实验五 牛黄解毒片中黄芩苷的含量测定
牛黄解毒片中黄芩苷的含量测定
牛黄解毒片中黄芩苷的含量测定
袁国秀
【期刊名称】《中国社区医师（医学专业）》
【年(卷),期】2011(013)023
【摘要】目的:测定牛黄解毒片中黄芩苷的含量是否符合规定.方法:利用高效液相色谱法测定黄芩苷的含量.结果:理论塔板数2579,分离数6.04,本品牛黄解毒片中含黄芩苷为0.878mg,约等于0.88mg/片,RSD=0.2%.结论:按2005年版<中国药典>规定每片含黄芩苷(C 21H 18O511)不得少于0.75mg,本品牛黄解毒片符合规定.【总页数】1页(P3)
【作者】袁国秀
【作者单位】132011,吉林省长春市中医院
【正文语种】中文
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3.牛黄解毒片中黄芩苷含量测定限度规定的商榷
4.牛黄解毒片中黄芩苷含量测定方法的改进
5.牛黄解毒片中黄芩苷的含量测定
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牛黄解毒丸(大蜜丸)中黄芩苷的含量测定方法的改进
牛黄解毒丸(大蜜丸)中黄芩苷的含量测定方法的改进
金丽鑫;徐愚聪;蒋畅
【期刊名称】《中国药品标准》
【年(卷),期】2012(13)4
【摘要】目的:修订完善牛黄解毒丸现行标准中黄芩苷的含量测定方法.方法:参照<中国药典>2010年版黄芩苷含量测定的方法,优化了测定方法.采用Welch Matenals C18 ( 4.6 mm×200 mm,5 μm)色谱柱,甲醇-水-磷酸(45∶55∶0.2)为流动相,流量1.0 mL·min-1.结果:以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,建立回归方程Y=2 105.3X-3.577 7,r=0.999 8,黄芩苷在0.028 46～0.853 8 μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率为103.2%(n=6),RSD为1.29%.结论:修订了的含量测定方法科学、合理,重复性好,可用于该药的质量控制.
【总页数】4页(P275-278)
【作者】金丽鑫;徐愚聪;蒋畅
【作者单位】成都中医药大学,成都,611130;四川省食品药品检验所,成都,610097;四川省食品药品检验所,成都,610097
【正文语种】中文
【中图分类】R921.2
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实验五牛黄解毒片中黄芩苷的含量测定
实验五牛黄解毒片中黄芩苷的含量测定
实验五牛黄解毒片中黄芩苷的含量测定
一、目的要求
1. 掌握中药制剂中黄芩苷的含量测定方法。
2. 掌握高效液相色谱仪的使用方法。
二、基本原理
利用高效液相色谱法分离牛黄解毒片中黄芩苷，在λman315 nm 处进行检测。
为了减小实验条件波动对分析结果的影响，采用随行外标一点法定量。
三、仪器与试药
1. 高效液相色谱仪、超声波提取器、分析天平。
2. 甲醇（色谱纯）、磷酸（AR）、双蒸水、乙醇（AR）。
3. 黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所）。
4. 牛黄解毒片（市售品）。
四、操作步骤
1. 对照溶液制备精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成1mL中含30μｇ的溶液，即得。
2.供试品溶液制备取本品20片，（包衣片除去包衣），精密称定，研细，混匀，取约1ｇ，精密称定，加70%乙醇30mL，超声处理20分钟，放冷，滤过，滤液置50mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，溶液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。
3. 测定法
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2）为流动相；检测波长为315nm。
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
五、思考题
1. HPLC中常用的定量方法有几种？外标一点法有何特点？
2. 牛黄解毒片中黄芩苷的含量测定还可用哪些方法？。
高效液相色谱法测定牛黄解毒片中黄芩苷大黄素的含量-精选文档
高效液相色谱法测定牛黄解毒片中黄芩苷大黄素的含量-精选文档高效液相色谱法测定牛黄解毒片中黄芩苷大黄素的含量牛黄解毒片是一种历史悠久、疗效确切的中成药，为《中国药典》[1]一部收载品种，由人工牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草八味药组成，临床主要用于清热解毒，火热内盛，咽喉肿痛，牙龈肿痛，口舌生疮，目赤肿痛，原标准仅对黄芩中的黄芩苷进行了含量测定，文献资料[2～3]中，也多为对处方中的一味药大黄的5种成分进行含量研究，为更好的保证药品质量，笔者采用高效液相色谱法对大黄中的大黄素和黄芩中的黄芩苷进行同时测定。
1仪器与试药1.1仪器岛津LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津公司）检测器：SPD-20A（D2+W）电子天平：CPA-225D，BP-221D1.2试药黄芩苷、大黄素对照品均由中国药品生物制品检定所提供（纯度均为100.00%），牛黄解毒片由昆明中药厂提供。
磷酸为分析纯、乙腈为色谱纯，水为超纯水。
2方法2.1色谱条件：KromasilC18（150×4.6 mm，5 mm）色谱柱；流动相为0.05%磷酸溶液：乙腈=75∶25；检测波长为254 nm；柱温：30℃，见图1。
2.2对照品贮备液的制备分别称取黄芩苷16.67 mg置于50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀；大黄素9.82 mg置于200 mL的容量瓶中加甲醇稀释至刻度摇匀，精密量取25 mL于50 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，即得对照品贮备液。
2.3方法学考察2.3.1线性关系考察精密量取各对照品贮备液，分别置于同一量瓶中，加甲醇分别制成含黄芩苷浓度0.006 7、0.013 0、0.033 4、0.066 7、0.100 0 mg/mL，大黄素0.000 491、0.000 982、0.002 455、0.004 910、0.007 365 mg/mL的溶液，取10ul 注入液相色谱仪，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，大黄素回归方程为y=4E+07x-140 4.6 R2=0.999 9，表明在0.000 491 mg/mL ～0.007 365 mg/mL范围内呈良好的线性关系；黄芩苷回归方程为y=1E+07x-336 3.2 R2=0.999 8，表明在0.006 7 mg/mL ～0.100 0 mg/mL范围内呈良好的线性关系2.3.2精密度试验精密称取样品0.252 4 g于50 mL容量瓶中，加少许50%甲醇溶液超声30 min，再加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。
牛黄解毒片中黄芩规范投料的快速鉴定方法[发明专利]
![牛黄解毒片中黄芩规范投料的快速鉴定方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/9e31c9b8ad02de80d5d84066.png)
专利名称：牛黄解毒片中黄芩规范投料的快速鉴定方法专利类型：发明专利
发明人：罗轶,朱韬,黄清泉,何颂华,吕轶峰
申请号：CN202011540691.6
申请日：20201223
公开号：CN112697941A
公开日：
20210423
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种牛黄解毒片中黄芩规范投料的快速鉴定方法，该方法是以黄芩苷和汉黄芩苷为对照品，采用高效液相色谱法进行测定，得到牛黄解毒片的高效液相色谱图，通过汉黄芩苷色谱峰峰面积与黄芩苷色谱峰峰面积对比进行判断，当汉黄芩苷色谱峰峰面积大于黄芩苷色谱峰峰面积的50%时，黄芩存在不规范投料的现象。
本发明的方法采用高效液相色谱法快速得到汉黄芩苷、黄芩苷的色谱峰峰面积，仅通过两种成分的色谱峰峰面积比即可判断出黄芩是否存在不规范投料的现象，鉴定成本低、时间短、操作简便，且鉴定结果较为准确。
通过本发明的鉴定方法对牛黄解毒片进行鉴定分析，可以规范牛黄解毒片中黄芩的投料方式，保证药效及用药安全。
申请人：广西壮族自治区食品药品检验所
地址：530021 广西壮族自治区南宁市青秀区青湖路9号
国籍：CN
代理机构：南宁市来来专利代理事务所(普通合伙)
代理人：来光业
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牛黄解毒片的鉴别
牛黄解毒片的鉴别一、实验目的1、掌握中药制剂的理化鉴别方法。
2、熟悉中药制剂的性状鉴别方法。
二、实验原理牛黄解毒片由人工牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草等组成。
有清热解毒主治清热解毒之功效。
用于火热内盛,咽喉肿痛,牙龈肿痛,口舌生疮等功效。
冰片具有升华性并显香草醛硫酸反应。
牛黄含胆汁酸成份，大黄含黄酮类成份。
可用于显微鉴别和含量测定。
三、实验操作本品为素片或包衣片，若为包衣片，除去包衣后，显棕黄色。
（一）成份鉴别1、冰片的鉴别（升华法）取本品1片，研细，进行微量升华，所得的白色升华物，加新制的1％香草醛的硫酸溶液1～2滴，液滴边缘渐显玫瑰红色。
2、牛黄解毒片中黄芩和大黄的显色反应鉴别（化学反应法）取本品6片，研细，加乙醇10m，温热10分钟，滤过，取滤液5ml，加镁粉少量与盐酸0.5ml，加热，即显红色（黄芩）；另取滤液4ml，加氢氧化钠试液，即显红色，再加30％过氧化氢溶液，红色不消失，加酸成酸性时，则红色变为黄色。
3、黄芩的鉴别（薄层色谱法）对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备：取本品4片，研细，加乙醚30ml，超声处理15min，滤过，弃去乙醚，滤渣置水浴上挥尽乙醚，加甲醇30ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml，加热使溶解，滴加盐酸调节PH值为2-3，加乙酸乙酯30ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml，使溶解，作为供试品溶液。
吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层析下，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5：3：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙酯溶液。
日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
（二）黄芩苷含量测定1、对照溶液制备精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成1mL中含30μｇ的溶液，即得。
药物制剂方案设计-牛黄解毒片的分析（实验方案设计）
药物制剂方案设计-牛黄解毒片的分析（实验方案设计）牛黄解毒片的分析（实验方案设计）一、实验目的1、掌握牛黄解毒片的理化鉴别方法。
2、熟悉牛黄解毒片中黄酮、黄芩等的含量测定方法。
二、实验原理牛黄解毒片由人工牛黄、雄黄、大黄、黄芩、桔梗、冰片制备而成，雄黄和大黄以细粉直接压片，可利用显微特征进行鉴别。
冰片具有升华性并显香草醛硫酸反应。
利用薄层色谱法分别鉴别牛黄解毒片中的人工牛黄（胆酸）、大黄（大黄素）、黄芩（黄芩苷）等。
三、实验方法（一）、鉴别1.大黄的鉴别(显微)：1.1 原理大黄的纤维结构中含草酸钙簇晶众多、形大、棱角大多短钝，而且黄色鲜明的特征明显。
1.2取本品，置显微镜下观察：草酸钙簇晶大，直径60～140 m。
不规则碎块金黄色或橙黄色，有光泽。
2.冰片的鉴别：2.1原理冰片具挥发性，易升华，点燃发生浓烟，并有带光的火焰。
与香草醛硫酸具有玫瑰红颜色的反应。
2.2 仪器：薄层硅胶G板。
2.3试剂和试药：试药为冰片对照品（中国药品生物制品检定所），试剂为分析纯；牛黄解毒片；乙醚，乙酸乙酯，苯-醋酸乙酯(19∶1)。
2.4测定：2.4.1 标准品液制备：精密称取冰片对照品1mg，加乙酸乙酯配制0.5mg/mL的溶液2ml。
2.4.2 样品液制备：取5片牛黄解毒片，研细，加乙醚10mL，超声10min，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯2mL使溶解，作为供试品溶液。
2.4.3 冰片的TLC检识：取对照品液及供试品液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(19∶1)展开，晾干，用新配制的1%香草醛硫酸溶液显色，在110℃烘数分钟。
3.人工牛黄的鉴别：3.1 原理：人工牛黄中胆红素在紫外灯( 365nm) 下检视供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上均显示相同颜色的斑点。
3.2仪器：薄层硅胶G板。
3.3试药和试剂：人工牛黄对照药材，胆红素对照品( 中国药品生物制品检定所)；牛黄解毒片；石油醚，三氯甲烷，甲酸乙酯，甲酸，石油醚( 30 ～60 ℃) －三氯甲烷－甲酸乙酯－甲酸( 20∶3∶5∶1)。
8034-2牛黄解毒片检验标准操作程序
目的：规范牛黄解毒片的中间产品、成品检验操作，保证检验结果的准确值。
范围：牛黄解毒片的中间产品、成品。
责任：质检员规定：1性状取本品20片，置白瓷盘中，在明亮处观察色泽及片型是否符合规定，然后除去包衣，观察其色泽，鼻嗅口尝其气味。
2鉴别2.1取供试品研细，置显微镜下观察现象。
2.2取本品1片，研细，进行微量升华，所得白色升华物，加新配制的1％香草醛硫酸溶液1～2滴，观察反应现象。
2.3取本品2片，除去糖衣，研细，加氯仿10ml研磨，滤过，滤液蒸干，加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。
另取胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg 的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇-（20：25：2：3）的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10分钟，置紫外光灯（365nm）下检视，观察供试品色谱与对照药材色谱中斑点的颜色及位置的对应情况。
2.4取本品1片，除去糖衣，研细，加甲酸20ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液10ml蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，加热回流30分钟，放冷，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干。
残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液，另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。
另取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验，取上述三种溶液各4µl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚（30～600C）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
观察供试品色谱与对照药材及对照品色谱中斑点的颜色及位置对应情况。
置氨蒸汽中熏后，日光下检视斑点颜色。
2.5取本品4片，除去糖衣，研细，加乙醚30ml，超声处理15分钟，滤过，弃去乙醚，滤渣置水浴上挥尽乙醚，加甲醇30ml超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干。
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实验五牛黄解毒片中黄芩苷的含量测定
一、目的要求
1. 掌握中药制剂中黄芩苷的含量测定方法。
2. 掌握高效液相色谱仪的使用方法。
二、基本原理
利用高效液相色谱法分离牛黄解毒片中黄芩苷，在λman315 nm处进行检测。
为了减小实验条件波动对分析结果的影响，采用随行外标一点法定量。
三、仪器与试药
1. 高效液相色谱仪、超声波提取器、分析天平。
2. 甲醇（色谱纯）、磷酸（AR）、双蒸水、乙醇（AR）。
3. 黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所）。
4. 牛黄解毒片（市售品）。
四、操作步骤
1. 对照溶液制备精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成1mL中含30μｇ的溶液，即得。
2.供试品溶液制备取本品20片，（包衣片除去包衣），精密称定，研细，混匀，取约1ｇ，精密称定，加70%乙醇30mL，超声处理20分钟，放冷，滤过，滤液置50mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，溶液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。
3. 测定法
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2）为流动相；检测波长为315nm。
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
五、思考题
1. HPLC中常用的定量方法有几种？外标一点法有何特点？
2. 牛黄解毒片中黄芩苷的含量测定还可用哪些方法？。