淋球菌核酸扩增荧光检测(NG-DNA)
淋球菌核酸检测试剂盒的质量评价
淋球菌核酸检测试剂盒的质量评价王春娥;卢旭;石继春;刘茹凤;李红;陈琼;唐静;陈翠萍;叶强【摘要】目的对12种淋球菌核酸检测试剂盒进行质量评价.方法应用12种淋球菌PCR试剂盒质控参考品,按照各试剂盒说明书的方法提取模板及核酸扩增,检测各试剂盒的阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、批内精密度及最低检测限,并进行比较分析.结果 12种试剂盒的阳性参考品符合率及阴性参考品符合率均为100％;批内精密度:各试剂盒检测结果Ct值的变异系数均小于5.0％;12种试剂盒中有10种试剂盒的最低检出限能达到1×103个菌/mL,其中3种能达到1×102个菌/mL,但另外2种试剂盒的最低检出限仅达到1×104个菌/mL.结论 12种淋球菌核酸检测试剂盒质量均较好,性能可靠.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2016(013)024【总页数】4页(P8-11)【关键词】淋球菌;试剂盒;国家参考品;实时PCR【作者】王春娥;卢旭;石继春;刘茹凤;李红;陈琼;唐静;陈翠萍;叶强【作者单位】中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050【正文语种】中文【中图分类】R515［Avsteact］Ov jective To evaluate twelve PCR kits for detection of Neisseria gonorrhea.M ethods Twelve kinds of Neisseria gonorrhoeae PCR kitwere selected，the templates extract and nucleic acid amplification of the quality control reference were conducted according to the kit introduction.The coincidence rates of positive and negative reference，the within-run precision and the lowest detection limit of the kits were detected according the national reference panel of Neisseria gonorrhea and were comparatively analyzed.Results The coincidence rates of positive reference and negative reference of all kits were 100%，and the CV of test results for precision was all less than 5.0%.The lowest detection limit of 10 kits was 1×103bacteria/mL，and 3 kits was 1×102bacteria/mL among them.But the CV of the other 2 kits was only 1×104ba cteria/mL.Conclusion The twelve PCR kits for Neisseria gonorrhea are reliable.［Key woeds］Neisseria gonorrhea；Kit；National reference panel；Real-time PCR淋球菌常可引起人类泌尿生殖系统化脓性感染，俗称淋病。
淋病诊断的金标准
淋病诊断的金标准淋病是由淋球菌引起的一种性传播疾病，常见于青壮年人群。
淋病的治疗非常重要，因为不及时治疗可能导致多种严重的后果，如不孕症、输卵管炎、子宫内膜异位症、阴道狭窄和盆腔炎等症状。
早期的淋病症状会与其它疾病症状相似，因此进行淋病的准确诊断非常重要。
目前，淋病诊断的金标准是实验室检测淋球菌。
下面将介绍几种主要的检测方法。
1.聚合酶链反应(PCR)检测PCR是一种高灵敏度和高特异性的分子生物学技术，可以扩增特定DNA序列。
PCR检测法采用采集尿液或分泌物样本中的淋球菌DNA，通过放大特异的DNA片段来检测样本中是否存在淋球菌。
这种方法可以检测到很小的淋球菌数量，因此被视为淋病检测的金标准。
PCR方法非常适用于无症状感染的早期诊断，而且具有高度的敏感性和特异性。
2. 细菌培养法检测细菌培养法是最传统的淋球菌检测方法之一。
该方法采用患者收集的分泌物样本，特别是尿液样本，将其用于培养淋球菌。
这种方法的优点是可以非常确切地识别淋球菌，但需要较长时间才能获得结果，通常需要等待3至5天。
此外，细菌培养法的特异性和灵敏性相对较低，因此可能会产生假阳性或假阴性结果。
3. 病原体抗原检测病原体抗原检测是在采集尿液、分泌物等样本后，通过检测淋球菌表面抗原来发现病原体的一种方法。
这种方法具有较高的特异性和敏感性，通常可以在几个小时内获得结果。
但是，病原体抗原检测的缺点是不能区分活菌和死菌，而且对于静止的菌，也难以检测到它们。
4. 免疫层析技术（ICT）检测免疫层析技术是一种免疫学检测方法，它可以检测到尿液、分泌物或血清样本中淋球菌的特异性抗原，是非常快速和便捷的检测方法。
免疫层析技术通常可以在20分钟内获得结果,同时具有适当的灵敏度和特异性,但需要注意的是，免疫层析技术检测的金标准要求的许多实验条件都需要严格的规范化和标准化，以保证其准确性。
结论：淋病是一种性传播疾病，具有严重的后果。
准确诊断对于早期治疗非常重要。
淋病的报告单模板
淋病的报告单模板摘要淋病是一种性传播疾病，由淋球菌引起。
本文提供了淋病的报告单模板，包括患者信息、检验结果和治疗建议等内容，以供医务人员参考。
患者信息姓名：性别：出生年月：联系电话：病历号：临床表现淋病的症状通常在感染后1-3周内出现，表现为以下症状：•尿道分泌物增多•尿道烧灼、瘙痒、疼痛等不适感•尿频、尿急、夜尿增多•下腹部不适或疼痛•性交后局部不适或疼痛检验结果医生应根据临床表现及检测报告确定诊断结果。
PCR检测PCR检测是目前最为常用的淋病检测方法，其灵敏度和特异性均较高。
一般情况下，PCR检测的结果可在24-48小时内出来。
淋球菌PCR检测结果：阳性/阴性：细菌培养淋病细菌培养需要较长时间，一般需要3-7天。
如果淋球菌分离出来，则诊断结果为淋病。
淋球菌细菌培养结果：阳性/阴性：治疗建议淋病需要使用抗生素治疗，且应避免直接性接触，以免交叉感染。
抗生素治疗淋病治疗的首选药物为头孢菌素或青霉素类抗生素，例如：•头孢孟多（Ceftriaxone）•青霉素G•百福龙（Azithromycin）其他治疗方法•休息•饮食清淡•多喝水•禁止饮酒、性生活预后如果得到及时、恰当的治疗，淋病的预后通常很好。
但如果不治疗或治疗不及时不充分，则可能导致严重后果。
结论淋病是一种常见的性传播疾病，医务人员应该密切关注淋病的诊断和治疗。
本文提供了淋病的报告单模板，帮助医务人员更清晰地了解患者的症状、检测结果和治疗建议。
女性淋球菌检查方法
女性淋球菌检查方法女性淋球菌是一种常见的性传播疾病，由淋球菌引起。
它可以引起女性生殖道的感染，包括宫颈、子宫和输卵管等部位。
如果不及时治疗，女性淋球菌感染可能导致一系列严重的并发症，包括不孕症和盆腔炎等。
因此，对于有性活动的女性来说，及时进行女性淋球菌检查非常重要。
女性淋球菌的检查通常可以通过下面几种方法进行：1. 宫颈涂片检查：这是最常用的女性淋球菌检查方法之一。
医生会使用一根专用的刷子从宫颈表面采集细胞样本，并送到实验室进行分析。
实验室会检测细胞样本中是否存在淋球菌的DNA，从而确定是否感染淋球菌。
2. 核酸扩增技术：核酸扩增技术是一种先进的分子生物学技术，可以直接检测淋球菌的遗传物质。
这种方法的优势在于其高度敏感性和特异性，可以在病原体数量非常低的情况下检测到淋球菌感染。
3. 荧光抗体法：这种方法是通过荧光标记的抗体与淋球菌细胞壁上的特定抗原结合来检测淋球菌感染。
医生会在宫颈涂片上涂抹荧光抗体，然后使用荧光显微镜观察并分析结果。
在进行女性淋球菌检查之前，需要注意以下几点：1. 检查时间：女性淋球菌通常在感染后2-6天内才能被检测出来，因此最佳的检查时间是在性接触后的7天内进行。
如果在这个时间范围内进行检查，可以提高检查结果的准确性。
2. 避免尿液排出：在进行女性淋球菌检查时，需要避免在检查前2小时内排尿。
排尿会冲洗掉淋球菌，导致检查结果不准确。
3. 避免使用抗生素：如果已经接受抗生素治疗，可能会在检查时抑制淋球菌的生长，导致检查结果为假阴性。
因此，在检查前需要避免使用任何抗生素。
女性淋球菌的检查是一项简单而重要的健康检查，可以有效地发现感染并及时进行治疗。
在进行检查时，需要选择合适的方法并注意检查时间和准备事项。
如果发现感染，及时就医并按照医生的建议进行治疗。
此外，还需要采取预防措施，如正确使用安全套，避免多次性伴侣和定期接受性健康检查，以降低感染的风险。
女性淋球菌虽然对女性的生殖系统健康造成了严重威胁，但只要我们保持健康的生活方式，定期接受检查和治疗，就可以有效地预防和控制淋球菌感染的风险。
淋病奈瑟菌的分子生物学检验
一、淋病奈瑟菌的基因组结构特征
淋病奈瑟菌FA1090菌株是最早被完成测序研 究的淋病奈瑟菌菌株之一，它的染色体DNA长度 为2.15Mbp，其中G+C含量为52.68%。编码区的 DNA长度占总长度的78%。共含有2069个基因，包 括2002个具有编码功能的基因和67个编码结构性 RNAs基。Chung GT等人在2008年报道了淋病奈瑟 菌新菌株NCCP11945的基因组结构。他们发现 NCCP11945染色体的DNA长度为2.23Mbp，据估计 可以编码2622个开放性阅读框。同时，NCP11945 含有一个能编码12个ORFs的质粒，其DNA长度为 4153bp。据他们估计，整个基因组的编码基因的 密度约为87%。全基因组平均G+C含量为52.4%。 这与FA1090菌株相类似。
4．链替代扩增技术
SDA是一种基于酶促反应的新的DNA体外等 温扩增技术。目前使用较多的是Becton Dikinson公司生产的Probe Tec ET，可以同时 对CT和NG进行检测，Probe Tec ET特异性扩增 NG染色体PivNg基因，然后用荧光标记的探针 检测其相应的DNA靶序列，2小时可以完成96份 标本检测。与培养法相比具有很高的敏感性和 特异性。
1．克服了淋球菌培养时间长等缺点，提高 了临床样本检测的阳性率和准确性。
2．通过分子生物学技术可以进行淋球菌感 染的分子流行病学调查。
3．可以准确、快速评价药物治疗的效果。 4．有利于淋病的鉴别诊断。
谢谢！
二、淋病奈瑟菌的分子生物学检验内容
（一）淋病奈瑟菌核酸的检测
1．聚合酶链反应
PCR是分子生物学中最常用检测基因的技术 手段，也是淋病奈瑟菌基因诊断中最基本的方法。 PCR引物的设计应选择与其相应的靶基因，多采 用：①隐蔽质粒cppB基因(cppBH01/3、1/2及 cppBN3/4)；②16s rRNA基因(SL67/59、NGPl/2)； ③porA假基因；④编码外膜蛋白基因（omp基 因）；⑤opa基因等；⑥胞嘧啶DNA甲基转移酶基 因(Roche Cobas Amplicor)。不同靶基因设计引 物对PCR的敏感性和特异性有一定的影响。
淋球菌快速检测方法
淋球菌快速检测方法淋球菌是一种常见性传播疾病的致病菌，该疾病会引起尿道炎、宫颈炎、盆腔炎等一系列症状，如果不及时治疗，将会带来严重后果。
现代实验室技术的发展，为淋球菌的快速检测提供了可能。
本篇文章将介绍几种常见的淋球菌快速检测方法。
一、核酸扩增技术核酸扩增技术是一种基于淋球菌DNA序列的敏感快速检测方法。
该技术可以通过扩增富含在淋球菌细胞表面的主要外膜蛋白（porB和ompA）基因，将淋球菌DNA检测出来。
核酸扩增技术的优势是敏感度高，可以检测出数量较少的细菌，同时具有较高的特异性，可以排除其他细菌的干扰。
核酸扩增技术还可以分为PCR和LAMP两种方法。
PCR：该方法通过利用DNA聚合酶对模板DNA的扩增，使得淋球菌DNA得以繁殖，最终产生充足的DNA量从而实现快速检测。
LAMP：该方法使用一组特异性高的介导引，引导引物扩增淋球菌DNA；同时，引物对复制DNA进行逐步退火，不断产生大量Tth酶，加速DNA复制。
该方法的优点包括快速、高灵敏度和高特异性。
二、抗原检测技术抗原检测技术是一种基于淋球菌周围结构中的抗原与抗体作用原理的检测方法。
该技术的原理是将尿道、宫颈或其他部位的标本与包含特异性抗体的检测物质结合，如果存在淋球菌抗原，那么该物质中的特异性抗体将与之结合，从而被检测出来。
此外，抗原检测技术还可以分为两种方法。
磁珠免疫分析法（MIA）：该方法主要分别利用MIA系统与放射免疫分析法，通过联合检测尿液中淋球菌抗原，提高淋球菌检测的敏感度和特异度。
免疫色谱检测法（ICA）：该法通常使用比色杆或凝胶将尿液标本转化为表现为颜色变化的带，从而检测淋球菌抗原。
三、细菌培养法细菌培养法是一种常用的淋球菌诊断方法，该方法先将标本放置在适宜的培养基上进行培养，然后镜检检查培养出来的细菌形态学，并通过转化菌株后行凝集抗体判定菌群是否为淋球菌。
该方法具有较高的特异性，可以对淋球菌进行精细的检测。
虽然细菌培养法的特异性和敏感性不高，但它仍然是一种目前最为常见的淋球菌检测体系，对于感染患者的确诊和治疗提供类似于淋球菌感染诊断的金标准。
常规PCR法和培养法检测女性生殖道感染者NG_CT_UU的比较
11 1 标本来源 :2003 年 7 月至 2003 年 12 月柳州地区防疫 站性病门诊疑诊为女性生殖道感染的患者 110 例 ,均有白带 增多 、发黄 、有异味 、伴外阴瘙痒 、宫颈分泌物增多或宫颈水 肿 等 炎 症 。年 龄 1 8 ～ 6 2 岁 。用 棉 拭 子 从 宫 颈 中 内 11 5 ～ 3 cm 处稍用力捻转 1～2 周后放入无菌管立即送检 。 11 2 仪器与试剂 :仪器为美国 PE 公司产 TC - 48 型 DNA 扩增仪 、北京六一仪器厂产电泳仪 、上海长明光学电子仪器 厂产 ZF - A 型紫外透射分析仪 。采用上海复星实业有限公 司生产 N G、CT 、U U 的 PCR21 试剂盒 ; N G 采用广西皮研所 生产的桂敏培养基 ; UU 采用广东珠海浪峰生物工程公司生 产的支原体培养基 ; McCoy 细胞作为 CT 培养细胞 。 11 3 方法 11 31 1 常规 PCR 法 :N G、CT 、U U 的常规 PCR 检测按试剂 盒说明进行 。进行 40 个循环扩增 、2 %琼脂糖凝胶电泳 ,在 紫外灯上检测 ,出现相应预期扩增片段长度为阳性 。每批实 验均设阴性及阳性对照 。 11 31 2 培养法 :细菌培养严格按全国临床检验操作规程[3] 进行 ,N G 使用淋球菌培养基培养 ,置于 5 %CO2 培养箱中 ,在 361 5°C 温度下培养 24～48 h ,平板出现菌落者再行氧化酶定 性实验 ,若出现红色为阳性 。UU 置于解脲支原体液体培养 基培养 ,置于 361 5 ℃温箱中培养 24～48 h ,培养液由黄色转 变为红色 ,判断为阳性 。CT 培养采用 McCoy 细胞为宿主细 胞 ,按照现代性传播疾病实验室诊断技术[4] 的方法进行 ,最 后经姬姆萨染色 ,在细胞中找到包涵体为阳性 。 11 4 统计学处理 :运用 SPSS101 0 统计软件进行数据分析 , 采用χ2 检验 。
感染性疾病检查项目一览表
找抗酸杆菌（染色镜检）
不抗凝血3ml
痰液
痰涂片
感染性疾病检查项目一览表
组合项目
内容
标本采集
性病基因诊断五项
淋球菌核酸扩增（NG-DNA）、沙眼衣原体核酸扩增（CT-DNA）、解脲支原体核酸扩增（UU-DNA）、单纯疱疹病毒核酸扩增（HSV-DNA）、乳头瘤病毒6，11型核酸扩增（HPV6,11-DNA）、乳头瘤病毒16，18型核酸扩增（HPV16,18-DNA）
分泌物、精液、前列腺液
性病培养
细菌培养+药敏、淋球菌培养+药敏、
支原体（解脲、人型）培养+药敏
常规检查系列
常规检查（白带、精液、前列腺液）
淋病双球菌涂片检查
淋病双球菌（革兰氏染色）
梅毒二项
梅毒初筛试验（TRUST）、梅毒确证试验（TPPA）
不抗凝血3ml
艾滋病检测
b）、
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淋球菌核酸扩增荧光检测（NG-DNA）
一、检验项目：淋球菌核酸扩增荧光检测（NG-DNA）
二、临床意义：
1、人是淋球菌的唯一天然宿主，人对淋球菌感染没有免疫能力，所有人均有相同的易
感性，因此再感染或慢性感染是较普遍的
2、临床常见症状为非淋性尿道炎、盆腔炎、前列腺炎、阴道炎、不育不孕症等，也有少
数无症状携带者
3、性接触传播是淋病的主要传染形式。
但也可以通过非性接触途径传播。
美国疾控中心建议：25岁以下高发年龄段的女性及25岁以上女性中的高危人群每年应当接受NG筛查；所有妊娠期女性第一次产检时应当接受NG检查，高危人群孕晚期时应当接受复查。
我国疾控中心2008年开始将NG列为单独的病种进行传染病报告。
2010年5月国家人口和计划生育委员会下发“国家免费孕前优生健康检查项目试点工作技术服务规范中临床实验室9项检查中就包含NG的检测。
有利于早期诊断
病原体初感染时几乎见不到特异症状，容易延误治疗性
三、标本送检要求：4ml黄色帽血清管，空腹采集后立即送检，如不能立即送检可于4℃
保存一周，如需长期保存请放入－20℃冻存，运输过程中请注意保持低温。
四、开单名称：淋球菌核酸定性检测（NG-DNA）。
五、收费： 140元/例
六、送检时间：周一至周五上午12：00前
七、送检地点：检验科PCR室
八、报告时间：抽血后，7个工作日后进入我院计算机检查报告系统，查看检测结果。
联系电话： 84206146。