高效液相色谱仪流动相及样品的预处理
高效液相色谱仪使用注意事项[1]
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岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
高效液相色谱仪操作三要点
高效液相色谱仪操作三要点高效液相色谱仪（HPLC）现已成为有机化学分析的重要手段之一。
同样，在食品分析中，无论是残留分析还是成分分析，HPLC 也已成为不可或缺的分析仪器。
和其它分析仪器一样，你若想让HPLC 很好地为你工作、得到可靠的数据，首先你要保养好它，使它处于一个良好的待机状态，这样你操作它进行分析时就可以比较顺利地获得理想的结果。
而且良好规范的操作习惯可以延长仪器使用寿命。
大家在学校或接受仪器公司培训的时候，老师或工程师会提出很多的操作注意事项。
但要是总结归纳一下，最重要的有三点：脱气、过滤和冲洗。
本文围绕这三点进行讨论，给新从事HPLC 分析的工作者一点操作建议，希望能对正确的操作仪器有一点帮助。
更欢迎有经验的专家介绍使用经验，提出好建议。
一、脱气流动相脱气对于避免HPLC 系统出问题，顺利得到一个理想的数据是一个很有效的措施。
HPLC 系统内是不希望有气泡存在的。
HPLC 泵在输送液体时要产生很大的力量，由于气体的压缩比与液体相比大的多，因而当气泡存在时，你将观察到瞬间的流速降低和系统压力下降。
如果这个气泡足够大，液相泵将不能输送任何溶剂，而且如果压力低于预先设定的压力低限，泵将停止工作。
有些泵设计可以很好地排除气泡，而也有一些泵设计当气泡存在时将停止运转。
当一个气泡通过输液泵时，由于系统压力大，气泡通常会溶解在流动相溶液中，随流动相通过柱子。
但是到达检测器流通池时系统压力又恢复到了大气压，因而气泡可能在检测器流通池中又显现，在色谱图上会出现不规律的毛刺。
为解决这个问题，有些仪器公司设计一个反压控制器，这样可以在检测器出口提供足够的压力保持气泡始终溶解在流动相中直到它们流出检测器。
当然，这个压力不能超过流通池所能承受的压力极限，否则可能损坏检测器。
紫外/可见光（UV/VIS）检测器的液相色谱图中的噪音毛刺通常是气泡进入并通过流通池的征兆。
有些检测器对空气的存在也非常敏感，但表现出的征兆与UV/VIS 不同，例如有报导说，当使用荧光（FL）检测器时，流动相中溶解氧的存在可能会使一些化合物失去荧光性。
2020药典关于0512 高效液相色谱法标准 公示稿
2020药典关于0512 高效液相色谱法标准公示稿一、引言本标准规定了采用高效液相色谱法对某物质进行检测的方法。
本标准适用于药品、食品和化妆品等领域的物质分析。
本标准是在2020药典的基础上制定的，旨在提高检测的准确性和可靠性，为相关行业提供更加精确的检测依据。
二、仪器和试剂1. 仪器：高效液相色谱仪，配备有紫外检测器。
2. 试剂：甲醇、乙腈、水等色谱纯度试剂，以及其他所需试剂。
三、实验步骤1. 样品准备：将待测样品进行预处理，使其符合高效液相色谱分析的要求。
2. 流动相制备：根据需要选择合适的流动相，并进行过滤和脱气处理。
3. 色谱柱选择：根据待测物质的性质选择适宜的色谱柱。
4. 检测条件设定：根据待测物质的性质，设定合适的流速、检测波长等参数。
5. 进样：将处理好的样品注入高效液相色谱仪中进行分析。
6. 数据处理：采集色谱图，并使用相关软件进行数据分析和处理。
四、结果计算和表示根据高效液相色谱图，对峰面积进行积分，并计算待测物质的含量。
结果表示应符合相关规定，如单位、有效数字等。
五、精密度和准确度1. 精密度：在同一实验条件下，对标准品进行多次测定，计算其相对标准偏差。
2. 准确度：采用已知纯度的对照品进行加标回收实验，计算回收率。
六、溶液稳定性考察待测物质在一定时间内的稳定性，以确保检测结果的可靠性。
可对放置不同时间的样品进行测定，观察其含量变化情况。
七、对照品纯度要求用于本方法检测的对照品应符合一定的纯度要求，以确保结果的准确性。
建议使用高纯度对照品进行测试和分析。
八、测试数据及图谱1. 测试数据：记录每次测定的峰面积、浓度等数据，以便后续数据处理和分析。
2. 图谱：记录色谱图，并注明各峰对应的物质。
九、检验规则1. 检验批次：同一批次样品应作为一个检验批次，按照相同的检测方法进行检测。
2. 异常值的处理：对于异常值，应进行复核或重新测定，以确保结果的准确性。
3. 检验报告：检验报告应包括样品信息、检测方法、结果数据等内容，并由检验人员签字或盖章。
高效液相色谱仪的操作步骤
高效液相色谱仪的操作步骤高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术。
它利用液体流动相和固定相之间的相互作用，将样品中的混合物分离出来，并通过检测器进行定量分析。
本文将介绍高效液相色谱仪的具体操作步骤。
1. 准备工作在进行高效液相色谱仪的操作之前，首先需要进行一些准备工作。
检查色谱柱是否安装正确，确保色谱柱是干净的，并检查流动相的配制是否准确。
2. 样品制备根据需要分析的物质，准备好待测样品。
样品制备可以包括溶解样品、过滤样品等步骤，以确保样品的纯净度和稳定性。
3. 仪器开机将高效液相色谱仪接通电源，打开仪器的电源开关。
等待仪器初始化，并确保仪器各个部分正常工作。
4. 设置参数在仪器上设置分析所需的参数。
包括选择适当的检测器类型和检测波长、设置流量、温度等。
5. 启动系统启动高效液相色谱仪系统，等待系统稳定。
通常需要一段时间使得流动相在管路中充分平衡，并确保流量稳定。
6. 校正进行色谱柱的校正。
校正过程包括流量校正、波长校正等。
通过校正可以保证仪器输出结果的准确性和可靠性。
7. 注射样品将样品通过注射器引入色谱柱中，控制样品的注射量，通常在微升至毫升的量级。
确保样品的注射量稳定和准确。
8. 分离分析开始运行高效液相色谱仪系统，进行样品的分离与分析。
在此期间，流动相通过色谱柱，将样品中的化合物根据它们与固定相之间的相互作用进行分离。
9. 监测结果通过检测器对分离后的化合物进行监测。
根据检测器的信号，可以得到每个化合物的峰面积、保留时间等数据。
10. 数据处理将监测到的信号输入到数据处理软件中，进行结果的计算和分析。
通常可以得到各个化合物的峰高、峰面积等数据，从而实现对样品的定量分析。
11. 关机分析结束后，关闭高效液相色谱仪的电源开关，并进行必要的清洗和维护工作。
确保仪器的正常运行，并延长其使用寿命。
总结：高效液相色谱仪的操作步骤涵盖了仪器准备、样品制备、仪器设置、校正、样品注射、分离分析、结果监测和数据处理等多个方面。
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。
溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。
超声脱气30分钟以上。
2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。
有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。
4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。
5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。
6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。
7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。
分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。
8. 设计走样方法。
9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。
高效液相色谱样品预处理步骤
高效液相色谱样品预处理步骤1. 样品准备在准备高效液相色谱样品时，需要确保样品的稳定性，防止样品在分析过程中发生变化。
因此，在样品准备过程中需要注意以下几点：（1）选择合适的样品存储容器，避免样品被污染或发生变化；（2）确保样品在分析前达到室温，以避免样品在注射到色谱柱时产生气泡；（3）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载。
2. 样品过滤在进行高效液相色谱分析前，需要将样品通过过滤器进行过滤，以去除样品中的固体杂质或悬浮物，从而防止其对色谱柱的堵塞或损坏。
通常使用的过滤器有不同规格的筛网或滤膜。
3. 样品衍生化在一些情况下，需要对样品进行衍生化处理，以便更好地进行高效液相色谱分析。
衍生化处理可以将样品中的某些化合物转化为更易分析的形式，例如将某些极性化合物转化为非极性化合物，使其更适合用有机溶剂进行洗脱。
4. 样品稀释在某些情况下，需要将样品进行稀释，以便更好地进行高效液相色谱分析。
过浓的样品可能会导致色谱峰过宽或重叠，影响分析结果的准确性。
通常使用的的是溶剂或水进行稀释。
5. 样品进样在进行高效液相色谱分析时，需要将样品通过进样针注入到色谱柱中。
在进行进样时，需要注意以下几点：（1）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载；（2）确保进样针的清洁和干燥，以避免对分析结果产生干扰。
6. 样品分离在将样品注入到色谱柱后，需要对其进行分离。
通常使用的的是高压泵将流动相通过色谱柱，将样品中的各个化合物进行分离。
在进行分离时，需要注意以下几点：（1）选择合适的流动相，以便将样品中的各个化合物进行分离；（2）调整流动相的流速和比例，以便获得更好的分离效果。
7. 检测器检测在分离后的各个化合物通过色谱柱流出时，需要使用检测器进行检测。
常见的检测器有紫外可见光检测器、电导检测器、荧光检测器等。
检测器可以提供样品的信号，并记录下各个化合物的在色谱图中的保留时间。
8. 数据处理在检测器检测完成后，需要对数据进行处理。
高效液相色谱仪的操作步骤 液相色谱解决方案
高效液相色谱仪的操作步骤液相色谱解决方案高效液相色谱仪操作步骤：1）．过滤流动相，依据需要选择不同的滤膜.2）．对抽滤后的流动相进行超声脱气10—20分钟。
3）．打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4）．进入hplc掌控界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5）．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6）．调整流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000、点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，察看基线的情况。
7）．设计走样方法。
点击file，选取se—lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，依据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2—5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading—inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8）．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，全部的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9）．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10）．填写登记本，由负责人签字。
注意事项：11）．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
脱气后的流动相要当心振动尽量不引起气泡。
12）．柱子是特别脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
13）．全部过柱子的液体均需严格的过滤。
14）．压力不能太大，可以不要超过2000 psi。
液相色谱流动相说明流动相相当于液相的血液，可以想象对液相的紧要程度。
高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
高效液相色谱仪的操作流程和注意事项引言：高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
掌握正确的操作流程和注意事项，对保证分析的准确性和结果的可靠性至关重要。
下面将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。
一、仪器准备在开始操作高效液相色谱仪之前，需要进行一些准备工作。
首先，检查仪器是否正常工作，例如电源是否正常接通，各个模块是否连接牢固等。
其次，确保色谱柱处于良好的工作状态，即没有泄漏和堵塞等问题。
最后，根据需要，选择合适的检测器，并校准相应的参数。
二、样品准备和进样样品的准备是操作高效液相色谱仪的关键一步。
首先，根据样品的性质选择合适的溶剂体系，并将样品完全溶解。
其次，为了提高分析的准确性，通常需要对样品进行预处理，例如磷酸酯酶的样品需要经过脱磷酸处理。
最后，将样品装入进样瓶中，根据仪器的要求设定进样量。
三、流动相的选择和准备流动相是高效液相色谱仪中的关键因素之一。
在选择流动相时，需要考虑样品的性质以及分析的目的。
常见的流动相包括有机溶剂、水以及它们的混合溶液。
在选择后，需要准备流动相，并进行除气处理以去除气泡。
此外，还要注意流动相的质量，例如pH值、浓度等。
四、色谱条件的设置色谱条件是操作高效液相色谱仪的关键之一。
根据分析的目的和样品的性质，需要设置合适的参数，例如流速、温度、梯度等。
在设置前，需要根据样品性质选择合适的色谱柱，并设定相应的温度以优化分离效果。
此外，还需要根据检测器的要求设定相应的参数。
五、数据采集和结果分析在操作高效液相色谱仪时，需要进行数据采集和结果分析。
首先，确保数据采集系统正常工作，并根据仪器的要求进行设定。
其次，启动数据采集并进行监控，及时记录实验过程中的各项指标。
最后，对采集的数据进行处理和分析，例如峰面积的计算、峰形的分析等。
注意事项：1. 严格按照操作流程进行操作，避免任意更改设置。
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第２ ３期
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科技信息
高效液相色谱仪流动相及样品的预处理
武 开 业
（ 林市 环境监 测总 站 榆
陕西
榆林
７９０ ） １ ０ ０
【 摘 要】 液相 色谱法是一种快速有效 的有机化合物分析技术 ， 在分析测定有机化合物方 面， 以其快速 、 灵敏 、 选择性好的特点， 倍受分析 工 作者青睐， 是环境监测、 卫生防疫、 油化工、 石 食品生产等行业作为水质分析的标 准仪器。 是， 但 由于液相 色谱分析技 术涉及 的样品种类繁多、 样 品组 成 及其 浓度 复 杂 ， 品 物理 形 态 多 变 ， 液相 色谱 仪 的 正 常分 析 测 定 造 成 一 些干 扰 因素 ， 果 不 注 意 流动 相 及 样 品 的预 处理 ， 对 日常的 样 对 如 会
３ 固 相 萃取 Ｓ Ｅ 技 术 Ｐ
固相 萃 取 技 术 是 基 于 同 液 相 色 谱 同 样 技 术 开 发 的分 离 复 杂 样 品 高 效 液 相 色谱 法 是 在 经 典 色谱 法 的基 础 上 ． 引用 了气 相 色 谱 的理 ０ ８ ％的成 本 及 工 作 量 在 论 ， 技 术 上 ， 动相 改 为 高 压 输送 （ 高输 送 压 力 可 达 ４９１７ ａ； 在 流 最 ． ０Ｐ ） 色 中 的不 同组 份 的 一 种 方 法 ，一 般 实 验 室 中 ６ — ０ 若 降 谱 柱 是 以 特殊 的方 法 用 小粒 径 的填 料 填 充 而成 ． 而 使 柱 效 大 大 高 于 样 品制 备 上 ． 采 用 固相 萃 取 技 术 可 以 加 速 样 品 的 制备 时 间 ， 低 样 从 经典液相色谱 （ 每米塔板数可达几万或几 十万 ） 同时桂后连有高灵敏 品前 处 理 的 成本 ， 高 分析 的 准确 性 及 回收 率 ， 容 易 自动 化 ， 少样 ： 提 更 减 度的检测器， 可对 流 出物 进 行连 续 检 测 。 品处 理 步 骤 ． 低 对 不 稳定 样 品的 影 响 。 降 高 效 液相 色 谱 仪 主 要 由 色谱 泵 及 控 制 器 、 样 器 、 谱 柱 、 测 器 进 色 检 各 种 固相 萃 取 小柱 可 以分 为 以下 三 类 ：
再 Ｏ倍 注 环 境 样 品 通 过 色谱 前 处 理 小 柱 ，除 去 干 扰物 质 以后 才 能通 过 色谱 柱 ， 体 积 的 甲醇 或 乙 腈 活 化 ， 用 ６到 １ 柱 体 积 的水 或 缓 冲 液 平 衡 ， 这 样 才 不 会损 坏 柱 子 ， 且 平 常需 要 做 相 关 的 维 护 和保 养 。 并 意不 要 让 小 柱 干 了 ， 样 品 溶解 在 一 些 强 极 性 的溶 剂 中 ， 后 加 入 样 使 然 品 ， 强 极 性 溶 剂 洗 脱 不 想 要 的 组 份 ， 极 性 弱些 的 溶剂 洗 脱 第 一 组 用 用 ２ 流动 相 的 预 处 理 感 兴 趣 的 组 份 ，最 后用 极 性 更 弱 的溶 剂 洗 脱 剩 下 的 感 兴 趣 的 组 份 ， 确 认 回收 率 。 ２１ 液相 色 谱 对 流 动 相 的要 求 ． ． 除色 谱 柱 对 流 动相 的要 求 外 ，还 要 注 意 流 动 相 与 检 测 器 匹 配 ， 流 ３３ 离 子 交换 包括 Ａｃｅ ｌｓ Ｍ ／ ｃｅｌ ｓＱ ｃｌＰｕ ｌ Ｃ Ａ ｃｌＨｕ ＭＡ／ Ｈ２ ，可先用 ６到 １ Ｎ 等 Ｏ 动 相 的脱 气 ， 意 卤 素 离子 的 吸附 ， 节 溶剂 粘 度 ， 注 调 防止 细 菌 生 长 。 倍 柱 体 积 的 去离 子 水 或 弱 缓 冲 液 平 衡 ， 样 品 溶 解 在 去 离 子 水 或 弱缓 使 ２２ 流 动 相 的 脱 气 ． 然后 加 入 样 品 ． 弱 缓 冲 液 洗脱 不 想要 的 组份 ， 强 一 些 缓 冲 用 用 可 以使 色 谱 泵 的 输 液 准 确 ， 且 脉 动 减 小 ， 保 留 时 间 以及 峰 面 冲 液 中 ， 并 使 Ｈ 最 积 的 重 现 性 提 高 ； 高 检 测 的性 能 ， 提 防止 气 泡 引 起 的 尖 峰 ， 基 线 稳 液 改 变 ｐ 或 离 子 强 度 洗 脱 第 一 组 感 兴 趣 的组 份 ， 后 用 更 强 的 缓 冲 使 定 ， 剂 的 紫 外 吸 收本 底 降 低 ； 护 色 谱 柱 ， 少 死体 积 ， 止 填 料 的 液 洗 脱 剩 下 的感 兴 趣 的组 份 溶 保 减 防 氧化。
分 析 测 定 带 来 不便 ． 以 需要 对 流 动 相 及 样 品 的预 处理 进 行 专 门的 学 习 才 能 熟练 掌 握 这 种 分 析技 术 ， 到 让 大 家都 满 意 的分 析 数 据 。 所 得
Ｉ 关键 词】 液相 色谱仪 ； 流动相 ； 样品 ； 预处理
１ 高 效 液 相 色谱 仪的 结 构 和原 理
． 和 数 据 处 理 及 控 制 五 大 部 分 组 成 ， 离 原 理 是 一 个 物 理 过 程 ， 动 相 ３ １ 正 相 分 流 携 带着 待 分 析 化 合 物 和 其他 一 些 共 存 物 质 流 过 色 谱 柱 ， 用 不 同 物 质 利 包 括 Ｓｌ ａ／ ｒ ｉ， Ｈ２ Ｄｏ ／Ｃ ， ｌｍｉａ等 ，可 先 用 ６到 ｉｃ Ｈｏｉｌ Ｎ ／ ｉｌ Ｎ Ａｕ ｎ ｉ ｓ ０倍 柱 体 积 的 非 极 性 溶 剂 使 样 品 溶 液 平 衡 ． 后 加 入 样 品 ， 非 极 性 然 用 在 固定 相 上 的 保 留 时 间 不 同 ， 而 出 峰 时 间 不 同而 达 到 分 离 ， 用 保 １ 从 利
留 时 间定 性 。 高 或 者 峰 面 积 定 量 ， 峰 在将 分 离 后 的 各 个 成 分 依 次 通 过 溶 剂 洗脱 不想 要 的组 份 。接 着 用 极性 溶 剂洗 脱 第 一 组 感 兴 趣 的组 测 出 各 化 合 物 的 浓 度来 。 目前应 用 最广 的 是 正 最 后 用极 性 更 强 的溶 剂 洗 脱 剩 下 的感 兴 趣 的 组 份 。 相 色谱 ， 固 定相 的 极 性 大 于 流 动 相 的极 性 ， 具 有 高 效 、 速 、 确 ３ 反 相 即 它 快 准 ． ２ 包 括 Ｃ８ ｔ ｌ／ ８ｔ Ｄ ｏ ／ Ｈ２ Ｃ 等 ， 先 用 ６到 １ 柱 ｌ／ ８ Ｃ， ， ｉｌ Ｎ ／ Ｎ Ｃ Ｃ 可 Ｏ倍 的优 点 ， 合 分析 各 种 组 成 的 环 境样 品 ， 适 若要 分 析 复 杂样 品 ， 要 先使 需