巨噬细胞培养
巨噬细胞原代培养方法
一、实验材料准备1. 动物：各个品系的小鼠2-4只。
2. 试剂：RPMI1640培养基(含酚红)，小牛血清，双抗，培养液(10%小牛血清、RPMI1640、双抗)，台盼兰等。
碘酒绵球和酒精绵球。
3. 器械：一次性注射器、手术器械。
二、实验方法如果采用刺激物，则可在实验前三天腹腔注射3%巯基乙醇酸钠每只2 mL，获得的巨噬细胞数要多一些。
不采用刺激物，直接开始下面的步骤。
1. 拉颈处死小鼠，在75%酒精浸泡1-2分钟，移入超净台中，仰卧位固定于解剖板上，碘酒消毒腹部皮肤，酒精绵球脱碘。
用手术直剪充分剪开腹部皮肤，暴露腹部肌层，再用酒精绵球消毒腹部肌层。
2. 用注射器抽取5 mL含双抗的RPMI1640培养基注入腹腔，用绵球轻揉腹部1-2 min，然后，用眼科镊稍提起腹腔，并用眼科剪剪开一个小口，用吸管吸取细胞悬液，移入离心管中(个人认为，此法比用注射器抽吸好一些)。
3. 1 000 rpm离心5 min后，用含双抗的RPMI1640培养基洗涤一次，再次离心，重悬细胞于含10%小牛血清的RPMI1640培养液中，如果是作为饲养细胞使用，则选择相应的培养液。
台盼蓝拒染法计数，将细胞稀释到目的浓度后，接种即可。
4. 如果是作为饲养细胞使用，调整浓度至2x105个/mL，接种到96孔板中，每孔100-200 μL；如果作为其它实验使用，可以调整成2x106/mL，加到24孔平底培养板中，1 mL/孔；5% CO2温箱孵育2 h后，换液，并用RPMI1640培养基洗1-2次，弃去未粘附细胞，贴壁细胞为单层的巨噬细胞。
用4度遇冷的1640培养基做，细胞在外面一直放在冰里。
三、结果巨噬细胞刚贴壁时偏圆形，或者类似鹅卵石形状，然后慢慢伸出伪足，铺开呈三角形或多角形。
巨噬细胞有吞噬的特性，当与细菌混合在一起的时候，在40倍物镜下可以看到巨噬细胞吞噬细菌，因此，巨噬细胞作为饲养细胞可以清除部分污染的细菌、支原体和部分细胞碎片。
共培养巨噬细胞和成骨细胞的方法
共培养巨噬细胞和成骨细胞的方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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巨噬细胞的原代培养
巨噬细胞属天然免疫细胞，具有趋化运动、吞噬、分泌和参与免疫调节等功能，是科学工作者研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。
巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。
巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2－3周多用做原代培养，不易长期生存。
巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如P331、S774A.1、RAW309Cr.l 等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。
目前，单核巨噬细胞株也有，比如RAW264.7，但价格比较贵，且保存也不方便。
培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，目前以小鼠腹腔取材法最为实用，而目前获取小鼠巨噬细胞的方法有两种，一种是直接用培养液灌洗实验动物腹腔，从腹腔灌洗液中分离巨噬细胞，还有一种方法向动物腹腔中注射刺激物（如牛血清，淀粉，糖原，脂多糖，矿物油，PRMI1640培养液等），这样使机体产生大量巨噬细胞后再腹腔灌洗，但由于许多刺激物能激活巨噬细胞，而被激活的巨噬细胞大量吞噬刺激物，有此得到的巨噬细胞培养用于培养时，细胞中的刺激物不能很快被消化而残留在细胞中，影响细胞代谢，同时也不能很好的模拟体内环境，所以我们直接用培养液灌洗实验动物腹腔，从腹腔灌洗液中分离巨噬细胞。
我们选择6周龄的昆明小鼠是因为此年龄小鼠能产生最多的巨噬细胞。
2试验材料昆明种小鼠 10只体重约18g～25g（约6周龄）由广西医科大学动物实验中心提供公鸡 1只PRMI1640培养基新生小牛血清HEPESD-Hanks液青霉素链霉素3试验仪器无菌操作台手术刀解剖剪解剖镊止血钳 5m注射器注射针，试管、培养瓶（12），12孔培养板(12)等。
二氧化碳培养箱生物显微镜高速冷冻离心机4实验步骤4．1细胞培养液的制备及消毒制备方法:将RPMI1640干粉一袋，HEPES4. 77g加入800m1三蒸水中，充分溶解后缓慢加入碳酸氢钠并逐步添加三蒸水，使溶液的pH值处于7. 2-7. 4之间，容积为1000m1。
巨噬细胞与软骨细胞共培养
巨噬细胞与软骨细胞共培养
巨噬细胞是一种免疫系统中的主要细胞类型，主要功能是吞噬和
消化体内的病原体或异物。
而软骨细胞是一种特殊的结缔组织细胞，
主要存在于软骨组织中，起到维护和修复软骨组织的功能。
巨噬细胞与软骨细胞共培养可以模拟一些炎症和损伤等生理或病
理过程。
在共培养中，巨噬细胞可以受到刺激，产生一系列的炎症因子，包括细胞因子和趋化因子，这些因子可以通过细胞间相互作用传
递到软骨细胞，对软骨细胞的生理状态和功能产生影响。
研究已经显示，巨噬细胞激活可以导致软骨细胞的炎症反应和损伤，同时也可以激活软骨细胞的修复和再生机制。
此外，巨噬细胞还
可以影响软骨细胞的分化和增殖，并调节软骨组织的胶原合成和分解。
通过巨噬细胞与软骨细胞共培养，可以更好地理解巨噬细胞和软
骨细胞之间的相互作用及其在炎症和修复过程中的作用机制，有助于
深入了解相关疾病的发病机制，并为开发相关治疗策略提供理论依据。
小鼠腹腔巨噬细胞培养详细方法
小鼠原代腹腔巨噬细胞培养一．实验用品：器材：眼科镊，眼科剪，Pe铝箔，离心管（50ml两个），针管（5ml和1ml），酒精灯，移液枪，枪头，酒精棉球，75％酒精，酒精喷壶，烧杯。
器械：显微镜，细胞计数版，计数器。
试剂：PBS（磷酸盐缓冲液），TF,TG(巯基乙醇酸钠），含10％TBS的RPMI-1640培养液（重悬细胞）。
二．实验步骤：1.提取小鼠巨噬细胞前3-5天：向每只小鼠腹腔注射2ml-2.5ml的3％的TG(诱导巨噬细胞向M1型转化），充分酒精消毒。
2.前1天：高压器械（剪刀，镊子，铝箔纸，烧杯）3.提取巨噬细胞：三．结果：巨噬细胞：刚贴壁时偏圆形，或者类似鹅卵石形状，然后慢慢伸出伪足，铺开呈三角形或多角形。
巨噬细胞有吞噬的特性，当与细菌混合在一起的时候，在40倍物镜下可以看到巨噬细胞吞噬细菌，因此，巨噬细胞作为饲养细胞可以清除部分污染的细菌、支原体和部分细胞碎片。
巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。
巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。
巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2－3周，多用做原代培养，难以长期生存。
小鼠腹腔巨噬细胞原代培养的应用：（1）用于细胞保种；（2）用于分子生物学研究；（3）用于基因治疗研究。
*注意：1. 巨噬细胞是终末分化细胞，不会增殖。
2. 很难消化下来，所以接种的时候，必须直接接种到目的培养器皿中。
3. 严格无菌操作，在超净台内进行。
4. 为避免交叉感染，每一只小鼠更换注射器。
5. 吸管吸取细胞悬液的时候，尽量不要吸到大小肠，否则容易引起成纤维细胞污染。
换液：培养液从4度取出回温，超净台中操作，用移液枪换液即可。
bmdms培养方法
bmdms培养方法
BMDMS是指骨髓来源的巨噬细胞（Bone Marrow-Derived Macrophages）。
它们是一种重要的免疫细胞，常被用于研究免疫学、生物学和疾病模型等方面。
下面我将从多个角度介绍BMDMS的培养
方法。
1. 材料准备。
常用培养基包括DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）或RPMI 1640培养基，其中含有10%胎牛血清（FBS）或去
血清培养基，还有抗生素如青霉素/链霉素。
2. 培养骨髓细胞。
首先需要从小鼠或大鼠的骨髓中分离细胞。
通常使用灭菌的
方式，将小鼠或大鼠的胫骨和腓骨取出，用培养基冲洗骨髓腔，将
细胞悬浮液通过滤网筛选，得到单个的骨髓细胞。
3. 培养和分化。
将分离得到的骨髓细胞接种在培养皿中，培养基中含有巨噬细胞分化因子如M-CSF（巨噬细胞集落刺激因子）。
细胞培养在37摄氏度、5%二氧化碳的培养箱中，每隔2-3天更换一次培养基，培养7-10天左右，即可得到成熟的BMDMS。
4. 细胞纯化。
有时为了得到更纯净的BMDMS，可以利用差速贴壁法（adherence method）或密度梯度离心分离等技术进行细胞纯化。
总之，BMDMS的培养方法是一个复杂而精细的过程，需要严格控制培养条件和培养基的配方，以确保得到高质量的巨噬细胞。
同时，培养过程中的细胞分化、纯化等步骤也需要根据具体实验的要求进行调整和优化。
希望以上信息能够对你有所帮助。
小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养技巧及经验总结
小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养技巧及经验总结小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养技巧及经验总结引言：巨噬细胞是免疫系统中重要的成分，广泛存在于骨髓、血液、淋巴组织等处。
巨噬细胞具有特殊的吞噬能力，能够吞噬病原菌及其代谢产物，调控免疫反应和清除废物，对维持人体内环境稳定起着重要作用。
因此，很多研究都需要使用巨噬细胞进行相关实验，本文将介绍一种常用的实验动物模型小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养技巧及经验总结。
一、材料和试剂1. 培养基：DMEM高糖培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium）。
2. 补充剂：10%胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS），1%青霉素-链霉素溶液。
3. 漂洗液：DPBS（Dulbecco's Phosphate Buffered Saline）。
4. 消化液：0.25%胰酶溶液。
5. 凝胶：1%琼脂糖凝胶。
6. 染色剂：Trypan Blue。
二、培养条件1. 温度：37℃。
2. 湿度：95%。
3. CO2浓度：5%。
三、培养步骤1. 培养皿的处理将培养皿倒置放在培养柜中，加入少量95%酒精进行消毒，再倒置晾干入培养箱。
2. 细胞传代1) 将细胞培养液放入离心管中，500g离心5分钟，倒掉上清液。
2) 加入适量的DPBS定量漂洗。
3) 加入适量的0.25%胰酶溶液，室温静置10分钟，观察细胞的脱落程度。
4) 加入适量的DMEM高糖培养基，将细胞悬浮液用吸管吸取到离心管中。
5) 500g离心5分钟，倒掉上清液。
6) 加入适量的DMEM高糖培养基进行细胞计数。
3. 细胞接种1) 取出一支分装好的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞冻存管，迅速放入37℃的水中解冻。
2) 将细胞悬浮液滴加入新培养皿中，加入足够的DMEM高糖培养基使细胞浓度达到合适的浓度（一般为10万/mL）。
3) 等待24-48小时，观察细胞生长情况，细胞覆盖率达到80%以上即可进行下一步实验。
巨噬细胞的实验原理是啥
巨噬细胞的实验原理是啥
巨噬细胞的实验原理是通过体外培养的方式，将目标细胞（如细菌、病毒或异物）与巨噬细胞接触，观察和分析巨噬细胞的生物学功能和作用。
巨噬细胞通常参与机体的免疫防御，通过吞噬、杀伤和降解外来病原体或异物，维持机体的内稳态和健康状态。
具体实验步骤可以包括以下内容：
1. 制备巨噬细胞：从实验动物或人体中获取巨噬细胞，通过培养基培养和增殖，使其获得足够的数量。
2. 培养实验细胞：将巨噬细胞放入培养皿中，提供合适的培养基和条件（如温度、湿度、适宜的营养物质），使其继续生长和分化。
3. 处理标的细胞：将待测的目标细胞（如细菌）加入到巨噬细胞培养皿中，使其与巨噬细胞接触。
4. 观察和分析：观察巨噬细胞对目标细胞的处理过程，可以通过显微镜观察和记录形态学变化，或者通过其他实验技术（如流式细胞术、PCR等）检测相关指标，如细胞增殖、细胞毒性、细胞吞噬能力等。
通过巨噬细胞实验，可以研究巨噬细胞与外源物质的相互作用过程、潜在细胞信
号通路和免疫机制等。
这些实验结果有助于理解巨噬细胞的生物学功能、疾病发生机制以及新药物和疫苗研发的方向。
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腹腔巨噬细胞的获取和培养
1.实验目的：
掌握腹腔巨噬细胞的获取方法及其培养技术
2.实验原理：
利用巨噬细胞具有趋化运动，吞噬，分泌和参与免疫调节的功能，向成熟大鼠腹腔内注射煮沸灭菌的4%的硫代乙酸钠，使血液中的单核细胞趋化至腹腔，即巨噬细胞。
硫代乙酸钠刺激后4日腹腔内巨噬细胞数量较多且其他细胞成分少（如淋巴细胞）。
3.实验器材及材料：
（1）成年大鼠
（2）手术器械：解剖剪，解剖镊和止血钳
（3）其他用品：注射器，培养皿和吸管，酒精及酒精棉球等
（4）清洗液：HBSS和不含Ca和Mg的HBSS。
（5）培养液：DMEM（加10%血清）
（6）细胞计数板和计数器
4.实验步骤：
（1）取细胞4d前，动物腹膜腔内注射5-10ml 4%硫代乙酸钠。
（2）乙醚麻醉后，拉颈处死动物，经颈总动脉放血。
将动物仰置，
剪去腹壁皮毛，用70%酒精消毒。
（3）沿正中线剪开腹壁，将5-10mlHBSS注入腹膜腔，用吸管反复冲洗腹膜腔的细胞。
（4）吸出腹膜腔的细胞悬液，离心（1000r/min,10min）。
（5）用培养液混悬沉淀细胞，将细胞悬液加入培养皿中，培养2h. （6）吸去培养液，用不含Ca2+和Mg2+的HBSS清洗2次，去除漂浮的细胞，得到附着于培养皿底部的巨噬细胞。
（7）采用刮取法或酶消化法取出贴壁的巨噬细胞，离心（1000r/min,10min）。
用培养液混悬细胞，将细胞调整至1-3X106个/ml,继续培养或直接用于实验研究。
5.实验结果分析：
（1）除巨噬细胞外，自腹膜腔洗出的细胞还含有淋巴细胞等。
由于淋巴细胞不贴壁，培养2h后用HBSS清洗，可除去淋巴细胞和其他悬浮细胞。
最终获得95%以上是巨噬细胞。
（利用巨噬细胞贴壁能力较其他细胞强）。
（2）巨噬细胞大小约50μm,一般不分裂，在培养条件下可存活1-3周。
直接从腹腔取得的巨噬细胞为静止性的，呈圆形，伪足不明显。
经硫代乙酸钠刺激可获得大量的炎症性巨噬细胞，培养2h后，细胞多呈梭形并伸出伪足，即“有头有尾”，具有较强的变形运动和吞噬能力。
6.实验讨论及注意事项：
(1)HBSS液应从4℃冰箱中取出，可抑制细胞快速代谢，保持活力。
(2)沿腹白线剪开腹腔皮肤至剑突时，应小心剪到肝脏而造成血细胞的污染。
(3)发现有腹壁小血管出血时，应及时用止血钳止血，以免污染腹膜腔。
(4)去腹膜腔巨噬细胞时，吸管不要接触腹壁，以免引起间皮细胞和成纤维细胞的污染。
（5）细胞重悬时，吹打要保持一定的速度，滴管要深入液面以下且吸的时候滴管口应仍然保持在液面下，这样才能使细胞充分混匀且不会有气泡产生。
但同时也需注意吹打次数，过分吹打也会影响细胞活力。
（6）移入培养皿中培养时应逐滴滴入不同部位，最后靠其表面张力形成一个液面，该做法可避免直接加入细胞悬液时所造成的细胞在培养皿中分布不均匀。
（7）移入培养皿中培养时切记所有操作均不要将自己的手胳膊从培养皿上方经过。