细菌分离培养及药敏试验方法及步骤
细菌培养报告总结范文
报告编号：2023-0001一、摘要本次细菌培养报告针对患者临床标本进行微生物学检验，通过严格规范的实验操作，对分离培养的细菌进行鉴定和药敏试验。
现将实验过程及结果总结如下：二、实验材料与方法1. 实验材料：临床标本、细菌鉴定试剂、药敏纸片、营养琼脂、血琼脂、生理盐水、无菌试管、无菌棉签等。
2. 实验方法：（1）标本采集：按照无菌操作原则，采集患者大便、尿液、血液等临床标本。
（2）标本处理：将采集到的标本进行适当稀释，分别接种于营养琼脂、血琼脂平板，37℃培养24小时。
（3）细菌分离：观察平板上菌落生长情况，挑取典型菌落进行纯培养。
（4）细菌鉴定：采用生化试验、血清学试验等方法对纯培养的细菌进行鉴定。
（5）药敏试验：采用纸片扩散法，对分离得到的细菌进行药敏试验。
三、实验结果1. 细菌鉴定结果：本次培养共分离出金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌等细菌。
2. 药敏试验结果：（1）金黄色葡萄球菌：对青霉素、头孢噻肟、万古霉素敏感，对红霉素、克林霉素、四环素耐药。
（2）大肠埃希菌：对头孢噻肟、氨苄西林、左氧氟沙星敏感，对阿莫西林、头孢他啶、四环素耐药。
（3）白色念珠菌：对氟康唑、伏立康唑、特比萘芬敏感，对酮康唑、咪康唑、克霉唑耐药。
四、讨论1. 本实验严格按照微生物学检验规范进行，保证了实验结果的准确性。
2. 通过细菌培养鉴定和药敏试验，为临床提供了有效的细菌学依据，有助于指导临床合理用药。
3. 在本次实验中，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等细菌的分离鉴定和药敏试验结果与临床诊断相符，为临床治疗提供了有力支持。
4. 针对本次实验结果，建议临床医生在治疗过程中，根据细菌的药敏试验结果，合理选用抗生素，以减少耐药菌的产生。
五、结论本次细菌培养报告通过对临床标本进行微生物学检验，成功分离出金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌等细菌，并对其进行了鉴定和药敏试验。
实验结果为临床治疗提供了有效依据，有助于提高治疗效果。
细菌培养药敏结果解读
细菌培养药敏结果解读细菌培养药敏结果解读1.引言细菌培养药敏结果是临床微生物实验室所进行的一项重要工作，有助于指导临床医生选择合适的抗生素治疗。
药敏结果是通过将细菌分离培养后，在不同的培养基上进行药物敏感性试验，通过观察生长生理和生化特性来确定药物对细菌的杀菌作用和药物的浓度。
2.方法2.1 细菌培养方法首先需要进行细菌的分离纯化，一般采用平板法、分离稀释法或滴管法等方法，将混合菌液均匀涂布在含有抗生素的寒天培养基上，培养一段时间后，进行菌落的形态观察，并选取单个菌落进行进一步的培养。
2.2 药敏试验方法将选取的纯化菌株接种在含有不同抗生素的寒天培养基上，根据不同的细菌相关标准，将药敏试验分为两类：定量法和定性法。
定量法：采用稀释法、琼脂滴定法或扩散法等方法，测定某一抗生素对细菌的最小抑菌浓度（MIC）。
定性法：采用直径（mm）法测定抗生素对菌落的抑制圈直径。
根据抑制圈的直径大小可以确定对某一抗生素的敏感性和抗性。
3.结果解读3.1 敏感性解读在药敏结果报告中，对于某一特定细菌对某一具体抗生素的敏感性会有一定的表述方式。
通常会用"S"表示敏感性，表示该细菌对该抗生素呈敏感状态；用"MS"表示中度敏感，表示该细菌对该抗生素的敏感性较差；用"R"表示耐药性，表示该细菌对该抗生素具有耐药性。
例如，对于金黄色葡萄球菌对青霉素的敏感性显示为"S"，表示金黄色葡萄球菌对青霉素呈敏感状态，可以选择青霉素作为治疗选项；对于大肠杆菌对青霉素的抗性显示为"R"，表示大肠杆菌对青霉素耐药，青霉素不能作为治疗选项。
3.2 抗生素选择根据细菌培养药敏结果，选择合适的抗生素进行治疗非常重要。
临床医生在选择抗生素时需要考虑以下几个因素：3.2.1 细菌的药敏性根据细菌对某一抗生素的敏感性，选择对该细菌有杀菌作用的抗生素。
通常选择对该菌株敏感的抗生素，可以起到较好的治疗效果。
分枝杆菌分离培养和药敏试验
分枝杆菌分离培养和药敏试验引言分枝杆菌（Branchiobdella）是一类无脊椎动物寄生虫，常见于淡水环境中。
它们具有扁平的身体和分枝状的触手，因此得名。
分枝杆菌对环境条件非常敏感，因此分离培养和药敏试验对其研究具有重要意义。
分枝杆菌分离培养的方法1.样品采集：在淡水环境中选择活跃的分枝杆菌寄生体作为样品。
2.样品处理：将样品置于理化条件适宜的培养基中，如R2A培养基等。
以适宜的温度和光照条件下培养。
3.分离纯培养：利用无菌技术将分枝杆菌从其他微生物分离出来。
常用方法包括稀释涂布法、均匀涂布法等。
4.单菌种培养：将分离得到的单个分枝杆菌菌落接种到新的培养基上进行单菌种培养。
5.培养基优化：根据菌株特性，优化培养基组成、温度、光照和其他环境条件。
通过观察菌落形态、生长速度等指标，选择适宜的培养条件。
分枝杆菌药敏试验的方法1.制备药敏试验板：选择适宜的培养基，如Mueller-Hinton琼脂、肉汤琼脂等。
将药物分别加入琼脂中，并制备成不同浓度的试验板。
2.培养分枝杆菌：将分枝杆菌菌液均匀涂布在药敏试验板上，培养在适宜的温度下。
3.药敏试验观察：观察菌落的生长情况和抑菌效果。
记录最小抑菌浓度（MIC）。
4.药敏结果解读：根据国际标准或相关研究的参考值，判断分枝杆菌对药物的敏感性和抗药性。
可以根据MIC值进行药物分类，如敏感、中度敏感和耐药。
5.药敏结果分析：根据实验结果，分析分枝杆菌的药物抗性特征，为临床治疗提供参考。
结论分枝杆菌分离培养和药敏试验是研究该虫寄生虫的重要手段。
合理的分离培养方法可以得到纯种菌落，为后续研究和药敏试验提供可靠的基础。
药敏试验能够判断分枝杆菌对药物的敏感性，为临床治疗提供重要参考。
参考文献： 1. Johnston, D.J. (2000). A new family of Branchiobdellidan (Annelida: Clitellata) ectosymbiontic on freshwater crayfishes: The Evansobdellidae. Proceedings of the Biological Society of Washington, 113(3): 842-850. 2. Erséus, C. (2001). Chapter 25 PhylumAnnelida: Clitellata, Branchiobdellida. In: Animal biodiversity: an outline of higher-level classification and survey of taxonomic richness (ed. by Z.Q. Zhang). pp. 281-282. 3. Erséus, C. (2005). Order Branchiobdellida. In: Annelida: Polychaeta, Myzostomida, Branchiura and Vestimentifera (ed. by J. B. Hutchings, S. P. Nimis, and C. Reish). pp. 97-100.。
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验一、引言鸭疫是一种由鸭疫里默氏杆菌引起的急性传染病，主要发生在水禽中，特别是对于幼鸭来说更为致命。
鸭疫病症主要表现为高热、抑郁、呼吸急促、鸭群死亡率极高，对农业生产造成了严重的危害。
对鸭疫病原菌的分离鉴定及药敏试验成为显得尤为重要。
二、分离鉴定1. 样品采集从患有鸭疫的幼鹅体内取样，如肺、脾、肝等内脏组织进行采集。
将样品放入无菌离心管中，冷链运输至实验室。
2. 细菌分离将取样的组织进行匀浆处理，然后用无菌梳子在无菌平板上均匀涂布。
置于37℃培养箱中培养24-48小时，直至出现细菌克隆。
3. 形态特征观察观察克隆菌落的形态特征，里默氏杆菌在培养基上呈现为小、灰白色，透明且呈环形的菌落，细菌呈杆状。
4. 生理生化特性鉴定将分离的细菌进行革兰氏染色，鉴定其为革兰氏阴性菌；进行氧化酶试验、嗜碱性酸加索试验等生化鉴定来确认细菌的特性。
5. 分子生物学鉴定利用PCR技术进行DNA提取和扩增，选择里默氏杆菌特异的引物进行扩增，最后通过测序鉴定其属于里默氏杆菌。
三、药敏试验1. 抗生素选取常见供试的抗生素包括庆大霉素、环丙沙星、卡那霉素、氨苄青霉素、头孢他啶、磺胺类药物等。
2. 药敏试验操作将分离的里默氏杆菌接种于固体培养基上，然后将不同抗生素的药片均匀涂布在培养基上，培养一段时间后观察对抗生素的敏感性。
3. 敏感性判定观察各药片周围是否有抑菌圈，并计算出抑菌圈直径，根据国家卫生部门颁发的药物抗菌圈直径标准来判断药敏性。
4. 结果判定根据药敏试验的结果，选择对里默氏杆菌具有良好疗效的抗生素进行治疗。
四、结语对幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验是鉴定病原体和确定治疗方案的重要手段。
合理的抗生素治疗可以有效控制鸭疫病的传播，保障畜禽养殖业的顺利进行。
希望通过不懈的努力，能够及时发现并有效治疗鸭疫病，保障水禽养殖业的健康发展。
细菌分离培养、接种技术及培养方法-精品医学课件
革兰染色法
Gram staining
临床微生物与免疫学检验教研室
一、实验目的
1.掌握细菌涂片制作方法； 2.掌握革兰染色法和细菌的基本形态； 3.了解革兰染色法的临床意义。
二、革兰染色原理
原理
细胞壁学说 等电点学说 化学学说
革兰阳性菌 细胞壁肽聚糖形成网状 结构，乙醇处理时，脱水 引起网状结构孔径变小， 通透性降低，结晶紫-碘 复合物不易脱去
实验步骤和方法
1)连续划线分离法：①将接种环火焰灭菌，待冷后取标 本少许；②左手持平板，五指固定平皿盖边缘，向外反 转手掌，装有培养基的平板于手掌内用拇指、小指和 无名指固定，并将平板边缘稍微提高呈现30～45度角， 置酒精灯前上方5～6cm；③右手持已取材的接种环， 先在平板一端涂布，然后快速大幅度左右来回以密而 不重的曲线形式作连续划线接种，使整个平板布满曲 线④划线完毕，将平板作好标记，置35℃孵育18-
革兰阴性菌
细胞壁肽聚糖含量低， 脂类物质含量高，乙醇处 理时，脂类物质溶解，细 胞壁的通透性增加，结晶 紫-碘复合物易脱去
三、实验器材和试剂
1.标本 ：金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的培养物。 2.试剂 ：革兰染液。 3.其他 ：载玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、显微镜。
四、操作步骤
1. 细菌涂片制备 ⑴涂片：取洁净载玻片一张，按无菌的方法取1~2环生 理盐水于载玻片上，按无菌的方法各取葡萄球菌和大肠埃 菌 培养物少许，在生理盐水中均匀研磨，涂好的菌膜直径 1cm左右。 ⑵干燥：室温下自然干燥或于酒精火焰半尺高处烘干。 ⑶固定：火焰加热法。目的是杀死细菌，并使菌体与载 玻片粘附牢固，染色时不致于被染液和水冲掉。
培养方法
2 二氧化碳培养法 (1)二氧化碳孵箱：能自动调节二氧化碳的含量和温度， 使用较为方便。 (2)烛缸法：取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨 口处涂以凡士林。将接种细菌的培养基放入缸中，点燃 缸内蜡烛，加盖密封。当蜡烛燃烧时会消耗缸内氧气并 产生CO2，随着缸内氧气的逐渐减少，蜡烛会自行熄 灭，此时缸内CO2浓度约为5％左右。 (3)化学法(重碳酸钠一盐酸法)：（自学）
药敏试验的原理
药敏试验的原理药敏试验原理药敏试验是一种用于确定细菌的抗生素敏感性的检测方法，主要用于指导临床上的抗菌治疗，以提高治疗效果和避免抗生素的滥用。
药敏试验的原理是通过将不同种类的抗生素与细菌进行反应，观察细菌的生长情况，来确定其对抗生素的敏感性或耐药性。
具体步骤包括以下几个方面：1. 培养细菌药敏试验前需要先从患者的样本中分离出目标细菌，并在培养基上进行培养，使其生长到所需的数量。
通常使用的培养基包括莫乃基、大肠杆菌平板以及血琼脂等。
2. 制备药物药敏试验所使用的药物通常是常见的抗生素，如青霉素、头孢菌素、氨基糖苷类等。
这些药物需要提前配置好，以确保其浓度的准确性和稳定性。
3. 稀释药物将药物稀释成不同的浓度，这些浓度范围从最小浓度开始，逐渐递增至最大浓度，通常会制备8个不同的浓度。
4. 加入细菌将药物加入到已经培养好的细菌中，让其在固定时间内进行吸收。
可以采用不同的方案，如将药物加到固定体积的培养基中，或是通过切开莫米德瓶，在其中加入药物溶液来进行。
5. 观察细菌的生长情况将稀释好的药物加入细菌中后，将其分配到不同的培养基上，通常使用微量进针或是延伸半硬质琼脂板法进行。
然后，将培养基放到恒温箱中进行培养，观察细菌的生长情况和形态。
6. 解读结果并进行分析根据细菌的生长情况来判断其对抗生素的敏感性或耐药性。
根据不同的药物浓度、细菌生长情况和形态，可以简单地确定细菌对药物的敏感性或耐药性。
药敏试验不仅可以指导临床上的抗菌治疗，而且可以在重要疾病爆发时，对于了解不同城市/城镇之间的细菌耐药率变化有帮助。
在药敏试验中，测定细菌对某种药物的敏感性或耐药性的方法有许多种，目前中国临床上主要采用两种常规药敏试验：纸片扩散法和微量进针法。
纸片扩散法纸片扩散法是一种常见的药敏试验方法，主要用于检测各种抗生素对细菌的敏感性。
该方法将已经稀释好的药物加在一个标准莫莫尼格琼脂板上，然后在细菌感染区域中放置一张含有药物的纸片，在培养室中孵化。
细菌的分离、培养及细菌对抗生素的敏感性试验
3、常用的接种方法
① 划线接种 ② 液体接种: ③ 穿刺接种 ④ 涂布接种 ⑤ 三点接种 ⑥ 浇混接种 ⑦ 注射接种
从固体培养基上挑取细菌，接种到 液体培养基中；或者从液体培养物中将 菌液接至液体培养基中，称为液体接种。
3、常用的接种方法
① 划线接种 ② 液体接种 ③ 穿刺接种： ④ 涂布接种 ⑤ 三点接种 ⑥ 浇混接种 ⑦ 注射接种
四、实验内容
1. 平板划线的练习
每人取普通平板1个: ① 练习如何打开平板； ② 练习接种棒的火焰灭菌； ③ 练习挑取单个菌落； ④ 练习分区平板划线。 再取普通平板1个, 4区划线后, 37℃培养, 作为考查内容.
接种环的火焰灭菌
平板分区划线示意图
把接种环上的材料涂在培养基的一侧，一般作3-5 次划线。
5、影响细菌生长的因素
① 营养 ② 水分、pH、渗透压 ③ 温度： ④ 气体环境 ⑤ 培养时间 • 只有处于最适生长温度时，生 长速度才最快，代时最短。 • 病原微生物通常为37℃。
5、影响细菌生长的因素
① 营养 ② 水分、pH、渗透压 ③ 温度 ④ 气体环境： ⑤ 培养时间 有的细菌还需要一定浓度的CO2 • 需氧菌 • 兼性需氧菌 • 厌氧菌 化学去氧 生物去氧 隔绝阻氧 替代驱氧
1、四个概念
① 分离培养： ② 接种 ③ 菌落 ④ 菌苔
就是把病料中的病原微生物分离培 养出来，并获得分离物的单一生长材料, 以进行诊断及有关研究工作。
1、四个概念
① 分离培养 ② 接种: ③ 菌落 ④ 菌苔
将微生物接到适合于它生长繁殖的 人工培养基上或活的生物体内的过程叫 做接种。
1、四个概念
2 1 3 4
2. 琼脂斜面的接种
每人取琼脂斜面1支: ① 练习打开斜面； ② 练习斜面到斜面的接种。
微生物检测流程
微生物检测流程
微生物检测的流程包括以下步骤：
1. 采集样本：在无菌环境中采集少部分食品样本，对样本实施均质处理，稀释样液，接种，然后恒温培养处理后的样本，取出观察食品样本。
2. 染色和观察：必要时，还需对标本行染色后再观察，这可对致病菌性质、来源进行鉴别，更能排除污染因素，使标本致病菌检出率得到大幅度提升。
3. 分离培养：若在镜检环节发现标本上吸附的细菌，就需对标本实施分离纯化并将其接种于适宜的培养基上，再将空气与温度调整至适合细菌生长的数值，获得便于进一步鉴定细菌。
4. 细菌鉴定：通过细菌形态、菌落特点、酶类检测、血清学试验、生化反应等方式鉴定分析分离获得的标本，明确致病原因。
5. 药敏试验：对分离致病菌行体外抗菌药物敏感性试验，预测其治疗作用，明确相关细菌耐药性，协助医生在临床诊断治疗中针对部分感染性疾病时采取合适药物，提升临床疗效。
6. 报告：要求在24小时内出具镜检报告，在24小时或次日出具初步鉴定与直接药敏结果；通常最后鉴定与细菌药敏结果不超过3天，除血培养外，任何一项送检标本需均在24小时内预报。
如需更多信息，可以查阅食品安全类书籍或者咨询微生物专家。
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细菌分离培养方法及操作步骤无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基，37℃恒温培养24 h，观察其生长特性。
目前细菌分离培养得常用方法有平板划线分离法、加热分离法与实验动物分离法。
平板划线接种法
这就是目前临床上最常用得分离接种方法。
它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落（有利于从含有多种细菌得标本中分离出目得菌），以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。
具体操作：
1、右手持接种环，在酒精灯上火焰灭菌；
图1 病料采集图2 接种环灭菌
2、待接种环冷却后，挑取被检料少许，左手持琼脂平板，以食
指为支点，用拇指与无名指将平皿揭开一空隙。
大约20℃时，迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基得边缘。
3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。
（注意：划线时，以腕力使接种环在琼脂平板表面划动，尽量不要划破培养基，划得线条要密，但不能重复旧线，以免培养物形成菌苔。
）
图3 平板划线接种法
4、划线完毕，合上平皿盖，将琼脂平板倒置，放入37℃温箱内培养18－24小时。
注意：分离培养用得平板培养基应表面干燥，可于临用前置37℃孵育箱内30分钟，这样表面即干燥有利于分离培养，又使培养基预温，对培养某些较娇弱得细菌有利。
细菌药敏试验方法操作步骤药敏试验就是抗菌药使用以前必不可少得一个基本环节，一个正
确得药敏结果能够科学得指导养殖户用药，减少抗菌素使用得盲目性，从而减少养殖户损失。
在临床实际生产中具备重要意义。
1、在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌得接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿得1/2。
然后，找到第二点划线至平皿得1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
图4 接种环划线
2、以无菌操作将灭菌得不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管得两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中得培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分得与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。
3、添加药物：按不同药液加样，样品加至满而不溢为止。
将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。
图5 添加药物
药敏试验结果：
图6 药敏试验结果
影响药敏结果得因素：
1、培养基:应根据试验菌得营养需要进行配制。
倾注平板时,厚度合适，约56mm，不可太薄,一般90mm直径得培养皿,倾注培养基
1820m为宜。
培养基内应尽量避免有抗菌药物得拮抗物质,如钙、镁离子能减低氨基糖苷类得抗菌活性,胞腺密啶核苷与对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磷胺药与TMP得活性
2、细菌接种量:细菌接种量应恒定,如太多,抑菌圈变小,能产酶得菌株更可破坏药物得抗菌活性。
3、药物浓度:药物得浓度与总量直接影响抑菌试验得结果,需精硫配制。
商品药应严格按照其推荐治疗量配制。
4、培养时间:一般培养温度与时间为37℃8-18小时,有些抗菌药扩散慢如多粘菌素,可将已放好抗菌药得平板培养基,先置4℃泳箱内2-4小时,使抗菌药预扩散,然后再放37℃温箱中培养,可以推迟细菌得生长,而得到较大得抑菌圈。
温培养箱中培养18-24h后备用。