流式细胞术简介及应用进展
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测血小板功能及其临床应用
流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）检测血小板功能及其临床应用血小板功能的检测包括测定血小板粘附、聚集和活化的能力。
然而，在血小板相关疾病的诊断中，检测血小板功能的方法常常是有争议的。
这通常是由于方法本身的原因造成的［1］，譬如，静脉阻滞、抗凝剂选择、离心，甚至标本处理不当等因素，都可导致医源性血小板激活，影响临床诊断的价值。
这就要求建立一种灵敏、精确、快速、简便，最好可用于临床常规检测血小板功能测定方法。
关键词：血小板临床应用流式细胞术血小板功能的检测包括测定血小板粘附、聚集和活化的能力。
然而，在血小板相关疾病的诊断中，检测血小板功能的方法常常是有争议的。
这通常是由于方法本身的原因造成的［1］，譬如，静脉阻滞、抗凝剂选择、离心，甚至标本处理不当等因素，都可导致医源性血小板激活，影响临床诊断的价值。
这就要求建立一种灵敏、精确、快速、简便，最好可用于临床常规检测血小板功能测定方法。
由于血小板的活化程度可由血小板膜糖蛋白表达水平的高低来判断，近年来，文献报道利用流式细胞术，特别是全血法流式细胞术，检测血小板膜糖蛋白的表达［2］。
该技术能灵敏、特异地检测血液中活化血小板，并评价其功能。
现就全血法流式细胞术检测血小板功能的方法及临床应用现状和潜力进行综述。
一、全血法流式细胞术1.方法学：流式细胞仪能快速测定大量个体细胞的特性。
样品中欲分析的细胞预先进行荧光标记，然后由压缩氮经硅管送达标本室，再以5 000～10 000个细胞/秒的速率逐个射入光敏感区。
在适当波长的激发光作用下，被特殊染色的细胞发射出一定量的荧光脉冲讯号。
探测器收集每个细胞的荧光讯号和光散射，然后传入计算机进行分析。
传统的流式细胞术检测血小板膜糖蛋白的表达，常用的样本是经洗涤的血小板或富含血小板的血浆。
由于血小板极易活化激惹，样本经离心、洗涤等步骤，容易人为地导致体外血小板激活，影响临床诊断价值。
为此，Shatti等［2］引入了全血法流式细胞术。
流式细胞术分析的工作原理及应用
流式细胞术分析的工作原理及应用1. 工作原理流式细胞术（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域的细胞分析技术。
它基于细胞在流式细胞仪中通过单个细胞传感器单元的原理，可以实时、快速地检测和分析细胞的各种特性。
1.1 流式细胞仪原理流式细胞仪是流式细胞术分析的核心工具。
它将细胞悬浮液注入到一个窄小的液流中，并通过雷射束（Laser Beam）对细胞进行激发。
当细胞经过激发光束时，会发射出特定波长的荧光信号。
流式细胞仪通过光学设备收集并分析这些信号，从而获得关于细胞的信息。
1.2 细胞荧光标记在流式细胞术分析中，细胞通常会被标记上特定的荧光染料，以便测量其特定特征。
这些标记可以是单一的，也可以是多重的，用于同时分析多个参数。
1.3 数据分析流式细胞仪在测量细胞荧光信号的同时，还会记录细胞的大小、形状和荧光强度等参数。
这些数据可以通过特定的软件进行分析和解释，以获得关于细胞数量、细胞类型和细胞功能等方面的信息。
2. 应用领域流式细胞术分析具有广泛的应用领域，在生物医学研究和临床诊断中发挥着重要作用。
2.1 免疫学研究流式细胞术在免疫学研究中广泛应用，可以用于分析免疫系统中不同类型的细胞数量和功能。
通过对白细胞表面标记物的检测，可以检测特定细胞亚群的存在，并研究其在疾病和免疫反应中的作用。
2.2 肿瘤学研究流式细胞术在肿瘤学研究中也扮演重要角色。
它可以用来研究肿瘤细胞的增殖、存活和死亡等关键特性，进而评估药物治疗对肿瘤细胞的影响。
此外，流式细胞术还可以检测循环肿瘤细胞，从而提供肿瘤早期诊断和治疗监测的手段。
2.3 微生物学研究流式细胞术被广泛应用于微生物学研究中，可以用于分析微生物的数量和生物学特性。
通过对细菌、真菌和病毒等微生物的荧光标记，可以确定它们的种类、数量和活性，从而研究其生长规律和致病机制。
2.4 干细胞研究流式细胞术在干细胞研究中也扮演重要角色。
流式细胞术的临床应用进展
对患者细胞亚群数量 的测 定来监控患者免疫状态 ， 指导治疗 。朱
立华等报道 了外周血 淋巴细胞 免疫表型的确参考值对其种族 、 性 别、 年龄等影响因素进行 了探讨 。 ２２ ２ 感染及其治疗 效果 观察 ．． 当感 染 发生 以流式 细胞 仪 （ ｌ ｙ 它 Ｆｏ Ｃ — ｗ ｔ ｔｒ为工具 ， ｏ ｅ） ｍｅ 在单细胞水平 上对 大量 细胞进 行高 速 、 准确 、 多
参数的定量分析或分选 ， 为生物医学与临床检验学发展提 供 了全
新 的 视 角 和 强 有 力 的 手 段 。 目前 流 式 细 胞 术 在 肿 瘤 、 胞 免 疫 、 细
流式细胞术（ Ｃ 是 ２ Ｆ Ｍ） ０世纪 ７ ０年代 初发展 起来 的一项 高 新技术 ，０年代 开始从 基础研 究发 展到 临床 医学研 究及 疾病 的 ８ 诊断和治疗监测 。 １ １ 细胞表型分析技术 ．
一
性 。正常组织细胞几 乎不表达突变型 Ｐ ３ 部分肿 瘤患者 的病变 ５，
细胞表 型分 析是 流式细胞仪最 常见 的
淋 巴细胞减 少 Ｄ ／ Ｄ Ｃ ４ Ｃ ８淋 巴细胞 比值 ＣＭ／ Ｄ Ｉ Ｃ ８下 降 ， 至可 甚
降低到 ０ ５以下 。对疑为艾滋病及 血清检测为 阳性 的人 ， ． Ｔ细胞 亚群是分析 了解免疫 系统被病 毒破坏 程度 的标 志 。初诊 时 ， Ｉ ＣＭ 细胞越少 Ｃ ４ Ｃ ８值越低者 ， 后越 差。所 以经治疗 后恢 复的 Ｄ／Ｄ 预 指标则是 Ｃ ４细胞 数增加 ， Ｄ ／ Ｄ Ｄ Ｃ ４ Ｃ ８比值升高。当病 毒（ 乙肝 如 病毒 、 Ｂ病 毒 、 巨细胞病毒 ） Ｅ 和 感染发生时 ， Ｄ Ｃ ８＋Ｔ细胞增多 ， 对 Ｃ ８细胞 的测定有助 于对 感染 的诊 断和治疗 效果的动态观察。 Ｄ
简述流式细胞术的原理与应用
简述流式细胞术的原理与应用一、流式细胞术的原理介绍流式细胞术（Flow cytometry）是一种利用流式细胞术仪（Flow cytometer）对单个活细胞进行多参数分析的技术。
它基于细胞的光学性质和生物化学特性，通过探针标记、荧光染料和细胞表面抗原的相互作用，对细胞进行高速连续检测和分离。
流式细胞术的原理如下：1.细胞悬浮和样本处理：将细胞样品作为悬浮液，通过离心等方法将细胞分散在液体中，去除细胞的团块和碎片，保证单个细胞的流式检测。
2.细胞标记：采用流式细胞术特定的探针和染料对细胞进行标记，以便后续检测和分析。
常用的标记方法包括荧光染料标记、抗体标记和细胞分子探针标记。
3.细胞分离和传送：将标记的细胞悬浮液通过流式细胞术仪，以流速每秒数千个细胞的速度单个分子传送到探测点。
4.光散射与荧光探测：细胞经过流式细胞术仪后，以激光束照射细胞，通过散射光和荧光信号的检测，对细胞进行空间分布和化学信息的获得。
5.数据采集与分析：通过计算机系统采集和记录细胞经过流式细胞术仪后所产生的光散射和荧光信号，在分析软件中对数据进行处理和解读，获得有关细胞的信息。
二、流式细胞术的应用流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，它在细胞学、免疫学、血液学、肿瘤学等领域有着重要的应用价值。
下面列举几个流式细胞术的应用示例：1.血液学研究：流式细胞术结合细胞表面标记和荧光染料标记，可以对血液中的不同细胞类型进行快速的鉴定和数量分析。
例如，通过流式细胞术可对血液中的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞等进行分类和计数，从而判断患者的免疫状态和疾病进展。
2.癌症诊断与治疗：流式细胞术对肿瘤细胞的检测和分析有着重要的作用。
通过流式细胞术，可以检测和定量肿瘤细胞的表面抗原和细胞内信号分子，进一步了解肿瘤细胞的类型、分化程度和增殖状态，为癌症的诊断和治疗提供指导。
3.免疫学研究：流式细胞术能够对免疫系统中的各种细胞类型进行鉴定、计数和功能分析。
流式细胞术简介及应用进展课件
流式细胞术简介及应用进展
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▪高速度：分析细胞数：1000个/s→60000个/s ▪高灵敏度：荧光分子数/细胞：3000→100个FITC； ▪高准确度：区分两个细胞：参数：相差5% →1%； ▪高精度：CV值：7% →< 1%; ▪多参数：荧光：1个 →12个参数； ▪高纯度：分选细胞：80-90% →99.9%; ▪其 它：荧光信号：线性检测→对数检测
电子程序化单细胞分选仪——Electronically programmable individual cell sorter, EPICS (Coulter公司）
流式细胞术简介及应用进展
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BD FACSCalibur型 FCM （单L，3F）
流式细胞术简介及应用进展
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Coulter EPICS XL/XL-MCL （单L，4F）
流式细胞术简介及应用进展
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BD FACSAria
BD FACSCount
CD3\4\8 专为HIV监测设计的经济普及型流式细胞仪
流式细胞术简介及应用进展
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BD FACSCanto 2L 6C
流式细胞术简介及应用进展
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BD FACS Calibur 1L 4C
流式细胞术简介及应用进展
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三、流式细胞术应用的新进展
流式细胞术简介及应用进展
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2、cytometric bead array (CBA)
微球流式芯片技术(CBA)是一种微球多参数检测分析技 术，它用一系列的微球组合来捕获并结合流式细胞术检 测溶液中被检测物质的量，其采用夹心法分析策略。用 已知的标准品和对照标准曲线就可得出被测样品的浓度。 这种检测方法，既不受样品量的限制，也可同时检测多 项指标参数；客观、省时、人为因素影响小。
流式细胞术应用于医学检验的研究进展
流式细胞术应用于医学检验的研究进展随着科技的发展和医学人员对诊断和治疗需求的不断提高，流式细胞术逐渐成为了医学检验中的重要技术。
流式细胞术是一种基于细胞表型学和细胞功能学的高科技方法，具有快速、准确和灵敏度高的特点。
它可以用于检测和分析目标细胞在生理状态下的表型和功能，对各种疾病的诊断和治疗提供有力的支持。
本文将重点介绍流式细胞术的原理、技术特点和在医学检验中的应用进展。
一、流式细胞术的原理流式细胞术是一种基于悬液细胞的物理活动特点和光学检测原理的细胞分析技术。
其基本原理是利用流式细胞术仪器将悬浮细胞按照大小、电荷、荧光等物理性质进行识别和分选，通过光散射和荧光检测技术确定细胞数量和特定分子在细胞表面或内部的表达情况，从而分析细胞的表型和功能。
具体而言，流式细胞术的流程包括细胞处理、细胞染色、细胞检测和数据分析等四个步骤。
首先，要将样品中的细胞处理成单细胞悬浮液，并加入适量的细胞染色剂，使目标细胞表面或内部的特定分子产生荧光信号。
然后，将悬浮细胞通过一条狭窄的流式细胞术仪器鉴别通道，利用激光束对细胞进行检测，同时对细胞进行分类和分选，将目标细胞单独收集。
最后，通过计算机软件进行数据分析，得到细胞数量、分子表达和分子数量等信息。
二、流式细胞术的技术特点流式细胞术作为一种高科技的细胞分析技术，具有以下几个显著的技术特点：1. 高速度流式细胞术中的细胞检测和分选速度非常快，每秒钟可检测和分选数千个甚至数万个细胞，数量级比传统细胞分析技术高几百倍，因此适用于大样本的细胞分析。
2. 高准确度流式细胞术能够在单细胞水平对细胞表型和功能进行检测和分析，具有高准确度的特点。
同时，流式细胞术能够检测多个分子的表达情况，从而减少了固定和染色的过程，降低了操作的误差和不确定性。
3. 多功能流式细胞术可以检测和分析不同类型的细胞，包括悬浮细胞和贴壁细胞等，同时可以检测多种荧光颜色和多个标志，能够同时分析多种细胞表型和功能的变化。
流式细胞术的原理及应用
流式细胞术的原理及应用前言流式细胞术（Flow Cytometry）是一项基于光学技术的分析和分类细胞及其组分的方法。
通过将细胞悬浮液通过流式细胞仪，实现细胞的快速高通量检测和分析。
流式细胞术在生命科学研究、临床诊断、药物研发等领域得到广泛应用。
本文将介绍流式细胞术的基本原理及其主要应用。
1. 原理1.1 细胞悬浮液的注射流式细胞术的第一步是将待检测的细胞悬浮液注入流式细胞仪。
悬浮液中的细胞会依次通过一个细胞注射口，形成细胞流。
1.2 通过激光激发荧光信号流式细胞仪利用激光束激发细胞或标记物的荧光信号。
细胞通常被染色或标记以便准确识别和分析细胞特定的特征。
1.3 接收荧光信号经过激发后，流式细胞仪会收集荧光信号，并通过各种光学和电子元件将其转化为电信号。
1.4 数据分析与可视化流式细胞仪将收集到的数据传输到计算机进行分析和可视化。
根据不同的荧光信号特性，可以得到细胞的表型、数量、活性等信息。
2. 应用流式细胞术在许多领域有着广泛的应用，在以下几个方面得到了突出的成果和应用：2.1 免疫学流式细胞术在免疫学研究中发挥着重要的作用。
通过流式细胞术，可以对免疫细胞进行表型和功能分析，了解免疫细胞的分布、表达特征、活性等信息，为研究免疫系统的机制提供了强有力的工具。
2.2 癌症研究流式细胞术在癌症研究中广泛应用。
通过流式细胞术，可以对癌细胞进行检测、鉴定和分析，了解癌细胞的异质性、增殖速率、转移能力等特征，为癌症的诊断和治疗提供重要信息。
2.3 微生物学研究流式细胞术在微生物学研究中起到关键作用。
通过流式细胞术，可以快速准确地对微生物进行定量分析和分型鉴定，如对细菌、真菌、病毒的检测和鉴别。
2.4 细胞工程与干细胞研究流式细胞术在细胞工程领域和干细胞研究中有着广泛的应用。
可以通过流式细胞术对干细胞进行分选、分析和富集，并对细胞工程的效果进行评估和监测。
2.5 遗传学研究流式细胞术在遗传学研究中也发挥着重要作用。
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用流式细胞术是一种广泛应用于生物医学领域的先进技术，它通过对细胞的特定特征进行高效、快速的检测和分析，为科学研究和临床诊断提供了强大的工具。
流式细胞术的原理和应用涉及到许多方面，包括仪器原理、标记技术、数据分析等，下面将对这些内容进行详细阐述。
一、流式细胞术的原理流式细胞术的原理基于细胞在流动液体中依次通过激光束后的单个检测区域，通过检测细胞在不同参数下的散射或荧光信号来获取关于细胞数量、大小、形态、表面标记物等信息。
流式细胞术通常包括以下步骤：1. 样本制备：将样本中的细胞进行适当的处理，如酶消化、离心、过滤等，以获得单细胞悬浮液。
2. 细胞标记：利用标记物（如荧光染料、抗体等）对待测细胞进行特异性标记，以便在流式细胞仪中对其进行检测和分析。
3. 流式细胞仪检测：将标记后的细胞悬浮液通过流式细胞仪，激光束依次照射每个细胞，并通过检测散射光和荧光信号来获得相关信息。
4. 数据分析：通过专门的流式细胞数据分析软件对获得的数据进行处理和分析，获取细胞的数量、特征等信息。
二、流式细胞术的应用1. 免疫学研究：在免疫学领域，流式细胞术可用于分析免疫细胞的类型、数量和功能，如淋巴细胞亚群的鉴定、T细胞的活化状态等，为免疫学研究提供了重要的数据支持。
2. 癌症诊断和治疗：流式细胞术可用于检测肿瘤细胞的类型和数量，分析肿瘤细胞的表面标记物，评估肿瘤的侵袭性和预后，指导临床治疗方案的选择和疗效监测。
3. 干细胞研究：流式细胞术可用于干细胞的鉴定和分离，分析干细胞的表面标记物和多能性，为干细胞研究和应用提供重要的技术支持。
4. 病原微生物检测：流式细胞术可用于检测微生物感染，分析微生物的数量、类型和毒力，评估感染的严重程度和治疗效果。
5. 血液分析：流式细胞术可用于分析血液中各类细胞的数量和功能，如白细胞亚群的鉴定、血小板的活化状态等，为临床诊断和治疗提供重要信息。
流式细胞术作为一种高效、敏感的细胞分析技术，在生物医学领域有着广泛的应用前景。
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Principle of CBA :
微粒体 探针分子 待测分子 报告分子
CBA反应微球探针复合体结构模式图
(如可溶性血清蛋白分子的CBA检测）
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Thanks for your attention!
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FCM主要分两种类型 ：
临床型——小型，科研与临床结合型 科研型——大型，基础研究和加速分
选型
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流式细胞仪——Flow cytomter,FCM 流式细胞术——Flow cytometry,FCM
激发荧光细胞分选仪——Fluorescence activated cell sorter,FACS（BD公司）
电子程序化单细胞分选仪——Electronically programmable individual cell sorter, EPICS (Coulter公司）
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BD FACSCalibur型 FCM （单L，3F）
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Coulter EPICS XL/XL-MCL （单L，4F）
光谱重叠：补偿修饰剔除联体细胞及碎片
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1、 Quantitative FCM (QFCM)
定量流式细胞术（Quantitative FCM, QFCM）是用流式细胞仪对特定细胞表面抗 原进行绝对定量。其基本原理是采用某种标 准物质获得一条标准曲线或线性方程，然后 获得待测抗原绝对分子数。
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2、cytometric bead array (CBA)
微球流式芯片技术(CBA)是一种微球多参数检测分析技 术，它用一系列的微球组合来捕获并结合流式细胞术检 测溶液中被检测物质的量，其采用夹心法分析策略。用 已知的标准品和对照标准曲线就可得出被测样品的浓度。 这种检测方法，既不受样品量的限制，也可同时检测多 项指标参数；客观、省时、人为因素影响小。
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CD3\4\8 专为HIV监测设计的经济普及型流式细胞仪
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BD FACSCanto 2L 6C
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三、流式细胞术应用的新进展
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▪高速度：分析细胞数：1000个/s→60000个/s ▪高灵敏度：荧光分子数/细胞：3000→100个FITC； ▪高准确度：区分两个细胞：参数：相差5% →1%； ▪高精度：CV值：7% →< 1%; ▪多参数：荧光：1个 →12个参数； ▪高纯度：分选细胞：80-90% →99.9%; ▪其 它：荧光信号：线性检测→对数检测
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BD FACSVantage SE
（14F， four-way sorting）
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Coulter EPICS ALTRA （空/水冷L， 6F）
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BD LSR （3L，6F）
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Coulter: FC 500
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BD FACSAria
流式细胞术在临床及科研中的应用
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Main contents:
1、流式细胞术的基本原理 2、流式细胞术在临床及科研中的应用 3、流式细胞术临床应用的新进展
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2
一、流式细胞术的基本原理
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1、流式细胞术（FCM）的概述
➢ 定义：以流式细胞仪为主要工具，对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗
粒细胞的各种成分进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。
➢ FCM是诸如生物学、生物技术、计算机科学、流体力学、激光技术、高等数学、
临床医学、分子生物学、有机化学和生物物理学等到学科知识综合运用的结晶。
➢ 现代流式细胞术，更是由于结合了单克隆抗体技术、定量细胞化学和定量荧光
细胞化学的应用，使其在生物学、临床医学、药物学等等众多研究领域的应用 有了更加突飞猛进的发展