UPLC 法测定葛根中β - 谷甾醇的含量
不同提取方法测定葛根中三种有效成分
不同提取方法测定葛根中三种有效成分一、实验目的及意义1. 了解水煮法、醇提法、微波辅助萃取法、超声波法、索氏提取法和溶剂浮选法；2. 熟悉相关仪器的使用操作。
二、研究背景简介葛根为临床常用中药，具有解肌退热、升阳透疹、生津止泻的功效。
葛根的主要活性成分是葛根素、大豆甙、大豆甙元等多种异黄酮类物质。
并含有多糖及多种微量元素，现代药理研究表明，葛根黄酮具有改善心脑血液循环，扩张冠状动脉，降血压，降血糖等作用；大豆甙元有明显抗心律失常作用，一直白血细胞的增殖及黑色素瘤细胞的分化。
民间常用葛根一味退热生津。
近几年临床上应用含葛根的的制剂愈风宁心片、葛根素注射液等治疗偏头痛、高血压、冠心病等疾病。
目前正在研制的还有葛根黄铜生物粘附性缓释片、葛根黄铜缓释胶囊、葛根素微乳、葛根素滴丸、葛根素复合骨架稀释片、配方颗粒等。
由于葛根属于药食同源，也被广泛的应用于保健品和食品中。
本课题对湖南和安徽两个地区的葛根采用水煮法、超声提取法、醇提法、微波辅助萃取法、索氏提取法、溶剂浮选法的提取方法，并针对其三种有效成分葛根素、大豆甙、大豆甙元的HPLC测定结果进行了分析比较。
三、实验内容1. 主要仪器安捷伦液相色谱仪1100系列（美国安捷伦公司）AB204-N电子天平（瑞士梅特勒公司）PHS-3B型pH计（上海精密科学仪器有限公司）MSP-100E微波萃取装置（雷鸣科技仪器公司）2. 主要试剂乙醇、正丁醇（分析纯，北京化工厂）；甲醇（色谱纯，天津西华特种试剂厂）；去离子水（自制）；葛根样品产地分别为安徽和湖南，葛根素、大豆甙和大豆甙元标准品（中国药品生物制品检定所）。
3. 实验步骤（1）水煮法水煮法是用水做溶剂，加热一定时间，能提出较多成分，符合传统用药习惯，时常用的一种提取方法。
此方法生产成本低，适合工业化生产。
（2）醇提法醇提法是葛根提取工艺中最常用的提取方法。
称取适量的葛根加乙醇进行回流，冷却后待测。
（3）微波辅助萃取法称取适量的葛根，用75%乙醇作为溶剂，在一定微波萃取条件下进行萃取，冷却后待测。
高效液相色谱法测定油脂中β-谷甾醇的含量
高效液相色谱法测定油脂中β-谷甾醇的含量邱丰艳;丁力;曹红云【摘要】建立了高效液相色谱法准确、高效测定油脂混合体系中β-谷甾醇含量的方法，并对油脂混合物中β-谷甾醇的提取工艺进行了优化。
采用C18反相色谱柱对β-谷甾醇含量进行测定，流动相为甲醇-水(体积比98．5：1．5)，检测波长210 nm。
结果表明：β-谷甾醇在25~500μg/mL范围内，质量浓度与峰面积呈良好的线性关系(R2=0．9998)，仪器检出限为7．5μg/mL，相对标准偏差(RSD)为0．85%；油脂混合物中β-谷甾醇的最佳提取工艺条件为提取次数4次，离心转速2000 r/min，皂化温度80℃，皂化时间210 min；在最佳提取工艺条件下β-谷甾醇的回收率为93．44%~96．48%，RSD为1．70%。
%The accurate and efficient method for determing β-sitosterol content of oil mixture by HPLC was established,and the extraction process of β-sitosterol from oil mixture was optimized. C18 reverse-phase chromatography column was used for the determination ofβ-sitosterol content under the conditions of mobile phase methanol - water (volume ratio 98. 5:1. 5 ) and detection wavelength 210 nm. The re-sults showed that the mass concentration of β-sitosterol had a good linear relationship with peak area in the range of 25-500μg/mL. The correlation coefficient, the instrumental limit of detection and the rela-tive standard deviation (RSD) were 0. 999 8, 7. 5 μg/mL and 0. 85% respectively. The optimal extrac-tion conditions of β-sitosterol from oil mixture were obtained as follows:extraction times four, centrifugal speed 2 000 r/min, saponification temperature 80℃ and saponification time 210min. Under these conditions,the recovery rate and RSD of β-sitosterol were 93. 44% -96. 48% and 1. 70%, respectively.【期刊名称】《中国油脂》【年(卷),期】2014(000)007【总页数】5页(P91-94,95)【关键词】HPLC;β-谷甾醇;油脂混合物【作者】邱丰艳;丁力;曹红云【作者单位】龙岩学院生命科学学院，福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院，福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院，福建龙岩364012【正文语种】中文【中图分类】TS225.1;TQ646β-谷甾醇是天然植物脂质中分布最广的甾醇类物质，具有良好的生理活性和安全性，不仅可降低人体对胆固醇的吸收，还可降低血浆中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量[1-3]。
保健食品中葛根素的测定 标准
保健食品中葛根素的测定1. 范围本标准规定了保健食品中葛根素的测定方法。
本标准适用于以保健食品为原料或产品中葛根素的测定。
2. 原理本方法采用高效液相色谱法测定保健食品中葛根素的含量。
样品经提取、净化后，采用高效液相色谱仪进行分离，以紫外检测器检测，外标法定量。
3. 试剂与溶液本标准所用试剂均为分析纯，水为超纯水。
3.1 甲醇：色谱纯。
3.2 乙腈：色谱纯。
3.3 葛根素标准品：纯度≥98%。
3.4 葛根素标准储备液（ρ=1mg/mL）：称取适量葛根素标准品，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。
3.5 葛根素标准工作液：将葛根素标准储备液稀释至所需浓度。
4. 仪器和设备4.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器。
4.2 分析天平：感量为0.0001g。
4.3 超声波清洗器。
4.4 离心机。
4.5 混合器。
5. 样品处理5.1 提取：称取适量样品，加入适量的甲醇，超声波提取一定时间，取出冷却至室温。
5.2 离心：将提取液以转速×g离心一定时间，取上清液备用。
5.3 过滤：取适量上清液，通过适当的滤膜进行过滤，备用。
6. 分析步骤6.1 液相色谱条件：色谱柱为C18柱，流动相为甲醇+乙腈（1:1），流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，进样量为20μL。
6.2 测定：分别将样品溶液和葛根素标准工作液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，以葛根素标准工作液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
根据样品的峰面积，从标准曲线上查出对应的浓度，计算出样品中葛根素的含量。
高效液相色谱法测定降脂减肥颗粒中葛根素含量
高效液相色谱法测定降脂减肥颗粒中葛根素含量一、背景降脂减肥颗粒是近年来市场上广泛流行的一种减肥产品。
其中的葛根素是一种生物活性成分，具有减轻体重、调节脂质代谢等功效，是降脂减肥颗粒的重要成分。
因此，准确地测定降脂减肥颗粒中葛根素的含量，对保证产品质量、确保安全有效性至关重要。
二、实验方法2.1 试剂和仪器•高效液相色谱仪 (HPLC)•Eclipse Plus C18色谱柱 (250mm×4.6mm，5μm)•甲醇•磷酸二氢钾•三氯乙酸•纯净水•过滤膜(0.22μm)2.2 样品制备将降脂减肥颗粒样品（1g）加入50mL锥形瓶中，加入5mL甲醇，超声处理20min，离心10min，过滤取滤液并将甲醇挥发至干燥，加入5mL红外级纯水，摇匀，滤过0.22μm滤膜备用。
2.3 色谱条件•柱温：35℃•流速：1.0mL/min•注射体积：10μL•检测波长：254nm•补偿波长：360nm•分离时间：20min2.4 制备标准曲线取葛根素标准品，精密称取不同质量的标准品，加入锥形瓶中并精密加入纯净水稀释至适量浓度。
取不同浓度的标准品溶液，分别进行色谱检测，绘制标准曲线。
2.5 样品测定将样品溶液注入色谱仪检测，读取峰面积，根据标准曲线计算得到样品中葛根素的含量。
三、结果分析本研究通过高效液相色谱法测定降脂减肥颗粒中葛根素含量，结果如下：样品标识葛根素含量(μg/g)样品A 5.76样品B 4.93样品C 5.15四、结论本研究成功地建立了一种高效液相色谱法测定降脂减肥颗粒中葛根素含量的方法，并对三个样品进行了检测，结果表明样品中均含有葛根素，其中样品A的含量最高，样品B的含量最低，样品C的含量次之。
该方法简便、快速、准确，可用于降脂减肥颗粒中葛根素的含量测定。
葛根素含量测定方法
葛根素含量测定方法
葛根素是一种生物活性成分，通常使用色谱法进行测定。
以下是一种常见的葛根素含量测定方法：
1. 仪器准备：高效液相色谱仪（HPLC），色谱柱（常用的为
C18柱），紫外检测器，注射器，数据处理软件等。
2. 样品制备：将葛根粉末经过适当的提取工艺得到提取液，通常可以选择水、甲醇或乙醇等溶剂进行提取。
将提取液过滤并稀释到适当的浓度。
3. 色谱条件设定：设置色谱柱温度、流速、洗脱液组成和等其他条件。
常见的流动相为A：乙腈，B：水，采用梯度洗脱进
行分离。
4. 标准曲线绘制：准备一系列不同浓度的葛根素标准溶液，通过色谱仪进行检测并记录峰面积。
将峰面积与标准溶液浓度绘制标准曲线。
5. 样品测定：将经过稀释的样品注射到色谱仪中，记录峰面积。
6. 结果计算：将样品的峰面积代入标准曲线中，根据峰面积与浓度的线性关系计算出葛根素的含量。
需要注意的是，葛根素的含量测定方法可以根据实际需求进行调整，上述方法仅为一种常见的测定方法，具体应根据实验条件和仪器设备进行调整。
高效液相色谱法测定葛粉保健品中葛根素的含量
高效液相色谱法测定葛粉保健品中葛根素的含量
孙林超
【期刊名称】《理化检验-化学分册》
【年(卷),期】2008(044)010
【摘要】对不同产区葛粉保健品中葛根素的含量进行分析,拟建立高效液相色谱法快速测定葛粉保健品中葛根素含量的方法.固定相为Agilent-C18柱(4.6 mm×300 mm,5μm),流动相为甲醇一水(70+30,体积比)溶液,流速为1.0 mL·min-1,波长为250 nm,进样量10μL.结果表明:葛根素的质量浓度在10.00～100.00 mg·L-1范围内与峰面积呈线性关系,加标回收率为99.0%～99.8%,检出限(3S/N)为1.0 mg·L-1,相对标准偏差分别为0.57%,0.64%,1.71%.
【总页数】3页(P945-946,949)
【作者】孙林超
【作者单位】江苏食品职业技术学院,淮安,223003
【正文语种】中文
【中图分类】O657.1
【相关文献】
1.HPLC谱法测定葛粉中葛根素含量 [J], 冯慧;周青;谢继安
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涛
5.RP-HPLC法测定保健品葛根粉中葛根素的含量 [J], 彭欣荣;李璞
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UPLC法测定葛丹颗粒中葛根素的含量
ｔ ｒ ｏ ｌ ｔ ｈ ｅ ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｐ ｕ ｅ ｒ ａ ｒ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｅ ｄ ａ ｎ ｒａ ｇ ｎ ｕ ｌ ｅ ｂ ｅ ｔ ｔ ｅ ｒ ． Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ： ｇ ｅ ｄ ａ ｎ ｇ ｒ ａ ｎ ｕ ｌ ｅ ； ＵＰ Ｌ Ｃ； ｐ ｕ ｅ ｒ ａ ｒ ｉ ｎ； ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
０ ． ３ ９ ０ ０ ｇ・ Ｌ 一， ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ９ ． Ｔ ｈ ｅ ａ ｖ ｅ ｒ ａ ｇ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｙ ｒ ａ ｔ ｅ ｗ ａ ｓ ９ ８ ． ８ ４ ％（ Ｒ Ｓ Ｄ：０ ． ７ １ ％） ． Ｃ ｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ Ｔ ｈ ｉ ｓ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｃ ａ ｎ ｂ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｃ ｏ ｎ —
ｒ ： ０ ． ９ ９ ９ ９ ， 平均 回收率为 ９ ８ ． ８ ４ ％， Ｒ Ｓ Ｄ＝ ０ ． ７ １ ％。结论 该法简单 、 快捷 ， 适用于葛丹颗粒 中葛根素 的含量测定 。
关键词 ： 葛丹颗粒 ； Ｕ Ｐ Ｌ Ｃ ； 葛根素 ； 含量测定
ＵＰＬＣ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｐ ｕｅ ｒ ａ ｒ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｅ ｄ ａ ｎ ｇ ｒ ａ ｎ ｕ ｌ ｅ
葛根含量测定方法(葛根素)
葛根含量测定方法（葛根素）葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根。
2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法测定其葛根素的含量。
一、高效液相色谱法2005版《中国药典》葛根含量测定项下：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（25：75）为流动相；检测波长为250nm。
理论板数按葛根素峰计算应不得低于4000。
供试品溶液的制备：取本品粉末约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
HPLC法测定葛根及其制剂中葛根素的含量时，使用最多的流动相系统为甲醇-水系统，另外还有甲醇-水，加醋酸调节pH等。
A：以甲醇-水为系统的，常见的比例及实验条件为：①Waters2695/ 2996/ Empower 色谱系统；色谱柱Symmetry C18 柱( 3.9mm150mm, 5μm)；流动相：甲醇-水(25：75)；DAD检测波长254nm；柱温35℃。
②SP8800 型高效液相色谱泵；Hypersil ODS (4.6mm250mm,5μm大连依利特科学有限公司)；流动相：甲醇-水(30：70)；柱温40℃；检测波长250nm。
③Waters高效液相色谱仪；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（4.6mm250mm,5μm）；甲醇-水（40：60）为流动相；检测波长为250nm；柱温30℃。
④美国Spectra-Physics 液相色谱仪；色谱柱Lunm C18 (150mm4.6mm, 5μm ) 不锈钢柱(美国Phenom enex 公司)；流动相为甲醇-水(28：72)；检测波长250nm；柱温30℃。
B：乙腈-水系统：①LC-10ATvp高效液相色谱仪；Hypersil ODS 色谱柱(4.6mm150mm,5μm)；乙腈-水(15：85)为流动相；检测波长250nm。
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阳止泻等功 效，临 床 用 治 表 证 发 热、项 背 僵 痛、麻 疹不透、热病口渴、阴虚消渴、脾虚泄泻等［2］。葛 根药材广泛用于糖尿病（ 消渴病） 及其并发症治
基金项目： 贵州省优秀青年科技人才培养对象专项资金，项目编号： 黔科合人字（ 2013） 46 号 作者简介： 吴红梅，女，副教授，博士，主要从事中药及民族药新制剂及质量控制研究工作。
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广西泰仁大药房
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南昌福顺堂大药房
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Key words： Pueraria lobata； β-sitosterol； UPLC； Determination of content
葛根为豆科植物野葛 Pueraria lobata（ Wild1 ） Ohwi 的干燥根，习称野葛［1］。葛根始载于《神农 本草经》，具 有 解 肌 透 热、透 发 麻 疹、生 津 止 渴、升
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四川红旗连锁股份有限公司
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合物，此实验考察了甲醇和无水乙醇的提取效率， 结果发现甲醇提取的含量大于无水乙醇。因此选 用甲醇作为提取溶剂。提取方法考察了超声提取 和回流提取，结 果 发 现 回 流 提 取 的 含 量 大 于 超 声 提取，故选用回流进行提取。
葛根药材 临 床 应 用 广 泛，但 在 质 量 控 制 方 面 主要以葛根 素 和 总 黄 酮 为 主，不 能 为 葛 根 药 材 的 质量提供更全面的控制。本实验建立葛根药材的 有效成分 β － 谷甾醇的含量测定方法，具有灵敏 度高，重现性好，分离度高，分析时间短等优点，可 以为葛根药材质量全面控制提供参考。
成分 β － 谷甾醇
称样量 /g
1. 0002 1. 0010 1. 0001 1. 0012 1. 0017 1. 0038 1. 0026 1. 0042 1. 0047
表 1 β － 谷甾醇的加样回收率试验
样品含量 μg / g
316. 69 316. 95 316. 11 317. 01 317. 17 317. 83 317. 45 317. 96 318. 12
摘 要： 目的： 建立葛根中 β － 谷甾醇的测定方法。方法： 采用超高效液相色谱法，色谱柱为 Agilent ZOＲBAX ＲＲHD Eclipse Plus C18（ 2. 1 × 100mm，1. 8μm） ，流动相为甲醇 － 0. 1% 乙酸水（ 100： 4 单泵） ，流 速为 0. 15mL / min，检测波长为 206nm，柱温为 50℃ 。结果： β － 谷甾醇浓度在 0. 0186 ～ 0. 186μg 范围内线 性关系良好，回归方程为 y = 1260. 5x + 1. 9164 （ r = 0. 9996） ，平均加样回收率为 96. 68% ，ＲSD（ % ） 值为 2. 63。结论： 该法专属性强、快速、简便、准确，可以用于葛根中 β － 谷甾醇的含量测定，为葛根的质量控 制提供依据。
WANG yuan-min，WU hong-mei，WANG Xiang-pei，XU Feng （ Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，Guizhou China）
Abstract： Objective： To establish a method for determining β-sitosterol in Pueraria lobata. Method： The method of UPLC-DAD was taken. The separation was performed on Agilent ZOＲBAX ＲＲHD Eclipse Plus C18 column （ 2. 1 × 100 mm，1. 8 μm） with methanol and （ 0. 1% ） acetic acid solution （ 100： 4 ） and the rate of flow was 0. 15mL · min-1. The Detection wavelength was 206nm and the column temperature was 50℃ . Ｒesult： β-sitosterol with the concentration of 0. 0186 to 0. 186μg has a good linear relationship. The linear equation is y = 1260. 5x + 1. 9164（ r = 0. 9996） . The average sample recovery rate was 96. 67% ，and ＲSD（ % ） was 2. 63. Conclusion： This method is specific，quick，simple and accurate. It can be applied to determine βsitosterol in Pueraria lobata，which provides the basis for quality control of the root of kudzu vine.
·24·
第 37 卷 第 4 期 2015 年 7 月
贵阳中医学院学报 Journal of Guiyang college of TCM
No. 4 Vol. 37 July 2015
UPLC 法测定葛根中 β － 谷甾醇的含量
王远敏，吴红梅，王祥培，徐 峰
（ 贵阳中医学院，贵州贵阳 550002）
精密量取 5mL 储备液于 10mL 的容量瓶中， 加甲醇定容，制备成 0. 186mg / mL 的对照品溶液。 2. 4 系统适应性试验
在上述的 色 谱 条 件 下，分 别 吸 取 对 照 品 溶 液 和供试品溶液注入液相色谱仪，色谱图见图 1，图 2，β － 谷甾醇与相邻峰的分离度均大于 1. 5，理论 塔板数按 β － 谷甾醇计算不低于 8000。 2. 5 线性关系考察
测定，记录色谱峰，以 β － 谷甾醇的对照品作为对 照，并计算 β － 谷甾醇的含量，结果见表 2。
第4 期
王远敏，吴红梅，王祥培，等． UPLC 法测定葛根中 β － 谷甾醇的含量
·27·
表 2 不同产地葛根中 β － 谷甾醇的含量 （ n = 3）
来源
mg. g － 1
ＲSD / %
贵阳芝林大药房
第4 期
王远敏，吴红梅，王祥培，等． UPLC 法测定葛根中 β － 谷甾醇的含量
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疗［3］，口服葛根煎剂还具有降低胆固醇、升高甘油 三酯现象［4］。葛 根 药 材 主 要 含 有 葛 根 素、葛 根 总 黄酮、大豆苷元、β － 谷甾醇等多种成分［5 － 7］，其中 葛根素具有降血糖、抗氧化的作用［8］，而葛根中的 β － 谷甾醇除抗炎、止咳、抗溃疡、抗癌、抗氧化等 药理作用外，还 具 有 明 显 的 降 低 胆 固 醇 和 降 血 糖 的作用［9 － 11］，说明 β － 谷甾醇也是葛根药材的有 效成分之一。目前葛根药材的质量控制主要集中 于葛根素及 总 黄 酮 方 面，不 利 于 更 全 面 的 控 制 葛 根药材质量。
采用 Agilent ZOＲBAX ＲＲHD Eclipse Plus C18
（ 2. 1 × 100mm，1. 8μm ） 色 谱 柱，流 动 相 甲 醇 － 0. 1% 乙酸水（ 100∶ 4，单泵） ，流速 0. 15mL / min，检 测波 长 为 206nm，柱 温 50℃ ，对 照 品 进 样 量 为 1μL，样品进样量为 2μL。 2. 2 供试品溶液的制备
回收率 /%
95. 00 97. 45 91. 57 96. 04 98. 42 96. 94 100. 00 99. 40 95. 27
平均回 . 10 样品测定 取 11 批 购 于 不 同 地 方 不 同 药 房 的 葛 根，按
2. 2 项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下
图 1 对照品色谱图
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贵阳中医学院学报
第 37 卷
图 2 葛根色谱图
2. 6 精密度试验 精密吸取对照品溶液 1μL，重复进样 6 次，测
得 β － 谷甾醇的峰面积的 ＲSD 值为 1. 60% ，表明 仪器的精密度好。 2. 7 稳定性试验
取供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，10，12h，进 样测定，记录峰面积。计算 β － 谷甾醇的峰面积 的 ＲSD 值 为 0. 27% ，表 明 供 试 品 溶 液 在 12h 内 稳定。 2. 8 重复性试验
加入量 μg
186. 00 186. 00 186. 00 372. 00 372. 00 372. 00 744. 00 744. 00 744. 00
测得量 μg
493. 39 498. 20 487. 32 673. 34 683. 30 677. 34 1063. 81 1057. 46 1026. 96
将葛根药材粉碎，过 40 目筛，取粉末约 1. 0g， 精密称定，加 50mL 甲醇，水浴回流 1. 5h，连续回 流三 次，合 并 滤 液，挥 干，将 残 渣 加 甲 醇 定 容 于 10mL 的容量瓶，摇匀，用 0. 22μm 的微孔滤膜滤 过，即得供试品溶液。 2. 3 对照品溶液的制备
精密称取 β － 谷甾醇对照品适量，置 25mL 的 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成 0. 372mg / mL 的对照品储备液。