ESBLs及Ampc酶
产AmpC酶和ESBLs阴沟肠杆菌的临床分布及耐药性分析
ｔ ｒ ｎ ｕ ｃ ｐ ｉ ｉ ｔ ｅ ｔ ＥＳ ＩＳ ｗｅ ｅ ｃ ｎ ｉｍｅ ｙ ＮＣＣ ｏ ｂ ｅ ｄ ｓ ｓ ａ ，ａ ｄ ｔ ｒ ｅ ｄ ｍｅ ｅ ｉ ａ ｄ ｓ ｓ ｅ ｔｂ ｌ ｙ ｔ ｓ ． ａ ｉ Ｂ ｒ ｏ ｆ ｒ ｄｂ ＬＳ ｄ ｕ ｌ ｉｃ ａ ｓ ｙ ｎ ｈ ｅ － ｉ ｎ
２０ ． ＶＩ ０７ ＴＥＫ ３ ｕｔ ｍ ａ ｉ ｉｒ ｉ ｌａ ｌ ｔｃ ｌｓ ｓ ｅ ｗ ａ ｐｐ ｉｄ ｔ ｅ ｆ ｍ ｉ ｄｅ ｔｆｃ ｔｏ ｆｂ ｃ ２ ａ ｏ ｔｃｍ ｃ ｏｂ ａ ｎａｙ ｉａ ｙ ｔ ｍ ｓａ ｌｅ Ｏ ｐ ｒｏｒ ｎｇ ｉ ｎ ｉｉａ ｉｎ ｏ ａ
ｓｏｎ ｌｔ ｓ ｓ ｕ ｅ Ｏ ｄｅ ｅ ｔＡ ｍ ｐ Ｒｅ ｕｌｓ Ａ ｏ ａ ３ ｓ ｒ ｉ ｓ ｏ ｔ ｒ ａ ｔ ｒｃｏａ ａ ｅ ｅｉｏｌ— ｉ ａ ｅ ｔｗａ ｓ ｄ ｔ ｔ ｃ Ｃ． ｓ ｔ ｔ ｔ ｌｏｆ６ ｔａ ｎ ｆＥｎ ｅ ｏｂ ｃ ｅ ｌ ｃ ｅ ｗ ｒ ｓ ａ
产 Ｅ Ｂ ｓ ９ ５ 的 菌 株 同 时产 生 Ａｍｐ Ｓ Ｌ ；． Ｃ酶 和 Ｅ Ｂ ｓ ３ ． 的 菌 株 均 不产 Ａｍｐ 酶和 Ｅ Ｂ 。产 酶 Ｓ Ｌ ；１８ Ｃ ＳＩ ｓ 株 的 耐 药性 明显 高 于 非 产 酶 株 ， 药 现 象 在 同 时产 生 Ａ Ｃ酶 和 Ｅ Ｂ ｓ 耐 ｍｐ Ｓ Ｌ 的菌 株 中尤 为 严 重 。结 论 本 地 区阴 沟肠 杆 菌 产 Ａｍｐ 酶和 Ｅ Ｂ ｓ的流 行 处 于 一个 相 对 较 高 的水 平 。产 Ａｍ Ｃ酶 及 Ｅ Ｂ Ｃ ＳＬ ｐ ＳＩ Ｓ的
国际检验 医学杂志 ２０ ０９年 １ 月第 ３ Ｏ卷第 ｌ 期
Ｉｔ ａ ｄＪｎａｙ２０ ，０．０Ｎ ． ｎ ＪＬｂＭｅ， ｕｒ ０９Ｖ １ ， ｏ１ ａ ３
铜绿假单胞菌产AmpC酶和ESBLs的检测和耐药性分析
ｎ ｓ Ｃ Ｅ Ｊ ｎｇｏ，Ｉ ｍ － ｉ （ ｅ ｒ ｅ ｏ ｔ Ｈ Ｎ ｉ －ｕ Ｌ ｏｍｎ Ｄｐ ｔ ｎ ｏ ｃ ｂ ｌ ｙ Ｇａ ｇ历 Ｍｅｉ ｌ ｏｅｅ Ｚ ａ ｎ ２０ ３ Ｃ ｉ ） ￣ ａ Ｃ ｇ． ａ ｍ ｔｆＭｉｏｉｏ ， ｕｎ ｒ ｏｇ ｄ ａ Ｃ ｌｇ ，ｈ ｎ ｇ ５４ ２ ， ｈ ａ ｃ ｌ ｎ Ａ ｓ ａｔＯｂｅｔ ｅ Ｔ ｖｓｇｔ ｔ ｒｖｌ ｃ ｆ ｍ ｃ／１ ｔ ｓ ｎ ｘ ｎｅ－ ｅｔ ￣ ｌ ｔ ａｅ ｓｕｏ ｏａ ｂｔ ｃ： ｊｃｉ ｏｉ ｅｔａ ｅｐｅａ ｎｅｏ Ａ ｐ ３ａ ａ ｅ ａｄｅｔ ｄｄｓ ｃｍ ａ ａ ｓ ｓｉ Ｐｅｄｍ ｎｓ ｒ ｖ ｎ ｉ ｅｈ ｅ － ｃ ｍａ ｓ ｅ ｐ ｒ ｃｍ ｎ
ｍｅ ｏ ｃ ｏ ｄｎ ｏ ｒｃ ｍｍｅ ｄ ｔ ｎ ｏ ｈ ｌ ｉａ ｄ Ｌ ｂ ｒｔｒ ｔｎ ａ ｄ ｎ ｔ ｕｅ Ａ ｍｏ ｉ ｅ ｈ ｅ － ｍｅ ｓ ｎ ｌｅ Ⅱ ｃ ｍｅ ｏ ｔ ｄ ａ ｃ ｒｉ ｇｔ ｅｏ ｈ ｎ ａｉ ｆｔｅ Ｃ ｉ ｃ ｌａ ａ ｏ ａ ｙ Ｓ ａ ｄ ｒｓ Ｉ ｓ ｔｔ ． ｄｆ ｄ ｔｒｅ ｄ ｎ ｉ ａ ｘ ａ ｔ ｔ ｄ ｏ ｎ ｎ ｏ ｉ ｉ ｉ ｏ ｈ
产 Ｅ Ｂ．和高产 Ａ Ｃ酶的铜绿假单胞菌在临床分离菌株 中 阳性率较 高 ， ＳＩ ｓ ｍｐ 产酶
度耐药 ， 大多数抗 生素敏感。结论 对
菌株对大多数抗 生素 的耐药性 明显高于非 产酶菌株 。 关键词 ： 铜绿假单胞菌 ； 三维试验 ； 超广谱 内酰胺酶（ ＳＬ ）Ａ ｐ Ｅ Ｂｓ ；ｍ Ｃ酶
Ｒｅｕｔ Ａ ｎ ０ ｔ ｉｓｏ Ｐ ｅｄ ｍｏ ａ ｅｕ ｉｏａ １ ４％ ｐｏ ｕ ｅ ｎｙＡ ｐ － ｅａ ｓｅ ７％ ｐｏ ｕ ｅ ｎｙＥ Ｂ ｓ１ ｓｌｓ ｍｏ ｇ１ ６ｓ ａｎ ｓｕ ｏ ｎ ａｒｇｎ ｓ ，７． ｒ ｆ ｓ ｒｄ ｃｄｏ ｌ Ｃ １１ ｔｍａ ｓ ｍ ３ａ ８． ｒｄ ｃｄｏ ｌ Ｓ Ｌ ０．
大肠埃希氏菌产ESBLs和AmpC酶的检测
出率为 ６ ０ ％ 。结论 ．３
笔者所在医院大肠埃 希氏菌主要产 Ｅ Ｂ ｓ ， Ｓ Ｌ 酶 其次是 Ａ ｐ ｍ Ｃ酶 ， 酶菌株临床经验 用药应首 产
选碳青霉烯 类， 其次是 Ｂ一内酰胺类抗菌素 ＋酶抑制剂 、 头霉素类 ， 及其 它敏感抗菌素 。
【 关键词 】 大肠埃希氏菌 ； 超广谱 ｐ 一内酰胺酶 （ Ｓ Ｌ ） 头孢菌 素酶（ Ｍ Ｃ ＥＢｓ； Ａ Ｐ）
１ ５例 ， 列 腺 液 ６例 ， 汁 ７例 ， 髓 １例 。 前 胆 骨 １２ 细 菌 鉴 定 ． 进行鉴定。 １２ １ Ｅ Ｂ ． ． Ｓ Ｌ确 证 实 验 以 大 肠 埃 希 氏 菌 （ Ｔ Ｃ ５２ ） 肺 Ａ Ｃ ２９２ 、 采 用 法 国梅 里 埃 公 司 Ｖ Ｋ Ｉ Ｅ一２细 菌 分 析 仪
菌 环 直 径 ≥５ｍ 即判 断 为 产超 广谱 Ｂ一内 酰 胺 酶 。 ｍ，
１２ ２ Ａ Ｃ酶 表 型 筛 选 ． ． ｍｐ
行 药 敏 试 验 ， 进 行 表 型筛 选 。判 断 标 准 按 照 Ｎ Ｃ Ｓ推 荐 的 并 ＣＬ
１ １ 菌株来源 ．
３ ５株大肠埃希 氏菌菌来 自 ２０ ６ ０ ６年 １月 ～
２０ ０ ８年 １ ２月笔者所 在 医院分 离 的 阳性标 本 ， 中痰 液 １０ 其 ３ 例， 气管刷取 物 ５例 ， 尿液 ９ ， ４例 血液 １ ， ７例 胸水 ２例 ， 腹水 ２ 例， 脑脊液 １ ， 例 分泌物 ７ ２例 ， 引流物 ８例 ， 穿刺液 ５例 ， 脓液
埃希 氏菌 中有 ９ ８株 单 产 Ｅ Ｂ ｓ 检 出 率 ２． ％ ， ＳＬ， ６ ８ ６株单 产 Ａ ｐ ｍ Ｃ酶 ， 检出率 １６ ，２株 同时 产 Ｅ Ｂ ｓ和 Ａ Ｃ酶 ， ．％ ２ ＳＬ ｍｐ 占
肠杆菌科细菌产AmpC酶、ESBLs和碳青霉烯酶的状况及检测分析
酶通常由染色体 编码 ，具有很强 的可诱导性 ，即产 酶株在不接触 Ｂ 内酰胺抗生素 时， 只产 生少量酶 ， 如有诱导作用 的抗生素存在 ， 可
一
使 产量显著上升 ， 因而这种 酶又称诱导酶 。 ｍ Ｃ酶可引起革兰阴性 Ａ ｐ 杆菌对头孢 菌素及单环类 、 头霉烯类（ 头孢 西丁）内胺酰抗生素耐药 。 １２头孢菌素酶（ ｐ ． Ａｍ Ｃ酶） Ｉ 临床实验室检测 的现状 检 测不 同类型的
Ａ Ｃ酶或检测产不 同类 型 Ａ Ｃ酶的菌株 ， ｍｐ ｍｐ 其方法也有所不同。目 前 已陆 续报道 的多种检测 有 ： 孢西丁敏 感试验 、 头 三维试 验 、 ｍｐ Ａ Ｃ
群 中的第 ３ 组Ｉ １ ａ 。在肠杆菌科 细菌中的碳青霉烯酶主要是 Ａ类 酶 ２ （ Ｐ ，ＭＥＩ ， ，Ｅ ） Ｋ ＣＳ ， ＮＭＣＧ Ｓ ， ＭＩ Ｂ类酶 （ＭＰＶＩ Ｎ Ｍ） Ｉ ， Ｍ，Ｄ ， Ｄ类酶 （ ＸＡ） Ｏ 。碳 青霉烯酶编码基 因既可 以定位 在质 粒 ， 整合子等 呵转移的基 因元 件
确诊试验 。
３碳 青 霉 烯 酶
３１ 青霉素类抗生素和头孢菌素类抗 生素耐约性 １ ．在 ３益严重 的情况 下 ，碳青 霉烯类药物一 度被认为是最 具有抗菌活性 和对 Ｅ Ｂ Ｓ Ｌ酶 、
Ａｐ ｍ Ｃ酶稳定的 Ｂ 内酰胺类抗菌药物 。 一 但是随着碳青霉烯类抗生素 的大量使用 ， 耐药菌株 的出现 也越来越 多 。这些 菌株 的出现 常使抗 感染 治疗陷入无药可用 的境地 ， 者死 亡率很高 。临床上对于碳青 患
上， 通过质粒 或转座 子在不 菌种 间传播 ， 也可 以由染色体介导。染 色体介导较少导致 菌属 间传播 。
酶表型筛选试 验 、 氟氯西林 （ ｃ 双抑制剂扩散协 同试验 、 电聚焦 Ｆ ） ｃ 等 及 氟氯西林 抑制试验等ｌ ＂ ７ ｒ 。除改 良的三维 试验较为经典外 ， 其他 的 检测 方法 还不成熟。 。头孢西丁敏感试验因操作简便 ， 可作为临床微 生物实验室检测 Ａｍ Ｃ酶的初步筛选方法 。Ａ ｐ ｐ ｍ Ｃ酶 酶表 型筛选 试 验和氟氯西林双纸片扩散协同实验均利用纸 片扩散法对产 Ａ Ｃ酶 ｍｐ 的菌株进 行检测 。三维试验和等 电聚焦及氟氯西林抑制试验均是检 测 细菌胞 体内 Ａ ｐ ｍ Ｃ酶 的活性 ， 不存在抗生素的诱导作用 ， 可用来 检 测 持续高产 Ａ ｐ ｍ Ｃ酶 。三维实验是 目前公认的检测质粒 Ａ ｐ 酶 或 ｍＣ （ 却阻遏） 持续高产 Ａ Ｃ酶酶的经典方法。 ｍｐ
大肠埃希菌质粒AmpC酶和ESBLs的基因型及耐药性研究的开题报告
大肠埃希菌质粒AmpC酶和ESBLs的基因型及耐药性研究的开题报告题目：大肠埃希菌质粒AmpC酶和ESBLs的基因型及耐药性研究研究背景与意义：大肠杆菌是人和动物肠道中的常见菌群，也是医院及社区中最常见的致病菌之一，其感染可引发泌尿系统、胃肠道、呼吸道、软组织等多种感染病。
然而，随着抗生素的广泛应用及滥用，大肠杆菌对抗生素的耐药性越来越严重，其中质粒AmpC酶和ESBLs的产生是造成其耐药性快速蔓延和治疗的难点之一。
因此，对大肠杆菌质粒AmpC酶和ESBLs 的基因型及其耐药性的研究，对于控制大肠杆菌的传播及其感染具有重要的意义。
研究内容与目的：本研究旨在分离临床大肠杆菌中的质粒AmpC酶和ESBLs阳性株，并对其进行药敏试验，比较不同基因型的耐药表型特点。
同时，对质粒AmpC酶和ESBLs的基因型进行PCR扩增及测序，分析其基因类型、序列差异及功能特征。
通过这些研究，探究大肠杆菌质粒AmpC酶和ESBLs基因型及其耐药性特征对于治疗和预防大肠杆菌感染的重要性。
研究方法：1. 分离临床大肠杆菌中的质粒AmpC酶和ESBLs阳性株，并进行药敏试验。
2. 分别利用PCR扩增、测序和比对分析，得到质粒AmpC酶和ESBLs的基因型及序列。
3. 利用构建重组表达载体等方法，验证质粒AmpC酶和ESBLs的序列特点及其与耐药性之间的联系。
研究进度及安排：1. 完成临床样品的采集及初步病原体分离鉴定（2个月）。
2. 进行药敏试验及筛选质粒AmpC酶和ESBLs阳性株（3个月）。
3. 利用PCR扩增、测序和比对分析，得到质粒AmpC酶和ESBLs的基因型及序列（4个月）。
4. 利用构建重组表达载体等方法，验证质粒AmpC酶和ESBLs的序列特点及其与耐药性之间的联系（5个月）。
5. 结果分析及撰写论文（2个月）。
预期结果及意义：研究结果将为控制大肠杆菌的耐药性提供科学依据，为制定相应的感染预防策略提供重要参考。
肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶的检测及其质粒分析
ｈ ｒ Ｕｎ ｖ ｒ ｉｙ，Ｗ ｕ ａ ３ ０ ２，Ｃ ｎ ａ ｉｅ ｓｔ ｔ ｈ ｎ４０ ７ ｈｉ ａ）
Ｅ ｂｔ ｅ］ Ｏ ｊｃｉ Ｔ ｖｓ ｇｔ ｅｐｅ ａ ｎｅｏ ｘｅｄ ｄｓｅｔｕ ￣ｌ ｔｍａｅ Ｅ Ｂ ｓ ｎ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｂｅｔ ｅ ｏｉ ｅｔ ａｅｔ ｒｖ ｌ ｃ ｆ ｔｎ ｅ—ｐ ｃｒｍ ａ ａ ｓｓ（ Ｓ Ｌ ）ａ ｄＡｍｐ － ｃ ｖ ｎ ｉ ｈ ｅ ｅ ｃ ＣＢｌ — ａ
Ｄｅ ｅ ｔｏ ｆ ｅ ｔ ｎ ｄ ｓ ｃ ｒ ｍ ｌ ｃ ａ ａ ｅ ｎｄ Ａｍ ｐ ｔ ｃ ｉ ｎ ｏ ｘ ｅ ｄｅ — ｐｅ ｔ ｕ ａ ｔ ｍ ｓ ｓａ Ｃ ｌ ｃ ａ ａ ｅ ｏ ａ ｔ ｍ ｓ ｓ ｐｒ —
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国感染控制杂志 ２０ 年 ９ ０７ 月第 ６ 卷箜
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业
・３ ９ ・ ２
．
实 验 研 究 ．
肺炎 克 雷伯 菌产 Ｅ Ｂ ｓ和 Ａｍｐ ＳＬ Ｃ酶 的检 测 及 其质 粒 分 析
张 振 鲍连 生 杨 劳荣 郑 义 ， ， ，
况及质粒型耐药基 因。方法
法进行最低抑菌浓度 （ Ｃ） ＭＩ 测定 ； 以美 国临床实验室标准 化委 员会 （ Ｃ Ｓ 推荐 的双纸片协同试验和确证 试验检 ＮＣ Ｌ ） 测 Ｅ Ｂ ｓ酶提取物三维试验检测 Ａｍｐ Ｓ Ｌ； Ｃ酶 ； 质粒接合 和消除试 验检测耐药基因 。结果 菌检出率为 ７ ．） （７ ３ ）产 Ａ Ｃ酶 的肺 炎克雷伯菌检 出率为 １ ． ６ （ ／ ８ ； 中同时产 Ｅ Ｂ ｓ和 Ａ Ｃ １（ ２ ／ ８ ； ｍｐ ５ ３ １ ５ ３ ）其 ＳＬ ｍｐ 酶 的肺炎克雷伯菌检 出率为 ５ ２ （／ ８ 。产酶株对第三代头孢菌素 、 基糖 苷类 、 ．６ ２３ ） 氨 氟喹诺酮类耐药 率均较高 ， 对 亚胺培南 、 厄他培南 等碳青霉烯类 耐药 率最低 。通过质粒接合 和消除试 验 ，Ｏ （ ／ Ｏ 产 Ｅ Ｂ ｓ ４ ４ １） Ｓ Ｌ 的肺炎克 雷伯菌 和 ２】 （／ ） Ａｍｐ （ １５ 产 Ｃ酶的肺炎克雷伯菌检测到传播耐药 的质粒 。结 论 肺炎克 雷伯菌产 Ｅ Ｂ 和 Ａｍｐ ＳＩ Ｓ Ｃ酶是 其对多种抗菌药物耐药的主要原因 ， 耐药 扩散 与细 菌质 粒 的水平 传播有 关 ， 其 对这些 产酶株 的监测 和阻止其传 播 是控制肺炎克雷伯菌感染的重要措施 。 ［ 关 键 词］ 超广谱 内酰胺酶 ； Ａｍｐ Ｃ酶 ； 微生物敏感性 试验 ； 质粒 ［ 文献标识码］ Ａ ［ 文章编号］ １７ —９ ３ （０ ７ ０ —０ ２ —０ ６ １ ６ ８ ２０ ）５ ３ ９ ４ ［ 中图分类号］ Ｒ ７ ． ９ ３ ８９ ６
呼吸道标本中大肠埃希菌AmpC酶和ESBLs的检测及耐药性分析
检 出 ５株 单 产 Ａｍｐ Ｃ酶 、８株 单 产 Ｅ Ｂ ｓ８株 同 时 产 Ａｍｐ ６ ＳＬ、 Ｃ 酶 ＋ Ｅ Ｂ ｓ检 出 率 分 别 为 １ ８ 、 ４３ 、． 。Ａｍｐ ＳＬ， ． ２ ． ２ ３ Ｃ酶 和 ＥＢ ｓ Ｓ Ｌ 总检 出率 分别 为 ３ １ 和 ２ ． 。 ． ６６ ２２ ２ ０株 大 肠 埃 希 菌 耐 药 结 果 ， 表 １ ． ８ 见 。 表 １
Ｏ
Ｏ
０
加 Ｏ
Ｏ
０
敝
０
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１ １ １ 菌 株来 源 ．．
实验菌株为 ２０ 年 １ 至 ２０ ０６ 月 ０ ８年 ４月 本
阿 莫 西 林 ／ 拉 维 酸 克 哌 拉 西 林 ／ 唑 巴 坦 三
头 孢 唑 啉
院 临床 微 生 物室 分 离 的大 肠 埃 希 菌 ２ ０株 。质 控 菌 株 为 大 肠 ８ 埃 希 菌 （ ＴＣ ２ ９２ ，肺 炎 克 雷 伯 菌 （ Ｃ ７ ０ｏ ） 阴 沟 肠 Ａ Ｃ ５２） ＡＴ Ｃ ０ ６ ３ ，
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重 庆 医 学 ２ ０ 年 ９月 第 ３ ０８ ７卷 第 １ 期 ８
２ ０８７
・
经验 交流 ・
呼 吸道标 本 中大肠 埃 希 菌 Ａｍｐ Ｃ酶 和 Ｅ Ｂ ｓ Ｓ Ｌ 的检 测及 耐药 性 分 析
张建辉 （ 四川省 绵 阳 中心 医院检 验 科 ６１０ ） ２ ０ ０
抗
． 、
色 体 介 导 的 Ａ Ｃ 内酰 胺 酶 引 起 。 大 肠 埃 希 菌 是 临 床 感 染 ｍｐ 的 常 见 病 原 菌 ， 用 改 良酶 提 取 物 三 维 实 验 法 检 测大 肠 埃 希 菌 采
Ａｍｐ 酶 和 Ｅ Ｂ ｓ并 对 其 耐 药 性 进 行 分 析 ， 示 其 主 要 耐 药 Ｃ ＳＬ ， 揭 机制和产酶情况 ， 导临床合理用药 。 指
多重耐药铜绿假单胞菌ESBLs和AmpC酶检测与分析
困难 本 研究 对 我 院 ２ ０ ０ ５年 １ 月 ２ ０ ０ ６年 １ ２月 各
种 临 床 标本 中筛选 出的 ６ ０株多 重 耐 药 铜绿 假单 胞 菌 的 Ｅ Ｂ ｓ和 Ａ Ｃ酶进 行 检测 与 分析 ． ＳＬ ｍｐ 以探 讨 其 耐 药 机制 ． 临床 治疗 及控 制 医院感染 提供 依据 。 为
附表
６ ｏ株 多 重 耐 药铜 绿 假 单 胞 菌 三 维 试 验结 果
３ 讨 论
作 者单 位 ：２ ０ ０ １ 浙 江 省 温 州 第 二 医 院 ；、 州 中心 医 ３５ ０ 、 ２湖
院
多 重 耐 药 铜 绿 假 单 胞 菌 一 直 是 临 床 抗 感 染 治
疗 的重 点 和难 点 ． 特别 是 近 年来 不 断 出现 对 所 有 抗
１ 培养 基 与 试 剂 ＭＨ 培养 基 干 粉 购 自杭 州 天 ． ２
液 ＋ ｌ ｍ ｌ ４ ｌ ｍｏＬ克 拉 维 酸＋ ｌ ｍ ｌ ｘ２ ／ ４ ｌ ｍｏ Ｌ氯 唑 西 林 ． ｘ２ ／
３ ｃ培 养过夜 ．平 板 上 出现 沿槽 周 围 生长 指 向纸 片 ５ｃ 的矢 状 菌苔 ． 即表 明该 酶 能水 解 亚 胺 培南 或 头 孢 噻
的 中心分 别 贴上 １ １ 亚 胺培 南 和 ３ ｌ ０ｘ ｇ ０ ｇ头 孢 噻肟 ． ｘ 距 纸 片边 缘 ５ｎ ｒｍ处 由里 向外 用 无 菌 刀 片均 匀 切 割 ４个 １ ｍ 宽 、５ ｍ 长 的槽 ，于槽 内分别 加 ４ ｌ 酶 ｍ １ｍ ０ｘ ｌ
生素、 免疫抑制剂 、 肿瘤化疗等药物 的广泛使用以 及各 种 侵 入性 操 作 的增 多 ． 菌 引起 的 医院感 染 日 该
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一、ESBLs酶
1.初步筛选试验
(使用一种以上的药物进行筛选将会提高检测的敏感性)
判读结果
头孢泊肟10μg 的抑菌圈≤17mm
头孢他啶30μg的抑菌圈≤22mm
氨曲南30μg的抑菌圈≤27mm
头孢噻肟30μg的抑菌圈≤27mm
头孢曲松30μg的抑菌圈≤25mm
提示可能有ESBLs的产生
2.表型确证试验
确证试验需要同时使用头孢噻肟和头孢他啶，单独和联合克拉维酸的复合制剂
（1）头孢他啶30μg与头孢他啶/克拉维酸30/10μg
（2）头孢噻肟30μg与头孢噻肟/克拉维酸30/10μg
2组药物中有任何一组，在加克拉维酸后，抑菌圈直径与不加克拉维酸的抑菌圈相比，增大值≥5mm时，判定为产ESBLs（如，头孢他啶的抑菌圈＝16mm；头孢他啶/克拉维酸的抑菌圈＝21mm）
二、Ampc酶（目前还很少将其做为常规监测）
1.初筛：
（1）头孢西汀（30μg/片）与头孢西汀（30μg）/邻氯西林（200μg）。
后者比前者的抑菌圈≥5mm即疑为Ampc。
（2）5种纸片筛选：头孢吡肟、亚胺培南、头孢西汀、头孢他啶与头孢他啶/克拉维酸。
如头孢西汀≤17mm，对头孢吡肟、亚胺培南敏感即疑为产Ampc；如头孢他啶与其酶抑制剂的抑菌圈≥5mm可能产ESBLS。
2.确证试验（参考）
（1）双纸片法：待检菌株接种于M-H琼脂平板，贴上诱导剂头孢西汀纸片，在其左右10 mm 处分别贴上底物头孢他定(CAZ)和头孢噻肟(CTX)纸片，35％孵育16—18 h后，由于诱导型AmpC酶的产生，CAZ或CTX的抑菌圈在靠近诱导剂的一侧被酶抑制而缩小，出现扁平区，即底物离诱导剂远侧的抑菌圈半径减去近侧的抑菌圈半径≥4 mm为阳性。
也可在M- H琼脂平板贴上诱导剂头孢西汀（FOX）和亚胺培南（lP）纸片，两纸片上下相距20 mm，然后在FOX和lP 左右10 mm处分别贴上底物CAZ和CTX纸片。
同理判断，即底物CAZ或CTX离诱导剂远侧的抑菌圈半径减去近侧的抑菌圈半径>／4 mm为阳性。
作为检测的诱导剂，IP优于FOX。
（2）四纸片法：采用亚胺培南(IPM)、阿莫西林/克拉维酸(AMC)、
头孢他定(CAZ)、头孢噻肟(CTX)或头孢曲松(CRO)、氨曲南(ATM))
四纸片。
位置如左图该方法不仅能准确、快速区分产ESBI~和产诱导
AmpC酶，并能同时检出产这2种酶菌。
.（3）三维水相试验方法
将标准菌株ATCC 25922按常规药敏纸片K-B法操作均匀涂布于M-H
平板上。
在M-H平板中心贴一片头孢西汀(30ug/片) 纸片，在距纸片边缘1cm处，用无菌手术刀片切3cm长度的小槽，将待测菌株的6个菌落接种于槽内(勿溢出槽外)，35℃孵育18-24h。
结果观察：若抑菌圈向内凹陷，即AmpC酶阳性。
三维水相试验方法的改进(M-H平板打孔[2mm]扩散法)。
（4）质粒型AmpC酶三联纸片方法的检测
将标准菌株ATCC 25922按常规药敏纸片K-B法操作均匀涂布于M-H平板上。
在M-H平板中心贴一片头孢西汀(30ug/片) 纸片，在纸片边缘贴有待测菌的纸片（纸片上含20ul， PH8.0，1M Tris-0.1MEDTA）。
另一侧边缘贴有产AmpC酶菌的纸片（同上）。
35℃孵育18-24h，如待检菌出现扁平或凹陷的抑菌环为阳性。