双特异性抗体mAb04-MICA对人白血病细胞K562的体内外抗肿瘤活性
疫苗前沿-个体化肿瘤疫苗应用于肺癌免疫治疗,有望增强抗肿瘤效果!
疫苗前沿|个体化肿瘤疫苗应用于肺癌免疫治疗，有望增强抗肿瘤效果肺癌是我国也是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，近年来，免疫治疗在肺癌的生物治疗领域取得了巨大进展，免疫卡控点抑制剂、基因修饰的特异性免疫细胞及疫苗成为研究的热点。
肿瘤疫苗可以通过靶向肿瘤细胞的特异性抗原来激发个体的免疫反应，从而产生抵抗肿瘤的效应。
疫苗针对肿瘤的特异性抗原有多种，包含肿瘤细胞，带有病毒载体的DNA，蛋白质或肽等，而联合佐剂接种能增强抗原的特异性免疫反应。
肿瘤疫苗治疗的最终目标是利用免疫系统的固有诱导性和特异性产生持久且记忆力强的活性，从而产生更快、更强大的免疫能力。
一、肿瘤抗原相关疫苗1、TG4010TG4010是一种靶向黏蛋白1(MUC1)抗原的治疗性疫苗，通过病毒载体修饰表达MUC1和白细胞介素-2，诱导及增强细胞的免疫应答反应。
2、L-BLP25L-BLP25是由BLP25脂肽、三种脂质和免疫佐剂单磷酰脂质A构成的脂质体疫苗。
L-BLP25疫苗能够经过靶向MUC1，诱导细胞免疫反应，可能导致表达MUC1的肿瘤组织产生免疫排斥反应。
3、黑色素瘤相关抗原A3(MAGE-A3)MAGE-A3是癌睾抗原的一类，主要在肿瘤组织中表达。
此外，MAGE-A3还在胚胎发育阶段、睾丸及胎盘组织中表达。
MAGE-A3通过细胞表面的人类白细胞抗原分子呈递给特定的T细胞，激发免疫反应。
4、纽约食管鳞状细胞癌1(NY-ESO-1)NY-ESO-1是癌睾抗原的代表性抗原之一，在生殖细胞和胎盘细胞中的表达受限，而在肿瘤细胞中重新表达，属于肿瘤特异性抗原，是免疫疗法的优选靶点抗原，不仅能引起体液和细胞免疫反应，还因为限定的表达方式避免了可能的脱靶毒性。
5、CIMAvax-EGFCIMAvax-EGF疫苗的成分为表皮生长因子受体(EGFR)蛋白耦合蛋白。
CIMAvax-EGF疫苗经过触发表达EGFR的癌细胞，激发免疫系统，产生特异性免疫反应。
略论shRNA对人白血病K562 ADM细胞多药耐药能力的完全逆转
表1 shRNA寡核苷酸片断的序列 （略）
图1 pGenSil-l质粒的结构。pGenSil-l质粒 （略）
1.4 细胞转染及稳定转染克隆的筛选 当K562/ADM细胞在六孔板内达到50%~60%满时进行转染。具体操作步骤按Lipofectamine 2000TM说明书建议的操作步骤进行。细胞转染48h后，将细胞转入直径10cm的培养板中并加入含400μg/ml G418的培养液（不含阿霉素）进行培养。3周以后，将稳定转染的克隆挑入96孔板中并扩增。期间利用荧光显微镜进行观察，稳定转染的克隆发绿色荧光；而没有稳定转染的细胞没有绿色荧光，丢弃这一部分细胞。
1.2 细胞培养 细胞在37°C、5%CO2、饱和湿度的二氧化碳培养箱中培养。培养液为含10%热灭活新生牛血清的RPMI1640细胞培养液。在K562/ADM细胞的培养液中加入浓度为1.0mg/L的阿霉素以维持其耐药性。
1.3 siRNA的设计及shRNA的构建 利用siRNA设计软件（网址摘要：http摘要://）设计了两条序列，分别针对MDR1基因（accession number摘要:M14758）的不同编码区域。MDR-A摘要:5′-AAC TTT GGC TGC CAT CAT CCA -3′;MDR-B摘要:5′- AAG GCC TAA TGC CGA ACA CAT-3′,分别针对MDR1 mRNA的第586-606及第3494-3514核苷酸区域。这两个序列分别被构建到一段短的双链DNA序列中（武汉晶赛公司合成，表1）。目的序列作为反义链，其正义链和反义链互补，中间间隔一段长9个核苷酸的发夹环，两端分别插入终止序列及Hind Ⅲ或BamH1酶切位点。然后将这两个序列分别插入pGenSil-l（武汉晶赛公司,图1）质粒中。反应按武汉晶赛公司建议的操作流程进行。
实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测专家共识
实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测专家共识摘要外周血细胞免疫功能检测在实体肿瘤免疫治疗受益者筛选、免疫相关不良反应监测、肿瘤疗效及预后评估等方面受到临床关注。
为促进临床有效选择和解读实体肿瘤诊疗相关的外周血细胞免疫功能指标，中国医师协会检验医师分会、北京医师协会医学检验专科医师（技师）分会、国家癌症中心、国家肿瘤区域医疗中心、国家医学检验临床医学研究中心（中国医科大学附属第一医院）组织相关领域的学术专家，对外周血细胞免疫功能指标包括T淋巴细胞亚群精细分型、髓源性抑制细胞和细胞因子的临床应用价值进行了充分总结，并撰写了专家共识，同时对外周细胞免疫功能实验室检测指标和方案或方法给出了推荐和参考方向，以期为实体肿瘤患者的精准诊疗提供帮助。
T细胞介导的细胞免疫应答是宿主抗肿瘤免疫最主要的途径，也是肿瘤发生免疫逃逸形成免疫抑制的关键靶点。
肿瘤微环境的局部细胞免疫，以及基于脾脏、淋巴结和血循环的外周细胞免疫的功能状态与肿瘤发生发展和治疗转归密切相关［1］。
基于外周血的细胞免疫功能检测在筛选免疫治疗受益者、监测免疫相关不良反应（immune-related adverse events，irAE）及评估肿瘤疗效和预后方面的作用越来越受到临床关注。
如何正确选择和解读实体肿瘤诊疗相关的外周血细胞免疫功能指标，目前国内外尚无统一规范。
为此，中国医师协会检验医师分会、北京医师协会医学检验专科医师（技师）分会、国家癌症中心、国家肿瘤区域医疗中心、国家医学检验临床医学研究中心组织在肿瘤免疫监测和流式细胞术分析淋巴细胞亚群领域经验丰富的专家，结合国内外进展，撰写实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测的专家共识，旨在帮助临床合理选择免疫指标评估外周血细胞免疫功能，以辅助实体肿瘤的精准诊疗。
鉴于细胞免疫功能在实体肿瘤免疫治疗中的重要价值，共识编写工作组关注细胞免疫应答从启动到发挥效应功能的全过程，针对参与细胞免疫应答的效应细胞、辅助细胞、负向免疫调节细胞等多种细胞亚群和免疫分子进行了临床研究证据的整合，筛选出在肿瘤免疫治疗监测、预后评估中具有指导价值的外周血细胞免疫功能实验室指标，并结合临床检验实践归纳为T淋巴细胞亚群精细分型，髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cell，MDSC）亚群分析和细胞因子水平检测三大类，并对这些指标的检测方案和临床应用选择作出了推荐。
体外诱导K562细胞伊马替尼耐药及其机理的初步探讨
体外诱导K562细胞伊马替尼耐药及其机理的初步探讨朱焕玲,刘 霆,孟文彤,贾永前四川大学华西医院血液科(成都610041) 【摘要】 目的 体外诱导K562细胞伊马替尼(i m atin ib)耐药并对其耐药性进行检测。
方法 以浓度递增的方法诱导K562对伊马替尼产生耐药,M T T法确定其耐药性。
R T2PCR方法半定量测定耐药细胞中B CR A B L基因水平,并进行B CR A B L基因序列测定。
流式细胞术测定P2gp表达。
高效液相色谱仪(H PL C)测定耐药细胞内药物浓度。
结果 ①浓度递增法成功诱导K562细胞伊马替尼耐药(K562R),K562R细胞能长期在含510Λmo l L的伊马替尼的培养液中生长。
②细胞生长曲线显示510Λmo l L伊马替尼作用于K562R细胞120h,其活细胞数量与0h无明显差别。
6个浓度梯度的伊马替尼(0、0.25、0.50、0.75、1.00、2.00Λmo l L)作用于K562细胞24h,发现所有浓度(除0Λmo l L外)伊马替尼均可抑制K562细胞的生长,24h细胞活力几乎为零。
③M T T法抑制率测定K562细胞半数抑制浓度约为0.75Λmo l L,K562R细胞约为7.5Λmo l L,耐药倍数约为10倍。
④H PL C细胞内药物浓度测定显示K562R胞内伊马替尼药物浓度低于K562细胞(P<0101),流式细胞检测未发现P2gp表达。
⑤374bp的B CR A B L基因序列分析未发现常规热点区域基因突变。
结论 体外成功诱导出伊马替尼耐药细胞——K562R细胞。
K562R耐药主要环节为胞内药物浓度降低,而胞内药物浓度降低与P2gp无关。
耐药机理需要进一步研究。
【关键词】 伊马替尼 抗药性 高效液相色谱仪 K562【中图分类号】 R733.71Establish m en t of an I ma ti n ib Resistance Cell L i ne K562R and Its Resistan t Pr i nc ip i a ZH U H uan2ling,L IU T ing,M EN G W en2tong,J IA Y ong2qian. D ep a rt m en t of H e m a tology,W est Ch ina H osp ita l,S ichuan U n iversi2 ty,Chengdu610041,Ch ina【Abstract】 Objective To estab lish an i m atin ib resistance cell line and to study its resistan t p rinci p ia.M eth-ods K562cells w ere cu ltu red in i m atin ib at gradually increased concen trati on s to generate their resistance cell line.M T T assay,R T2PCR,flow cytom etry and H PL C w ere u sed to clarify the po ssib le m echan is m s of the resis-tance.Results ①I m atin ib resistance cell line K562R w as successfu lly induced by con tinuou s cu ltu re in the p res2 ence of gradually increasing do ses of i m atin ib up to5Λmo l L.K562R cells w ere m ain tained in the m edia con tain ing 5Λmo l L i m atin ib.②P ro liferati on data show ed that cell grow th of K562R w as no t inh ib ited in5Λmo l L i m atin ib, w hereas the paren tal sen sitive cell w as sign ifican tly inh ib ited by up to2.0Λmo l L i m atin ib.③T he I C50of K562R w as abou t7.5Λmo l L w h ich w as ten ti m es h igher than that of the paren tal cell.④H PL C revealed that the in tra2 cellu lar i m atin ib concen trati on of K562R w as strik ingly low er than that of the paren tal cells(up to27.82fo ld).By flow cytom etry,P2gp w as no t detected on K562R cell,indicating that low in tracellu lar i m atin ib concen trati on m ay no t be due to P2gp m ediated efflux.⑤Sequence analysis of the374bp A B L k inase dom ain show ed no m u tati on in K562R cell.Conclusion A n i m atin ib resistance cell line K562R has been successfu lly estab lished.L ow in tracellu2 lar i m atin ib concen trati on is a key link in the chain of cell resistance.【Key words】 I m atin ib D rug resistance H PL C K562 甲磺酸伊马替尼(i m atin ib m esylate,I M)是一类苯胺嘧啶化合物,具有高度特异的酪氨酸激酶抑制作用,能抑制酪氨酸激酶、干细胞生长因子受体(c2k it)和血小板衍生生长因子受体(PD GFR)。
二氢杨梅素对K562_A02细胞阿霉素耐药性的逆转作用_李碧蓉
赖效应（ r1 = 0. 37，r2 = 0. 38） ，IC50 分别为 71. 23 ± 6. 51 和 72. 88 ± 5. 49 mg / L。5、10 和 20 mg / L 为 DM Y 的低细胞 毒性剂量。DM Y（ 5、10 和 20 mg / L） 增敏 K562 细胞和 K562 / A02 细胞对 ADM 耐药性且呈剂量依赖效应（ r1 = －
李碧蓉1 ，王乐1 ，韩维娜1 ，夏琳钦2 ，唐姝2*
邵阳医学高等专科学校 1 生理学教研室，2 病理学教研室，湖南邵阳 422000
摘要 目的： 探讨二氢杨梅素（ dihydromyricetin，DM Y） 对人慢性粒细胞白血病耐药细胞株 K562 / A02 细胞对阿
霉素（ adriamycia，ADM ） 耐药的逆转作用及可能机制。方法： 用 DM Y （ 5、10、20、40、60、80 和 100 mg / L ） 和 ADM
0． 62，r2 = － 0． 71） ，耐药逆转倍数介于 1. 38 － 28. 59 之间。DM Y（ 5，10 和 20 mg / L） 增加 K562 / A02 细胞内 ADM
的10 和 20 mg / L） 均显著降低了 K562 / A02 细胞中 P-
gp、M ＲP1、GSTπ 和 BCL-2 蛋白表达，呈剂量依赖性（ r1 = － 0. 41，r2 = － 0. 37，r3 = － 0. 58，r4 = － 0. 46） 。与
ADM 组比较，DM Y（ 5，10 和 20 mg / L） + ADM 组 P-gp、M ＲP1、GSTπ 和 BCL-2 蛋白表达均显著降低（ r1 = － 0. 55，
J Exp Hematol 2016； （ 5） ： 1369 － 1374
抗肿瘤药物筛选方法及体内药效学评价体系
抗肿瘤药物筛选方法及体内药效学评价体系建立一套包括细胞毒类药物、肿瘤血管生成抑制剂、肿瘤耐药逆转剂、肿瘤分化诱导剂、肿瘤治疗增敏剂、抗肿瘤转移、抗肿瘤药物体内作用的药效学研究和评价体系及相应的标准操作规程以及抗肿瘤药物作用新机制的研究。
模型名称筛选目的模型类型1. 抗肿瘤体外筛选（MTT，SRB）小鼠黑色素瘤（B-16）抗肿瘤药细胞人早幼粒细胞性白血病（HL-60）抗肿瘤药细胞人红白血病细胞（K-562）抗肿瘤药细胞鼻咽癌（KB）抗肿瘤药细胞人高分化胃腺癌（MKN-28）抗肿瘤药细胞人中分化胃腺癌（SGC-7901）抗肿瘤药细胞人低分化胃腺癌（BGC-823）抗肿瘤药细胞人低分化胃腺癌（MKN-45）抗肿瘤药细胞人低分化胃腺癌（MGC-823）抗肿瘤药细胞人肝细胞性肝癌（SMMC-7721）抗肿瘤药细胞人肝细胞性肝癌（BEL-7402）抗肿瘤药细胞人肺癌（A-549）抗肿瘤药细胞人肺癌（SPC-A-1）抗肿瘤药细胞人肺癌（NCI-H460）抗肿瘤药细胞人结肠腺癌（CACO-2）抗肿瘤药细胞人结肠腺癌（HCT-116）抗肿瘤药细胞人结肠腺癌（HT-29）抗肿瘤药细胞人乳腺癌（MCF-7）抗肿瘤药细胞人乳腺癌（MDA-MB-231）抗肿瘤药细胞人宫颈癌（Hela）抗肿瘤药细胞人类口腔表皮样癌（KB）抗肿瘤药细胞人卵巢腺癌（SK-OV-3）抗肿瘤药细胞人卵巢腺癌（HO-8910）抗肿瘤药细胞人前列腺癌（PC-3）抗肿瘤药细胞人脑瘤（SF-726）抗肿瘤药细胞人脑瘤（SF-736）抗肿瘤药细胞2. 肿瘤分化诱导剂的筛选NBT/MTT法分化诱导剂的筛选细胞3. 肿瘤耐药抑制剂的筛选人红白血病细胞耐药株（K562/A02）耐药抑制剂的筛选细胞人乳腺癌耐药株（MCF-7/ADM）耐药抑制剂的筛选细胞4. 肿瘤血管生成抑制剂的筛选人血管内皮细胞模型（增殖、迁移、血管形成）肿瘤血管生成抑制剂的筛选细胞鸡绒毛膜尿囊和卵黄膜囊（CAM）肿瘤血管生成抑制剂的筛选鸡胚组织大鼠动脉环肿瘤血管生成抑制剂的筛选动脉组织5.体内抗肿瘤评价小鼠S-180肉瘤体内抗肿瘤评价ICR小鼠小鼠H-22肝癌体内抗肿瘤评价ICR小鼠小鼠艾氏腹水瘤体内抗肿瘤评价ICR小鼠小鼠Lewis肺癌体内抗肿瘤评价C57小鼠小鼠B-16黑色素瘤体内抗肿瘤评价C57小鼠鼻咽癌（KB）体内抗肿瘤评价裸小鼠人高分化胃腺癌（MKN-28）体内抗肿瘤评价裸小鼠人中分化胃腺癌（SGC-7901）体内抗肿瘤评价裸小鼠人低分化胃腺癌（BGC-823）体内抗肿瘤评价裸小鼠人低分化胃腺癌（MKN-45）体内抗肿瘤评价裸小鼠人低分化胃腺癌（MGC-823）体内抗肿瘤评价裸小鼠人肝细胞性肝癌（SMMC-7721）体内抗肿瘤评价裸小鼠人肝细胞性肝癌（BEL-7402）体内抗肿瘤评价裸小鼠人肺癌（A-549）体内抗肿瘤评价裸小鼠人肺癌（SPC-A-1）体内抗肿瘤评价裸小鼠人肺癌（NCI-H460）体内抗肿瘤评价裸小鼠人结肠腺癌（HCT-116）体内抗肿瘤评价裸小鼠人结肠腺癌（HT-29）体内抗肿瘤评价裸小鼠人乳腺癌（MCF-7）体内抗肿瘤评价裸小鼠人乳腺癌（MDA-MB-231）体内抗肿瘤评价裸小鼠人宫颈癌（HELA）体内抗肿瘤评价裸小鼠人类口腔表皮样癌（KB）体内抗肿瘤评价裸小鼠人卵巢腺癌（SK-OV-3）体内抗肿瘤评价裸小鼠人卵巢腺癌（HO-8910）体内抗肿瘤评价裸小鼠人前列腺癌（PC-3）体内抗肿瘤评价裸小鼠6.抗肿瘤转移体内评价人乳腺癌（MDA-MB-435）抗肿瘤转移体内评价裸小鼠人肝细胞性肝癌（IM3）抗肿瘤转移体内评价裸小鼠7. 肿瘤耐药抑制剂的体内评价人红白血病细胞耐药株（K562/A02）耐药抑制剂的体内评价SCID小鼠人乳腺癌耐药株（MCF-7/ADM）耐药抑制剂的体内评价裸小鼠8. 人脑瘤原位接种评价小鼠胶质瘤抗人脑瘤药物体内评价ICR小鼠人脑瘤（SF-726）抗人脑瘤药物体内评价裸小鼠人脑瘤（SF-736）抗人脑瘤药物体内评价裸小鼠。
红白血病细胞系K562诱导外周血NK细胞凋亡机制的初步研究
红白血病细胞系K562诱导外周血NK 细胞凋亡机制的初步研究红白血病细胞系K562诱导外周血NK细胞凋亡机制的初步研究摘要：本研究旨在探索红白血病细胞系K562在外周血NK细胞中引起凋亡的机制以及调节性T细胞（Treg）数量的变化。
使用流式细胞术检测Treg和NK细胞的表型，并通过Annexin V/PI染色和细胞周期分析评价NK细胞凋亡。
对与凋亡相关的信号通路进行了进一步探讨。
同时，评价了癌细胞-免疫细胞交互作用的影响因素。
结果发现，K562导致外周血NK细胞凋亡，并与NF-κB信号通路相关。
此外，K562也可增加Treg的数量且减少T细胞激活标志物CD69的表达程度。
通过康复试验发现，NF-κB信号通路抑制剂Bay 11-7082可以降低K562诱导的NK细胞凋亡率，增加CD69表达和降低Treg数量。
这些结果揭示了红白血病细胞系K-562可以引起外周血NK细胞凋亡，并增加Treg数量的机制，为后续NK细胞免疫治疗策略的研究提供了基础数据。
关键词：红白血病，K562，NK细胞，T细胞，Treg，NF-κB，凋亡，免疫治疗引言：红白血病是一种常见的血液系统肿瘤，治疗难度大且效果不甚理想。
近年来，人们致力于寻找新的治疗策略，其中包括免疫治疗。
NK细胞作为具有天然杀伤活性的一类免疫细胞，可以通过杀伤癌细胞增强机体免疫力，因此，将NK细胞应用于治疗红白血病备受关注。
然而，前期研究发现，K562细胞系可以通过唤醒Treg增加NK细胞的凋亡率加重红白血病的症状。
因此，研究K562对NK细胞凋亡和Treg数量的调节机制，可以为NK细胞免疫治疗研究提供重要理论数据。
材料与方法：实验对象：红白血病患者外周血（11例），健康人外周血（8例）实验组：患者外周血中分离出NK细胞，细胞由K562处理24h，治疗前7h添加Bay 11-7082。
另外，还设置了Treg/Foxp3染色组、螺旋体多糖予以刺激组，制备了癌-T细胞共培养试验体系。
p-糖蛋白在人白血病多药耐药细胞株K562A02线粒体上表达的研究的开题报告
p-糖蛋白在人白血病多药耐药细胞株K562A02线粒体上表达的研究的开题报告【开题报告】一、选题背景及研究意义多药耐药是白血病治疗中一个普遍存在的问题，当前临床上使用的大多数抗肿瘤药物都存在多药耐药的现象，这就给临床治疗带来了很大的挑战。
因此，研究白血病多药耐药的分子机制已成为当前研究的热点问题之一。
P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）是一种跨膜输运蛋白，能够将多种化合物从内部输送到细胞外，包括许多抗癌药物。
P-糖蛋白在多药耐药的癌细胞中高度表达，已成为临床上诊断多药耐药的主要指标。
因此，研究P-糖蛋白在多药耐药白血病细胞中的表达和其对癌细胞的作用机制更加具有现实意义。
线粒体是细胞内储能和凋亡的重要场所，多药耐药癌细胞的线粒体功能异常是引起化疗患者治疗失败的一个主要因素。
因此，研究P-糖蛋白在白血病多药耐药细胞株K562A02线粒体上的表达及其对线粒体功能的影响将有助于深入了解多药耐药的分子机制。
二、研究目的本研究旨在探讨P-糖蛋白在人白血病多药耐药细胞株K562A02线粒体上的表达情况以及其对线粒体功能的影响，为临床治疗多药耐药白血病提供新的治疗策略。
三、研究内容与方法1、建立人白血病多药耐药细胞株K562A02模型将K562细胞株连续压制5-20次，筛选出具有多药耐药性的细胞株作为实验材料。
2、检测K562A02细胞株P-糖蛋白表达情况及线粒体功能Western blot和RT-qPCR方法检测K562A02细胞株P-糖蛋白的表达水平；采用荧光探针，检测K562A02细胞株线粒体功能如膜电位、呼吸、自由基等参数的变化。
3、通过基因克隆技术构建P-糖蛋白过表达和沉默的K562A02细胞株采用基因克隆技术将P-糖蛋白基因克隆至真核表达质粒，转染至K562A02细胞株中，通过Western blot检测P-糖蛋白的表达情况。
利用siRNA技术对P-糖蛋白进行沉默，通过Western blot及RT-qPCR检测P-糖蛋白的表达水平。
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学 报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１８，４９（１）：１１７－１２４ 第 ４９卷
ｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ．Ｂｅｓｉｄｅｓ牞ｍＡｂ０４ＭＩＣＡｓｈｏｗｅｄｈｉｇｈｂｉｎｄｉｎｇｃａｐａｃｉｔｙｔｏｍｕｒｉｎｅＶＥＧＦＲ２．Ｔｈｅｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙｅｘｈｉｂｉｔｅｄｓｕｐｅｒｉｏｒａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｆｉｃａｃｙｔｏｔｈｅｍａｔｅｒｎａｌｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄｐｒｏｌｏｎｇｅｄｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｏｆ ｔｕｍｏｒｂｅａｒｉｎｇｍｉｃｅ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＫｉ６７牞ｐＶＥＧＦＲ２牞ＶＥＧＦａｎｄＣＤ３４ｉｎｍＡｂ０４ＭＩＣＡｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｍＡｂ０４ＭＩＣＡ ｃｏｕｌｄａｔｔｅｎｕａｔｅｔｈｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆＶＥＧＦＲ２ ａｎｄｉｍｐａｉｒａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｔｈｅｔｕｍｏｒｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｍｅｎｔ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ牞ｍＡｂ０４ＭＩＣＡｃｏｕｌｄｂｅｆｕｒｔｈｅｒｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｓａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｔｕｍｏｒｔａｒｇｅｔｅｄｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｇｅｎｔｆｏｒｌｅｕｋｅｍｉａ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｂｏｄｙ牷ＶＥＧＦＲ２牷ＭＩＣＡ牷ｉｍｍｕｎｅｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ牷ｌｅｕｋｅｍｉａ
ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８．２０１８０１１７
引用本文 杜晓典，孙福谋，袁敏讷，等 双特异性抗体 ｍＡｂ０４ＭＩＣＡ对人白血病细胞 Ｋ５６２的体内外抗肿瘤活性［Ｊ］．中国药科大学学 报，２０１８，４９（１）：１１７－１２４ Ｃｉｔｅｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｓ：ＤＵＸｉａｏｄｉａｎ，ＳＵＮＦｕｍｏｕ，ＹＵＡＮＭｉｎｎｅ，ｅｔａｌＡｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｂｏｄｙｍＡｂ０４ＭＩＣＡｔｏｈｕｍａｎｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌ Ｋ５６２ｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏ［Ｊ］．ＪＣｈｉｎａＰｈａｒｍ Ｕｎｉｖ，２０１８，４９（１）：１１７－１２４
收稿日期 ２０１７１２２６ 通信作者 Ｔｅｌ：０２５－８３２７１３９５ Ｅｍａｉｌ：ｍｉｎｗａｎｇ＠ｃｐｕｅｄｕｃｎ Ｔｅｌ：０２５－８３２７１４８３ Ｅｍａｉｌ：ｊｕａｎｃｐｕ＠１２６ｃｏｍ
基金项目 国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１４７３１２５）；江苏省自然科学基金资助项目（ＮｏＢＫ２０１６１４５９）；江苏高校“青蓝工程”资 助项目（２０１４）；大学生创新创业训练计划资助项目（Ｎｏ２０１７１０３１６０３２Ｘ）
摘 要 探讨双特异性抗体 ｍＡｂ０４ＭＩＣＡ对人白血病细胞 Ｋ５６２的体内外抗肿瘤活性。前期研究显示，ｍＡｂ０４ＭＩＣＡ具有 抗血管生成和重塑肿瘤微环境中的免疫监视作用，体外对 Ｋ５６２细胞具有良好的抗肿瘤作用。通过 ＥＬＩＳＡ鉴定 ｍＡｂ０４ ＭＩＣＡ对抗原 ＶＥＦＧＲ２和受体 ＮＫＧ２Ｄ的亲和力；ＣＣＫ８法分析 ｍＡｂ０４ＭＩＣＡ对 Ｋ５６２的体外增殖抑制作用；采用流式细胞术 分析 ｍＡｂ０４ＭＩＣＡ对鼠源 ＶＥＧＦＲ２的交叉反应能力；建立 Ｋ５６２皮下荷瘤 ＢＡＬＢ／ｃ裸鼠模型，通过测定瘤体积、称量瘤重、观 测荷瘤鼠生存期等方法检测目的抗体的体内抗肿瘤活性；免疫组化方法测定其对肿瘤组织本身及组织内新生血管生成的 影响。结果显示：ｍＡｂ０４ＭＩＣＡ对 ＶＥＧＦＲ２和 ＮＫＧ２Ｄ都具有良好的亲和力，并且在体外能够特异性地抑制 ＶＥＧＦ诱导的 Ｋ５６２细胞的增殖；ｍＡｂ０４ＭＩＣＡ与鼠源 ＶＥＧＦＲ２具有较高的结合能力；相同给药剂量下，双特异性抗体抑瘤作用显著优于 母体单抗，且能延长荷瘤裸鼠生存期，其中 Ｋｉ６７、ｐＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦ及 ＣＤ３４的表达量显著降低，提示 ｍＡｂ０４ＭＩＣＡ可通过 特异性地阻碍瘤组织 ＶＥＧＦＲ２的磷酸化而控制瘤体新生血管的生成，在治疗白血病方面具有潜在的应用价值。 关键词 双特异性抗体；血管内皮生长因子受体 ２；ＭＨＣＩ相关抗原分子 Ａ；免疫监视；白血病 中图分类号 Ｑ５１１；Ｒ９６５ 文献标志码 Ａ 文章编号 １０００－５０４８（２０１８）０１－０１１７－０８
学报
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１８，４９（１）：１１７－１２４
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双特异性抗体 ｍＡｂ０４ＭＩＣＡ对人白血病细胞 Ｋ５６２的 体内外抗肿瘤活性
杜晓典，孙福谋，袁敏讷，王 斐，刘雅利，尚鹏钊，王 ，，南京 ２１０００９）
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