在植物基因功能研究中的应用主要体现在以下几个方面：
一、植物基因图位克隆的技术原理和应用
1、揭示基因与表型特征之间的关系：通过图位克隆技术，科学家们可以克隆 出与特定表型特征相关的基因，进而研究其功能和作用机制。
一、引言
与功能分析将有助于我们深入理解黄瓜的生长发育机制，为进一步的遗传改 良提供理论依据。
二、黄瓜高效遗传转化体系的建 立
二、黄瓜高效遗传转化体系的建立
1、种子处理：选择健康、无病的黄瓜种子进行消毒处理，以减少细菌和真菌 的污染。
2、胚胎培养：在无菌环境下，将消毒后的种子植入含有适当营养物质的培养 基中，进行胚胎培养。
3、数据分析：采用合适的数据分析方法和软件进行数据分析。例如，使用聚 类分析方法对不同样本间的基因表达谱进行聚类；使用差异表达分析方法筛选出 差异表达的基因；使用网络分析方法分析基因之间的相互作用关系。
6、临床应用：根据候选基因的研究结果，开发针对该疾病的诊断试 剂、药物等临床应用方案。
4、结果解释：对数据分析结果进行解释，将分析结果与实验目的进行关联， 得出有关疾病机制或候选基因功能的结论。
图位克隆基因是一种基于基因组图谱的基因克隆技术。它首先利用物理作图 和DNA测序技术构建基因组图谱，然后根据图谱信息定位疾病相关基因。图位克 隆基因技术具有定位准确、克隆效率高、可重复性强等优点，为科研人员在基因 克隆领域提供了新的解决方案。
图位克隆基因的方法
1、实验设计
1、实验设计
图位克隆基因实验的第一步是实验设计。科研人员首先需要确定研究的疾病 类型和目标基因，然后制定实验方案，包括样本收集、DNA提取、基因组图谱构 建等步骤。
转基因遗传体系建立的步骤
第一步植物取材1.实验准备：培养基：MS+6-BA1.0+IAA0.5+3%Su+0.6%Ag (PH调至6.0) 培养皿（每皿含滤纸4张）2.实验步骤：取出半夏，用解剖刀、镊子等处理，得到叶柄、叶片及块茎。
将它们分开培养。
注意：叶柄长度约为1~1.5cm，块茎切片厚约1mm，叶片四周切出切口。
第二步摇菌1.实验准备：YEB液体培养基（500ml）配置每升培养基，应在900ml去离子水中加入：蛋白胨5g酵母抽提物1g牛肉浸膏5gMgS O4.7H2O 0.493g 调PH至7.0左右，去离子水补至1000ml后分装，高压灭菌卡那霉素（Km）储藏浓度50mg/ml 培养基浓度50ug/ml 利福平（Rif）储藏浓度50mg/ml 培养基浓度50ug/ml 2.试验步骤：1）向YEB液体培养基中加入Rif和Km，使其在培养基中的浓度为50ug/ml，摇匀后分装至小三角瓶中，约25ml//瓶。
2）取出已处于对数期的农杆菌，吸取1ml菌液加入YEB内，然后放在160r的摇床上，设定时间为99h3）培养36h后，菌体处于生长对数期，取1ml做为保留的菌种。
第三步36h后侵染1.实验准备：50ml离心管、1.5ml离心管、无纸培养皿、培养皿（一个皿中含很多滤纸）、无菌水、MS固体培养基、甘油（须灭菌）MS液体培养基：MS+6-BA1.0+IAA0.5+3%Su PH调至6.0乙酰丁香酮（配方：先用DMSO溶解，再加等体积的无菌水，过滤除菌，配成10mg/ml。
DMSO：二甲基亚砜）2.实验步骤：1）保留菌种将细菌过夜培养物在无菌条件下分装于1.5ml灭菌离心管中，每管700ul，然后加入300ul 50%的无菌甘油，颠倒混匀，写好日期和菌种名，液氮速冻后-70℃长期保存。
2）离心将摇至对数期的菌液倒入50ml的离心管内，于5000r/min离心6~8min。
同时倒平板（含Km、Rif各50ug/ml,乙酰丁香酮80ug/ml）3）悬浮将离心管内的上清液去掉，加入MS液至50ml 悬浮，吸取10ml至空离心管中，稀释5倍，测其吸光值，一般OD 值达到0.5时为宜。
细胞工程第七章 植物转化受体系统
特点：
(1) 原生质体被除去了细胞壁这一天然屏障，能够直 接高效地摄取外源DNA或遗传物质，甚至细胞核；
(2) 通过原生质体培养，细胞分裂可形成基因型一致的细胞 克隆，从转化原生质体获得的转基因植株嵌合体少；
(3) 原生质体转化受体系统易于在相对均匀和稳定 的同等控制条件下进行准确的转化和鉴定；
选择原则 ：
①同一物种的培养基有雷同性，即同一物种的不同亚种、品种间的基本培养基 类型基本相同；
②同一植物的不同组织器官的基本培养基类型基本相同； ③植物组织培养时所需营养成分与田间栽培有相似性； ④MS培养基是大多数植物的通用培养基； ⑤无机盐的浓度是基本培养基类型的重要因素，应该作为培养基选择的重要参
的抗生素有一定的敏感性；要求抗生素对受体植物 没有严重的毒性；
（5）对农杆菌侵染有敏感性。
第一节 植物基因转化受体系统的类型及其特性
一、愈伤组织再生系统
愈伤组织再生系统是指外植体经脱分化培养诱导愈伤组织，并 通过分化培养获得再生植株的受体系统。
特点：
（1）外植体细胞经历了脱分化和再分化两个过程，具有易 于接受外源基因的能力，转化率较高；
第七章 植物基因转化受体系统
本章所讲内容：
建立植物基因转化受体系统的基本条件； 植物基因转化受体系统的类型及其特性； 建立植物基因转化受体系统的程序及要求； 建立植物基因转化受体系统过程中的常见问
题及解决方案。
概述：
植物基因工程技术：即将目标性状基因分离出来， 构建重组DNA分子导入受体物种中，筛选出获得目 标基因表达后代，培育新品种，这种技术称为转化。
生理上的变化：
结构：茎尖分生细胞较小、结构简单，缺少 具正常功能的输导组织，叶片只有海绵组织， 气孔的保卫细胞功能失调等。
植物基因转化受体系统
不经过愈伤组织的受体系统
不经过愈伤组织的受体系统也称为直接分化再生系 统，是指外植体细胞越过脱分化阶段，直接分化出 不定芽，从而获得再生植株的受体系统； 研究显示，采用叶片、幼茎、子叶、胚轴以及一些 营养变态器官为外植体时，在适宜的培养技术控制 下，均可直接分化出芽
特点
获得再生知足周期短，操作简单 体细胞无性系变异相对较小，可较好的维持受体植 株的遗传特性 转化的外源基因能稳定遗传（特别是茎尖） 同样可能出现较多的嵌合体 外植体直接分化出芽较难，转化细胞直接分化成植 株难度更大
农杆菌敏感性
农杆菌介导的基因转化由于具有转化效率高、多为 单拷贝插入等优点，是常用的植物基因转化方法； 使用农杆菌介导的转化方法，需要植物受体对农杆 菌敏感
在选择农杆菌转化系统前，必需测试受体系统对农 杆菌的敏感性
第二节 植物基因转化受体的类型及其特性
由于众多类型的植物离体培养技术的完善，使转基 因受体系统有了很大的选择范围 不同的受体类型具有不同的缺点，适合的转化方法 也不同 实际操作中应根据受体的特性，基因转化方法，选 择适宜的受体系统
1、以原生质体或细胞为周倜的直接基因转移 2、载体介导的基因转化 3、种质系统介导的基因转化
1、以原生质体或细胞为受体的直接基因转 移
聚乙二醇法 电激法 脂质体法 磷酸钙-DNA共沉淀法 显微注射法 基因枪法 超声波法
①PEG介导的基因转化
利用化学试剂，如聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、多聚-L-鸟 氨酸(pLO)和磷酸钙等，诱导原生质体摄取外源DNA分子，进入原
特点：
具有更强的接受外源DNA的潜能 转化的基因无显隐性的影响，利于性状的选育，加 倍后可迅速获得纯合二倍体新品种 花粉管通道法将现代的分子育种与常规育种紧密结 合，是十分有潜力的受体系统 在花粉或小孢子培养系统作为受体系统更为理想
植物遗传转化步骤
植物遗传转化步骤植物遗传转化是指通过外源DNA的导入，使植物细胞或组织发生基因改变，从而获得具有特定性状的转基因植物。
这一技术在农业、医学和工业等领域有着广泛的应用。
下面将介绍植物遗传转化的基本步骤。
步骤一：选择外源DNA在植物遗传转化中，首先需要选择外源DNA，也就是我们要导入到植物细胞中的目标基因。
这个目标基因可以来自于其他物种，也可以是人工合成的。
目标基因的选择取决于我们希望在转基因植物中表达的特定性状。
步骤二：构建转化载体将目标基因导入植物细胞需要使用载体。
载体是一种专门设计用于植物遗传转化的DNA分子。
通常，载体由多个组成部分组成，包括启动子、终止子、选择标记和目标基因。
这些组成部分的功能是确保目标基因能够在植物细胞中正确表达。
步骤三：转化载体导入植物细胞一旦构建好转化载体，接下来就需要将其导入到植物细胞中。
目前，有多种方法可以实现这一步骤，包括农杆菌介导转化、基因枪法和电穿孔法等。
这些方法都可以有效地将外源DNA导入植物细胞，使其成为转基因细胞。
步骤四：筛选转基因细胞一旦植物细胞被导入外源DNA，我们需要对其进行筛选，以确定哪些细胞成功地获得了目标基因。
为了实现这一步骤，常常会在转化载体中加入选择标记基因，如抗生素抗性基因。
只有携带了目标基因的细胞才能存活下来，而其他细胞则会被筛选掉。
步骤五：培养和再生转基因植物筛选出的转基因细胞可以通过培养和再生来获得完整的转基因植物。
这一过程通常需要在培养基上进行，通过提供适当的营养物质和激素来促进细胞分裂和分化。
经过一段时间的培养，转基因细胞可以发展成为转基因植物。
步骤六：鉴定转基因植物需要对获得的转基因植物进行鉴定，以确认其是否成功地获得了目标基因。
这一步骤通常需要使用分子生物学技术，如PCR和Southern blot等，来检测目标基因的存在和表达。
只有经过鉴定的转基因植物才能用于进一步的研究或应用。
总结：植物遗传转化是一项复杂的技术，需要经历多个步骤才能成功。
生菜遗传转化受体系统的建立及鲑鱼降钙素基因的导入
生菜遗传转化受体系统的建立及鲑鱼降钙素基因的导入赵吉强;李霞;李丽霞;程智慧;陈杭【期刊名称】《烟台大学学报（自然科学与工程版）》【年(卷),期】2004(017)002【摘要】以散叶生菜大速生(Lactuca sativa var. capatata L.)为试材,以MS为基本培养基,采用不同激素配比,确定生菜高效诱芽培养基为MS+0.1 mg/L 6-BA+0.05 mg/LN从;抗生素敏感性试验表明,筛选培养基中适宜的卡那霉素选择压为75 mg/L,抑菌剂羧苄青霉素的适宜质量浓度为300 mg/L;通过根癌农杆菌介导的叶盘法将鲑鱼降钙素(sCT)基因转入大速生散叶生菜,PCR检测转化率达25.4%.【总页数】6页(P116-121)【作者】赵吉强;李霞;李丽霞;程智慧;陈杭【作者单位】烟台大学,生物化学系,山东,烟台,264005;国家蔬菜系统工程中心种质改良实验室,北京,100089;烟台大学,生物化学系,山东,烟台,264005;西北农林科技大学园艺学院,陕西,杨陵,712100;国家蔬菜系统工程中心种质改良实验室,北京,100089【正文语种】中文【中图分类】Q34【相关文献】1.鲑鱼降钙素基因向烟草遗传转化的初步研究 [J], 赵吉强;李霞;程智慧;陈杭;李元;陈松森2.生菜农杆菌遗传转化系统的建立及HIV蛋白基因的导入 [J], 敬军;季静;王罡;王萍;张成瑶3.生菜遗传转化体系的建立及口蹄疫抗原决定簇融合基因的导入 [J], 邓小莉;李慧4.生菜基因转化组织培养受体系统的建立 [J], 罗雯;孙东妮;王甜;王钢5.生菜遗传转化受体体系的建立 [J], 刘思言;姚丹;关淑艳;王丕武;冯逸龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
农杆菌转化法导入受体细胞的流程
农杆菌转化法导入受体细胞的流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
文档下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用，谢谢！本店铺为大家提供各种类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，想了解不同资料格式和写法，敬请关注！Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!农杆菌转化法是一种常用的植物基因转化技术，通过农杆菌将外源基因导入植物细胞，实现基因工程的目的。
一种建立高效花生转基因受体体系的方法及其应用[发明专利]
![一种建立高效花生转基因受体体系的方法及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/5a03bc6084868762cbaed566.png)
专利名称：一种建立高效花生转基因受体体系的方法及其应用专利类型：发明专利
发明人：姚伟,段真珍,何正权,余云芳,陈发菊,梁宏伟,梁薇,乐超银,王玉兵,陈凡,戴建武
申请号：CN200710051497.X
申请日：20070207
公开号：CN101024820A
公开日：
20070829
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种建立花生转基因受体体系的方法及应用。
以花生幼叶为外植体接种在附加不同激素组合的诱导培养基上，诱导幼叶产生胚性愈伤组织，进而在附加不同激素组合的分化培养上分化培养，产生丛生芽或丛生芽组织块，最后转接到附加不同激素组合的生根培养基上生根培养，获得再生植株。
选取继代培养后处于旺盛生长期的胚性愈伤组织块和丛生芽组织块作为受体，采用农杆菌介导法将外源基因导入受体细胞，经过恢复、筛选、分化、生根等步骤获得转基因植株。
本发明能从绝大多数基因型的受体细胞中再生出转基因植株，且转化频率高，再生植株性状变异小。
申请人：三峡大学
地址：443002 湖北省宜昌市大学路8号
国籍：CN
代理机构：宜昌市三峡专利事务所
代理人：成钢
更多信息请下载全文后查看。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
选 取 完 整 、 满 的 生 菜 种 子 ， 用 ７％酒 精 处 理 饱 先 ０
３ ｓ４ ］ 再 用次 氯 酸钠 消毒 ０ ［６ －
，
５分 钟 ， 接 置于 １一 ８ ６ ｌ℃的光 照培 养箱 中进行 培养 ， 种 子 待 萌发 ， 苗生 长至 １２厘米 时 ， 幼 ～ 叶生 ２ ４片 ， 取相 对 较 ～ 选
７ １ ２ １ ３
４ ．％ ３８ 芽 呈 绿 色 ８ ３％ 芽 呈 绿 色 ， 长 点 较 多 １ 生 ７． ０６ ％ 芽 呈 绿 色 ， 长 点 不 多 生
物 技 术 。Ｅ ｍａ ：ｉ ｎ ２ ０ ＠１３ｃｒ － ｉ ｓａ一０ １ ６． ｎ ｌ ｙ ｏ
★通讯作者 ： 王丕武（ ９ ８ ） 男， １ ５ 一 ， 吉林蛟河人 ， 教授 ， 博士 生导师 。
抹蔬
专家论坛
生菜遗 传转 化 受体体 系 的建立
刘 思言 姚 丹 关 淑艳 王丕 武 冯逸 龙
１０ １ ） ３ １ ８ （ 吉林农业大学 吉林长春
生菜为菊科莴苣属植物 ， 是一种大众化的食用价值 很高的蔬菜 ， 含有维生素 ｃ和多种矿物质… 。同时 ， 生菜 由于其再生率和转化率较高 ， 又是一种用来表达外源蛋 白的良好宿主植物＿３可以利用转基因技术 ， ２， ＿ ］ 将对人类 有利 的外源基因转入生菜体内，开发一种功能性蔬菜。
－
６ Ｂ 接 种 数 出芽 数 出芽 率 －Ａ
Ｏ ／ ｍｇ Ｌ １ ２ １ ８３ ．％
芽 的 生 长状 况
生 芽 不 明 显
００ ｍ ／ Ｉ ／ ４ ｇＬ ｍｇ Ｌ ０２ ／ ｌ ／ ．ｍｇ Ｌ ｍｇ Ｌ ０４ Ｌ １ ． ｍ ｍ
１ ６ １ ６ １ ７
表 ４ 不 同激素浓度对美 国结球生菜诱导 出芽的影响
部， 取叶片 、 茎段作为外植体材料 ， 进行愈伤组织诱导 ，
再 将 生 成 的愈 伤 组织 转 入 芽诱 导 培 养 基 中进 行 出芽 诱 导， 在其 出芽 之后 再 对 其进 行 生 根诱 导 ， 最终 获 得 再 生
植株。
２ 结 果 与分析
・
从表 中可 以看 出 ， 于美 国紫叶生菜 、 国结球生菜 、 对 美
１ 材 料与 方法
表 ２ 不 同 ６ Ｂ 浓 度 对 美 国紫 叶生 菜 愈 伤 组 织诱 导 的 影 响 －Ａ
１ 材料 ： ． １ 本实验采用青丰公 司出产 的美国结球生菜 、 美 国紫叶生菜 、 美国绣球生菜三个生菜品种的种子。
１ 方 法 ． ２ １ ． 无 菌材 料 的获得 ．１ ２
１ ２ １ ６ １ ２ １ ３
芽 的 生 长状 况
经过 １ 天后， ５ 统计愈伤组织诱导情况（ 结果见表 １ 、） 、３。 ２ 从表 中可以看出， 美国紫叶生菜和美国绣球生菜 的
愈 伤 组 织 诱 导 的 最 佳 培 养 基 为 ＭＳ Ｎ Ａ ．ｍ ／＋ 一 ＋ Ａ ０ｉ ｇＬ ６
＝ 里
０ ／ ｍｇＬ Ｏ ４ ／ ． ｍｇＬ ０ ０２ ． ｍ Ｌ ０４ ／ ． ｍｇＬ ０ ／ ｍｇＬ １ ｍ Ｌ １ ｍ Ｌ ｌ ｇＬ ｍ ／
塑 当 塑 些茎奎
１ ２ １ ６ １ ４ １ ６ ０ ５ １ ０ １
茎
２１ 愈 伤组 织 的诱 导 ． 将实 生苗 的叶 片与茎 段 分别 接 种 于 ２ 一 １ ｍ ／、 ． Ｄ ． ｇＬ ４ ０ Ｎ Ａ ．ｍ ／ ，并 加入 不 同浓 度 ６ Ｂ 的 ＭＳ培 养 基 中 ， Ａ ０１ ｇＬ －Ａ
本 文 以不 同的生 菜 品种 为材 料 ， ＭＳ或 １２ 以 ／ＭＳ培 养基 为 基本 培养 基 ， 通过 附 加不 同 的植物 调节 激 素对生 菜 进
１０ ｇ Ｌ２４一 ．ｒ ／ ． Ｄ。 ａ
表 １ 不同 ６ Ｂ － Ａ浓度对美国结球生菜愈伤组织诱导的影响
行无性快繁研究 ， 希望能建立一个高频的生菜遗传转化 受 体体 系 ， 为转基 因研 究奠定 基 础 。
Ｏ ％ 未生 芽 ３ ．％ １ ３ 芽 呈 翠 绿 色 ７ ．％ １ 芽 呈绿 色 ， 长点 较 多 ４ 生 ６３ ． ％ 芽生 长 不 明显
表 ５ 不 同激 素 浓 度 对 美 国紫 叶生 菜 诱 导 出 芽 的影 响
６ Ａ 一Ｂ ０ ｇ ｍ
１ ｇ ｍ １＿
接 种 数 出芽 数 出芽 率
为 茁壮 的实生 苗进 行实 验 。 １ ． 实验方 法 ．２ ２ ２２ 芽 的诱 导 ．
分别 选 取相 应 的 ３ 品种 种 子 的 实 生苗 ，去 除 根 个
将 诱 导 生 成 的愈 伤组 织 转 入 附加 不 同浓 度 的
Ｎ Ａ，一 Ａ 的 ＭＳ培养 基 中进行不 定芽 的诱 导 。 Ａ ６Ｂ 培养 ２ ０ 天 后统计 其 出芽率 （ 实验 结果 见表 ４５ ６ 。 、、）
Ｂ ０ ｍ ／＋ ． Ｄ ｍ ／， Ａ ． ｇ ２ 一 １ ｇ 而美 国结球生菜 的愈伤组织诱 ５ Ｌ ４ Ｌ
导 最 佳 培 养 基 为 ＭＳ ０１ ｇＬ Ａ ０７ ｒ ／６一 Ａ＋ ＋ ．ｍ ／Ｎ Ａ＋ ．５ ｇＬ Ｂ ａ
ｋ基金项 目： 转基因生物新 品种培育重大专项（ ０ ８ Ｘ ８ ０ — ０ ） ２０ Ｚ ０ ０ ４ ０ ４ 作 者 简介 ： 思 言 （９ ９ ， ， 林 四 平 人 ， 师 ， 士 ， 究 方 向 ： 物 生 刘 １７ 一）女 吉 讲 硕 研 作
１ ｇ ｍ
１ ｇ ｍ
８３ －％ 芽 生 长 不 明显 ２ ．％ ５ ０ 芽 呈翠 绿 色 ９ ．％ 芽 呈 绿 色 ， 长点 较 多 １ ７ 生 ６ ．％ 芽 呈 绿 色 ， 长点 不 多 ９２ 生
表 ６ 不 同激素浓度对美国绣球生菜诱导出芽的影响
Ｎ Ａ Ａ
Ｏ ｇＬ ｍ ／