脯氨酸的检测方法
脯氨酸的荧光激发波长
脯氨酸的荧光激发波长脯氨酸是一种重要的天然氨基酸，存在于多种生物体内，具有诸多生物功能和广泛的应用价值。
脯氨酸的荧光激发波长是指当脯氨酸受到外界刺激时，所吸收的光的波长范围。
下面将介绍脯氨酸的荧光激发波长及其影响因素。
脯氨酸的荧光激发波长主要受到两个因素的影响，一是脯氨酸的化学结构，二是环境因素。
首先，脯氨酸的化学结构中，芳香环和酰基基团相互作用决定了其吸收和发射光谱。
脯氨酸的吸收光谱范围为200-300 nm，发射光谱范围为300-450 nm。
其次，环境因素也影响脯氨酸的荧光激发波长。
例如，溶液的pH值、温度、离子强度等环境条件会对脯氨酸的吸收和发射光谱产生影响。
脯氨酸的荧光激发波长对于其生物功能和应用具有重要意义。
首先，脯氨酸的发光特性可以用于生物物理学和生物化学研究中的分子探针和荧光标记。
通过标记脯氨酸，可以用荧光显微镜观察其在细胞内的分布和运动轨迹，帮助研究者研究细胞生物学和生物化学过程。
其次，脯氨酸的荧光激发波长还可以用于荧光检测和分析技术中。
利用脯氨酸的荧光特性，可以实现对某些荧光物质的检测和分析，如荧光染料、荧光探针和生化分子等。
脯氨酸的荧光激发波长还受到多种因素的影响。
首先，脯氨酸的光谱性质受到它的吸收效率和荧光发射效率的影响。
脯氨酸的吸收效率与其分子结构和环境中的其他分子相互作用有关。
例如，脯氨酸分子中的芳香环和酰基基团可以通过共振效应增强其吸收效率。
其次，溶液的pH值对脯氨酸的光谱性质也有显著影响。
在酸性条件下，脯氨酸分子的芳香环质子化，导致吸收和发射光谱发生红移。
在碱性条件下，脯氨酸分子的芳香环解质化，吸收和发射光谱发生蓝移。
另外，温度和离子强度等溶液条件也可以影响脯氨酸的光谱性质。
例如，温度的变化可以引起脯氨酸分子结构的改变，从而影响其吸收和发射光谱。
总之，脯氨酸是一种具有重要生物功能和广泛应用价值的天然氨基酸。
脯氨酸的荧光激发波长是指其在受到外界刺激时所吸收的光的波长范围，该波长主要受到脯氨酸的化学结构和环境因素的影响。
9种氨基酸UPLC分析方法(异硫氰酸苯酯柱前衍生法)
9种氨基酸UPLC分析方法（异硫氰酸苯酯柱前衍生法）2013-09-05方法：HPLC基质：标准溶液应用编号：103087化合物：Asp（天冬氨酸） Glu(谷氨酸) Ser(丝氨酸) Gly(甘氨酸) His(组氨酸) Arg(精氨酸) Thr(苏氨酸) Ala(丙氨酸) Pro(脯氨酸) Tyr(酪氨酸) Val(缬氨酸) Met(蛋氨酸) Cys(胱氨酸) IIe(异亮氨酸) Leu(亮氨酸)Nle(正亮氨酸) Phe(苯丙氨酸) Trp(色氨酸) Lys(赖氨酸)固定相：Endeavorsil C18色谱柱/前处理小柱：Endeavorsil C18 1.8μm 100 x 2.1mm样品前处理：1 溶液配制：氨基酸储备液：称取一定量氨基酸标准品，用0.1 mol/l HCl水溶液溶解，配成氨基酸单标浓度为0.05 mol/l 氨基酸使用液：将储备液用0.1mol/l HCl水溶液稀释，得到浓度为0.002 mol/l的氨基酸单标和混标，待衍生 0.1 mol/l HCl水溶液：量取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 异硫氰酸苯酯（PITC）溶液：将250 μl异硫氰酸苯酯用乙腈定容至10 ml，得到0.2 mol/L异硫氰酸苯酯溶液三乙胺溶液：将1.4 ml三乙胺用乙腈定容至10 ml，得到1.0 mol/L三乙胺溶液 0.1 mol/l HCl水溶液：量取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 2 标准溶液衍生化：量取200 μl氨基酸混合使用液，置于1.5 ml塑料离心管中，准确加100 μl 1 mol/l三乙胺乙腈溶液和100 μl 0.2 mol/l异硫氰酸苯酯乙腈溶液，混匀，室温反应1小时，然后加入正己烷400 μl，旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s，静置分层，取200 μl下层溶液与800 μl水混合，0.22 μm针式过滤器过滤，待分析。
色谱条件：色谱柱：Endeavorsil C18，100×2.1 mm，1.8 μm (Cat#:87003) 流动相： A：0.05 mol/L乙酸钠水溶液（冰乙酸调节pH至6.50±0.05） B：甲醇：乙腈：水=20：60：20（V：V：V）流速：0.3 mL/min 柱温：35 ℃检测器：UV 254 nm 进样体积：2.0 μL文章出处：天津应用实验室关键字：天然氨基酸、Asp（天冬氨酸）、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、IIe(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Nle(正亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(赖氨酸)、UPLC、奋进、Endeavorsil C18、异硫氰酸苯酯、柱前衍生、PITC谱图：。
脯氨酸含量的测定
脯氨酸含量的测定脯氨酸是一种重要的氨基酸，由于其参与了生物体内多种代谢反应，因此在生物学、医学、食品科学等领域都具有重要的应用价值。
对于脯氨酸含量的测定，常用的方法主要有生物化学法、色谱法、质谱法等。
下面将详细介绍这些方法的原理和操作步骤。
一、生物化学法生物化学法是一种常用的脯氨酸含量测定方法，其原理是利用苯酰亚胺与脯氨酸在强酸条件下的酰化反应，生成具有紫色色素的N-苯酰脯氨酸，可通过分光光度计测定其吸收光谱来确定含量。
1. 操作步骤：（1）样品制备将待测样品粉碎并过筛，加入盐酸或硫酸等强酸，混合均匀，常温下反应数小时，将反应溶液转移至滤袋中过滤，然后将滤液经旋转浓缩至干燥，加入适量的甲醇或氯仿等溶剂，振荡溶解，即可制备待测样品。
（2）标准曲线制备取不同浓度的脯氨酸标准溶液，分别进行相同的处理方法，制备不同浓度的标准溶液。
然后以标准溶液的吸收值为纵坐标，相应浓度为横坐标，绘制标准曲线。
（3）分光光度计测定将待测样品和标准溶液分别置于分光光度计中，以标准曲线为参照，通过测定吸收光谱来确定样品中脯氨酸的含量。
二、色谱法色谱法多用于测定含量较低的脯氨酸，其原理是利用离子交换色谱分离脯氨酸，在检测器中进行检测并计算。
将待测样品加入甲醇或氯仿等溶剂中，过滤经过滤纸，然后加入0.5N NaOH(或1N NaOH) 溶剂，混合并振荡，使脯氨酸完全转化为盐基态的氨基酸。
（2）色谱条件设置利用离子交换色谱柱，设置流速，根据需求设置检测器(如紫外检测器)，调整溶液的pH值、离子强度等，使得脯氨酸能够被完全分离。
（3）色谱分离及检测按照设定条件进行色谱分离，并在检测器中检测脯氨酸的吸收光谱，通过计算峰面积或峰高，来确定样品中脯氨酸的含量。
三、质谱法质谱法通常用于测定含量较低的脯氨酸，其原理是利用高分辨率质谱仪对样品进行荷质比分析，获得脯氨酸分子的荷质比和相应的亚分子和碎片离子，进而计算出样品中脯氨酸的含量。
将待测样品中的脯氨酸沉淀或提取出来，常用的提取方法包括利用乙酸酐等试剂进行衍生化处理。
脯氨酸含量检测试剂盒说明书
脯氨酸（Pro ）含量检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0290规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体45 mL×1瓶（自备）4℃保存试剂二液体45 mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1．试剂一：自备冰乙酸。
2．标准品：脯氨酸10 mg ，临用前加入1 mL 蒸馏水，配成10 mg/mL 标准品。
产品说明：脯氨酸（Pro ）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内Pro 含量显著增加。
Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。
因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
用磺基水杨酸（SA ）提取Pro ，加热处理后，Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色，在520nm 测定吸光度。
技术指标：最低检出限：0.1791 μg/mL 线性范围：0.5-40 μg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器及用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰乙酸、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细胞、细菌或组织样本的制备：细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），之后置沸水浴振荡提取10min ；10000g ，常温离心10min ，取上清，冷却后待测。
组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取10min，10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。
脯氨酸的代谢
脯氨酸的代谢
1. 脯氨酸的定义及其结构：
脯氨酸是一种异构氨基酸，其分子中有两个羟基，是一种含不对称的异构体。
它的分子式为C5H9NO2，分子量为115.12，在水溶液中它的pKa为9.13。
它有很好的水溶解性和营养抗性能，也是肌肉中最重要的氨基酸之一。
2. 脯氨酸的营养价值：
脯氨酸是重要的氨基酸，它是蛋白质的必需成分，对人体健康有着非常重要的作用。
脯氨酸能为蛋白质提供硫醇所需的原料物质，能够防止肉类中脂肪囤积，调节肝脏胆固醇合成，促进免疫功能，增强新陈代谢，增加消化酶活性，增加消化酶吸收营养，并可以调节血液中的氨基酸含量，促进细胞再生成活力。
3. 脯氨酸的储存及检测：
脯氨酸由于其稳定性，在常温下储存，不易变质。
在冷藏，干燥，避光的条件下，可保持较长的有效期，但氨基酸会发生氧化变质，因此在储存过程中应避免曝光在光线的作用。
脯氨酸的检测有多种方法，最常用的检测方法是通过液相色谱仪(HPLC)、分子筛、比色法和光源荧光技术等来实现，其结果可以为实验和工业生产提供重要参考。
4. 脯氨酸的代谢：
脯氨酸代谢在人体中发挥着重要作用。
它被消化酶分解成谷氨酸、胱氨酸和末端丙酮酸，这些物质最终被肝脏分解成尿酸。
高尿酸血症是一种与脯氨酸代谢异常有关的疾病，过多的尿酸可引发肾结石和关节炎。
对脯氨酸代谢异常及其引起的疾病，应采取适当的措施积极治疗，以预防后续并发症的发生。
ape法 棕榈酰化
ape法棕榈酰化【简介】在生物化学领域，ape法与棕榈酰化是两个重要的研究手段。
ape法，全称为"氨基酸脯氨酸酶肽酶法"，是一种用于检测蛋白质修饰的方法。
棕榈酰化则是一种常见的脂质修饰方式，广泛存在于细胞膜蛋白、信号转导蛋白等众多生物分子中。
在本文中，我们将探讨这两者之间的关系及其在实际生活中的应用。
【ape法的原理与应用】ape法是一种基于蛋白质降解的研究方法，通过检测脯氨酸残基的降解来推测蛋白质的修饰状态。
在这个过程中，ape酶可以识别并水解含有脯氨酸肽键的蛋白质，从而揭示蛋白质修饰的信息。
该方法在研究蛋白质棕榈酰化修饰方面具有很高的敏感性和特异性。
【棕榈酰化的作用与影响】棕榈酰化是一种重要的脂质修饰方式，指的是蛋白质中的赖氨酸残基被饱和的棕榈酸酯化。
这种修饰作用会影响蛋白质的的结构、功能、稳定性以及细胞内定位等。
棕榈酰化在生物体内参与了许多生物学过程，如信号传导、细胞黏附、离子通道调节等。
因此，研究棕榈酰化对于理解细胞生物学和发展生物医学领域具有重要意义。
【实际应用案例】在实际研究中，ape法与棕榈酰化的结合应用广泛。
例如，研究人员可以通过ape法检测蛋白质棕榈酰化修饰的位置和程度，进一步研究这种修饰对蛋白质功能的影响。
此外，ape法还可以用于研究其他类型的蛋白质修饰，如糖基化、磷酸化等。
【总结】总之，ape法与棕榈酰化在生物化学研究领域具有重要作用。
它们是研究蛋白质修饰的重要手段，有助于揭示生物分子在细胞功能中的作用机制。
通过不断探索和研究，科学家们可以更好地了解生命过程中的分子调控，为生物医学领域的发展提供有力支持。
脯氨酸的检测方法
脯氨酸的检测方法Coca-cola standardization office【ZZ5AB-ZZSYT-ZZ2C-ZZ682T-ZZT18】脯氨酸的检测方法1. 原理样品用茚三酮处理，样品中的脯氨酸反应生成橙色物质，在520nm检测吸光度，并作空白对照实验。
2. 应用范围本方法适用于蜂蜜、果汁和浓缩汁中的脯氨酸的检测。
本方法在其它方面的应用必须经过个别论证。
3. 试剂及仪器脯氨酸3%茚三酮2-甲氧基乙醇溶液（茚三酮溶解于10ml 2-甲氧基乙醇，每天保持新鲜，即现用现配）2-甲氧基乙醇蚁酸(96%)，即甲酸异丙醇（2-丙醇）水溶液：水：丙醇= 1：115ml旋盖玻璃离心管（确保离心管的边缘没有缺口，将有缺口的离心管丢掉）分光光度计，检测吸光度设定在520nm下1cm 玻璃比色皿4. 样品准备苹果，梨和大部分浆果的果汁用单一浓度（即原果汁浓度），橙汁用1：20的水进行稀释。
其它的果汁应进行适当的稀释，以保证稀释后的样品中的脯氨酸的含量低于50mg/L(见稀释表)。
浓缩果汁用水稀释到单一浓度，然后再进一步进行适当的稀释。
蜂蜜的稀释，采用蜂蜜加50ml水。
将样品在分析之前离心5min左右，去除悬浮物，取上清液进行分析。
原果汁稀释表样品类型稀释比例颜色空白期望值Apple 苹果1:1yes Apricot 杏21:1yes Aronia 野樱莓1:1yes Banana 香蕉1:1yes Blackberry 黑莓1:1yes Cherry 樱桃1:1yes Cranberry 蔓越莓1:1yes Grape 葡萄16:1yes Grapefruit 柚子21:1no Guava 番石榴3:1yesKiwi 泥猴桃1:1yesLemon 柠檬21:1noLime 酸橙21:1noMandarin 中国柑桔21:1noMango 芒果1:1yesNectarine 油桃21:1noOrange 柑桔21:1noPapaya 番木瓜1:1yesPassion Fruit 西番莲1:1yesPeach 桃6:1yesPineapple 菠萝1:1yesPlum 李子7:1yesPrune 西梅16:1yes5:1yesRaspberry 悬钩子（树梅）Strawberry 草莓1:1yesTangerine 橘子21:1noTomato 番茄1:1yes5. 标准溶液的制备脯氨酸贮备液（500mg/L）：脯氨酸加水定容至100ml。
脯氨酸检测试剂盒(茚三酮比色法)
脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)简介：脯氨酸(Proline，Pro)是一种环状的α-亚氨基酸，呈中性，等电点为6.30，水中溶解度比任何氨基酸都大，水中可溶162g左右，易潮解不易得结晶，有甜味。
与茚三酮溶液共热，生成黄色化合物，一旦进入肽链后，可发生羟基化作用，从而形4-羟脯氨酸，是组成动物胶原蛋白的重要成分。
羟脯氨酸也存在于多种植物蛋白质中，尤其与细胞壁的形成有关，在正常情况下脯氨酸含量较低，但在逆境下(旱、热、冷、冻、盐碱等)，常有脯氨酸的明显积累，即积累指数与植物的抗逆性有关。
在临床、生物材料、工业等方面均有广泛应用。
Leagene脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)检测原理是脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中，前者与茚三酮共热发生反应，能产生稳定的红色产物，以分光光度计测定处吸光度，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与脯氨酸浓度成正比。
该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、蒸馏水2、研钵或匀浆器3、离心管或试管4、滤纸或纱布5、水浴锅6、比色杯7、分光光度计操作步骤(仅供参考)：编号名称TO111350TStorage试剂(A): 脯氨酸标准(100μg/ml) 1ml 4℃试剂(B): PRO Lysis buffer 250ml RT试剂(C): PRO Assay buffer80ml RT试剂(D): 茚三酮2支RT 避光使用说明书1份1、准备样品：①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，加入PRO Lysis buffer 后匀浆或研磨，沸水浴(期间经常摇动)，混匀，用滤纸或纱布过滤，滤液即为脯氨酸提取液，4℃保存备用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于脯氨酸的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用PRO Lysis buffer进行适当匀浆，留取上清即脯氨酸提取液，4℃保存备用，用于脯氨酸的检测。
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脯氨酸的检测方法1. 原理样品用茚三酮处理，样品中的脯氨酸反应生成橙色物质，在520nm 检测吸光度，并作空白对照实验。
2. 应用范围本方法适用于蜂蜜、果汁和浓缩汁中的脯氨酸的检测。
本方法在其它方面的应用必须经过个别论证。
3. 试剂及仪器3.1 脯氨酸3.2 3%茚三酮2-甲氧基乙醇溶液（0.3g 茚三酮溶解于10ml 2-甲氧基乙醇，每天保持新鲜，即现用现配）3.3 2-甲氧基乙醇3.4 蚁酸（96%），即甲酸3.5 异丙醇（2- 丙醇）水溶液：水：丙醇= 1：13.6 15ml 旋盖玻璃离心管（确保离心管的边缘没有缺口，将有缺口的离心管丢掉）3.7 分光光度计，检测吸光度设定在520nm 下3.8 1cm 玻璃比色皿4. 样品准备4.1苹果，梨和大部分浆果的果汁用单一浓度（即原果汁浓度），橙汁用1：20 的水进行稀释。
其它的果汁应进行适当的稀释，以保证稀释后的样品中的脯氨酸的含量低于50mg/L（见稀释表）。
浓缩果汁用水稀释到单一浓度，然后再进一步进行适当的稀释。
蜂蜜的稀释，采用2.5g蜂蜜加50ml水。
将样品在分析之前离心5min 左右，去除悬浮物，取上清液进行分析。
4.2 原果汁稀释表稀释比例颜色空白期望值样品类型Apple 苹果1:1 yesApricot 杏21:1 yesAronia 野樱莓1:1 yesBanana 香蕉1:1 yesBlackberry 黑莓1:1 yesCherry 樱桃1:1 yesCranberry 蔓越莓1:1 yesGrape 葡萄16:1 yesGrapefruit 柚子21:1 noGuava 番石榴3:1 yesKiwi 泥猴桃1:1 yesLem on柠檬21:1 noLime酸橙21:1 noMandarin中国柑桔21:1 noMango芒果1:1 yesNectarine 油桃21:1 noOran ge柑桔21:1 noPapaya番木瓜1:1 yesPassion Fruit 西番连1:1 yesPeach 桃6:1 yesPin eapple 菠萝1:1 yesPlum李子7:1 yesPrune 西梅16:1 yesRaspberry悬钩子（树梅）5:1 yesStrawberry 草莓1:1 yesTan geri ne 橘子21:1 noTomato番茄1:1 yes5. 标准溶液的制备5.1脯氨酸贮备液（500mg/L） : 0.0500g脯氨酸加水定容至100ml。
此贮备溶液冷藏存放，每月重新配置一次。
5.2 50mlg/L准工作溶液：每天配置一次，取5ml脯氨酸贮备溶液，用水定容至50ml。
用该溶液作为分析用的标准溶液。
6. 结果判定6.1将离心管编号，并设计样品编号与离心管标号的对照表格。
按下表，向离心管内移取相应溶液：样品*颜色空白标准水空白茚三酮溶液 1.00 mL 1.00 mL 1.00 mL2-甲氧基乙醇 1.00 mL标准溶液0.50 mL样品0.50 mL 0.50 mL水0.50 mL蚁酸0.25 mL 0.25 mL 0.25 mL 0.25 mL6.2深颜色的果汁或者稀释度较低的果汁中的色素物质，将会对检测结果的判定产生影响。
为纠正因此产生的结果偏差，使用颜色空白对照实验。
对苹果汁、梨汁、浆果汁和蜂蜜采用颜色空白对照实验。
50mg/l标准溶液的水空白对照实验用于柑橘汁及其它高稀释倍数的果汁检测。
6.3盖紧离心管，充分摇匀（处理茚三酮时要戴乳胶手套）。
同时将所有离心管放入沸水浴中加热15分钟。
将离心管放在室温水浴中冷却5分钟。
向每个离心管中加入5ml异丙醇水溶液（1: 1）。
充分混匀后，用1cm比色皿，在520nm下测量每管溶液的吸光度（A520）（对于有絮状物的样品，如芒果，将样品离心后，把上清液用移液管小心转移至比色皿中，直接用离心管倾倒会将絮状物混到上清液中）。
每次测量之前，要先用待测溶液将比色皿润洗一下，倒掉润洗液，然后再进行测量。
在35分钟的冷却时间，内将所有待测溶液的A520检测完毕。
应戴乳胶手套，以避免茚三酮溶液滴溅到皮肤上，茚三酮溶液滴溅到皮肤上，会产生深紫色的色斑。
7•计算如果50 mg/L标准溶液的A值＜ 0.600，结果需经实验室主管的核准，才能上报结果，否则样品可能需要进行复测脯氨酸（mg/L） = （ A样品/ A标准溶液）x CC是标准溶液的浓度（通常为50 mg/L）对于脯氨酸含量的水果来说，结果必须要乘上稀释倍数（稀释后体积/原体积）对于浓缩果汁和蜂蜜来说，结果必须乘以稀释倍数（稀释后体积ml/预案重量g）结果用mg/kg表示8.参考资料AOAC官方分析方法出版时间15th Ed. （1990）方法编号979.20工作表脯氨酸样品编号# ___________________________________________ Date ________样品类型 ____________________________________________ Analyst ________样品标准稀释度(w/v) _______稀释度(v/v) _______离心管编号# _______空白管号 _______________A520吸光度___________A 520空白吸光度_________A 520 -----------如果50 mg/L标准溶液的A值＜ 0.600，结果需经实验室主管的核准,样品脯氨酸mg/L or mg/kg mg/L or mg/kg mg/L or mg/kg mg/L or mg/kg mg/L ormg/kg mg/L or mg/kg mg/L or mg/kgPROLINEPri ncipleThe prepared sample is treated with nin hydri n. Proli ne in the sample reacts to form an orange derivative. Absorba nee is measured at 520 nm versus appropriate reage nt bla nk.ApplicabilityThis method is applicable to the determ in ati on of proli ne in hon ey, fruit juices and concen trates. Other applicati ons of this method must be in dividually validated.Reagents and EquipmentProline 脯氨酸3% ninhydrin in 2-methoxy ethanol (0.3 g of ninhydrin dissolved in 10 mL 2-methoxyethanol is satisfactory; make up fresh daily)3%的茚三酮在2-甲氧基乙醇(0.3 g茚三酮溶解在10 mL 2-甲氧基乙醇；每天补充新的) 2-methoxy ethanol 2-甲氧基乙醇formic acid (96%) 蚁酸(96%) (甲酸)aqueous isopropanol (2- Propanol ) - diluted 1+1 水：异丙醇1：115 mL screw cap glass centrifuge tubes (be sure that there are no chips on the rim of the tube; dispose of chipped tubes) 15 mL 的带螺帽的玻璃离心管(确定管子的边没有破损；除掉有破损的瓶子) spectrophotometer set to measure absorbance at 520 nm 520 nm 测定吸光度1 cm glass cuvettes 1 cm 的玻璃小管Sample PreparationApple, pear and most berry juices are run single strength. 苹果，梨和多数浆果类的汁液是直接做。
Citrus juices are diluted 1+20 with water. 柑橘类的汁液要用水稀释 1 ：20 。
Other fruit juices should be diluted appropriately such that the proline concentration in the diluted sample is less than 50 mg/L (see dilution table). 其它水果汁液也应该适当的稀释使脯氨酸的浓度在稀释后达到小于50 mg/L 。
Fruit juice concentrates are diluted to single strength with water, and then further diluted appropriately. 浓缩果汁用水稀释到原来的浓度，然后再适当的稀释。
Honey is diluted 2.5 g to 50 mL with water. 蜂蜜取2.5 g 用50 mL 的水稀释。
Centifuge turbid samples for approximately 5 minutes prior to analysis to remove suspended material; use clear supernatant for analysis. 浑浊的样品，在分析前5 分钟离心，移去悬浮物，用清亮的浮在表面的去测。
Dilution Table for Single Strength JuiceDilutio n from ColorSin gle Stre ngth Bla nk Sample TypeApple 1 1yesApricot 21:1 yesAron ia 1 1yesBanana 1 1yes Blackberry 1 1yesCherry 1 1yesCran berry 1 1yesGrape 16:1 yes Grapefruit 21:1 noGuava 3:1 yesKiwi 1 1yesLem on 21:1 noLime 21:1 noMan dari n 21:1 noMango 1 1yesNectari ne 21:1 noOrange 21:1 noPapaya 1 1yesPassi on Fruit 1 1yesPeach 6:1 yesPin eapple 1 1yesPlum 7:1 yesPrune 16:1 yes Raspberry 5:1 yes Strawberry 1 1yesTan geri ne 21:1 noTomato 1 1yesStan dard Preparati onPrepare a proli ne stock soluti on (500 mg/L) by dissolvi ng 0.0500 g proli ne in water and mak ing up to 100 mL. This soluti on should be stored refrigerated and prepared fresh mon thly.准备脯氨酸标准储备溶液(500 mg/L):用水溶解0.0500 g脯氨酸至100 mL ,溶液保存到冰箱，每月配制新的标品。