【CN109988799A】一种甘油2α葡萄糖基化酶在制备2α甘油葡萄糖苷中的应用【专利】
一种生产甘油葡萄糖苷过程中恢复蛋白质含量的方法[发明专利]
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专利名称：一种生产甘油葡萄糖苷过程中恢复蛋白质含量的方法
专利类型：发明专利
发明人：段仰凯,吕雪峰,吴怀之,张凯,刘祥
申请号：CN201811096175.1
申请日：20180919
公开号：CN108949644A
公开日：
20181207
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种生产甘油葡萄糖苷过程中恢复蛋白质含量的方法，该方法包括以下步骤：(1)藻细胞和蛋白质初始积累阶段：该阶段使用的培养基不加入盐胁迫所使用的胁迫物；(2)藻细胞合成甘油葡萄糖苷阶段：第一阶段结束后，在培养基中加入相应浓度的盐胁迫所需的胁迫物，此阶段藻细胞开始合成GG；(3)藻细胞蛋白质恢复阶段：第二阶段结束后，将藻细胞采收并分离GG，剩余的藻细胞投入与第一阶段相同的新鲜培养基中培养，随后收集藻细胞获得藻粉。
采用该工艺不仅能够获取较高产量的甘油葡萄糖苷，而且最终收获的藻粉的蛋白质含量大于60％(w/w)，满足国家标准≥55％的要求。
申请人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
地址：266101 山东省青岛市崂山区松岭路189号
国籍：CN
代理机构：济南圣达知识产权代理有限公司
代理人：董洁
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【CN109762033A】一种甘油葡萄糖苷晶体的制备方法【专利】
代理人 黄美娟 李世玉
(51)Int .Cl . C07H 15/04(2006 .01) C07H 1/06(2006 .01) C12P 19/44(2006 .01)
(10)申请公布号 CN 109762033 A (43)申请公布日 2019.05.17
[0003]
[0004] 由于GG在各个领域具有实用性，因此要求其为保藏稳定性良好、不含杂质或分解 物等的高纯度物质。有关GG的合成方法已有报[Journal of the Agricultural Chemical Society of Japan，64卷，1821-1826页(2000年)；Applied Microbiology&Biotechnology， 100卷，6131-6139页(2016) ；Applied Biocatalysia，47卷，10086-10089页(2008年) ，但通 常得到的 是GG水溶液 ，GG易吸 潮 ，难以 获得晶 体。晶 体 相对于水溶液来说纯度更高 、更易运 输及保存。为了满足工业规模的大量供给的需要，需要得到GG的晶体。 [0005] 综上所述，目前由于GG具有非常强的吸水性，本领域缺乏大规模生产GG结晶的方 法 ，GG产品也主要以 水溶液为主 ，因此迫 切需要开发一种高效的 、稳定的GG结晶 方法 ，提高 GG的 运输成本 ，便于GG的 使 用 ，同时提高结晶收 率 ，降 低成本 ，缩短结晶 周期 ，提高 产品 质 量。
( 54 )发明 名称 一种甘油葡萄糖苷晶体的制备方法
( 57 )摘要 本发明公开了一 种甘 油葡萄糖苷晶 体的 制
备方法：将质量浓度8-10％甘油葡萄糖苷水溶液 在50-60℃、-0 .02～-0 .04MPa的条件下浓缩至甘 油葡萄糖苷质量浓度为50-55％ ，获得浓缩液 ；向 浓缩液中加入4-6倍体积的含有体积浓度1-7％ 石油醚的有机溶剂 ，在70-80℃下回流反应5080min 后 ，缓慢降 温至45-55℃ ，趁热 加入分子筛 或浓硫酸，室温放置40-48h，4-8℃冰箱中冷却结 晶 2-8天 ，在相对湿度为10-20％的 条件下 抽滤 ， 滤饼真空干燥 ，获得甘 油葡萄糖苷晶 体 ；采 用本 发明方法最终可以得到GG的晶体，且适于GG的大 规模生产 ，收率达到51％ ，纯度达到86％。
葡萄糖转换成甘油的方程式
葡萄糖转换成甘油的方程式
葡萄糖转化为甘油的过程涉及生物化学反应，主要是经过甘油
磷酸脱氢酶催化作用而发生。
这个过程可以用化学方程式来表示：
葡萄糖+ 2NAD^+ + 2Pi + 2ADP → 甘油 + 2NADH + 2H^+ +
2ATP.
在这个方程中，葡萄糖（C6H12O6）在催化剂的作用下被氧化，
生成甘油（C3H8O3），并且伴随着NAD^+还原为NADH，Pi（无机磷
酸盐）和ADP生成ATP。
这个过程在生物体内发生，是细胞内能量
代谢的重要环节之一。
除了化学方程式，我们还可以从生物化学角度来解释这个过程。
葡萄糖分子在细胞内经过一系列酶的作用，最终转化为甘油的过程
是糖代谢途径的一部分，这个过程中产生的NADH和ATP是细胞内能
量的重要来源。
甘油本身在生物体内也具有重要的生物学功能，比
如在脂质代谢中起着重要作用。
总的来说，葡萄糖转化为甘油是一个复杂的生物化学过程，涉
及多种物质的相互作用和转化，其化学方程式只是对这个过程的简
单描述之一。
从生物学角度来看，这个过程对细胞能量代谢和生物体的生理功能具有重要意义。
一种利用微生物合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的方法[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010501634.0(22)申请日 2020.06.04(71)申请人 江南大学地址 214000 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号(72)发明人 饶志明 张显 段培枫 易敢峰 付维来 杨套伟 徐美娟 邵明龙 (74)专利代理机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211代理人 仇钰莹(51)Int.Cl.C12N 9/10(2006.01)C12N 15/54(2006.01)C12N 15/70(2006.01)C12N 1/21(2006.01)C12P 19/44(2006.01)C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称一种利用微生物合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的方法(57)摘要本发明公开了一种利用微生物合成2-O -α-D -甘油葡糖苷的方法，属于基因工程技术领域。
本发明所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
本发明所述突变体是在肠膜明串珠菌来源的蔗糖磷酸化酶的基础上，进行定点突变实现蔗糖磷酸化酶酶活的提高的，将突变体酶在大肠杆菌中表达，并用作全细胞催化剂生产2-O -α-D -甘油葡糖苷，在5L发酵罐水平，可短时间内生产大量的2-O -α-D -甘油葡糖苷，这有利于扩大蔗糖磷酸化酶生产2-O -α-D -甘油葡糖苷工业化应用前景，实现大规模工业化应用。
权利要求书1页 说明书4页序列表6页 附图1页CN 111690624 A 2020.09.22C N 111690624A1.一种酶活提高的蔗糖磷酸化酶突变体，其特征在于，含有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
2.编码权利要求1所述突变体的基因。
3.携带权利要求2所述基因的载体。
4.表达权利要求1所述蔗糖磷酸化酶突变体的微生物细胞。
5.一种基因工程菌，其特征在于，表达SEQ ID NO.1所示的突变体或SEQ ID NO.3所示的蔗糖磷酸化酶基因。
α-葡萄糖苷酶的基本资料
关于α-葡萄糖苷酶的介绍α-葡萄糖苷酶作为淀粉水解酶家族中的重要一员，被广泛应用于食品和发酵工业、化学工业以及临床检测和疾病治疗等领域。
对它的研究一直受到人们的高度重视，多年来α-葡萄糖苷酶在不同领域的应用均产生了很好的经济和社会效益。
1、α-葡萄糖苷酶的简介α-葡萄糖苷酶(EC.3.2.1.20)为淀粉水解酶类中的一种，它又被称为α-葡萄糖苷水解酶或葡萄糖基转移酶（GTase），是一种α-D-葡萄糖苷酶。
主要在细胞外起作用。
它从多糖的非还原末端水解底物的α-葡萄糖苷键，产生α-D-葡萄糖，通常把它们归类于水解酶第3类,主要水解二糖、低聚糖、芳香糖苷，能以蔗糖和多聚糖为底物。
同时，它还具有转糖苷作用，可将低聚糖中的，α-1，4-糖苷键转化成α-1，6-糖苷键或其他形式的链接，从而得到非发酵性的低聚异麦芽糖或糖酯、糖肽等。
按一级结构可将α-葡萄糖苷酶归为水解酶13类的31家族。
α-葡萄糖苷酶通常按底物专一性分为3个类型。
Ⅰ型α-葡萄糖苷酶水解芳基葡萄糖苷如对--硝基苯酚α-D-葡萄糖吡喃苷(pNPG)，且水解速率比低聚麦芽糖快。
Ⅱ型α-葡萄糖苷酶对麦芽糖具有高活性，而对芳基葡萄糖苷活性低。
Ⅲ型α-葡萄糖苷酶与Ⅱ型类似，但它水解低聚糖和淀粉的速率基本一样。
2、α-葡萄糖苷酶来源及分布α-葡萄糖苷酶在自然界分布广泛，种类繁多，性质各异，几乎存在于所有生物体内。
目前已经进行研究的α-葡萄糖苷酶除少数来源于植物和动物外，绝大多数均来自于微生物中。
细菌、霉菌及酵母菌等一些菌株能分泌此酶，其中产酶较多的是黑曲霉，市场上销售的α-葡萄糖苷酶产品大都为黑曲霉发酵生产所得。
3、微生物α-葡萄糖苷酶研究现状微生物来源的α-葡萄糖苷酶相对分子量一般在50~120kDa之间。
不同来源的α-葡萄糖苷酶的相性质则差异很大。
同一种属的微生物，除少数外，它们所产生的α-葡萄糖苷酶性质差异也较大。
例如，枯草杆菌属的不同α-葡萄糖苷酶分子量一般在65~120kDa，有些属酸性水解酶，有些属中性水解酶，合适温度各异，底物专一性也不尽相同，有的主要降解直链淀粉、有的水解麦芽糖和低聚麦芽糖、有的具有较宽的底物专一性，可水解多种底物。
【CN109985062A】香菇多糖在制备抑制α葡萄糖苷酶活性药物中的应用【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910317767.X(22)申请日 2019.04.19(71)申请人 辽宁大学地址 110000 辽宁省沈阳市沈北新区道义南大街58号(72)发明人 曹向宇 孔宇驰 繆静宜 何勇林 李其久 牟藤 (74)专利代理机构 沈阳杰克知识产权代理有限公司 21207代理人 金春华(51)Int.Cl.A61K 31/715(2006.01)A61K 45/06(2006.01)A61P 3/10(2006.01)(54)发明名称香菇多糖在制备抑制α-葡萄糖苷酶活性药物中的应用(57)摘要本发明公开香菇多糖在制备抑制α-葡萄糖苷酶活性药物中的应用。
所述的香菇多糖可通过抑制α-葡萄糖苷酶活性，来达到降低餐后血糖，预防糖尿病的目的。
本发明旨在研究开发出疗效好且副作用小的降糖保健品，有效控制α-葡萄糖苷酶活性，可降低餐后血糖，预防糖尿病的发生。
本发明为研究香菇多糖作为降低餐后血糖，预防糖尿病发生的保健品提供了新的思路。
权利要求书1页 说明书3页 附图2页CN 109985062 A 2019.07.09C N 109985062A权 利 要 求 书1/1页CN 109985062 A1.香菇多糖单用或与其他药物联用在制备抑制α-葡萄糖苷酶活性药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，香菇多糖单用或与其他药物联用在制备预防糖尿病药物中的应用。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的香菇多糖的剂量为0.3-2.7mM。
2。
一种生物催化合成甘油葡萄糖苷的方法[发明专利]
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专利名称：一种生物催化合成甘油葡萄糖苷的方法专利类型：发明专利
发明人：杨建刚,张同,曾艳,孙媛霞,马延和
申请号：CN201910710353.3
申请日：20190802
公开号：CN110438100A
公开日：
20191112
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种生物催化合成甘油葡萄糖苷的方法，本发明通过建立体外多酶级联反应体系或全细胞催化体系，可分别转化廉价底物蔗糖、麦芽糖、麦芽糊精、葡萄糖和甘油合成高附加值的甘油葡萄糖苷，甘油葡萄糖苷转化率均达到80％以上，并且进一步构建了高浓度的大反应，可高效生成甘油葡萄糖苷，该方法实现了磷酸基团的循环利用，可在低磷条件下反应，是环境友好型的技术路线，具有很强的应用潜力，所合成的甘油葡萄糖苷可用于化妆品、食品和医药等领域。
申请人：中国科学院天津工业生物技术研究所
地址：300308天津市滨海新区天津空港经济区西七道32号
国籍：CN
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CN 109988799 A
说 明 书
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一种甘油-2-α-葡萄糖基化酶在制备2-α-甘油葡萄糖苷中的 应用
(一)技术领域 [0001] 本发明涉及一种含甘油-2-α-葡萄糖基化酶在生产2-α-甘油葡萄糖苷(2-O-α-Dglucosylglycerol，以下简称2-α-GG)中的应用。
(二)背景技术 [0002] 2-α-甘油葡萄糖苷(2-α-GG)是一类由甘油分子与葡萄糖分子以糖苷键结合的物 质，结构式如图1所示，其通过糖苷键将一个D-吡喃葡萄糖和甘油2号位的羟基偶联，是自然 界多种植物、藻类和细菌对抗干旱和高盐环境的天然保护剂。葡萄糖分子的构型结合甘油 分子的位置分为多种，目前已经鉴定出六种，但作为天然渗透压抵抗分子的是2-α-GG。它是 微生物在胁迫条件下合成的一种渗透保护物质，同时还是一种大分子稳定剂，能够在高温 或冷 冻干燥条件下稳定蛋白 质或酶等生物大分子结构 ，也可 用于蛋白 质药物等的 长期保 存 ；由 于具有低吸水性、高保湿性的特点 ，用于提高皮肤保湿效果 ，是一种良 好的 化妆品添 加剂，抗氧化和抗衰老等功效。更有研究发现2-α-GG还具有治疗过敏性呼吸系统疾病等多 种人体保健功效。 [0003] 2-α-GG在化妆品、医药等行业具有广泛的应用前景，但局限于2-α-GG的生产技术， 高纯度的产品价格高居不下。目前的生产方法包括化学法合成、酶法合成和植物或藻类中 直接提取。其中化学法缺乏 立体 和区域专一性 ，产物多样 ，得率低 ；许多酶法转化的 产物亦 含有多个糖基化位点的 产物 ，难以 得到单一产品2-α-GG ；直接提取的 方法 ，其得率太低 ，成 本高 ，难以 产业化。目前 ，2-α-GG的生产技术侧重于筛选专一性更好的酶法转化和微生物代 谢工程直接发酵生产。
( 19 )中华人民 共和国国家知识产权局
( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910066879 .2
(22)申请日 2019 .01 .24
(71)申请人 浙江工业大学 地址 310014 浙江省杭州市下城区潮王路 18号
(72)发明人 陈小龙 江丹 朱林江 陆跃乐 范永仙 陈翰驰
(74)专利代理机构 杭州天正专利事务所有限公 司 33201
本发明公开了一种甘油-2-α-葡萄糖基化 酶在制备2-α-甘油葡萄糖苷中的应用，所述甘 油-2-α-葡萄糖基化酶氨基酸序列为SEQ ID NO .2所示；本发明所述生产2-α-GG的重组大肠 杆菌，即重组大肠杆菌(Escherichia coli)IEFbpmsp208能够在胞内高效合成蔗糖磷酸化酶 ，以 甘油和蔗糖为底物 ，高效催化甘油的糖基化反 应 ，反应18-24小时 ，可得到大于10％的 2-α-GG 溶液 ，且对底物蔗糖的转化率大于92％ ，2-α-GG 的产物浓度高 ，转化率高 ，有利于2-α-GG分离纯 化。
(10)申请公布号 CN 109988799 A (43)申请公布日 2019.07.09 C12N 9/24(2006 .01)
权利要求书1页 说明书5页 序列表3页 附图1页
CN 109988799 A
CN 109988799 A
权 利 要 求 书
1/1 页
1 .一种甘油-2-α-葡萄糖基化酶在制备2-α-甘油葡萄糖苷中的应用，其特征在于所述 甘油-2-α-葡萄糖基化酶氨基酸序列为SEQ ID NO .2所示。
2 .如权利要求1所述的应用，其特征在于所述甘油-2-α-葡萄糖基化酶编码基因的核苷 酸序列为SEQ ID NO .1所示。
3 .如权利要求1所述的应用，其特征在于所述应用的方法为：将含甘油-2-α-葡萄糖基 化酶基因的重组大肠杆菌经发酵培养获得的发酵液或发酵离心的湿菌体用缓冲液悬浮的 菌悬液为催化剂，以甘油为底物，以蔗糖为辅助底物，在30-45℃的条件下进行反应，获得含 2-α-甘油葡萄糖苷的反应液，将反应液分离纯化，获得2-α-甘油葡萄糖苷。
蛋白胨10g/L、NaHPO4·12H2O 8 .9g/L、KH2PO4 3 .4g/L、NH4Cl 2 .67g/L、Na2SO4 0 .71g/L、 MgSO4·7H2O 0 .49g/L，溶剂为去离子水，pH6 .8-7 .0；
(2)发酵培养：将种子液以体积浓度5％的接种量接种到含卡那霉素50mg/L的发酵培养 基中 ，在30-37℃培养4-6h ；加入终浓度为18-22g/L的α-乳糖 ，在22-25℃继续发酵12-18h ， 取发酵液离心 ，收 集湿菌体细胞 ；所述发酵培养基 质量终浓度组成 ：酵母粉12g/L 、蛋白 胨
度组成：酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、NaHPO4·12H2O 8 .9g/L、KH2PO4 3 .4g/L、NH4Cl 2 .67g/L、 Na2SO4 0 .71g/L、MgSO4·7H2O 0 .49g/L，溶剂为去离子水，pH6 .8-7 .0；
(2)发酵培养 ：将新鲜培养的种子液按照体积浓度5％的接种量 ，接种到含质量浓度 0 .05％消泡剂和50mg/L卡那霉素的发酵培养基中，37℃培养4h；加入终浓度为20g/L的α-乳 糖，在发酵温度25℃、溶解氧DO大于20％、pH6 .8条件下发酵培养，获得发酵液；所述发酵培
15g/L、甘油10g/L、Na2HPO4·12H2O 8 .9g/L、KH2PO4 3 .4g/L、NH4Cl 2 .67g/L、Na2SO4 0 .71g/ L、MgSO4·7H2O 0 .3g/L，溶剂为去离子水，pH6 .8-7 .0。
8 .如权利要求3所述的应用，其特征在于所述发酵液的发酵罐制备方法： (1) 将含甘 油-2-α-葡萄糖基化酶基因的 重组大肠杆菌接 种在含50mg /L卡 那霉素的 种 子培养基中，30-37℃、180-250rpm培养至对数生长中期，获得种子液；所述种子培养基终浓
代理人 黄美娟 李世玉
(51)Int .Cl . C12P 19/44(2006 .01) C12P 19/14(2006 .01) C12N 15/70(2006 .01) C12N 15/53(2006 .01)
( 54 )发明 名称 一种甘油-2-α-葡萄糖基化酶在制备2-α-
甘油葡萄糖苷中的应用 ( 57 )摘要
4 .如权利要求3所述的应用，其特征在于所述发酵液或菌悬液中湿菌体含量为5-100g/ L，甘油的终浓度为100-150g/L，蔗糖终浓度为300-400g/L。
5 .如权利要求3所述的应用，其特征在于反应pH为6 .0-8 .0，反应时间为24h。 6 .如权利要求3所述的应用，其特征在于缓冲液为pH7 .0、2 于所述发酵液的摇瓶制备方法：(1)将含甘油-2α-葡萄糖基化酶基因的重组大肠杆菌接种在含50mg/L卡那霉素的种子培养基中，30-37℃、 180-250rpm培养至对数生长中期 ，获得种子液 ；所述种子培养基终浓度组成 ：酵母粉5g/L、