PDA培养基的配制及试管斜面制作

合集下载

PDA培养基

PDA培养基

培养基的配制一、PDA培养基的配制其配方如下:土豆200g,葡萄糖20g,琼脂15~20g,水1000mL,pH值自然。

(1)称量和熬煮药品实际用量计算后,按培养基配方逐一称取去皮土豆。

土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。

滤液补充水分到1000ml。

(2)加热溶解把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。

(3)分装按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。

分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。

分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。

(4)加棉塞培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。

(5)包扎加塞后,将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳或橡皮筋扎好,用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。

二、棉塞的制作正确的棉塞是形状、大小,松紧应与试管口(或三角烧瓶)完全适合。

过紧则妨碍空气流通,操作不便;过松时,空气会毫无障碍地进入试管(或三角烧瓶)中,达不到灭菌的目的。

棉塞过小往往易掉进试管内,因此棉塞质量的优劣对实训的结果有很大的影响。

正确的棉塞头较大,加塞时,应使棉塞长度的1/3留在试管口外,2/3在试管口内(见实训图6-4)。

棉塞制作方法见图6-5。

三、斜面与平板培养基的制作斜面与平面培养基是常用的琼脂固体培养基。

将熬制好的琼脂培养基趁热装入试管灭菌后摆鞋面,凝固后即成斜面培养基。

斜面培养基常用于菌种培养、菌种保藏等工作。

PDA培养基的配制方法

PDA培养基的配制方法

PDA培养基的配制方法一、目的要求1.学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。

2.学习并掌握棉塞的制作方法。

二、培养基的配制原理培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质,用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。

在自然界中,微生物种类繁多,营养类型多样,加上实训和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,但不论是何种培养基,均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。

不同微生物对pH值要求不一样,所以配制培养基时,还应根据不同微生物对pH值的要求,将培养基调到合适的pH值范围。

三、实训材料和用具琼脂,可溶性淀粉,葡萄糖,10﹪NaOH,10﹪HCl,1mol/L NaOH,lmol/L HCl,KNO3,NaCl,K2HPO4·3H20,MgSO4·7H20,FeSO4·7H2O;试管,三角瓶,烧杯,量筒,玻璃棒,天平,牛角匙,PH试纸,棉花,牛皮纸,记号笔,纱布,四、操作方法与步骤(一) 培养基的配制PDA培养基的配制其配方如下:土豆200g,葡萄糖20g,琼脂15~20g,水1000mL,pH值自然。

(1)称量和熬煮药品实际用量计算后,按培养基配方逐一称取去皮土豆。

土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。

滤液补充水分到1000ml。

(2)加热溶解把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。

(3)分装按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。

分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。

分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。

pda培养基

pda培养基

PDA培养基简介PDA(Potato Dextrose Agar)培养基是一种常用于真菌及酵母的培养基。

它是由马铃薯提取物和葡萄糖混合制成的。

PDA培养基具有高透明度、无色无味、好制备、便于观察真菌和酵母生长等特点,在微生物实验室中被广泛应用。

材料制备PDA培养基所需的材料如下:•马铃薯 200克•葡萄糖 20克•蒸馏水 1000毫升•培养皿或试管步骤以下是制备PDA培养基的步骤:1.清洁材料:使用75%乙醇或其他消毒剂彻底清洁培养皿或试管,确保无细菌污染。

2.准备马铃薯提取物:将马铃薯削皮并切成小块。

将切好的马铃薯放入锅中,加入足够的蒸馏水,然后煮沸20-30分钟,直到马铃薯变软。

3.提取马铃薯汁液:使用纱布或滤纸将煮熟的马铃薯过滤,以去除固体残余物。

收集过滤得到的液体,这就是所需的马铃薯提取物。

4.加入葡萄糖:将葡萄糖加入马铃薯提取物中,搅拌均匀,直到完全溶解。

5.加入琼脂:将1000毫升蒸馏水倒入锅中,加热至沸腾。

然后,将琼脂逐渐加入,并持续搅拌,直到琼脂完全溶解。

6.混合培养基:将马铃薯提取物和葡萄糖溶液倒入含有溶解琼脂的锅中,搅拌均匀,确保混合到一致。

7.倒入培养皿或试管:将培养基均匀地倒入清洁的培养皿或试管中,注意避免产生气泡。

8.等待凝固:将培养皿或试管放置在平坦的表面上,等待培养基凝固。

9.高温蒸汽灭菌:将培养皿或试管用锡箔纸密封,并放入高温蒸汽灭菌器中,进行高温灭菌。

温度和时间根据需要进行设置。

注意事项•在制备PDA培养基过程中,要遵守无菌操作的原则,以确保培养基的纯度和无菌性。

面罩、手套、试验台面和实验室工具等都需要进行严格消毒和清洁。

•倒入培养皿或试管时,要小心避免气泡的产生。

气泡会影响培养基的均匀性和透明度。

•在使用培养基前,需要进行高温蒸汽灭菌以杀灭其中的细菌和真菌孢子。

高温和时间应根据实验的需要进行设置。

结论PDA培养基是一种简单易制备的培养基,常用于真菌和酵母的培养。

PDA LB培养基

PDA LB培养基

PDA培养基马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基是分离菌物和细菌的常用培养基,其做法是称取200g马铃薯,洗净去皮切成小块,加水1000ml煮沸半个小时或高压蒸煮20分钟,纱布过滤,再加10-20g葡萄糖和17-20g琼脂,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),15磅蒸气(121℃)灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。

PDA培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养。

小技巧:1、做PDA培养基用土豆应去皮,避免带入杂质,产生泡沫,影响通气。

PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称,即Potato Dextrose Agar (Medium),依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。

一种常用的培养基,宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。

分装于试管按物理性状划分:固体培养基按培养基成分划分:半合成培养基配方马铃薯200克葡萄糖20克琼脂15~20克自来水1000毫升自然PH配制步骤其做法是先洗净去皮,再称取200g马铃薯切成小块,加水煮烂(煮沸20~30分钟,能被玻璃棒戳破即可),用四层纱布过滤,再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂,继续加热搅拌混匀,稍冷却后再补足水分至1000毫升,分装试管或者锥形瓶,加塞、包扎,(121℃)灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面或者摇匀,冷却后贮存备用。

其他事项1.培养基经灭菌后,必须放在37C温箱培养24h,无菌生长者方可使用。

2.PDA培养基一般不需要调pH。

对于要调节pH的培养基,一般用pH 试纸测定其pH。

如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。

调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。

3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养。

4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素,加入量为0.1g/L培养基,主要是为了抑制细菌的生长,减少干扰性LB培养基LB一般被解释为Luria-Bertani培养基,其发明人为贝尔塔尼(Giuseppe Bertani),这个名字来源於英语的lysogeny broth,即溶菌肉汤。

培养基配方及配制方法

培养基配方及配制方法

培养基配方1 斜面菌种保存培养基1.1PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)称取200g马铃薯,洗净去皮切碎,加水1000ml煮沸0.5h,纱布过滤,滤液补足1000ml,再加15g葡萄糖和15-20g琼脂,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。

1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备:干麦芽首先进行粉碎(不能太粗,也不必太细。

太粗影响糖化效率,过细影响过滤速度),按麦芽重量的3~4倍加水,搅拌均匀后,37℃左右浸泡1小时,然后缓缓加温至55~63℃(在升温过程中应不断搅拌使温度均匀),保温4~6小时(用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时),糖化结束。

在糖化过程中,应每小时搅拌一次。

取过滤后的清液,加1.8%琼脂,分装试管,每试管约5-10ml (视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。

2 基菌落总数检测2.1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中,煮沸溶解后,调pH,然后在121℃下灭菌15min,取出,稍微冷却后,带热倒入培养皿中。

3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分:胰蛋白胨:20g,葡萄糖:1g,甘露醇:2g,柠檬酸钠:5g,去氧胆酸钠0.5g,磷酸二氢钾4g,磷酸氢二钾1.5g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml。

pH7.0制法:将上述物品加入蒸馏水中,加热溶解煮沸,调pH为7.0,分装,在115℃高压灭菌15min。

3.2 HE琼脂成分:胨:12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖12g,水杨素2g,胆碱20g,氯化钠5g,琼脂18~20g,蒸馏水1000ml0,0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml,Andrade指示剂20ml.,甲液20ml,乙液20ml。

pH7.5 制法:将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液,将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解,加入甲液乙液到基础液中,调pH,再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷却至50~55℃,倾注浇平板。

实验一 PDA培养基配制

实验一 PDA培养基配制

实 验 一
马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基配制
1. PDA配方
马铃薯 200g 、葡萄糖( dextrose ) 或蔗糖20g、琼脂20g、H2O 1000mL、 pH 6.5。
2. 配制方法
马铃薯(去皮、去芽眼)→切成片(玉米大小) →称取200 g+1000 mL H2O→煮沸15 min →双层纱 布过滤→取滤液并补足1000 mL+琼脂→熔化+其它 营养物质→调节pH(用HCl或NaOH)→分装试管→
茶树菇 Agrocybe aegerita
担 子 菌 纲 食 用 菌
鸡腿菇
杏鲍菇:Pleurotu seryngii
别名:刺芹侧耳、雪茸。 杏鲍菇是一种营养十分丰富、味道鲜嫩的新 型品种,菌肉肥厚,质地脆嫩,具有杏仁香味。
杏鲍菇:Pleurotu seryngii
红菇:Russula lepida
香菇
担子菌纲食用菌
银耳(白木耳)
担子菌纲食用菌
黄 金 针 菇 白金针菇
担子菌纲食用菌
灵 芝
灵 芝
担子菌纲食用菌Biblioteka 猴头菇担子菌纲食用菌
黑木耳
担子菌纲食用菌
草菇(麻菇, 杆菇)
担子菌纲食用菌
竹 荪
担子菌纲食用菌
灰树花
是一种珍稀食药用菌, 口感脆嫩,味似鸡丝。
牛肝菌
茶树菇 Agrocybe aegerita
pdapda200gdextrose20g20g1000mlph65配制方法马铃薯去皮去芽眼切成片玉米大小称取200g1000mlo煮沸1520min双层纱布过滤取滤液并补足1000ml琼脂熔化其它营养物质调节ph用hcl或naoh分装试管塞上棉塞捆扎灭菌高压蒸气灭菌1530min制成斜面检查灭菌效果即2830培养23d1每人制5支试管斜面

(完整版)PDA培养基的配方及配制方法

(完整版)PDA培养基的配方及配制方法

PDA培养基的配方及配制方法PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称,即Potato Dextrose Agar (Medium),分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。

它属于固体培养基、半合成培养基.PDA培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势,一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛.PDA培养基的配方土豆 200g葡萄糖 20g琼脂 15~20g水 1000mLpH值自然PDA培养基的配制(1)称量和熬煮按培养基配方逐一称取去皮土豆。

土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20—30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。

滤液补充水分到1000ml。

(2)加热溶解把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。

(3)分装按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。

分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。

分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.(4)加棉塞培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。

(5)包扎加塞后,将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳或橡皮筋扎好,用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。

PDA培养基的配制及试管斜面制作

PDA培养基的配制及试管斜面制作

PDA培养基的配制及试管斜面制作PDA(Potato Dextrose Agar)是一种常用的培养基,用于微生物的培养和鉴定。

下面将详细介绍PDA培养基的配制方法以及试管斜面的制作步骤。

一、PDA培养基的配制方法:-马铃薯提取物:200g-葡萄糖:20g-琼脂:15g- 蒸馏水:1000ml1.将马铃薯削皮并切成小块,然后放入锅中加入足够的蒸馏水,煮沸30分钟,使马铃薯溶解。

2. 用纱布或过滤纸过滤烧开的马铃薯,收集滤液,将滤液浓缩至1000ml。

3.将浓缩后的马铃薯提取物与葡萄糖混合,搅拌均匀。

4.将琼脂加入马铃薯提取物和葡萄糖混合物中,加入足够的蒸馏水。

5.在烧杯中加热混合物,使琼脂完全溶解。

6.用自动调节器调节pH值为7.0-7.27.将混合物分装至试管或琼脂培养皿中。

8.将试管或琼脂培养皿密封并高压灭菌,高压灭菌时间为121°C,15-20分钟。

二、试管斜面的制作步骤:1.配制好的PDA培养基倒入装有试管的架子中,大约倒满1/3左右。

2.将试管架放入预热至沸腾状态的水浴中。

3.等待试管内的培养基开始沸腾,并保持沸腾状态2-3分钟。

4.将试管架从水浴中取出,让试管内的培养基冷却至接近凝固的状态。

5.倾斜试管架,使试管内的培养基斜倒在试管壁上,形成斜面。

6.等待培养基凝固完全。

7.使用无菌的环针或棉签,在斜面上划线隔离待培养的微生物。

8.将试管密封,高压灭菌。

PDA培养基配制和试管斜面制作之后,可以用于各种微生物的培养和鉴定。

在使用PDA培养基时,要注意严格无菌操作,避免外界的污染。

在制作试管斜面时,也要确保试管和培养基的完全无菌,以保证培养的准确性和可靠性。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

1.实验材料
1.1试剂材料
土豆,葡萄糖,琼脂,试管,试管架,天平,注射用硫酸链霉素,注射用青霉素钠,三角瓶,灭菌锅,电磁炉,超净工作台,烧杯,1mL移液器,培养皿
1.2PDA培养基配方
土豆(去皮)200g
葡萄糖20g
xx15-20g
蒸馏水1000mL
pH 自然
2.实验方法与步骤
2.1称量和熬煮
将土豆去皮,按自己所需的量(例如配制1L)称取土豆,将土豆切成小块放入锅内,加入适量的蒸馏水,在电磁炉上加热至沸腾,30min后用4层纱布在大量杯上过滤,弃掉滤渣,滤液用蒸馏水补足1L。

2.2溶解
用天平称取20g葡萄糖加入滤液中,用玻璃棒搅拌,使其完全溶解。

2.3分装
称取8-10g琼脂,加入所用三角瓶中,然后将滤液分装到三角瓶中,每瓶500mL,用玻璃棒将琼脂搅匀。

2.4xx
培养基分装完毕后,在三角瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性。

2.5包扎
加塞后,在棉塞外用两层报纸包裹,其外用橡皮筋包扎好,标记。

2.6灭菌
将配制完成的培养基,包好的平板及其他所需用品一起放入灭菌锅灭菌(见灭菌锅使用方法)。

3.试管斜面制作方法与步骤
3.1前两步同
2.1,
2.1步骤
3.2加热溶解
量取500mL滤液到1000mL的烧杯中,再加入8-10g的琼脂,用玻璃棒搅匀,放入微波炉缓慢加热溶解,加热其间注意不要让培养基溢出烧杯,不时用玻璃棒搅拌。

3.3分装
等琼脂溶解后,将培养基分装到事先准备好的试管中。

分装量约占试管高度的,管口尽量不要沾染培养基。

3.4加塞
培养基分装完毕后,在试管口上塞上棉塞或橡胶塞,以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性。

3.5包扎
加塞后,试管7-9支捆用橡皮筋捆好,在塞外用两层报纸包裹,其外用橡皮筋包扎好,标记。

3.6灭菌
将包好的试管和其他所需灭菌物品一同放入灭菌锅灭菌。

3.7摆斜面
灭菌完成后,将试管拿出,在超净工作台下摆成斜面,根据自己需要选择合适的倾斜度。

相关文档
最新文档