个人对细菌培养及药敏试验中常见问题的改进对策和建议
临床微生物检验中存在的问题，如何改进？
临床微生物检验中存在的问题，如何改进？一、临床微生物检验中存在的问题临床微生物检验是作出正确临床诊断、实施有效治疗的重要基础，伴随科学技术的不断发展，也推动医疗技术上了一个台阶，其中，医学分子生物学的发展成果最为显著。
所以作为医学分子生物学的重要组成部分，临床微生物检验可以帮助医务工作者快速获取致病菌的准确信息，其临床意义重大。
但是临床上对微生物检验的要求很高，我国临床微生物检验中也还存在一些问题，临床微生物检验还未达到令人满意的程度。
1、微生物样本质量控制问题关于实验室中微生物检验样本的质量控制问题，主要从样本的采集、运送及储存几个方面考虑。
微生物检验样本的采集往往由临床医护人员负责，如果在采集样本的过程中，医护人员不清楚样本采集要求，采集方式、采集过程不规范，则容易使其所采集的样本被污染或出现错误。
有些医护人员可能采集到了致病菌，但是由于所采集的量太少，而无法获得正确的检验结果等。
除了微生物样本的采集方式，样本的采集时间也关乎中微生物检验结果的准确性。
通常情况下，样本的采集应该是在早期、症状较典型时期及患者服用之前进行，如果采集样本的医护人员不对时间进行仔细的区分，而盲目的进行采集，比如在患者已经服药的状态下进行样本采集，则会影响样本检验结果的质量。
不符合样本采集时间而采集的微生物样本，所得出的检验结果是不可信的。
再有，微生物样本的运送与存储也是决定检验结果的关键，样本运送过程是否干净、无污染，样本的保存是否合理，这都是保障样本检验结果准确的重要前提。
临床上，不同病原微生物具有不同的生活习性，所以其运送和保存条件有所不同，比如淋病奈瑟菌对低温条件比较敏感，所以应该将其储存于合适室温环境中。
检验人员对目标病原微生物的特性加以区别，在样本的运送与储存过程中注意卫生和自我防护，确保样本不被污染。
2、检验人员的专业素养问题在临床微生物检验过程中，检验人员的主观判断及操作技能对检验结果意义重大，而大部分临床微生物检验都是要求很高的高精度实验，检验结果不能出现错误。
基层实验室细菌培养检查存在的问题及改进方法
基层实验室细菌培养检查存在的问题及改进方法宝鸡市中医医院检验科张永宁（主管检验师）邮编：72100目前，许多基层实验室临床细菌学培养检查中过多地沿用传统的分类细菌学那一套方法，即采集标本-接种培养-纯培养-鉴定药敏-报告。
由于分类细菌学和临床细菌学研究方法和目的有一定差异，这种按部就班的方法，往往使取得的信息陈旧而失去助诊意义，已不能适应临床的客观需要【1】，应进行改进。
1当前基层实验室细菌学培养检测存在问题1.1标本采集过程存在问题1.1.1被动采集标本造成培养阳性率降低或培养结果与临床诊断不符。
许多基层医院医生习惯根据实验使用抗生素，无效时才做到细菌培养，这样造成多数患者在留取标本前已经使用过抗生素，细菌处于抑制状态或转成L型状态，使培养阳性率大为降低。
1.1.2大多数基层实验室标本由护士采集或病人自采送检验科室的模式。
而细菌培养标本具有不同与其一般检验对标本的要求，对标本采集有严格的要求。
例如血液培养需要在病人高热,寒战时由护士通知检验人员以无菌手续，床头采集；前列腺液采集需由医生清洁患者尿道口后按摩采集于无菌容器；痰液标本需护士指导病人用0.1%心洁尔漱口后辅助病人深呼吸气后用力咳出肺部的痰液等。
病人自菜标本造成许多标本被污染，使培养结果的可靠性大打折扣。
1.2方法学问题1.2.1基层实验室细菌培养检查以传统手工法为主，多沿用传统分类细菌学检查方法，因报告迟缓失去助诊意义。
1.2.2忽视标本的革兰染色直接显微镜检查，使许多有用的信息被忽视。
1.2.3盲目追求鉴定项目多而全，造成浪费或延时；或仅凭形态染色及菌落特征等数个鉴定实验即草率出报告。
1.2.4培养基悬着单一，致病菌检出率低。
对当前我国细菌抗菌药敏试验的建议
对当前我国细菌抗菌药敏试验的建议我国与世界各国一样面临着感染菌的耐药性明显增多的威胁,尽管新型抗菌药物不断出现,但常见感染菌的耐药性也随之增加。
国内耐甲氧西林的金黄色葡萄球及血浆凝固酶阴性的葡萄球菌（MRSA）及血浆凝固酶阴性的葡萄球菌的检出率在20%-80%之间，耐万古霉素的肠球菌（VRE），具有超广谱β-内酰胺酶的肠杆菌科，耐青霉素的肺炎链球菌的检出率也在增多。
因此，有效而合理的抗生素治疗更加依赖准确而及时的抗菌药敏试验。
当前，我国微生物检验手段虽有明显进步，但仍是检验各学科中的薄弱环节，很有必要加强，以适应临床诊断和治疗的需要。
（一）当前国内药敏试验中存在的主要问题。
1、方法学不统一，没有标准化。
2、市场提供的药敏试验的培养基、药敏纸片以及最低抑菌浓度（MIC）稀释板等缺乏严格质控，质量难以保证。
3、细菌检验队伍薄弱，检验人员知识更新不够，对药敏试验方法的标准化、抗菌药物的选择、影响因素等缺乏了解。
4、药敏试验报告出结果时间长，检验与临床缺乏沟通,致使药敏试验结果不能满足临床治疗要求。
为解决此类问题,必须共同完成以下任务。
（二）药敏试验方法的选择与标准化。
美国临床试验室标准化委员会（NCCLS）推荐纸片扩散法测抑菌环直径和肉汤稀释法测MIC，少数细菌和抗生素要求用琼脂稀释法。
在常规工作中选用纸片扩散法或MIC可依本单位情况而定，一般纸片扩散法较为灵活实用。
MIC对于比较抗生素间的抗菌活性或对纸片扩散法“中介”结果有补充价值。
有的试验如部分MRSA及VRE 的筛检宜用琼脂筛选平皿法。
浓度梯度药敏法（如Etest法）兼具纸片扩散法与MIC 的特点，必要时选用。
纸片扩散法，肉汤稀释法及琼脂稀释法必须标准化。
如抗生素浓度、培养基的组合、PH、细菌接种方法、接种量、培育时间、结果判定标准及结果解释等，应该按照NCCLS1997年发布的文件和全国临床检验操作规程（第2版）严格执行。
常规纸片扩散法、肉汤稀释法只适用于速生细菌。
实验中可能出现的常见问题与解决办法
实验中可能出现的常见问题与解决办法一．污染污染是指由于微生物的侵染，在组织培养容器中滋生大量菌斑，使组培材料不能正常生长和发育的现象，主要有以下5方面的原因：1.器具灭菌：实验的所有器具都要在121°C消毒25min，若灭菌温度不够或者时间不足，都会导致污染。
灭菌时要求冷空气完全排除，否则会达不到指定温度。
其次，要做好灭菌登记，杜绝出现人为失误造成的污染。
此外，在接种过程中，每用一次都要在火焰上彻底灼烧，特别在接触到污染物时极易引起器具污染。
2.外植体：很多材料在灭菌后其实还是带菌的，不过量比较少，短期应该观察不到被感染的现象。
3.接种操作：首先，接种人员的手，手腕要用酒精棉球好好擦拭。
其次，对于放置在外的培养物（灭菌好的培养基）其瓶子外壁上有灰尘与微生物，放入超净台前可以用酒精消毒一下。
再者，很容易出现瓶口的污染，所以接种人员的技术要娴熟，干练。
4.环境条件：加强环境的灭菌消毒。
若有污染的材料不可以就地清洗，必须高压杀菌后再清洗，否则会导致大量孢子弥漫。
此外，要及时打扫卫生，定期蒸熏消毒。
保证环境的干净。
5.超净工作台：要定期对初过滤器进行清洗和更换。
此外，每次使用前要提前20min打开机器预处理，并对台面进行酒精喷雾消毒。
二．材料死亡实验过程中，很可能出现材料死亡，主要有以下几个方面：1.外植体灭菌过度：一旦材料太小或灭菌时间太长，剂量太大，就会导致材料死亡，所以要严格控制时间。
2.污染：大量污染会造成材料死亡。
3.培养基配置出现问题：在激素配置或营养成分配置出现问题时，材料易死亡，常常发生在无生长点的材料和愈伤组织中。
4.培养环境的恶化：温度过高，透气不好，培养过于密集，久不转移，有害气体的累积都会造成培养材料的死亡。
【措施】：【1】.选用较为温和的灭菌剂，降低药物浓度，减少灭菌时间，或选取较为坚强的外植体（eg：生长季节取芽）【2】注意个人卫生，严格按照规则进行操作。
【3】认真配置各种母液及培养基，选用盐含量较低的培养基，也可以试着用1/2或1/4的培养基，并调整各激素的用量和配比。
菌种培养过程中常见的问题
在菌种培养过程中，可能会遇到一些常见问题。
以下是一些可能出现的问题以及可能的解决方法：1. 污染：污染是菌种培养中最常见的问题之一。
可能的污染源包括空气、培养基、仪器设备等。
为了防止污染，可以采取以下措施：- 严格的无菌操作：使用无菌技术进行培养操作，包括洗手、穿戴无菌手套、喷雾消毒操作台等。
- 使用高质量的培养基和试剂：选择经过验证和检测的培养基，并确保其无菌。
- 定期检查培养物：观察培养物是否有异常的颜色、形态或气味等变化提示污染发生。
2. 生长不良：菌种在培养过程中可能会出现生长缓慢、生长不均匀或无生长等问题。
解决方法可能包括：- 检查培养条件：检查温度、湿度、氧气和二氧化碳浓度等培养条件是否适合该菌株的生长要求。
- 营养补充：检查培养基中的营养物浓度是否适当，并考虑添加合适的营养物以提供必要的生长要素。
- 检查菌种质量：确保菌种的纯度和活力，可以进行冻存备份或重新分离培养。
3. 发生菌株突变：在长期培养过程中，菌株可能发生突变，导致菌株特性的改变。
要解决这个问题，可采取以下措施：- 定期进行感性检查：定期检查培养基中的菌株特性，如形态、生长速度、代谢产物等。
- 保存原始菌株：在培养初期获得的原始菌株可以保存备份，以备将来恢复原始性状或与突变菌株进行比较。
4. 产物产量低：如果所期望的产物产量低于预期，可能是由于某些因素的影响。
解决方法可能包括：- 优化培养条件：例如，调整温度、pH值、培养基组分等，以最大程度地促进产物的合成和积累。
- 改进培养策略：例如，采用特定的培养方式（如批量培养、连续培养、补料策略等）来提高产物产量。
- 改进菌株选择：有时候，通过筛选和选育新的高产株系或采用遗传工程手段来改进产物产量。
5. pH 值偏离理想范围：菌种在培养基中的生长和代谢通常对pH 值敏感。
如果pH 值偏离了菌种所需的理想范围，可以采取以下措施：- 调整培养基的pH 值：通过添加酸或碱来调整培养基的pH 值，使其适应菌种的生长要求。
基层医院微生物实验室存在的问题及解决策略
基层医院微生物实验室存在的问题及解决策略关键词微生物实验室存在的问题解决方法近年来，随着医疗卫生事业快速发展，基层医院业务的拓展，加至二级医院评审需要，许多基层医院都成立了微生物实验室。
但是，由于一些实验室条件简陋，技术人员缺乏，在标本的采集、接种培养、菌种鉴定以及药敏试验中，存在许多不规范、甚至错误的做法。
本文通过对基层医院微生物实验室的走访和调查，基层医院微生物实验室从标本的采集到细菌培养鉴定和药敏实验中都存在很多问题，现将这些问题整理归纳，提出解决的方案。
使基层医院微生物实验室能在医院感染性疾病的检测诊断、指导临床合理用药、流行病学调查和统计、消毒灭菌效果的检测评价等方面发挥积极的作用。
存在的问题管理问题：微生物实验室作为二级医院评审必备条件，一些医院虽然成立了微生物实验室，但只是形同虚设。
由于微生物检验成本高收益少。
所以，领导不重视，前期投资少，技术力量缺乏；实验室制度不健全，没有可操作的SOP文件，没有标准菌株，不做室内质控，很难保证菌种鉴定、药敏实验的准确性。
实验室工作人员理论知识缺乏，观念落后，对新知识掌握不够。
技术问题：①标本采集：由于没有SOP文件，缺乏统一采集标准，大夫取标本随意性强，大量送检标本不合格。
如伤口分泌物，大夫用采样棒随意蘸取脓液送检，这样的标本阳性率很低；痰液标本不是咳自肺部，而是口咽部分泌物，大多连口都不漱，直接留取口水送检，分离不出致病菌；血培养只抽1次，草草了事；尿标本留取时，不告诉病人采集标本应做的准备，致使采集标本污染严重。
对实验前质量控制不重视，标本培养阳性率低，临床大夫有抱怨。
②标本的培养：由于实验室条件简陋，没有CO2培养箱，一些苛养菌生长不良，使血液、脑脊液等标本培养的阳性率减低。
有些医院为了节约材料，制作的培养基厚度不够，细菌生长不良，甚至用一个平板接种两个标本，严重违反操作规程。
③微生物室药敏试验，基层医院多以K-B法为主，各实验室在菌悬液浓度的配制、药敏纸片的选取、黏贴纸片间距等方面都存在很大差异；有很多细菌室没有CLSI手册，就更谈不上按标准执行；有些医院不论阴性菌、阳性菌、球菌或杆菌，选用同类药敏纸片进行药敏试验。
医院细菌培养及药敏试验中常见问题调研及改进对策探讨
医院细菌培养及药敏试验中常见问题调研及改进对策探讨在医疗领域中，病原体的分离培养和药物敏感性测试是非常关键的一步。
通过细菌培养和药敏试验对病原体进行鉴定和分析，有助于制定合理的治疗方案和避免抗生素滥用。
但在实际应用中，细菌培养和药敏试验中存在一些常见问题，本文将对这些问题进行调研，并提出改进对策。
细菌培养中的问题培养场所不合适在细菌培养过程中，需要将试管、平板等放入恒温箱中，温度和湿度等条件需要精准控制。
然而，在部分医院中，培养场所并未得到妥善的管理，导致封闭环境中的微生物污染。
同时，一些医院内科细菌培养室在制定设计方案时事先并未考虑到恒温箱的寿命等技术性要求，导致设备老化、运行寿命短等问题。
结果与真菌混杂细菌和真菌的分离培养需要不同的条件和介质。
有时，细菌和真菌可能同时存在并共存生长，而细菌培养过程中，可能存在真菌的污染，导致培养结果出现假阳性。
培养时间过长或过短培养时间的不同直接会影响细菌的生长情况。
培养时间过长，会导致菌落过于庞大、数量众多从而给后续药敏试验带来困难，甚至在读取结果时出现歧义或误读。
另外，由于医疗人员需要快速的获取病人的细菌结果，培养时间过短会缩短含意明确的药物诊断周期，从而带来副作用的风险。
药敏试验中的问题药敏纸片使用错误或不当药敏纸片上的药物种类丰富，并且不同药物对细菌敏感度不同。
药敏试验需要精准配制，并且在操作前精确估算、如何正确地将药敏试纸放置在津贴表面上，使用药物浓度和时间都应该得到平衡。
不同细菌菌株的敏感性差异不同的细菌菌株对药物的敏感性是不同的，而不同的药敏试验方法可能会对结果产生误差。
这是因为，药敏试验中的测量技术和条件还没有到达全自动化的水平，未能对药物浓度进行准确包气泡、一步加药以及精确监控反应时间等。
未能及时分离并鉴定菌株在药物治疗过程中，病情往往非常紧急。
国内一些医院未能及时地对病人的细菌分离和肿瘤组织分析进行检测，导致细菌种类的鉴定存在误差。
这样会导致药物治疗方案有偏差，病情得不到有效控制，严重时甚至会危及患者生命。
细菌药敏实验中需要关注的问题(1)
细菌药敏实验中需要关注的问题（1）写在课前的话长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参考，并提高疗效。
这就需要利用药敏试验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。
一、摘要随着抗菌药在临床的广泛使用，耐药细菌越来越多，临床医生也越来越关注细菌对不同种类抗菌药物的敏感性。
实验室检测细菌药敏就成了我们工作当中的一个主要的内容，怎么样才能做好细菌药敏试验？下面我们就来讨论一下细菌药敏试验中需要特别关注的几个问题。
这些问题包括：一、哪些细菌需要进行药敏试验？二、采取什么方法进行药敏试验？三、药敏试验应该检测哪些抗菌药物？四、药敏试验时我们应该注意哪些环节？五、如何正确报告药敏试验结果？六、怎样做好药敏试验的室内质控？二、哪些细菌需要进行药敏试验（一）需要进行药敏试验需要进行药敏试验的情况主要包括两种情况：一个是明确了这个细菌是引起感染的病源，注意这是引起感染的病源。
第二种情况是这种引起感染的细菌在治疗过程当中可能发生了耐药。
（二）无需进行药敏试验还有一些情况是不需要进行药敏试验的，比如我们正常呼吸道存在的一些菌群，像奈瑟菌，呼吸道的草绿色链球菌这些正常菌群是不需要进行药敏试验的。
第二类不需要进行药敏试验的情况是到目前还没有发现对某种药物具有耐药的细菌，比如A群和B群的链球菌，它们对青霉素目前来说都是敏感的。
所以也不需要进行药敏试验检测。
第三种不需要进行药敏试验的情况是，已知这一种细菌对某种药物具有天然的耐药性。
比如肺炎克雷伯菌对氨苄西林就是属于天然耐药，就没有必要再去检测肺炎克雷伯菌对氨苄西林的药物敏感性。
第四种不需要进行药敏试验的情况是，尿液标本中如果分离到三种或三种以上的细菌都不需要进行药敏试验。
（三）无需进行试验而报告了药敏结果可能导致的结果如果我们把不应该进行药敏试验的细菌做了药敏试验，并且把药敏试验的结果出了报告，可能会导致什么情况？临床医生可能根据我们报告的药敏试验结果采取了相应的治疗，而且这种治疗应该说是不必要的，或者是不适当的。
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个人对细菌培养及药敏试验中常见问题的改进对策和建议
【关键词】细菌培养及药敏试验；改进对策和建议
【中图分类号】R470 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）03-01136-02
医院微生物室的细菌培养及药敏试验是防治感染性疾
病和监测耐药菌株、防范医院感染的重要手段和方法，对临床工作应该具有准确指导作用。
然而，其实存在的问题较多，根据我们科多年的调研和体会，与此相关的若干不良现状却导致了药敏试验结果难以准确指导临床合理选用抗生素的
局面。
现个人分析如下：
常见问题：
1：感染性疾病的微生物培养送检率低，且送检标本质量堪忧。
许多感染性疾病的病原微生物标本送培养率都在50%
以下，应当重复送检的标本更少，同时，有限的送培标本还存在标本合格率低即采集时机、方法、采集途径、采集量的不科学问题，及时采集后的保护、送检时间、条件也有不当造成污染或病原体破坏而影响培养阳性率的情况，故在临床工作中正是由于感染性疾病病原送培率低、送培质量难保证，故造成了培养结果难以指导临床选药、经验性使用抗生
素的现象极为普遍的情况，遇疗效不好则频繁更换，不仅疗效不佳，而且这又是产生和促进细菌耐药性增加的因素之一。
2：医院所购进使用的抗生素谱有一定的差异，与商品化药敏板中的抗生素谱较难一致。
3：医院内部缺乏科学系统的细菌耐药性评估和由此决定的抗生素退出医院机制。
通常是检验科（微生物室）、药剂科、院感科各管一段，没有形成合力，药剂科只管购进抗生素，检验科只出培养和药敏结果，院感科也只将一些数字通报出来，成为缺少深入分析的“死”数字。
虽然大多数医院能将培养和药敏结果报告给临床医师，医师们也仅限于单对单地决定病人抗生素的选择，而很少有人对医院乃至全地区的细菌耐药性宏观上系统、科学地动态地分析评比，得出某一时期内的总趋势，以进一步指导医院建立起抗生素因耐药明显而定期退出医院
的机制，以利促进抗生素的合理使用和防止耐药性进一步加剧。
问题5：医院使用最多的前20 位抗生素品种与药敏试剂盒的品种吻合率低。
现在不少医院使用抗生素频率最多的抗生素往往不一
定是药敏试剂盒中的抗生素种类，而是盲目性或经验性使用的抗生素。
从上述问题的调研不难看出，这个系列问题的解
决不是一个简单工作，而是一个社会性系统工程，社会大系统涉及到药企、生物制品开发公司、医院以及可能需要出来协调的卫生行政部门甚至政府；而医院内问题的解决也不是一个科室能完成的，院内的小系统工程必须由院感科、医务科、护理部、药剂科、临床微生物室、临床各科共同协作完成，还需要医院行政管理干预才能完整调节，故以下建议侧重以问题解决角度提出，同时也涉及了部分具体部门和科室。
对策
1：多方努力提高感染性疾病和医院感染病例的病原学送培率。
送培病原学的标本少，临床经验性、盲目性用抗生素就更普遍，易造成耐药现象，故提高病原学送培率是感染性疾病针对性治疗的最起码要求，故应力求最大限度完成，建议医院采取管理措施实现对抗生素使用“用药必检”或对感染性疾病“逢菌必检”的双重战略，以促进现有不良局面的改善。
2：引导临床医师“谱对谱”用药。
提高临床病原送培率以及医院抗生素谱―药敏抗生素谱相吻合对应后，必须严格规范临床医师“谱对谱”选用抗生素的行为，即医院不仅定期公布耐药菌谱和抗生素耐药谱，而且强化和引导医师经常把医院耐药菌谱熟记于心，选
药时与相应耐药率高的抗生素谱相比对，尽量选择较少耐药的抗生素针对性给药，既提高疗效，又减少耐药。
3：动态调整“本土抗生素谱”和“本土药敏试剂盒抗生素谱”。
医院的抗生素谱应不断调整，这不仅有当前医疗保险和新型农村合作医疗政策对医院抗生素目录的管理要求，更重要的是十分必要用药敏试验、耐药率指标、医院感染标准要求来动态、科学调整“本土抗生素谱”，要把它当成一项持续改进的制度和措施，一方面让抗生素可“退”（退出医院）、可“进”（进入医院），退出抗生素发生后医院药剂科要及时动态补充、修订新的“本土抗生素谱”；另一方面检验科要相应调整“本土药敏试剂盒”的抗生素谱，使二谱的吻合率更高或完全吻合，以便及时向商家预定、购进新的药敏试剂盒用于药敏试验继续满足指导临床合理选择抗生素的要求。
4：清醒认识抗生素不合理使用与医院感染的关系，痛治抗生素不合理使用。
医院应该加强意识教育和抗生素与耐药性、不合理使用抗生素与院感关系的培训，让医务人员尤其医师们具有清醒的认识，把千方百计尽量提高病原学送培率、合理使用抗生素、利用病原学检测和药敏试验科学使用抗生素当成自己的必修课、是自己应尽的职责和义务，同时医院要制定对这种职责和义务的考评体系，用奖惩办法来“调理”这种意识和
行动。
5：建立各医院因耐药率高的抗生素退出医院机制。
为了把药敏的“死结果”变活，尤其要强化细菌耐药率检测结果对医院抗生素使用谱的调整指导作用，切实出台抗生素因耐药率高而退出医院的科学机制来实施必要的“率对率淘汰”，确保抗生素正确使用和防止更高的耐药率出现。
比如，建议对耐药率超过30～50%的抗生素必须预警，减少使用并改进使用的合理化程度，防止耐药率进一步升高，而对耐药率超75%以上的抗生素应暂时退出医院，并定期监测、以后耐药率下降后的该抗生素又可再次进入医院。
参考文献：
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[2] 徐秀华.临床医院感染学.长沙：湖南科学技术出版社，1998：81.
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