转基因大豆、玉米、水稻深加工产品的五重巢式PCR技术检测
PCR扩增检测转基因大豆、玉米
【实验步骤】 基因组DNA浓度和纯度的鉴定
取5μL样品溶于95μL三重蒸馏水中，用 Biophotometer分 析DNA的浓度，通过它对提取大豆DNA测OD值。并记 录数据。由OD260nm/OD280nm判定基因组DNA的浓度， 其比值在1.7~2.0之间较好，符合PCR检测要求。
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是 一种选择性体外扩增DNA的方法，其基本原理类 似 于 DNA 的 天 然 复 制 过 程 。 它 包 括 : 变 性 (Denature) 、 退火(Anneal)和延伸(Extension)三个基
外源基因( EPSPS)特异性扩增 12 3 4567M 12
外源终止子(NOS) 特异性扩增
外源启动子(CaMV35S)特 异性扩增
1 未加模板对照 2 转基因大豆、玉米 3~7 非转基因大豆、玉米
PCR假阳性结果 1． 引物设计不当，应调换引物 2． 循环参数不合适，导致非特异性扩增 3． 靶序列的交叉污染
大豆凝集素(Lectin)基因、玉米特异性内源基
因IVR为内参 ？
西医学是最近三四百年来建立在解 剖学、 生物学 及现代 科学技 术基础 上、发 展起来 的一门 以“解 剖人、 肉体人 ”为概 念的、 新兴的 现代医 学科学 理论体 系。主 要采用 科学实 验方法 ，从宏 观到微 观，直 至目前 的分子 基因层 次水平 ，发展 极为迅 速，超 过其它 任何一 门医学 科学， 成为世 界医学 史上的 主流。 医学、比较医学、后现代医学、行为 医学等 所谓“ 医学” ，都称 不上一 门独立 的医学 科学， 关于这 一点在 灵魂医 学有关 章节中 将有相 关点评 。
【实验步骤】
大豆、玉米DNA 提取--改良的CTAB法
玉米转基因检测工作总结
玉米转基因检测工作总结
近年来，随着生物技术的发展，转基因作物的种植越来越普遍。
而玉米作为世
界上种植面积最大的转基因作物之一，其转基因检测工作也变得愈发重要。
本文将对玉米转基因检测工作进行总结，以期为相关领域的研究和实践提供参考。
首先，玉米转基因检测工作的目的是为了确保市场上销售的玉米产品符合相关
的法律法规和标准。
通过检测玉米中是否含有转基因成分，可以保障消费者的权益，同时也有助于监管部门对市场上的玉米产品进行有效管理。
其次，玉米转基因检测工作通常包括样品收集、DNA提取、PCR扩增、基因
分型和数据分析等环节。
样品收集是整个检测工作的第一步，必须确保样品的来源真实可靠。
DNA提取是提取玉米样品中的基因组DNA，为后续的PCR扩增提供
原料。
PCR扩增是通过特定引物扩增目标基因片段，从而检测玉米中是否含有转
基因成分。
基因分型和数据分析则是对PCR扩增产物进行分析和鉴定，最终确定
样品中是否含有转基因成分。
最后，玉米转基因检测工作还需要关注一些问题。
例如，样品收集的时机和方法、DNA提取的纯度和质量、PCR扩增的引物设计和反应条件、基因分型的准确
性和灵敏度等都需要认真考虑和解决。
同时，检测结果的解读和报告也需要准确和详尽，避免因为技术误差或其他原因导致的错误判断。
总的来说，玉米转基因检测工作是一项复杂而重要的工作，涉及到多个环节和
技术。
只有严格按照标准操作流程，确保每个环节的准确性和可靠性，才能够得到真实有效的检测结果。
希望本文的总结能够为相关领域的研究和实践提供一定的参考和借鉴。
转基因植物及产品成分检测等17项标准2019年6月实施
2/864要闻聚焦转基因植物及产品成分检测等17项标准2019年6月实施 农业农村部25日发布第111号公告，《转基因植物及其产品成分检测 基因组DNA 标准物质制备技术规范》等17项标准业经专家审定通过，现批准发布为中华人民共和国国家标准，自2019年6月1日起实施。
17项标准如下：序号标准名称标准代号1 转基因植物及其产品成分检测 基因组DNA 标准物质制备技术规范农业农村部公告第111号-1-20182 转基因植物及其产品成分检测 基因组DNA 标准物质定值技术规范农业农村部公告第111号-2-20183 转基因植物及其产品成分检测 抗虫耐除草剂棉花GHB119及其衍生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-3-20184 转基因植物及其产品成分检测 抗虫耐除草剂棉花T304-40及其衍生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-4-20185 转基因植物及其产品成分检测 抗虫水稻T2A-1及其衍生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-5-20186 转基因植物及其产品成分检测 抗病番木瓜55-1及其衍生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-6-20187 转基因植物及其产品成分检测 抗虫玉米Bt506及其行生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-7-20188 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂玉米C0010.1.1及其行生品种定性PCR 方农业农村部公告第111号-8-20189 转基因植物及其产品成分检测 抗虫大豆DAS-81419-2及其行生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-9-201810 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂大豆 SYHTOH2及其衍生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-10-201811 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂大豆DAS-444Ø6-6及其行生品种定性PCR 方法农业农村部公告第111号-11-201812 转基因动物及其产品成分检测 合成的ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-l)定性PCR 方法农业农村部公告第111号-12-201813 转基因植物环境安全检测 外源杀虫蛋白对非靶标生物影响第1部分：日本通草蛉幼虫 农业农村部公告第111号-13-201814 转基因植物环境安全检测 外源杀虫蛋白对非靶标生物影响第2部分：日木通草蛉成虫农业农村部公告第111号-14-201815 转基因植物环境安全检测 外源杀虫蛋白对非靶标生物影响第3部分：龟纹瓢虫幼虫农业农村部公告第111号-15-201816 转基因植物环境安全检测 外源杀虫蛋白对非靶标生物影响第4部分：龟纹瓢虫成虫农业农材部公告第111号-16-201817 转基因生物良好实验室操作规范 第2部分：环境安全检测农业农村部公告第111号-17-2018经营许可、市场监管、使用指导等职责任务落到实处。
转基因大豆检测方法及标准概述
转 基 因 大 豆 是 商 品 化 最 早、 推 广 应用速度最快、种植面积最广的转基 因粮食作物。由于转基因大豆产品可 能存在潜在的环境污染、食用安全及 生态风险，对人类健康和自然环境带 来不利影响 [1]，因此需要加强对转基 因大豆产品的有效监督、监测和管理。
1 转基因大豆检测技术研究进展
农业农村部公告第 111 号 -9-2018
SN/T 3767.16-2014
SN/T 3767.17-2014
SN/T 3767.18-2014
SN/T 3767.19-2014
3 讨论与建议
目 前， 我 国 转 基 因 大 豆 的 检 测 方 法主要以 PCR 方法为主。PCR 实验成 败的关键在于模板 DNA 的提取质量， 对于不同加工过程的产品，应选择不 同 的 DNA 提 取 方 法， 同 时 采 用 紫 外 分光光度计给出 DNA 的浓度及 A260 nm/A280 nm 的比值，以判断其是否 适合进行 PCR 检测。实验中还应该注 意污染问题，建议实验过程中注意添 加阴性和空白对照。实验室的布局以
及检测工作应严格遵循国家标准中转
基因通用标准的规定。
参考文献 [1] 王南 , 李海燕 . 转基因大豆概况
及其安全性 [J]. 吉林农业 ,2016(19):118. [2] 王颢潜 , 陈锐 , 李夏莹 , 等 . 转基
因产品成分检测技术研究进展 [J]. 生物 技术通报 ,2018,34(3):31-38.
农业部 1485 号公告 -8-2010
GB/T 19495.4-2018
农业部 1782 号公告 -1-2012
GB/T 19495.5-2018
农业部 1782 号公告 -4-2012
基于PCR扩增技术的水稻优质染色体鉴定及应用研究
基于PCR扩增技术的水稻优质染色体鉴定及应用研究随着人们对高质量生活的追求，优质农产品也成为了人们越来越关注的话题。
而水稻作为我国的重要粮食作物，其品质的高低也直接关系到我国的粮食安全。
然而，在实际生产中，水稻优质染色体的鉴定仍然是一个相对困难的问题。
本文将介绍一种基于PCR扩增技术的水稻优质染色体鉴定方法及其应用研究。
1. PCR扩增技术简介PCR全称为聚合酶链反应，是一种基于DNA聚合酶的体外DNA扩增技术。
PCR扩增技术的发明者Kary Mullis在1983年首次提出了该技术，他因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。
PCR扩增技术是一种高灵敏、高特异和高效率的DNA扩增技术，已经广泛应用于生物学研究、医学诊断、法医学和基因工程等领域。
2. PCR扩增技术在水稻优质染色体鉴定中的应用PCR扩增技术已经成为一种有效的鉴定水稻优质染色体的方法。
通过对水稻栽培品种的遗传分析和核型分析，人们已经确定了许多与水稻优质染色体相关的DNA标记。
其中，GBSSR（Genotyping-by-sequencing derived SSR markers）是一种快速、经济和高效的基因标记技术，可以在很短的时间内鉴定水稻的优质染色体。
3. 水稻优质染色体鉴定的PCR扩增方法（1）提取样本DNA首先，需要提取水稻样本的基因组DNA。
可以使用各种不同的提取方法，如CTAB法、SDS法和膨胀法等。
（2）PCR扩增操作PCR扩增操作一般包括以下步骤：1.将所需试剂加入PCR反应管中，包括模板DNA、引物（primers）、酶和反应缓冲液等；2.将反应管放在热循环仪中，进行不同的温度处理，包括变性、退火和延伸等；3.重复以上步骤多次，通常可进行20-40个循环，每个循环的时间一般为30秒到2分钟不等；4.最后，将PCR产物分离并进行电泳分析，以确定DNA扩增是否成功。
（3）结果分析PCR扩增反应成功后，可以对扩增产物进行分析，以鉴定与水稻优质染色体相关的DNA标记。
如何检测转基因大豆
PCR检测转基因大豆：[目的]定性检测转基因大豆。
[方法]以非转基因大豆和CP4-EPSPS 转基因大豆为材料,以大豆内源基因Lectin和外源基因5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(CP4-EPSPS)为检测的目的片段,建立PCR反应体系。
采用改进CTAB法提取大豆基因组DNA, 并对所提DNA进行PCR扩增和电泳检测,确定转基因大豆的PCR检测限。
实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立：采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测 ,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R 的定量PCR检测方法。
该方法的检测灵敏度 <0 0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10 0倍用巢式和半巢式PCR检测转基因大豆Roundup Ready及其深加工食品：用从转基因大豆(Glycinemax )颗粒中提取的DNA作为模板,经过稀释,形成不同浓度梯度的DNA溶液,然后用巢式和半巢式PCR进行扩增反应。
结果表明,巢式和半巢式PCR均可以扩增DNA浓度为10-14g/μL的溶液。
用巢式和半巢式PCR对市场的食品原料和深加工食品进行检测,可以从大豆油、酱油、面酱、大豆磷脂、豆腐、豆浆等食品原料和深加工食品的17个品牌的食品中检测出大豆内标基因(housekeepinggene)。
ELISA方法定量检测转基因大豆及其产品的研究：以美国、阿根廷、巴西转基因大豆等为材料,建立了ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4 EP- SPS蛋白的方法,成功检测出美国转基因大豆含量为3.768%、阿根廷转基因大豆含量为2.820%、巴西转基因大含量为1.920%,转基因豆粉、转基因豆粕和中国大豆未检测到CP4 EPSPS蛋白。
此方法具有简便、快速、稳定等优点,其检测灵敏度可达到0.0075%,并且稳定性良好,为抗草甘膦转基因大豆中CP4 EPSPS蛋白的定量检测提供了有效的手段。
转基因大豆检测技术研究进展
转基因大豆检测技术研究进展[摘要]大豆的转基因研究是国内外植物分子生物学研究的热点之一。
转基因大豆已成为世界大豆主产国大豆产业发展的主要动力。
由于转基因产品的安全性在世界范围内引起广泛关注，对转基因检测技术的要求也越来越高，因此,对转基因大豆检测技术的研究成为近年来研究的热点。
重点介绍以蛋白质和核酸为目标的检测技术，如EI。
ISA、PCR和基因芯片技术的最新进展，并对不同方法的优缺点进行比较，为转基因大豆快速检测方法的选择、改进和后续研究提供参考。
[关键词]转基因大豆；检测技术；蛋白质；核酸Abstract：Soybean transformation research is a/hot spot0in the area of plant molecular genetics. Transgenic soybean has become the important power of soybeans industry development in the worlds' major producers of soybean. The different points on potential ecological risks and the impact of transgenic products on human health attracted worldwide attention． With the increase of transgenic products， the transgenic detection technology requirements should be established and perfected． The advance in detection techniques of transgenic soybean were summarized focusing on the protein and nucleic acid for target detection technology，such as new research on ELISA，PCR and gene chip techn0109y，and their characteristic were compared to provide references for transgenic soybean fast detection selection，improvement and subsequent research．Key words：transgenosis soybean；detection technology；protein；nucleic acid.转基因大豆，是指利用转基因技术，通过基因工程方法导入外源基因所培育的具有特定性状的大豆品种。
玉米转基因检测工作总结
玉米转基因检测工作总结近年来，随着转基因技术的不断发展，转基因作物在农业生产中的应用也越来越广泛。
其中，转基因玉米作为重要的农作物之一，其安全性和品质问题备受关注。
为了确保转基因玉米产品的质量和安全，转基因检测工作显得尤为重要。
转基因玉米检测工作主要包括样品采集、DNA提取、PCR扩增、基因分析和结果判读等环节。
首先，进行样品采集时需要注意采样点的选择和采样方法的规范，以确保样品的代表性和可靠性。
接着，对样品中的DNA进行提取和纯化，以获取高质量的DNA模板。
随后，利用PCR技术对目标基因进行扩增和检测，通过比对转基因和非转基因玉米的特定基因序列，来判断样品中是否存在转基因成分。
最后，根据PCR结果进行基因分析和结果判读，以确定样品中的转基因含量和种类。
在实际工作中，玉米转基因检测工作面临着许多挑战和困难。
首先，样品来源的多样性和复杂性使得样品采集和处理工作较为繁琐和耗时。
其次，PCR扩增和基因分析过程中，需要严格控制实验条件和操作流程，以避免外源污染和假阳性结果的产生。
此外，不同转基因玉米品种的基因序列差异和检测方法的局限性也给检测工作带来了一定的难度。
然而，通过不懈努力和技术创新，玉米转基因检测工作取得了一系列成果和进展。
现在，已经建立了一套完善的转基因玉米检测体系和方法，可以对不同来源和类型的玉米样品进行准确和快速的检测。
同时，一些先进的检测技术和设备的引入，也为玉米转基因检测工作提供了更多的技术支持和保障。
总的来说，玉米转基因检测工作是一项重要且复杂的工作，需要多方合作和共同努力。
随着转基因技术的不断发展和应用，玉米转基因检测工作也将继续深化和完善，为转基因玉米产品的质量和安全保驾护航。
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转基因大豆、玉米、水稻深加工产品的五重巢式PCR技术检测近年主要转基因粮食作物大豆、玉米和水稻加工产品已应用于食品制造业，为此，食品中转基因成分的安全性受到广泛关注。
当前，国际贸易和各国食品工业等部门对转基因产品逐步实施IP(Identity Preservation)管理，加强检测监控。
深加工品经过若干道加工程序，理化性质变化、DNA断裂，转基因成分检测的难度大大增加。
目前，国际上没有统一的针对转基因粮食作物深加工产品的检测标准，而我国也没有建立有效的检测标准对市场上常见的转基因大豆、玉米和水稻深加工产品中的主要外源CrylA (B)、BAR、CP4 EPSPS和PAT基因进行检测。
五重巢式PCR是近几年出现的检测技术，它结合了巢式PCR的高灵敏度和多重PCR的快速、简单和高特异性特点，可以减少假阳性，可以同时检测多个基因片段，可以使检测灵敏度的下限提高几千倍…3]。
五重巢式PCR方法快速、灵敏度高，在人和动物疾病检测和病毒鉴定中应用较多。
目前该技术在转基因检测中的应用还较少，仅在转基因大豆深加工制品和转基因水稻种子的检测中有半巢式PCR应用的报道。
但这些技术仅能对转基因大豆或水稻单一品种进行检测，在做不同品种或品系转基因成分检测时，需要分别试验，比较繁琐。
迄今为止，还没有快速、高通量同时检测不同品种和不同品系的转基因大豆、玉米和水稻外源基因的报道。
本研究旨在建立五重巢式PCR体系，探索粮食深加工产品中的转基因成分，实现不同品种和不同品系粮食作物转基因成分的高通量检测，为转基因深加工产品检测标准的建立提供理论基础。
1 材料与方法1.1材料1.1.1 试验材料转基因RR大豆购自美国孟山都公司；转基因玉米Bt11、Bt176由吉林农科院惠赠；转基因水稻由农业部转基因生物安全管理办公室提供；转基因玉米MON810、TC1507、T25和CBH-351购自香港基因芯片公司，作为阳性对照。
非转基因大豆、玉米和水稻由东北农业大学农学院提供，作为阴性对照。
待检深加工产品大豆蛋白质粉、巧克力饮品、婴儿米粉、大豆卵磷脂、大豆油、大豆色拉油、玉米油、玉米淀粉、玉米蛋白粉、营养麦片（含有稻米成分）和玉米泥均购自超市，均未注明是否含有转基因成分。
1.1.2试验试剂Wizard@试剂盒，Promega公司(Madison，USA)；Taq DNA聚合酶、dNTP、10×PCR缓冲液（含MgC12）、DL DNA2000分子质量标准，大连宝生物工程有限公司；特异引物，上海英俊生物公司。
1.1.3仪器设备高速离心机（上海安亭公司，TDL-40B型）、PCR仪（德国Biometra，Biometra Tgradient 型）、核酸电泳仪（杭州托普仪器有限公司，GE-100型）、紫外分光光度仪（美国BECKMAN，DU@ 640型）、凝胶成像系统（美国UVP，G8000型）。
1.2方法1.2.1 DNA提取将转基因大豆、玉米、水稻和非转基因转基因大豆、玉米、水稻分别按不同质量比混合成标准品，取标准品和待测样品（按操作说明要求的质量）分别根据Wizard@试剂盒操作说明进行DNA提取，并用紫外分光光度计将DNA溶液稀释至同一质量浓度(50 ng/uL)。
1.2.2 引物设计利用Primer Premier V5.0软件进行五重巢式PCR的引物设计，用Oligo V6.22软件筛选出引物之间互相干扰最小的引物，引物所扩增目的片段及扩增产物大小见表1。
1.2.3 五重巢式PCR反应体系1)第1轮五重PCR反应体系及反应条件。
在第1轮五重PCR反应体系中，加DNA模板1uL(50 ng)，dNTP各0.4 mmol/L，2×PCR缓冲液，引物混合液工（CP4 WF/ CP4 WR，0.8umol/L;Rbcl WF/Rbcl WR,0.3 umol/L;CryWF/Cry WR,0.25 umol/L;BAR WF/BAR WR,0.4umol/L; Pat WF/Pat WR，0.4 ptmol/L;)10 uL，DNA聚合酶4 U，补去离子水至50 uL。
扩增条件为：95℃预变性10 min; 95℃30 s，65℃60 s，72℃60 s，10个循环；95℃30 s，62℃60 s，72℃60 s，10个循环；95℃30 s，60℃60 s，72℃60 s，10个循环；95℃30 s，58℃60 s，72℃60 s，10个循环：72℃，10 min。
2)第2轮五重PCR反应体系及反应条件。
取第1轮五重PCR产物1_uL作为模板，进行五重巢式PCR第2轮扩增。
反应体系中加引物混合液Ⅱ(CP4 NF/ CP4 NR,0.6umol/L; Rbcl NF/Rbcl NR,0. 25 umol/L; CryNF/Cry NR,0.5umol/L; BAR NF/BAR NR,0.3 umol/L;Pat NF/Pat NR,0.6umol/L;)10 uL，DNA聚合酶4U，其余步骤同前。
扩增条件同上。
3)检测方法的灵敏度分析。
将转基因大豆、玉米、水稻和非转基因大豆、玉米、水稻分别按不同质量比混合，使样品转基因成分的含量分别达到5%、1%、5×10-1%、5×10_2%、5×10_3%、10-3%、5×10_4%和10-4%。
用上述PCR方法对含混合DNA样品进行灵敏度测试。
4)扩增产物检测。
两轮多重PCR扩增产物用琼脂糖电泳检测，琼脂糖胶质量分数为3%，胶中溴化乙锭质量浓度为0.5ug/mL，电泳缓冲液为1× TAE，以DL-2000 DNA做分子质量标准，电泳条件为10 V/cm电压，电泳lh。
2 结果与分析2.1 DNA提取本研究所选材料均是深加工制品，测量所提取DNA样品的OD260值小于0.1以及OD260/OD280也小于1.5，进行电泳检测时也观察不到DNA条带（图1），说明所提取DNA样品浓度很低。
用普通PCR扩增是检测不出结果的，但用随后的五重巢式PCR进行扩增却可以检测到清楚的目的带，说明使用Wizard@试剂盒提取的DNA可以满足五重巢式PCR扩增的需要。
2.2 五重巢式PCR样品检测第1轮扩增结果见图2(a)，该体系扩增出阳性对照的CP4-EPSPS基因、RBCL基因、CrylA (B)基因、BAR基因和PAT基因，扩增片段大小分别为498、433、321、201和160 bp及阴性对照的RBCL 基因。
阳性对照结果说明扩增体系正常，可以扩增出目的基因；阴性对照结果表明实验过程中无假阳性结果，排除转基因成分污染的可能；空白对照无扩增条带说明无污染。
但其他泳道未看到扩增结果，表明深加工制品中DNA含量非常低，普通的PCR反应无法进行转基因检测。
第2轮扩增结果(图2(b))显示，卵磷脂、大豆蛋白质粉、巧克力饮品、婴儿米粉扩增出RBCL基因和CP4-EPSPS基因片段，即以上4种样品含有转CP4-EPSPS基因成分；玉米淀粉和玉米泥中扩增出RBCL基因、CrylA (B)基因和PAT基因片段，即以上2种样品含有转CrylA (B)基因和PAT基因成分；玉米蛋白粉扩增出RBCL基因、CrylA(B)基因和BAR基因片段，即含有转CrSA (B)基因和BAR 基因成分；营养麦片扩增出RBCL基因和CrylA (B)基因片段，即含有转CrylA (B)基因成分；大豆精炼油大豆色拉油和玉米油未检出任何条带，即未从这3种样品中提取出DNA。
表明经过第2轮的巢式PCR扩增，可以检测出除精炼油外的深加工制品的转基因成分。
2.3 五重巢式PCR灵敏度分析在第1轮五重PCR灵敏度分析实验中，5× lO_1%的阳性混合标准品中利用5对外引物能够同时扩增出5个目的基因片段，在5×10-2G的阳性t昆合标准品中只能扩增出RBCL基因、CrylA (B)和PAT基因，说明第1轮五重PCR的灵敏度为0.5%（图3）。
在第2轮五重PCR灵敏度分析实验中，5×10-3%的阳样性混合标准品中能够同时扩增出较为清晰的5个目的基因，1×10-3%的阳性混合标准品中只能扩增出RBCL基因、CP4-EPSPS基因和CrylA (B)基因，5×10_ 40的阳性混合标准品中只能扩增出RBCL基因和CrylA (B)基因，说明五重巢式PCR的灵敏度为5×10_3%（图4）。
3 结论与讨论1)本试验针对转基因市场上常见的转基因粮食作物大豆、玉米和水稻的主要外源CrylA (B)基因、BAR基因、CP4EPSPS基因、PAT基因及共同的内标准基因RBCL基因的特点设计了10对引物，建立了五重巢式PCR体系，其检测灵敏度达到0.005%，对11个大豆、玉米和水稻深加工制品进行了五重巢式PCR检测，检测出除大豆精炼油、色拉油和玉米油以外的所有深加工产品的主要外源CrylA(B)基因、BAR基因、CP4-EPSPS基因、PAT基因及共同的内标准基因RBCL基因，结果表明本研究建立的五重巢式PCR检测方法适用于主要转基因粮食作物深加工产品的定性检测。
深加工转基因产品中DNA提取需要大量的样品材料才能得到足够的DNA进行分析。
由于深加工食品中DNA模板含量少，需要利用高效的或特殊的DNA提取方法，以提取到其中微量的DNA。
使用普通的DNA和其他试剂盒进行DNA提取，不能扩增得到PCR产物，说明DNA提取失败。
利用Wizard@试剂盒，可有效提取到所选11种样品中8种样品的DNA模板。
实验表明，豆油和玉米油中的DNA在产品制备过程中已遭到极为严重的破坏和降解并且含量极低，对豆油和玉米油已无转基因检测的必要，而其他深加工产品均可使用此试剂盒进行DNA模板提取。
外源基因在转入植物中时，作了不同程度的修饰和改造，导致不同品种、品系的转基因植物中相同基因的DNA序列有很大差异。
如CrylA (B)基因在抗虫水稻和抗虫玉米中就不相同，并且在玉米的不同品系如BTll、BT176和MON810中也不相同，这样就给检测这些基因造成了很大麻烦，对于不同品种甚至不同品系转基因植物的检测都需要设计不同的引物进行PCR扩增。
本试验对同一目的基因在不同品种和不同品系中的序列进行分析，在保守区域设计多对引物，筛选出了可以在不同品种和不同品系中通用的引物进行检测，所设计的CrylA(B)基因引物可以同时扩增转基因玉米BT11、BT176、MON810和转基因水稻中的CrylA(B)基因；PAT基因引物可以同时扩增转基因玉米BT11、T25和TC1507中的PAT基因；BAR基因引物可以同时扩增转基因玉米BT176和CBH351中的BAR基因，大大提高了检测效率。