茯砖茶有机酸反相高效液相色谱分析方法建立及其应用
反相高效液相色谱法直接测定茶叶水提取物中的嘌呤碱
件下 咖啡因与其它成分都能完全分离 即使流动相
组成和体积比有一个小的变动 咖啡因仍能与邻近
峰完全分离∀ 图 是 甲醇水溶液作流动相时广
东绿茶水提取物的色谱图 在此条件下 可可碱峰
的尾部重叠了一小峰 茶碱 标准品的
保留时间
峰完全被邻近的多酚峰
所掩盖∀
参考文献
中华人民共和国国家标准
夏贤明 丁 宁 分析化学
括号内范围对应峰高标准曲线
∀
茶叶中嘌呤碱的定量
首先 我们参照国标 用分光光度法测定了
种茶叶中总嘌呤碱的质量分数 测得干茶叶中总嘌
呤碱的质量分数为 云南普茸茶
广东绿茶
京华花茶
∀
将本文建立的方法用于 种茶叶中嘌呤碱的直
接测定 所得结果见表 ∀ 咖啡因的质量分数较高 受邻近峰的影响也小 结果的重现性较好 而茶碱的
第 卷第 期 年月
色
谱
反相高效液相色谱法直接测定茶叶水提取物中的嘌呤碱Ξ
丁明玉
杨海军 肖善强
清华大学化学系 北京
陈培榕
摘要 用反相高效液相色谱法直接测定茶叶水提取物中的咖啡因 可可碱和茶碱 方法简便快速∀ 在
检
测波长下 可可碱 茶碱和咖啡因的检测下限分别为 和 Ù 峰面积标准曲线在 ∗
实验方法
准确称取干茶叶 加蒸馏水约
加热
至沸 保持微沸 适当冷却后用
Λ 滤膜过
滤 用少量蒸馏水洗茶叶 次 最后定容至
容量瓶中 直接进样进行
分析∀
叶中嘌呤碱总量 并且还可能受到共存非嘌呤碱类
物质的干扰∀ 用高效液相色谱
分离和测定
结果与讨论
嘌呤碱已有报道 但都必须预先分离大量存在的
种嘌呤碱的同时分离
有机酸类化合物的反相高效液相色谱法的分离条件研究
有机酸类化合物的反相高效液相色谱法的分离条件研究一、本文概述有机酸类化合物是一类在生物、医药、食品、环境等领域具有广泛应用的重要化合物。
随着科学技术的发展，有机酸类化合物的分离和分析方法日益受到关注。
反相高效液相色谱法（RP-HPLC）作为一种高效的分离技术，在有机酸类化合物的分离和纯化中发挥了重要作用。
本文旨在探讨反相高效液相色谱法在有机酸类化合物分离条件方面的研究进展，包括流动相的选择、固定相的性质、分离条件优化等方面，以期为提高有机酸类化合物的分离效果和分析精度提供理论支持和实践指导。
本文将对反相高效液相色谱法的基本原理和分离过程进行简要介绍，为后续研究奠定基础。
接着，重点分析流动相组成对有机酸类化合物分离效果的影响，包括有机溶剂的选择、缓冲盐的种类和浓度、pH值等因素。
探讨固定相类型及其性质对分离效果的影响，如固定相粒径、表面化学性质、孔径等。
在此基础上，通过实验研究，优化有机酸类化合物的分离条件，包括流速、温度、梯度洗脱等参数，以实现高效、快速的分离效果。
本文将总结反相高效液相色谱法在有机酸类化合物分离条件研究方面的成果和不足，并展望未来的发展方向，为相关领域的研究提供参考和借鉴。
通过本文的研究，有助于推动有机酸类化合物分离技术的进一步发展和应用，为相关领域的科学研究和产业发展做出贡献。
二、材料与方法实验中所使用的有机酸类化合物标准品购自Sigma-Aldrich和Alfa Aesar等公司，纯度均大于98%。
高效液相色谱级甲醇、乙腈、水和磷酸等溶剂购自Fisher Scientific。
反相高效液相色谱仪（RP-HPLC）为Waters公司的2695型，配备有紫外检测器（Waters 2996型）。
色谱柱为Symmetry C18（6×150mm，5μm）和Symmetry C8（6×150mm，5μm），购自Waters公司。
为了获得最佳的分离效果，我们对流动相组成、流速、柱温以及检测波长等色谱条件进行了详细研究。
高通量筛选研究茯砖茶降脂功效
法。将茯砖茶水提液分别用三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，制得三氯甲烷层、乙酸乙酯层、正丁醇层及水
层样品，茶渣用 95%的乙醇提取，均采用过氧化物酶增殖体活化受体（PPARα、PPARγ、PPARδ）、肝 X 受
体（LXR）、法尼酯衍生物 X 受体（FXR）及前脂肪细胞（3T3-L1）模型进行高通量药物筛选研究茯砖茶的
茶 叶 科 学 2006，26（3）：209~214 Journal of Tea Science
高通量筛选研究茯砖茶降脂功效
傅冬和，刘仲华*，黄建安，龚雨顺，陈金华
（教育部茶学重点实验室，湖南 长沙 410128）
摘要：寻找高效天然的降脂减肥药物是当前研究的热点之一，高通量药物筛选是近年发展起来的药物筛选新方
一般来说，PPARα、PPARδ、PPARγ、LXR 模型的激活值大于 1 就有活性，但要大于等于 1.5 时，激活的效果才较明显，3T3-L1 模型的 测定值小于 0.8 时抑制效果才明显，FXR 模型 的测定值小 12.8（对照值）才显示抑制作用。 从表 2 的结果来看，所有样品对 FXR 都有一 定的抑制作用，正丁醇层和水层作用最明显， 乙酸乙酯层不明显。正丁醇层的样品激活效果 不明显，三氯甲烷层及水层对 PPARγ 有一定 的激活作用。综合效果最好的是乙酸乙酯层， PPARδ、PARγ、LXR 均有较强的激活作用， 对 FXR 也的抑制作用。所有样品对 3T3-L1 细 胞的抑制作用均不明显，说明不能抑制脂肪细 胞的生长，对 PPARα 模型都没有激活作用。
本研究以茯砖茶为原料，选用 PPARs、 LXR、FXR 及 3T3-L1 模型通过高通量筛选， 研究其降脂减肥作用及其有效部位。
1 材料及方法
1.1 材料
茯砖茶（由湖南益阳茶厂提供），食用酒 精，三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇（分析纯），
茯砖茶降脂功能成分研究
茯砖茶降脂功能成分研究I. 前言随着人们生活水平的提高，饮食结构发生了很大的变化，脂肪摄入量逐年增加，导致血脂异常的患病率不断攀升。
血脂异常是导致心血管疾病的重要危险因素，因此降低血脂水平对于维护心血管健康具有重要意义。
茯砖茶作为一种传统的中草药饮品，具有很好的降脂作用，其主要成分为茶多酚、黄酮类化合物、氨基酸等。
本研究旨在探讨茯砖茶中的主要功能成分及其降脂作用机制，为进一步开发利用茯砖茶提供科学依据。
茯砖茶是一种以茶叶为主要原料，通过特殊工艺制成的砖状茶制品。
其独特的制作工艺使得茯砖茶中富含多种有益成分，如茶多酚、黄酮类化合物、氨基酸等。
这些成分具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种生物活性，对人体健康具有很好的保健作用。
近年来越来越多的研究表明，茯砖茶具有显著的降脂作用，能够有效降低血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)水平，同时提高高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平。
因此茯砖茶在降低血脂方面具有很大的潜力。
本研究将对茯砖茶中的主要功能成分进行分析，探讨其降脂作用机制，为进一步开发利用茯砖茶提供科学依据。
通过对茯砖茶中各功能成分的提取、分离和鉴定，可以揭示其降脂作用的具体途径。
此外本研究还将探讨茯砖茶与其他降脂药物的协同作用，为临床治疗血脂异常提供新的思路。
A. 研究背景和意义随着现代生活节奏的加快，人们的饮食结构发生了很大的变化，高脂肪、高热量的食物逐渐成为人们日常生活的主要组成部分。
这种不良的饮食习惯导致了血脂异常的发病率逐年上升，给人们的健康带来了极大的隐患。
血脂异常是引发心血管疾病的重要危险因素，如动脉粥样硬化、冠心病、高血压等。
因此研究降脂功能成分，寻找一种安全、有效的降脂方法具有重要的现实意义。
茯砖茶作为一种传统的中药材，具有很好的降脂效果。
茯砖茶中的茶多酚、儿茶素等活性成分能够有效降低血脂，预防心血管疾病的发生。
然而目前关于茯砖茶降脂功能成分的研究尚不充分，需要进一步深入探讨其降脂机制和有效成分。
高效液相色谱法测定调味茶饮料中甜味剂和防腐剂
高效液相色谱法测定调味茶饮料中甜味剂和防腐剂
高效液相色谱法是一种常用的分析方法，适用于测定调味茶饮料中甜味剂和防腐剂的
含量。
本文主要介绍了高效液相色谱法的原理和步骤，并利用该方法对调味茶饮料样品中
甜味剂和防腐剂进行了测定。
高效液相色谱法是一种采用液相（即溶液）作为固定相的色谱方法。
它主要由溶液泵、进样器、柱箱、检测器和数据处理系统等组成。
在高效液相色谱法中，样品溶液通过一根
填充了固定相的柱子（色谱柱），在柱子中分离出不同组分，然后通过检测器进行检测，
并且由数据处理系统进行数据分析和计算。
在测定调味茶饮料中甜味剂和防腐剂的高效液相色谱法中，首先准备样品溶液。
样品
溶液的制备方法可以根据所测定的具体甜味剂和防腐剂进行选择。
常见的方法包括简单溶解、稀释等。
接下来，将样品溶液通过进样器进入色谱柱。
色谱柱中的固定相能够将样品
溶液中的甜味剂和防腐剂分离出来。
然后，通过检测器对分离出的组分进行检测。
根据不
同组分的特征峰，可以确定每种组分的含量。
利用数据处理系统对得到的数据进行分析和
计算，得到甜味剂和防腐剂的含量。
高效液相色谱法具有灵敏度高、准确性高、选择性好、分离效果好、操作简单等特点，因此被广泛应用于食品行业。
在调味茶饮料的生产过程中，为了达到特定的口感和防止细
菌污染，通常会添加甜味剂和防腐剂。
在生产过程中，需要对甜味剂和防腐剂的含量进行
测定，以确保产品的质量和安全性。
利用高效液相色谱法进行测定，可以快速、准确地得
到甜味剂和防腐剂的含量信息，并且不会对样品造成污染，适用性广泛。
反相高效液相色谱法测定九种有机酸
以采用反相高效液相色谱法测定九种有机酸为例，探讨了流动相pH 值对分析结果的影响。
实验结果表明pH=2.40 时，九种有机酸得到有效分离，且峰形理想，而不同pH 值对分析结果影响很大，不仅会大大改变各有机酸的保留值，甚至会导致无法将各有机酸分离。
本文分析了影响测定流动相p H 值的因素。
应用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分析测定时，常常采用离子抑制法即向含水流动相中加入酸、碱或缓冲溶液等改性剂，以使流动相的p H 值控制一定数值，抑制溶质的离子化，减少谱带拖尾、改善峰形，以提高分离的选择性[1]。
例如在分析有机弱酸时，常向流动相中加入磷酸(或乙酸、三氯乙酸、1% 的甲酸、硫酸)，就可抑制溶质的离子化，获对称的色谱峰。
对于弱碱性样品，向流动相中加入1 % 的三乙胺，也可达到相同的效果[2~6]。
虽然RPC 方法建立时最好选用pH 微小改变不影响分离的流动相，但pH 值的较大变化往往会对分析结果产生很大影响，因此流动相pH 值的调节是分析过程中至关重要的一个环节，本文以反相高效液相色谱法测定九种有机酸为例考察了不同流动相p H 值对分析结果的影响，指出准确调节流动相p H 值的关键所在，有助于提高分析结果的准确性。
摘要以采用反相高效液相色谱法测定九种有机酸为例，探讨了流动相pH 值对分析结果的影响。
实验结果表明pH=2.40 时，九种有机酸得到有效分离，且峰形理想，而不同pH 值对分析结果影响很大，不仅会大大改变各有机酸的保留值，甚至会导致无法将各有机酸分离。
本文分析了影响测定流动相p H 值的因素。
应用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分析测定时，常常采用离子抑制法即向含水流动相中加入酸、碱或缓冲溶液等改性剂，以使流动相的p H 值控制一定数值，抑制溶质的离子化，减少谱带拖尾、改善峰形，以提高分离的选择性[1]。
例如在分析有机弱酸时，常向流动相中加入磷酸(或乙酸、三氯乙酸、1% 的甲酸、硫酸)，就可抑制溶质的离子化，获对称的色谱峰。
薄层色谱法检测茯砖茶中他汀类物质_王珊
薄层色谱法检测茯砖茶中他汀类物质王珊，吕嘉枥*，韩蓉陕西科技大学（西安 710021）摘要采用薄层色谱法定性检测他汀类物质。
以洛伐他汀标准品、辛伐他汀标准品为参照, 分析了不同展开剂系统对茯砖茶、冠突散囊菌发酵麦麸中他汀类物质的展开效果研究。
结果显示: 他汀类物质以氯仿-甲醇-氨水 (体积比25∶3∶1) 为展开剂, 紫外254 nm检视, 并以碘蒸气为显色剂为最优。
关键词薄层色谱; 定性分析; 茯砖茶; 冠突散囊菌; 他汀类物质Detection of Statins in Fuzhuan Brick Tea by TLCWang Shan, Lü Jia-li*, Han RongCollege of Life Science and Engineering, Shaanxi University of Science & Technology (Xi’an 710021)Abstract The statins in Fuzhuan brick tea and Eurotium cristatum fermented on wheat bran were analyzed by different developing solvent of TLC for the qualitative analysis, while lovastatin and simvastatin for reference. The results showed that the statins were eluted with chloroform-methyl alcohol-ammonia (25∶3∶1), determined at UV 254 nm and stained with iodine vapor.Keywords TLC; qualitative analysis; Fuzhuan brick tea; Eurotium cristatum; statins茯砖茶[1]是以黑毛茶为原料经独特“发花”工序后形成的再加工茶，属后发酵茶。
反相高效液相色谱法测定中药茯苓中4种三萜酸的含量
基金项目:江苏省中医药领军人才项目(2006)作者简介:沈玉萍,女,硕士,讲师 研究方向:中药制剂*通讯作者:贾晓斌,男,教授,博士生导师 研究方向:中药制剂 Te:l(025)85637809 Fax :(025)85637809 E m ai:l j xi aob i n2005@h ot m ail co m反相高效液相色谱法测定中药茯苓中4种三萜酸的含量沈玉萍1,杨欢2,陈斌2,贾晓斌2*(1 江苏大学药学院,镇江212013;2 江苏省中医药研究院,国家中医药管理局中药释药系统重点研究室,南京210028)摘要:目的 建立一种同时测定中药茯苓中去氢土莫酸、猪苓酸C 、3 差向去氢土莫酸和去氢茯苓酸等4种三萜酸的方法,为其质量控制提供检测手段。
方法 采用A g ilent Z orbax SB C 18色谱柱(3 0mm 100mm ,3 5 m ),以乙腈 0 05%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0 6mL m i n -1,紫外检测波长为243n m,柱温为40 。
结果 在以上色谱条件下,供试品溶液中的4个被分析物均与干扰成分完全分离,在4 48~143、1 38~44 2、3 20~102和7 72~247 g mL -1范围内线性关系良好(r 2 0 9998),RSD <3 11%(n =6),制备的样品溶液在48h 内测定各三萜酸峰面积RSD 不超过1 31%,4个茯苓三萜酸的平均加样回收率介于98 8%~102%(R SD 2 30%)。
结论 本方法可用于茯苓药材中以上4种三萜酸的含量测定。
关键词:茯苓;反相高效液相色谱法;去氢土莫酸;猪苓酸C ;3 差向去氢土莫酸;去氢茯苓酸中图分类号:R 284 1 文献标志码:A 文章编号:1001-2494(2011)05-0388-03D eter m ination of Four Triterpenes in Poria by RP HPLC S H EN Yu p i n g 1,YANG H uan 2,CHEN B i n 2,JI A X iao b i n2*(1 Co llege of Pharmaceutical Science ,J i angsu Universit y,Zhenjiang 212013,China;2 J i angsu P rovincial Instit ute of T raditional ChineseM edicine ,K e y Laboratory of N e w D rug D eliver Sys te m of ChineseM edicine of S tate Adm inistration of T rad itional Ch i neseM ed icine of t he P eop le s Republic of China ,N anjing 210028,China )ABSTRACT :OB J ECTIVE To establi sh a RP HPLC m e t hod f o r t he de ter m i nati on o f four tr iterpenes i nc l ud i ng dehydro t umu l osic ac i d ,po lyporen ic acid C ,3 ep i dehydro t u m ulosic acid and dehydropachym i c ac i d i n P or i a METHOD S T he deter m i nation w as per fo r med on an A g il ent Z orbax SB C 18colu mn (3 0mm 100mm,3 5 m )a t 40 du ri ng the e l uti on T he m obil e phase com posed o f acetonitr ile and w ate r conta i n i ng 0 05%H 3PO 4(v /v)under grad i ent el u ti on ,wh i ch was driven at a constant flo w ra te of 0 6mL m i n -1 T he detec ti on wave l eng th was at 243n m RESULTS U nder the above chro m atog raph i c conditions ,all four ana l y tes were co m plete l y separated fro m t he i nterfe rent i n the tested sa m ple so l ution T he li nearities o f t he ana l y tes w ere good (r 2 0 9998)w it h i n the ranges o f 4 48-143,1 38-44 2,3 20-102and 7 72-247 g mL -1,respecti ve l y R SD s o f repeatab ility testw ere l ess than 3 11%(n =6) In addition ,RSD s o f peak areas w ere no g reate r t han 1 31%o f the stability (48h),and t he averag e recover i es o f four triterpenes were i n t he ranges of 98 8%-102%(RSD 2 30%) CONCLUSI ON The establis hed m ethod can be used f o r t he de ter m i nati on of t he f our triterpenes i n P or i aKEY W ORDS :P or i a ;RP HPLC ;dehydro t u m ulosic ac i d ;po lyporen ic acid C ;3 ep i dehydrotu m ulosic acid ;dehydropachy m ic acid中药茯苓为多孔菌科(Polyporaceae)真菌茯苓P oria cocos (Schw )W o lf 的干燥菌核。
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分离度
１．８ １．６ １．４ １．２
１ ０．８ ０．６ ０．４ ０．２
０
１
磷酸二氢钾 ２ ３４５
磷酸氢二铵 ６ ７ ８ ９ １０
标准有机酸
图 2 流动相种类对分离度的影响
2.1.3 流动相浓度选择 磷酸盐浓度的高低影响有机酸
存在形式的稳定性，从而影响分离效果。磷酸盐浓度
· 248 ·
中国农学通报
种因素，试验中选择0.1 mol/L KH2PO4作为流动相。
加量为 8%时，丙酮酸、苹果酸、抗坏血酸完全重叠，共 只有 9 个峰（图 5）。故选择 1%~3%的甲醇添加量进行
保留时间／ｍｉｎ
２０ １５ １０
５ ０
０
草酸 丙酮酸 抗坏血酸 乳酸 柠檬酸 琥珀酸
０．０５
０．１
酒石酸
后续的正交试验。
一一一 苹果酸
中国农学通报 2011,27(30):246-252 Chinese Agricultural Science Bulletin
茯砖茶有机酸反相高效液相色谱分析方法建立及其应用
袁 玲，黄建安，龚志华，陈金华，李银花，袁 勇，肖文军
（湖南农业大学茶学教育部重点实验室/国家植物功能成分利用工程技术研究中心，长沙 410128）
Abstract: To establish a kind of simple and rapid high performance liquid chromatography determination method of organic acid in fu-brick tea, Kromasil C18 column was used at 17℃ and mobile phase was 3% CH3OH -0.1 mol/L KH2PO4 (pH value adjusted with phosphoric acid to 2.7) with flow rate of 0.4 mL/min. 10 μL sample was injected into the column and detection wavelength was 210 nm. The relative standard deviations were lower than 1.80% , and recovery was 90.12% to 105.74% . All of the correlation coefficients between the concentration of the organic acids and the HPLC response areas were higher than 0.998, indicating that the method was simple, rapid and accurate. At the same time, the method has been applied to detect composition and content of organic acids. Results showed that 11 kinds of organic acids were detected in fu-brick tea. Key words: high performance liquid chromatography; fu-brick tea; organic acid
精密称取各有机酸标准品，用水定容于 10 mL 容量 瓶 中 ，得 混 合 标 准 溶 液（ 草 酸 0.88 mg/mL、酒 石 酸 0.411 mg/mL、丙 酮 酸 0.612 mg/mL、苹 果 酸 1.812 mg/mL、抗 坏 血 酸 0.153 mg/mL、α- 酮 戊 二 酸 0.386 mg/mL、乳 酸 2.045 mg/mL、乙 酸 2.133 mg/mL、 柠 檬 酸 0.925 mg/mL、富 马 酸 0.045 mg/mL、琥 珀 酸 1.998 mg/mL）。 1.5 样品处理
(Key Lab of Tea Science of Ministry of Education, Hunan Agricultural University/National Research Center of Engineering & Technology for Utilization of Functional Ingredients from Botanical, Changsha 410128)
α－酮戊二酸 乙酸
富马酸
保留时间／ｍｉｎ
一一一１６ １４ １２
１０
８
６
０．１５
０．２
浓度／（ｍｏｌ／Ｌ）
４ ２
草酸 丙酮酸 抗坏血酸 乳酸 柠檬酸 琥珀酸
酒石酸
一一一 α苹－酮果戊酸二酸
乙酸 富马酸
一一一
图 3 KH2PO4浓度对保留时间的影响
０
２
４ 甲醇加入６量／％
８
2.1.4 流动相 pH 的选择 有机酸为弱酸，在水溶液中会 解离。为了使有机酸能够以分子的形式在反相柱上保 留，可通过调节流动相的 pH，达到抑制解离的作用。 如图 4，当 pH＞2.5 时，pH 越低，各有机酸的保留时间 越长；当 pH＜2.5 时，随着 pH 的降低，有机酸的保留时 间反而缩短，分离度降低。当 pH 为 2.7 时，各有机酸均 能较好地分离，因此，选择 pH=2.7 进行后续试验。
称取 2.0000 g 磨碎茶样，放入 250 mL 三角瓶中， 加 200 mL 沸水，置沸水浴上浸提 45 min（每隔 10 min 摇 1 次）后抽滤，用热水洗涤 2~3 次，滤液冷却后定容
至 250 mL，然后将茶叶提取液用 0.45 μm 的滤膜过滤， 所得滤液直接用于 HPLC 分析有机酸。 2 结果与分析 2.1 单因素试验确定有机酸分离的色谱条件 2.1.1 检测波长的选择 分别对草酸、酒石酸、丙酮酸、 苹果酸、抗坏血酸、α-酮戊二酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富 马酸、琥珀酸的标准溶液进行 200~400 nm 紫外光扫描 分析。结果（图 1）表明，除抗坏血酸在 245 nm 处有最 大吸收外，其余 10 种有机酸在 210 nm 左右有最大吸 收，故检测波长选择有较大吸收的 210 nm。
甲醇为色谱纯；磷酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二铵均 为分析纯；草酸、酒石酸、丙酮酸、抗坏血酸、α-酮戊二 酸、苹果酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、琥珀酸标准品（纯度 均大于 97%，Sigma 公司）；乳酸对照品为分析纯；精品 茯砖茶（购于湖南省安化县益阳茶厂）。 1.3 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm， 5 μ mol/L KH2PO4 溶 液（A 相 ）和 3% 甲 醇（B 相 ）；检 测 时 间 30 min；流速 0.4 mL/min；柱温 17℃；检测波长 210 nm； 进样量 10 μL。 1.4 标准品溶液的配置
研究室内试验于 2010 年在湖南农业大学国家植 物功能成分利用工程技术研究中心进行。 1.2 仪器与试剂
LC-10ATVP 高效液相色谱仪（日本岛津公司）； 4504MP 微量电子天平；Delta320A pH 计；KQ3200 型超 声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；数显恒温水 浴锅（长沙市八方科学仪器有限公司）；UV-2550 紫外可 见分光光度计，纯水发生器（上海申生科技有限公司）。
袁 玲等：茯砖茶有机酸反相高效液相色谱分析方法建立及其应用
· 247 ·
子，但大量无机阴离子的存在通常会增加低含量有机 酸的检测难度。相比之下，高效液相色谱法测定有机 酸，操作简单、分离效果较好。近年来，高效液相色谱 法检测有机酸是采用较多的方法[10-12]。反相高效液相 色 谱 法 检 测 茶 叶 中 有 机 酸 少 见 报 道 ，但 多 为 其 他 植 物 中 有 机 酸 的 检 测 ，且 有 机 酸 种 类 大 都 在 10 中 以 内 [13-14]。 笔者试图建立反相高效液相色谱法，并分析 茯砖茶中草酸、酒石酸、丙酮酸、苹果酸、抗坏血酸、α酮戊二酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、琥珀酸 11 种有 机酸，以期对研究发酵茶与非发酵茶活性成分的差异 以及茯砖茶的保健功能提供参考。 1 材料与方法 1.1 试验时间、地点
越高，有机酸的存在形式越稳定，但浓度过高，离子强度 机酸的疏水基与固定相的相互作用减弱，保留时间下
也增大，对有机酸分离不利，同时影响色谱柱与输液泵 降，丙酮酸与苹果酸的分离度越来越小。当甲醇添加
的寿命。如图 3 所示，随着 KH2PO4浓度的增加，保留时 间和分离度受浓度的影响减小，在较低浓度时也能获得
论文编号：2011-1960
Study on Development and Application Technology of Analysis Method for Organic Acid in Fu-brick Tea by RP-HPLC
Yuan Ling, Huang Jian’an, Gong Zhihua, Chen Jinhua, Li Yinhua, Yuan Yong, Xiao Wenjun
摘 要：为建立一种简便快速的高效液相检测法测定茯砖茶有机酸，采用 Kromasil C18 色谱柱（5 μm，
250 mm×4.6 mm），色谱条件为：3% CH3OH- 97% 0.1 mol/L KH2PO（4 用磷酸调 pH 至 2.7）作为流动相，流
速 0.4 mL/min，柱温 17℃，进样量 10 μL，检测波长 210 nm。该方法回收率达到 90.12%~105.74%，相对标
0 引言 茯砖茶属黑茶类，为一种后发酵茶，是青海、西藏
等边远和少数民族地区居民必不可少的生活茶饮。有 机酸是茯砖茶品质成分的重要物质，具有改善肠胃道 功能[1-3]、增强茶多酚抗氧化性能[4]、促进儿茶素在人体
中吸收[5]以及调节妇女月经周期、减轻关节炎、痛风[6] 等生理功能。目前测定茶叶中有机酸的方法主要有酸 碱滴定法[1]、离子色谱法[7-8]以及高效液相色谱法[9]。酸 碱滴定法虽然方便，但只能测定总酸的含量；离子色谱 法可同时测定溶液中的多种有机酸根离子和无机阴离