第二十四章 常用分子生物学技术的原理及其应用
常用分子生物学技术的原理及其应用
（二）基因突变
利用PCR技术可以随意设计引物在体 外对目的基因片段进行嵌和、缺失、点突 变等改造。
（三）DNA和RNA的微量分析
PCR技术高度敏感，对模板DNA的 量要求很低，是DNA和RNA微量分析的 最好方法。
目录
（四）DNA序列测定
将PCR技术引入DNA序列测定，使测序 工作大为简化，也提高了测序的速度；
目录
链末端合成终止法测定DNA序列的原理
G
ddG
测序反应
电泳
A
T
C
ddA ddT ddC
正极
AACGTGGACT AACGTGGAC AACGTGGA AACGTGG AACGTG AACGT AACG AAC AA A
负极
3'
5'
目录
二、DNA自动测序
采用荧光替代放射性核素标记是实现DNA序 列分析自动化的基础。用不同荧光分子标记四种 双脱氧核苷酸，然后进行Sanger测序反应，反应 产物经电泳（平板电泳或毛细管电泳）分离后， 通过四种激光激发不同大小DNA片段上的荧光分 子使之发射出四种不同波长荧光，检测器采集荧 光信号，并依此确定DNA碱基的排列顺DNA的 信息（包括所有的编码区和非编码区）以DNA 片段形。目录基因组和cDNA的构建和筛选目录
基因组筛选结果举例第一轮筛选第二轮筛选
第三轮筛选
待测DNA片段既可克隆到特定的载体后 进行序列测定，也可直接测定。
（五）基因突变分析
PCR与其他技术的结合可以大大提高基 因突变检测的敏感性 。
目录
三、几种重要的PCR衍生技术
（一）逆转录PCR技术
• 逆转录PCR(reverse transcription PCR，RTPCR)是将RNA的逆转录反应和PCR反应联合 应用的一种技术。
常用分子生物学技术的原理及其应用
分子生物学技术是生物学领域中的重要工具，广泛应用于基础研究、医学诊断、药物研发等领域。
以下是常用的分子生物学技术及其原理和应用：1. PCR技术：PCR（聚合酶链式反应）是一种体外扩增DNA的方法，基本原理是通过DNA聚合酶酶在体外模拟DNA的复制过程，从而快速扩增目标DNA片段。
PCR技术在基因克隆、基因检测、DNA指纹分析等领域有着广泛的应用。
2. 基因克隆技术：基因克隆是将感兴趣的DNA片段插入到载体DNA 中，构建重组DNA分子的过程。
通过基因克隆技术可以获得大量目的基因的DNA序列，用于研究基因功能、表达调控等方面。
3. 蛋白质表达与纯化技术：蛋白质表达技术是将外源基因导入宿主细胞中，使其表达目的蛋白质的过程。
通过蛋白质表达与纯化技术，可以获得大量纯净的蛋白质样品，用于研究蛋白质结构、功能等。
4. 基因编辑技术：基因编辑技术包括CRISPR-Cas9系统、TALENs和ZFNs等，可以实现对基因组特定区域的精准编辑。
基因编辑技术在疾病治疗、植物育种等领域有着巨大的潜力。
5. RNA干扰技术：RNA干扰是一种通过RNA介导的基因沉默机制，可使目标基因的mRNA水平下降，从而抑制基因表达。
RNA干扰技术在基因功能研究、疾病治疗等方面具有重要应用价值。
6. 蛋白质亲和纯化技术：蛋白质亲和纯化技术利用蛋白质与其结合物质之间的特异性相互作用，实现对目标蛋白质的选择性富集和纯化。
该技术在药物筛选、蛋白质相互作用研究等领域有着广泛应用。
7. 基因芯片技术：基因芯片是一种高通量的生物芯片技术，可同时检测上千个基因的表达水平。
基因芯片技术广泛应用于基因表达谱分析、疾病诊断、药物研发等领域。
8. 蛋白质组学技术：蛋白质组学技术主要包括蛋白质质谱分析、蛋白质组芯片等，用于研究蛋白质在生物体内的表达水平、翻译后修饰等。
蛋白质组学技术在疾病诊断、药物靶点鉴定等方面有着重要应用。
以上是常用的分子生物学技术及其原理和应用。
《医学分子生物学》课件：常用分子生物学技术的原理及其应用
预杂交液实际上就是不含探针的杂交液 ，其中主要 含有鲑鱼精子DNA（该DNA与哺乳动物的同源性极低， 不会与待测DNA或探针杂交）、牛血清等，这些大分子 可以封闭膜上所有非特异性吸附位点。
常用分子生物学技术的 原理及应用
The Principle and Application of Common Used Techniques in Molecular Biology
目录
一、分子用研究技术
目录
第一节 分子杂交与印迹技术
Cycle 3
5
5
5
5
5
5
5
5
5 5
5 5
25～30 次循环后，模板DNA的含量 可以扩大100万倍以上。
目录
PCR技术原理示意图
目录
PCR的基本反应步骤
变性 95˚C
延伸 72˚C
退火 Tm-5˚C
目录
目录
引物：
引物是指与待扩增靶DNA两端序列互补的寡核苷酸。 PCR反应中的引物有两条，即5′端引物和3′端引物。 引物决定PCR扩增产物的特异性和长度。 PCR引物的设计与PCR反应的成败关系密切。
目录
PCR体系基本组成成分 • 模板DNA • 特异性引物 • 耐热DNA聚合酶 • dNTPs • 含Mg2+缓冲液
目录
一、PCR技术的工作原理
Template DNA
5
5
5
Cycle 1
Primer 1 5 Primer 2
5 5
5 5
常用分子生物学技术的原理及其应用
基因突变技术的最新进展
近年来，随着技术的发展，基因突变技术不断取得新 的突破和进展。
输标02入题
高通量突变筛选技术使得能够在短时间内对大量基因 进行突变和筛选，加速了基因功能研究和药物研发的 进程。
01
03
基因编辑技术的出现，如CRISPR-Cas9系统，使得能 够实现精准地编辑基因组，为基因治疗和生物育种等
01
02
03
04
基因突变技术在生物工程中广 泛应用于菌种改良、基因治疗
和生物制药等领域。
通过基因突变技术可以改良微 生物菌种的代谢途径，提高产
物的产量和品质。
在基因治疗中，基因突变技术 可用于纠正致病基因的缺陷， 治疗遗传性疾病和癌症等疾病
。
在生物制药中，基因突变技术 可用于产生具有特定性质的蛋 白质或酶，用于药物研发和生
常用分子生物学技术的原理及其应 用
目 录
• 基因克隆技术 • 基因表达技术 • 基因突变技术 • 蛋白质组学技术
01 基因克隆技术
基因克隆技术原理
基因克隆技术是通过将外源DNA片段插入到载体DNA中，然后将其转化到宿主细胞 中进行复制和表达，从而获得目的基因或基因片段的过程。
基因克隆的关键步骤包括：目的基因的获取、载体的选择和制备、DNA连接、转化 和筛选。
疾病治疗
基因表达技术可用于疾病 治疗，如基因疗法和基因 编辑等。
基因表达技术的最新进展
CRISPR-Cas9系统
这是一种新型的基因编辑技术，通过向导RNA和Cas9蛋白的引导，实现对特 定DNA序列的切割和编辑。
人工染色体
通过基因表达技术，可以人工构建染色体，实现生物体的染色体数目和结构的 改变。
领域带来了革命性的变革。
常用分子生物学技术的原理及其应用
常用分子生物学技术的原理及其应用概述分子生物学技术是现代生物学研究中应用广泛的一系列技术方法。
这些技术能够帮助科学家从分子水平上理解生物学系统的结构和功能，并促进相关研究的进展。
本文将介绍几种常用的分子生物学技术，并详细探讨它们的原理和应用。
1. 聚合酶链式反应（PCR）•原理：聚合酶链式反应（PCR）是一种体外合成DNA的方法，通过循环性反应使DNA的数量迅速扩增。
该技术主要包括三个步骤：变性、退火和延伸。
在变性步骤中，DNA双链被加热使其解旋成两条单链。
在退火步骤中，引物与模板DNA序列互补碱基配对。
在延伸步骤中，热稳定DNA聚合酶将新的DNA链延伸。
•应用：PCR技术在生物学研究和临床诊断中有着广泛的应用。
它可以用于基因克隆、基因突变分析、DNA测序、DNA指纹鉴定等。
此外，PCR还常用于检测病原体、肿瘤标记物以及遗传性疾病的诊断。
2. 凝胶电泳•原理：凝胶电泳是一种分离DNA和蛋白质的常见方法。
该技术基于物质在电场中的迁移速度不同，利用电势差将分子分离开来。
DNA片段在凝胶中迁移速度与其大小有关，大片段迁移较慢，小片段迁移较快。
•应用：凝胶电泳广泛应用于DNA分析、蛋白质分析以及核酸杂交等实验中。
在分子生物学研究中，凝胶电泳可用于确认PCR扩增产物的大小，并进行DNA片段的分离和纯化。
此外，它还可以检测基因突变、遗传关系等。
3. 蛋白质电泳•原理：蛋白质电泳是一种分离和分析蛋白质的技术。
该技术基于蛋白质的大小、电荷和形状差异，利用电势差将蛋白质分离开来。
在电泳过程中，蛋白质样品被加载到聚丙烯酰胺凝胶中，并通过电场迁移。
•应用：蛋白质电泳在生物学研究和临床诊断中具有重要作用。
它可以用于鉴定蛋白质在细胞中的表达水平、研究蛋白质结构和功能以及检测特定蛋白质的存在与否。
此外，蛋白质电泳还用于分离和纯化重组蛋白质。
4. 核酸杂交•原理：核酸杂交是一种通过互补碱基配对而发生的分子相互作用。
通过标记的探针DNA或RNA与靶序列相互结合形成稳定的双链或三链结构，从而可进行检测和定位。
常用分子生物学技术的原理及应用
常用分子生物学技术的原理及应用一、PCR技术1.PCR（Polymerase Chain Reaction）技术是一种常用的分子生物学技术，主要用于扩增DNA片段。
2.PCR技术的原理是通过添加DNA模板、引物和DNA聚合酶，以及一系列特定的温度循环，迅速扩增目标DNA序列。
3.PCR技术的应用广泛，如基因克隆、基因突变分析、疾病诊断等。
二、蛋白质电泳技术1.蛋白质电泳技术是用于分离和定量蛋白质的常用方法。
2.蛋白质电泳技术包括SDS-PAGE和蛋白质西方印迹等。
3.SDS-PAGE是一种蛋白质分子量分析方法，通过凝胶电泳分离蛋白质。
4.蛋白质西方印迹则用于检测特定蛋白质的表达，并通过特异性抗体与该蛋白质结合，产生特定的信号。
三、原位杂交技术1.原位杂交技术是研究基因表达和基因组结构的重要工具。
2.原位杂交技术通过结合特异性探针和标记物，用于检测目标序列在组织或细胞中的分布。
3.原位杂交技术有多种类型，如荧光原位杂交（FISH）和非放射性原位杂交等。
4.原位杂交技术在遗传学研究、疾病诊断和生物学研究中得到广泛应用。
四、基因克隆技术1.基因克隆技术是将特定DNA片段插入到载体DNA中的技术。
2.基因克隆技术的关键步骤包括：DNA片段的切割、载体DNA的选择和连接、转化等。
3.基因克隆技术在基因工程、重组蛋白质的表达以及基因功能研究等方面具有重要应用。
五、DNA测序技术1.DNA测序技术是用于确定DNA序列的方法。
2.DNA测序技术包括Sanger测序和高通量测序等。
3.Sanger测序是一种经典的测序方法，逐个位置确定DNA序列。
4.高通量测序技术通过并行测序大量的DNA片段，实现快速高效的DNA测序，并被广泛应用于基因组学研究、药物研发等领域。
六、蛋白质质谱技术1.蛋白质质谱技术是分析蛋白质结构和功能的重要方法。
2.蛋白质质谱技术包括质谱仪的使用和蛋白质样品的制备等。
3.蛋白质质谱技术能够快速鉴定蛋白质样品中的蛋白质组分，并定量分析特定蛋白质的表达水平。
分子生物学技术及其应用
分子生物学技术及其应用随着科技的不断发展，分子生物学技术已经逐渐成为了生物学前沿研究中的重要工具之一。
从最早的基因克隆技术，到现在的基因编辑和重编程技术，分子生物学技术已经广泛应用于药物研发、生物治疗、基因诊断等多个领域。
本文将着重介绍分子生物学技术的基本原理、主要应用及对未来科技发展的影响。
一、分子生物学技术的基本原理分子生物学技术是一种借助于分子生物学理论，利用各种化学和物理手段对生物大分子进行操作和研究的技术。
其基本原理在于利用生物大分子的物理性质和化学性质来进行分离、纯化和分析。
其中，分子生物学技术的核心是DNA分子的操作和研究。
DNA分子作为生物体内的遗传物质，其结构和功能的研究对于理解生物现象和生命本质有着重要作用。
因此，在分子生物学技术中，对于DNA的操作和研究显得尤为重要。
二、分子生物学技术的主要应用1. 基因克隆技术基因克隆技术是指将DNA分子从源生物体中剪切并插入到另一个宿主生物体中的技术。
其应用广泛，例如在基因疗法、基因工程、药物研发和农业生产等领域中都有重要的作用。
2. 基因编辑技术基因编辑技术是利用CRISPR-Cas9系统定点修改基因序列的技术。
其应用广泛，可用于基因治疗、基因诊断及疾病预防等领域。
3. DNA测序技术DNA测序技术是指通过对DNA分子的测序来分析DNA序列信息的技术。
其应用广泛，可用于遗传病诊断、药物研发、生态环境研究等领域。
4. 基因表达分析技术基因表达分析技术是指通过各种分析手段对基因表达水平进行分析的技术。
其应用广泛，可用于疾病诊断、药物研发、基因工程等领域。
5. 基因组编辑技术基因组编辑技术是指将基因组中的特定部位进行编辑的技术。
其应用广泛，可用于基因治疗、药物研发等领域。
三、分子生物学技术对未来科技发展的影响随着分子生物学技术的不断发展，其在生物医学、农业、环境保护、食品安全等领域中的应用越来越广泛。
分子生物学技术的出现和发展带来了许多新的机遇和挑战。
24常用分子生物学技术的原理及其应用(人卫9版)
SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳：常用于蛋白质分
子量的测定
IEE等电聚焦电泳：通过蛋白质等电点的差异而分离
蛋白质的电泳方法
2-DGE双向凝胶电泳：蛋白质组学研究的重要技术
a. 样品加于凝胶上部的上样孔内，在电场的作用下，蛋白质分子根据其 固有 的带电性和分子大小进行分离 b. 凝胶经染料（例如：考马斯亮蓝）染色后，蛋白质条带得以显现
三、几种重要的PCR衍生技术
逆转录PCR(reverse transcription PCR，RT-PCR)是
将RNA的逆转录反应和PCR反应联合应用的一种技术
RT-PCR是目前从组织或细胞中获得目的基因以及对 已知序列的RNA进行定性及半定量分析的最有效方法
逆转录PCR技术常用引物
mRNA 寡核苷酸 dT 5’ A A A A A A 3’ T T T T T T 5’ mRNA
第一节
分子杂交和印记技术
Molecular Hybridization and BlottingTechnique
一、分子杂交与印迹技术的原理
分子杂交 (molecular hybridization)
不同的DNA或RNA分子之间，或DNA分子与RNA分子
之间，按照碱基互补配对的原则，两条完全或不完全互
引物
F 荧光物质
F
聚合酶 F F
F
F
F
F
F
F
TaqMan探针法 分子信标探针法 FRET探针法
F
Q
杂交体
F
Q
分子信标
靶基因
F: 荧光报告基因；Q:荧光淬灭基因
实时定量PCR技术具有定量、特异、灵敏和快速等特点，是目前检测目的核酸 拷贝数的可靠方法，是DNA定量技术的一次飞跃。目前实时荧光PCR技术已经被广 泛应用于基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域
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利用透析袋把大分 子蛋白质与小分子 化合物分开的方法
应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分 子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的
蛋白质溶液 超滤膜
离心
蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场 中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达 到分离各种蛋白质的技术, 称为电泳(elctrophoresis) 根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等
用于RNA的定性定量分析
用于蛋白质定性定量及相互作用研究
⑤
④ ①
②
③
三种印迹技术的比较
其他杂交或印记技术
斑点印迹 (dot blotting)
原位杂交 (in situ hybridization)
组织原位杂交
细胞染色体DNA原位杂交
菌落原位杂交
DNA芯片技术 (DNA chip)
多组织片 组织阵列
组织微阵列
第五节
蛋白质的分离纯化和结构分析
Isolation, Purification and Structural Analysis of Proteins
丙酮、乙醇等有机溶剂可以使蛋白质沉淀，再将其溶解在小 体积溶剂中即可获得浓缩的蛋白质溶液
为保持蛋白质的结构和生物活性，需要在0～4℃低温下进行 丙酮或乙醇沉淀 沉淀后应立即分离，否则蛋白质会发生变性
随机引物
5’
A A A A A A 3’
mRNA 特异性引物 5’ A A A A A A 3’
24
三、几种重要的PCR衍生技术
利用完整的细胞作为一个微小的反应体系来扩增细胞内的目的基因片段
PCR反应在福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片或细胞涂片上的单个细胞 内进行。反应后，再用特异性探针进行原位杂交即可检出待测DNA或RNA 是否在该组织或细胞中存在 原位PCR将目的基因的扩增与定位相结合，既能分辩鉴定带有靶序列的细 胞，又能标出靶序列在细胞内的位置
固定在固相支持物上，当与待测蛋白质样品反 应时，可捕获样品中的靶蛋白，再经检测系统 对靶蛋白进行定性和定量分析的一种技术
蛋白质检测芯片 蛋白质功能芯片
是将数十个、数百个乃至上千个小的处于自然或病理状态下的组织标本 集成在一张固相载体上（通常是载玻片） 形成微缩组织切片，以形态学
为基础，在组织切片上高通量获取基因的表达信息的一种技术
称之为“blotting”，即印迹技术
探针技术
探针（probe）指的是带有特殊可检测标
记的多聚核苷酸片段
放射性核素、生物素或荧光染料可以标记其
末端或全链的已知序列
探针可以与固定在NC膜上的核苷酸互补结合 可以用于检测核酸样本中存在的特定基因
二、分子杂交和印迹技术的类别及应用
用于克隆基因的酶切图谱、基因组中某一基因的定性及定量、基因突变、 基因拷贝数及限制性片段长度多态性分析等
三、几种重要的PCR衍生技术
实时PCR (real-time PCR) 技术是指在PCR反应体系中加入 荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个 PCR进程，最后通
过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法
实时技术通过动态监测反应过程中的产物量，消除了产物堆
积对定量分析的干扰，亦被称为定量PCR
实时PCR在肿瘤方面的应用 实时PCR用于多态性分析 实时PCR用于病原体的检测
第三节
DNA测序技术
DNA Sequencing
一、双脱氧法和化学降解法是经典DNA测序方法
二、第一代全自动激光荧光DNA测序仪器基于双脱氧法 三、高通量DNA测序技术使基因测序走向医学实用 四、DNA测序在医学领域具有广泛应用价值
将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电 荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因 素去除而沉淀
各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH均不同，可据此将不同的 蛋白质予以分离
利用特异抗体可以识别相应抗原并形成抗原抗体复合物的特性，可从 蛋白质混合溶液中分离获得相应的抗原蛋白 用于特定蛋白质定性和定量分析 将抗体交联至固相化的琼脂糖珠上，易于获得抗原抗体复合物
第二十四章
常用分子生物学技术
Basic Techniques in Molecular Biology
作者 : 药立波 单位 : 第四军医大学
本章小结
第一节 分子杂交和印迹技术 第二节 PCR技术的原理与应用 第三节 DNA测序技术 第四节 生物芯片技术 第五节 蛋白质的分离、纯化与结构分析
第六节 生物大分子相互作用研究技术
原位分子杂交技术
原位杂交是进行基因及其表达产物定位分析的一种技术
基本原理：利用标记的核酸分子探针与组织、细胞或染色体上待测
DNA或RNA结合，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色 体上的位置显示出来
重要条件：组织、细胞或染色体的固定，具有能与待测特定片段互
补的核苷酸序列（探针），以及与探针结合的标记物
引物
F 荧光物质
F
聚合酶 F F
F
F
F
F
F
F
TaqMan探针法 分子信标探针法 FRET探针法
F
Q
杂交体
F
Q
靶基因
分子信标
F: 荧光报告基因；Q:荧光淬灭基因
实时定量PCR技术具有定量、特异、灵敏和快速等特点，是目前检测目的核酸 拷贝数的可靠方法，是DNA定量技术的一次飞跃。目前实时荧光PCR技术已经被广 泛应用于基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域
一、双脱氧法和化学降解法是经典DNA测序方法
二、第一代全自动激光荧光DNA测序仪器基于双脱氧法
早期的全自动DNA序列分析仪的工作原理主要是基于Sanger 法，采用四色荧光标记ddNTP而制作的。采用4种不同荧光染料 标记4种不同的可终止DNA延伸反应的底物ddNTP，经Sanger法 反应后，赋予所合成的DNA片段4种不同的颜色。待测DNA样品 的4个反应产物在同一个泳道内依照片段大小电泳分离，由仪器 自动连续采集荧光数据并完成分析，最后直接显示待测DNA的 碱基序列
SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳：常用于蛋白质分
子量的测定
IEE等电聚焦电泳：通过蛋白质等电点的差异而分离
蛋白质的电泳方法
2-DGE双向凝胶电泳：蛋白质组学研究的重要技术
a. 样品加于凝胶上部的上样孔内，在电场的作用下，蛋白质分子根据其 固有 的带电性和分子大小进行分离 b. 凝胶经染料（例如：考马斯亮蓝）染色后，蛋白质条带得以显现
原位分子杂交技术
(TTAGGG)n-3'
分析基因在染色体上的位置 DNA荧光原位杂交
确定特定基因的表达定位 RNA原位杂交
第二节
PCR技术的原理与应用
Principle and Application of Polymerase Chain Reaction
聚合酶链反应
(The Polymerase Chain Reaction, PCR)
三、高通量DNA测序技术使基因测序走向医学实用
人群及个体进行全基因组序列分析必须实现DNA测序技 术的微量、快速和低成本化
新的高通量DNA测序技术及其分析仪器因此应运而生。 这些新技术被冠予新一代测序（next generation sequencing，NGS）之称
新一代测序技术
焦磷酸测序（Pyrosequencing） 循环芯片测序（cyclic-array sequencing） 单分子实时测序
第一节
分子杂交和印记技术
Molecular Hybridization and BlottingTechnique
一、分子杂交与印迹技术的原理
分子杂交 (molecular hybridization)
不同的DNA或RNA分子之间，或DNA分子与RNA分子
之间，按照碱基互补配对的原则，两条完全或不完全互
通过DNA序列分析可以鉴定基因和基因组的变异 通过DNA序列测定分析人工重组的基因
通过DNA序列测定对定点突变进行确认
第四节
生物芯片技术
Biochip Technologies
基因芯片(gene chip)
是指将许多特定的DNA片段有规律地紧密排列固定于
单位面积的支持物上，然后与待测的荧光标记样品进 行杂交，杂交后用荧光检测系统等对芯片进行扫描， 通过计算机系统对每一位点的荧光信号做出检测、比 较和分析，从而迅速得出定性和定量的结果。该技术
凝胶中加入系列两性电解质载体，在电场中形成一个连续而稳定的线 性pH梯度，样品加于凝胶上部，蛋白质根据不同的等电点被分离
第一相：等电聚焦电泳将蛋白质按等电点进行分离
将等电聚焦电泳的凝胶置于水平的SDS-PAGE凝胶的上样处 第二相：SDS-PAGE电泳将蛋白质按分子量进行分离。图中水平方向代表了蛋白质等电点 的差别， 垂直方向代表了蛋白质分子量的差别
重点难点
掌握
印记技术的概念；PCR技术的概念，原理、用途；DNA序列测定的概念和 用途；生物芯片的概念；蛋白质分离纯化的主要技术所依据的蛋白质理化性 质
熟悉
印记技术的种类；实时PCR技术的原理和用途；新一代DNA序列测定的概 念和用途；生物芯片的用途；蛋白质分离纯化的主要方法的概念和应用
了解
分子生物学技术在医学发展中的意义；基因的概念；蛋白质分离纯化的 主要方法及其基本原理；多肽链中氨基酸的序列分析方法及其原理；蛋白质 空间结构测定的基本原理；蛋白质相互作用分析的主要方法和意义
延伸 72˚C
退火 Tm-5˚C
（50-65 ˚C）
产物：两引物之间特异的DNA片段