抗中性粒细胞胞浆抗体ANCA的检测及临床意义
ANCA检测与应用
封闭纤维膜阻止非特异反应区发生反应。检测时，膜条与稀释的病人 血清共同孵育使血清中的抗体与膜条上的抗原结合。利用辣根过氧化 物酶标记抗人IgG二抗检测此结合抗体。加入底物后，此结合抗体表现 为可见的蓝色条带，终止反应后为棕色。将实验结果与试剂盒提供的
LIA特异判读卡比较，可判断病人的自身抗体特性。
及血管壁引起者为继发性血管炎，只是多种组织的病理改
变之一，与血管炎疾病不同。
病症特征
1、肺部 2、肾： 3、肝脏 4、心血管： 5、神经系统：
6、鼻咽部：
7、皮肤：
病理病因
血清病 药物变态反应及感染 乙型肝炎病毒 中华巨细胞病毒 单纯疱疹病毒
成人T细胞白血病病毒
ANCA的临床应用
•最常见的疾病如韦格纳肉芽肿（WG ）、原发性局灶节段坏死 性肾小球肾炎（ NCGN ）、结节性多动脉炎（ PAN ）等均可检 出ANCA。WG的cANCA阳性率可高达90%，抗PR3抗体是诊断 WG的特异性指标。在坏死性或新月型肾小球肾炎患者，ANCA 的阳性率可达 80% ， pANCA 对应的特异性抗原主要为 MPO 。 ANCA的检测可大大提高肾血管炎的早期诊断率。 •与ANCA 阳性相关的疾病还有继发性血管炎、非血管炎性疾病 （如肺部炎症疾病）、炎性溃疡、RA、SLE、自身免疫性肝脏 疾病等。但这些疾病中各自相关的ANCA靶抗原各不相同，不同
本病有诊断意义，其他检查有血管造影检查、自身抗体检
查等。
2、皮肤型变应性血管炎；红斑、结节、紫癜、风团、血疱、丘疹、坏死、溃疡、 脓疱 3、系统型变应性血管炎；多脏器受累
头痛、发热、乏力、关节及肌肉疼痛
粘膜:鼻衄、咯血、便血、 肾：蛋白尿、血尿
ANCA
# 非典型型ANCA（atypical ANCA，aANCA或 xANCA） 兼有 cANCA和pANCA 两种特性，aANCA不易与 pANCA区分， 并且主要靶抗原还不清楚，所以许多实验室将其列入 pANCA 之列，作为pANCA 的一个亚型
ANCA两种荧光染色型
核周型ANCA（pANCA）
胞浆型ANCA（cANCA）
..
ANCA两种荧光染色型
间接免疫荧光法（ indirect immunoflurescence, IIF）是检测ANCA最早采用的方法
应用乙醇固定的白细胞制备的抗原底物片，主要 表现为两种阳性荧光染色型：
# 胞浆型ANCA（cytoplasmic ANCA，cANCA） 胞浆弥漫性颗粒样染色，并在核叶之间有重染 # 核周型ANCA（perinuclear ANCA，pANCA） 环绕细胞核周围胞浆亮染
系统性血管炎诊断与鉴别诊断
炎症性肠病诊断与鉴别诊断 自身免疫性肝病诊断与鉴别诊断
其它疾病诊断与鉴别诊断
结缔组织病 感染性疾病
系统性血管炎（systemic vasculitis）
是以血管的炎症反应为主要病理改变的一类炎
性疾病
由于血管的炎性病变导致相应的组织器官供血
障碍、组织坏死
pANCA滴度与IBD临床活动性、病程、病变部位无关 IBD自身抗体谱联合检测有助于IBD诊断与鉴别诊断
pANCA与IBD
IBD患者血清中存在的ANCA主要是 p/aANCA 其靶抗原目前尚不清楚，LF、Cath G、BPI、
LYS、HEL等均有报道，但尚无统一结论
pANCA在UC中呈高特异性，在涉及到结肠病变
ANCA自身抗体谱
（Antineutrophil Cytoplasmic Autoantibodies）
ANCA
形成型肾小球肾炎有关的另一种ANCA-MPO
• 1989年Targen等发现ANCA与炎症性肠病（IBD）有
关 —pANCA /aANCA
• 1990年lüdemann等证实为cANCA的主要靶抗原为，
PR3 ，约占cANCA的80%～90%
（HEL）抗体
• 1992年Halbqachs-Mecareli等在IBD中发现抗组织蛋白酶G
（Cath G）抗体
• HEL与Cath G是中性粒细胞中嗜苯氨蓝颗粒中除PR3以外的
两种丝氨酸蛋白酶，与PR3存在氨基酸序列同源性，分子量 均为29 000，具有蛋白水解酶活性
其他特异性ANCA
• 抗溶酶体（lysozyme, LYS）抗体：1993年，Schmit等首先报
# 核周型ANCA（perinuclear ANCA，pANCA） 环绕细胞核周围胞浆亮染
# 非典型型ANCA（atypical ANCA，aANCA或 xANCA） 兼有cANCA和pANCA两种特性，aANCA不易与pANCA区分， 并且主要靶抗原还不清楚，所以许多实验室将其列入pANCA 之列，作为pANCA 的一个亚型
• 疾病活动性和病期阶段敏感性，初发不活动WG中，
阳性率50%，而活动性典型WG，几乎100%阳性
• 其它原发性血管炎25%的阳性机会，如显微镜下型多
血管炎（MPA）Байду номын сангаас坏死性新月体型肾小球肾炎 （NCGN）、结节性多动脉炎（PAN）等
• 该抗体滴度与病情活动一致，常被作为判断疗效、
估计复发的指标，从而指导临床治疗
Clinical Application of ANCA autoantibodies
抗中性粒细胞胞浆抗体检测在肾功能不全肾病中的临床意义
（ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ，Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ Ｐｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ Ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ
Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ，Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ，Ｊｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ２ １ ０ ０ ２ ９，Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
国际检验 医学杂 志 ２ ０ １ ３ 年Ｉ １ 月第３ ４ 卷第 ２ ２期
ｌ ｎ ｔ Ｊ Ｌ ａ ｂ Ｍｅ ｄ ， Ｎ ｏ ｖ ｅ ｍｂ ｅ ｒ ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ３ ４ ００ ９ ・
・
临床 检验 研 究论 著 ・
抗 中性粒 细 胞 胞 浆 抗体 检 测 在 肾功 能不 全 肾病 中 的临床 意 义
赵 春， 符布 清△， 史桂 兰 （ 江 苏省 中医院检 验科 ， 江 苏南京 ２ １ ０ ０ ２ ９ ）
摘 要 ： 目的 探 讨 肾病 患 者 不 同抗 中性 粒 细 胞 胞 浆 抗 体 （ ＡＮｃ Ａ） 结 果 组 肾功 能 变化 规 律 。方 法 测 定 肾功 能 不 全 患 者 不
Ｄ ＯＩ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ ． ２ Ｏ １ ３ ． ２ ２ ． ０ ３ ０
文献标识码 ： Ａ
文章编号 ： １ ６ ７ ３ ４ １ ３ Ｏ （ ２ Ｏ １ ３ ） ２ ２ — ３ ０ ０ ９ ０ ２
Ｃｌ ｉ ｎｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｉ ｇ ｎｉ ｆ ｉ ｃ ａｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ａ ｎｔ ｉ ｎｅ ｕ ｔ ｒ ０ ｐ ｈｉ ｌ ｃ ｙ ｔ ｏ ｐｌ ａ ｓ ｍｉ ｃ ａ ｎｔ ｉ ｂ ｏｄ ｉ ｅ ｓ ｉ ｎ ｒ ｅ ｎ ａｌ ｉ ｎｓ ｕｆ ｆ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎｃ ｙ ｏ ｆ ｋｉ ｄｎ ｅ ｙ ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｚｈ ａｏ Ｃｈｕ ｎ， Ｆ Ｂ ｕ ｑｉ ｎｇ 。 Ｓｈｉ Ｇｕｉ ｌ ａｎ
ANA、ANCA检测及临床应用
干燥综合征 （Sjögren‘s Syndrome）
SS特异性指标
Characteristic Antibodies SS-A SS-B 40-95% 40-95%
Ro-52抗体与SS
疾病 干燥综合征 系统性硬化症 肌炎 SLE MCTD RA n 88 81 26 210 21 165 抗Ro-52 阳性 81 % 28 % 31 % 38 % 19 % 5 %
SLE相关自身抗体检测的意义
自身抗体能被检测到的时间越早，提示这种抗体对早期预 防的意义越大。
自身抗体按照一定的时间顺序依次出现，可以作为反映疾
病进程的标记物。SLE自身抗体产生至少经历三个时期：
1）无临床症状，无自身抗体；2）无临床症状，但实验室检
查能发现自身抗体，如ANA，SSA等；3）导致疾病的特异性 自身抗体产生，如dsDNA,Sm等。 SLE抗体的检测应该保持连续性，才能实现有效预防自身抗 体对受累器官和疾病表型的预测。
某些自身抗体对自身免疫疾病发病有预警价值
ANA检测的临床意义
系统性红斑狼疮 活动期 非活动期 药物诱导的红斑狼疮 混合性结缔组织病（MCTD、Sharp综合征） 类风湿性关节炎
进行性系统性硬化症
多发性肌炎及皮肌炎 干燥综合征 慢性活动性肝炎 溃疡性结肠炎 其它风湿病
正常人
ANA阳性率% 95－100 80－100 100 100 20－40 20－50 85－95 30－50 70－80 30－40 26 5-10
局部的血管炎，这是神经精神狼疮的病理基础。
2012年系统性红斑狼疮国际临床合作组 （SLICC）制定的SLE分类标准
临床标准 1 急性皮肤狼疮 2. 慢性皮肤狼疮 3. 口腔溃疡 4. 非疤痕性脱发 5. 2个以上关节炎 6.浆膜炎（胸膜炎或心包炎） 7. 神经（癫痫或精神病） 8 肾脏（尿蛋白/肌酐比值尿蛋白> 0.5g/24h或红细胞管型） 9. 溶血性贫血 10. 白细胞减少症（<4000/ml）1次或 淋巴细胞减少症（<1000/ml）1次 11. 血小板减少症（<100000/ml） 至 少1 次 免疫学标准 1. ANA阳性 2. dsDNA抗体阳性（ELISA法需 两次阳性） 3. Sm抗体阳性 4. 磷脂抗体阳性(狼疮抗凝物或 梅毒血清试验假阳性、或中高 滴度心磷脂抗体（IgA、IgG或 IgM）、或抗β2糖蛋白I（ IgA、 IgG或IgM ）阳性） 5. 补体下降（C3 C4 CH50） 6. 直接Coombs试验阳性（除外 溶血性贫血）
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的检测及临床意义教学提纲
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的检测及临床意义抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测及临床意义――间接荧光免疫(IIF)方法（欧盟）一、ANCA概念及分类抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成份为靶抗原的自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的意义，已成为自身免疫性疾病的一项非常重要的常规检测项目。
目前，已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为ANCA的靶抗原，蛋白酶3(PR3)，髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶G(Cath G)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白 2 (H-LAMP2)，溶菌素(LYS)，天青杀素，防御素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶。
根据乙醇固定的中性粒细胞基质片中，可以区分两种不同的荧光模型：一种胞浆型（c-ANCA），是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光。
在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现相同。
其主要的靶抗原是蛋白酶3(PR3)。
另一种是核周型（p-ANCA），是围绕中性粒细胞细胞核周围的平滑带状荧光。
由多种抗原引起，主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶G(Cath G)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白 2 (H-LAMP2)，溶菌素(LYS)等。
不同抗体在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现有所不同。
抗MPO抗体产生的p-ANCA因耐甲醛，其荧光模型与在乙醇固定的中性粒细胞中出现的c-ANCA类似故叫甲醛抗性的p-ANCA。
而其他非MPO抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现，这种类型又称为甲醛敏感的p-ANCA。
故根据乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片表现，可初步判定ANCA的靶抗原PR3，MPO，非MPO三类。
二、ANCA 的检测间接荧光免疫方法是检测ANCA 的参考方法或者标准方法，至今也是最常用的经典方法。
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的检测及临床意义
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测及临床意思之阳早格格创做――间交荧光免疫(IIF)要领（欧盟）一、ANCA观念及分类抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞战单核细胞胞浆成份为靶抗本的自己抗体，对于系统性血管炎炎症性肠病等多种徐病的诊疗战鉴别诊疗具备要害的意思，已成为自己免疫性徐病的一项非常要害的惯例检测名目.暂时，已经有十余种中性粒细胞胞浆身分被证据为ANCA的靶抗本，蛋黑酶3(PR3)，髓过氧化物酶(MPO)，人黑细胞弹性蛋黑酶(HEL)，乳铁蛋黑(LF)，构造蛋黑酶G(Cath G)，杀菌/通透性巩固蛋黑(BPI)，人溶酶体相闭膜蛋黑2(H-LAMP2)，溶菌素(LYS)，天青杀素，防卫素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶.根据乙醇牢固的中性粒细胞基量片中，不妨区别二种分歧的荧光模型：一种胞浆型（c-ANCA），是匀称分集正在所有中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光.正在乙醇战甲醛牢固的中性粒细胞片中，其荧光模型表示相共.其主要的靶抗本是蛋黑酶3(PR3).另一种是核周型（p-ANCA），是盘绕中性粒细胞细胞核周围的仄滑戴状荧光.由多种抗本引起，主要靶抗本是髓过氧化物酶(MPO)，人黑细胞弹性蛋黑酶(HEL)，乳铁蛋黑(LF)，构造蛋黑酶G(Cath G)，杀菌/通透性巩固蛋黑(BPI)，人溶酶体相闭膜蛋黑2(H-LAMP2)，溶菌素(LYS)等.分歧抗体正在乙醇战甲醛牢固的中性粒细胞片中，其荧光模型表示有所分歧.抗MPO抗体爆收的p-ANCA果耐甲醛，其荧光模型与正在乙醇牢固的中性粒细胞中出现的c-ANCA类似故喊甲醛抗性的p-ANCA.而其余非MPO 抗体没有与甲醛牢固的中性粒细胞反应，无荧光表示，那种典型又称为甲醛敏感的p-ANCA.故根据乙醇战甲醛牢固的中性粒细胞片表示，可收端判决ANCA 的靶抗本PR3，MPO ，非MPO 三类.二、ANCA 的检测间交荧光免疫要领是检测ANCA 的参照要领大概者尺度要领，于今也是最时常使用的典范要领.IIF 是区别c-ANCA 战p-ANCA 的前提，有较下敏感性，可半定量，但是IIF 测定的是总ANCA ，没有克没有及准确区别靶抗本，需特同性的检测要领动做补充.由于多种免疫性徐病患者存留ANA ，用IIF 法检测ANCA 时，会爆收搞扰真验截行的推断.为预防搞扰局面，采与了四基量共同的检测即：乙醇牢固的粒细胞；甲醛牢固的粒细胞；Hep-2（人喉癌细胞）细胞；猴肝细胞.基量片各细胞分集及意思如表一所述.ANCA 荧光模型及表示如表二所述.表一：四联基量片分集及意思区别ANA 的搞扰：Hep-2细胞有典型荧光表示，Hep-2细胞甲醛牢固 粒细胞1：推断c-ANCA ，2：区别 p-ANCA 对于甲醛敏感仍旧耐受甲A 粒甲A ，表二：ANCA 荧光模型及表示三、注意事项为普及对于徐病诊疗的特同性，检测时应注意以下问题1、检测ANCA ，普遍修议共时搞IIF 初筛战确认真验，以普及ANCA 的临床应用价格，没有搞单独初筛大概单独确认真验，免得落矮对于徐病诊疗的特同性.2、没有克没有及仅检测抗PR3战MPO 二种特同性抗体，而没有检测，那样简单节造ANCA 对于徐病诊疗的特同性.3、用IIF 检测时，仅使用乙醇牢固的粒细胞片，那样没有克没有及庄区别ANA 与ANCA ：借帮猴肝细胞战其中的肝血窦粒细胞.ANCA 阳性，惟有肝血窦粒细胞出现荧光，.如果二者共时阳性，所有肝细胞核皆有荧光.猴肝细胞乙醇牢固 粒细胞是尺度真验基量.区别二种荧光模型：c-ANC荧光模型荧光表示乙醇牢固粒细胞 甲醛牢固粒细胞 Hep-2细胞 猴肝细胞A N A 阳性c-ANCA 阳性胞量浮现弥集的细颗粒荧光，胞量荧光浑晰勾勒出核的表面，分页核之间荧光巩固.胞量浮现弥集的细颗粒荧光，胞量荧光浑晰勾勒出核的表面，分页核之间荧光巩固. 阳性肝细胞自己无荧光. 仅肝血窦粒细胞出现荧光.p-ANCA 阳性甲醛耐受p -ANC A 浮现核周胞量仄滑丝状戴荧光.荧光阳性的胞量主要集结正在分页核周围，产死环状大概没有准则的块状.胞量浮现弥集的细颗粒荧光，胞量荧光浑晰勾勒出核的表面，分页核之间荧光巩固.阳性肝净细胞自己无荧光. 仅肝血窦粒细胞出现荧光.甲醛敏感p -ANC A浮现核周胞量仄滑丝状戴荧光.荧光阳性的胞量主要集结正在分页核周围，产死环状大概没有准则的块状.阳性 阳性肝净细胞自己无荧光. 仅肝血窦粒细胞出现荧光.A N A 阳性ANCA 阳性 细胞核阳性，荧光强度巩固 阳性细胞核浮现荧光表示，如ANA 所述 肝细胞核阳性.肝血窦粒细胞已睹荧光.甲醛耐受p-ANCA 阳性细胞核阳性，荧光强度巩固荧光表示如c-ANCA 阳性，乙醇，甲醛牢固粒细胞所述细胞核浮现荧光表示，如ANA 所述.肝细胞战肝血窦粒细胞皆有荧光.甲醛敏感p-ANCA 阳性 细胞核阳性，荧光强度巩固阳性细胞核浮现荧光表示，如ANA 所述.肝细胞战肝血窦粒细胞皆有荧光.重排除ANA的搞扰，简单出现假阳性.四、临床意思（一）ANCA与本收性小血管炎韦格纳肉芽肿(WG)，隐微多动脉炎(MPA)，坏死性月牙体性肾小球肾炎(NCGN)战变应性肉芽肿性血管炎(CSS)等等本收性系统性小血管炎的收病与ANCA稀切相闭，临床上已将上述徐病统称为ANCA相闭小血管炎.ANCA,特同性PR3抗体战抗MPO抗体的检测已成为本收性小血管炎的敏感特同的血浑教检测名目.1、抗PR3抗体特同性PR3抗体为WG的标记性抗体，抗PR3抗体荧光模型以c-ANCA为主.但是以c-ANCA诊疗WG特同性为90％，而以抗PR3抗体的特同性可超出95％.抗PR3抗体正在其余的本收性血管炎中业不妨检测出去，但是阳性率较矮.抗PR3抗体敏感度与徐病的活动性及病程有闭，正在徐病的早期症状没有明隐时，便可出现阳性.果而抗PR3抗体常动做WG的早期诊疗、疗效推断、复收预计的指标，对于临床治疗有要害的参照价格.2、抗MPO抗体抗MPO抗体荧光模型以p-ANCA为主，主要与MPA、NCGN、CSS相闭.还可睹于其余徐病，如节结性多动脉炎，抗肾小球基底膜肾病，WG，SLE，RA，药物诱导的狼疮，Felty概括症等.抗体滴度与徐病活动性相闭，可用于早期诊疗、疗效推断、复收预计的指标，对于临床治疗有要害的参照价格.抗MPO抗体阳性下度提示坏死性血管炎大概特收性NCGN，对于诊疗本收性小血管炎的特同性达到99％.果而每一个没有明本果的血管炎大概肾小球肾炎的患者，皆该当检测ANCA.表三：ANCA 与本收性小血管炎（二）ANCA 与药物诱导性血管炎连年去没有竭有药物治疗引起的ANCA 阳性的病例报导，如丙基硫氧嘧啶，肼苯哒嗪，普鲁卡果酰胺，青酶胺，好谦霉素，他巴唑/甲巯咪唑等.其中报导比较多的是少久使用丙基硫氧嘧啶引起的ANCA ，其特性是滴度下，抗体谱广（抗本主假如MPO ，也可共时陪随大概单独出现其余靶抗本，如PR3，LF ，Cath G ，BPI ，LYS 等）.药物诱导性血管炎患者临床表示与本收性血管炎类似，停行丙基硫氧嘧啶用药后，临床症状佳转，ANCA 可转阳.果此，少久使用丙基硫氧嘧啶治疗历程中，应定期检测ANCA ，趁早创造药物诱导性血管炎.（三）ANCA 与其余徐病除本收性血管炎中，其余一些徐病中也可出现ANCA ，主要为p-ANCA ，其靶抗本并没有是PR ，MPO ，而是LF ，Cath G ，BPI ，LYS 等1、缓性炎症性肠病(CIBD)CIBD 是一种消化系统的自己免疫性徐病，包罗溃疡性结肠炎（UC ），克罗恩病（CD ）二种.往常的CIBD 诊疗依好X 线查看，内窥镜及构造教诊疗，缺累灵验的考查室指标.连年去钻研创造UC 病人血浑中ANCA 阳性率为60-80％，而CD 患者的阳性率为10-20％，多为p-ANCA ，相闭靶抗本有BPI 等.滴度与徐病的活动度战病程无闭.果相闭徐病荧光模型靶抗本（％）韦格纳肉芽肿(WG) C ，P （少睹） PR3（85），MPO （10） 隐微多动脉炎(MPA)C ，PPR3（45），MPO （45） 坏死性月牙体性肾小球肾炎(N CGN)C ，P （少睹） PR3（25），MPO （65） 变应性肉芽肿性血管炎(CSS) C ，P （少睹） PR3（10），MPO （60） 结节性多动脉炎（PAN ）少睹 PR3（5），MPO （15） 抗肾小球基底膜病（抗GBN ）PMPO为p-ANCA正在UC阳性率下，CD阳性率矮，故可动做二者的鉴别诊疗及UC早期诊疗指标.2、结缔构造病正在结缔构造病中，ANCA阳性主要睹于SLE战RA，其余结缔构造病中少睹.但是文件报导正在SLE战RA阳性率好别特地大（16-69％），那大概与使用要领，抗本基量片及处事人员火仄有很大闭系.SLE中ANCA阳性大概与缓性炎症反应有闭，如动脉炎，浆膜炎战CRP减少等.有报导抗MPO抗体与RA的闭节中益伤及血管益伤有闭.3、自己免疫性肝病正在自己免疫性肝病中，也可检测到p-ANCA.正在本收性软化性胆管炎(PSC)患者中，p-ANCA阳性率下达70-80％，是该病要害的血浑教指标.4、其余徐病有文件报导，HIV,阿米巴，细菌熏染以及没有明本果的肺部缓性炎症及纤维化患者中有p-ANCA阳性.。
抗中性粒细胞胞浆抗体检测及临床意义论文
抗中性粒细胞胞浆抗体的检测及临床意义【摘要】目的：探讨抗中性粒细胞胞浆抗体（anca）检测及其临床意义。
方法：采用间接免疫荧光法（iif）和酶联免疫吸附法（elisa）对610例患者进行anca检测。
结果：患者中panca阳性69例，占11.31%，canca阳性43例，占7.05%，不典型anca（aanca）6例，占0.98%。
结论：采用iif法elisa法联合检测anca有利于anca相关疾病的诊断与鉴别诊断。
anca阳性患者临床表现为多脏器受累， anca检测对及时诊断，尽早开展治疗提供有力依据，有助于提高生存率。
【关键词】抗中性粒细胞胞浆抗体；pr3；mpo【中图分类号】r446 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2013）06-0480-01抗中性粒细胞胞浆抗体（antineutrophil cytoplasmic autoanti bodies）是以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要意义。
anca作为特异性血清学诊断工具对anca相关疾病的诊断、疗效观察、判断病情活动和复发有重要意义。
为此，对我院610例行anca检测的患者分析，情况如下：1 资料与方法1.1一般资料采样鞍山市中心医院2010年5月～2011年4月检测anca的610例患者，女性占57.4%，男性42.6%。
1.2采用间接免疫荧光技术（iif）对anca进行检测。
抗原基质为hep-2细胞/猴肝/甲醛固定的中性粒细胞/乙醇固定的中性粒细胞。
乙醇固定的基质显示两种荧光模型：一种是胞浆型（canca），为均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光。
其主要靶抗原为位于中性料细胞嗜苯胺蓝颗粒中的蛋白酶3（pr3）。
另一种是核周型（panca），是围绕细胞核的平滑带状荧光。
主要靶抗原为髓过氧化物酶（mpo），其它还有粒细胞特异性弹性蛋白酶、乳铁蛋白、溶菌酶、组织蛋白酶g等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
抗中性粒细胞胞浆抗体A N C A的检测及临床意
义
文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测及临床意义
――间接荧光免疫(IIF)方法（欧盟）
一、ANCA概念及分类
抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成份为靶抗原的自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的意义，已成为自身免疫性疾病的一项非常重要的常规检测项目。
目前，已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为ANCA的靶抗原，蛋白酶
3(PR3)，髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶G(Cath G)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白2 (H-LAMP2)，溶菌素(LYS)，天青杀素，防御素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶。
根据乙醇固定的中性粒细胞基质片中，可以区分两种不同的荧光模型：
一种胞浆型（c-ANCA），是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光。
在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现相同。
其主要的靶抗原是蛋白酶3(PR3)。
另一种是核周型（p-ANCA），是围绕中性粒细胞细胞核周围的平滑带状荧光。
由多种抗原引起，主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶G(Cath G)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白2 (H-LAMP2)，溶菌素(LYS)等。
不同抗体在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现有所不同。
抗MPO抗体产生的p-ANCA因耐甲醛，其荧光模型与在乙醇固定的中性粒细胞中出现的c-ANCA类似故叫甲醛抗性的p-ANCA。
而其他非MPO抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现，这种类型又称为甲醛敏感的p-ANCA。
故根据乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片表现，可初步判定ANCA的靶抗原PR3，MPO，非MPO三类。
二、ANCA的检测
间接荧光免疫方法是检测ANCA的参考方法或者标准方法，至今也是最常用的经典方法。
IIF是区分c-ANCA和p-ANCA的基础，有较高敏感性，可半定量，但IIF测定的是总ANCA，不能准确区分靶抗原，需特异性的检测方法作为补充。
由于多种免疫性疾病患者存在ANA，用IIF法检测ANCA时，会产生干扰实验结果的判断。
为避免干扰现象，采用了四基质联合的检测即：乙醇固定的粒细胞；甲醛固定的粒细胞；Hep-2（人喉癌细胞）细胞；猴肝细胞。
基质片各细胞分布及意义如表一所述。
ANCA荧光模型及表现如表二所述。
表一：四联基质片分布及意义
表二：ANCA荧光模型及表现
三、注意事项
为提高对疾病诊断的特异性，检测时应注意以下问题
1、检测ANCA，一般建议同时做IIF初筛和确认实验，以提高ANCA的临床应用价值，不做单独初筛或单独确认实验，以免降低对疾病诊断的特异性。
2、不能仅检测抗PR3和MPO两种特异性抗体，而不检测，这样容易限制ANCA对疾病诊断的特异性。
3、用IIF检测时，仅使用乙醇固定的粒细胞片，这样不能严格排除ANA的干扰，容易出现假阳性。
四、临床意义
（一）ANCA与原发性小血管炎
韦格纳肉芽肿(WG)，显微多动脉炎(MPA)，坏死性新月体性肾小球肾炎(NCGN)和变应性肉芽肿性血管炎(CSS)等等原发性系统性小血管炎的发病与ANCA密切相关，临床上已将上述疾病统称为ANCA相关小血管炎。
ANCA,特异性PR3抗体和抗MPO抗体的检测已成为原发性小血管炎的敏感特异的血清学检测项目。
1、抗PR3抗体
特异性PR3抗体为WG的标志性抗体，抗PR3抗体荧光模型以c-ANCA为主。
但以
c-ANCA诊断WG特异性为90％，而以抗PR3抗体的特异性可超过95％。
抗PR3抗体在其他的原发性血管炎中业可以检测出来，但阳性率较低。
抗PR3抗体敏感度与疾病的活动性及病程有关，在疾病的早期症状不明显时，就可出现阳性。
因而抗PR3抗体常作为WG的早期诊断、疗效判断、复发估计的指标，对临床治疗有重要的参考价值。
2、抗MPO抗体
抗MPO抗体荧光模型以p-ANCA为主，主要与MPA、NCGN、CSS相关。
还可见于其他疾病，如节结性多动脉炎，抗肾小球基底膜肾病，WG，SLE，RA，药物诱导的狼疮，Felty综合症等。
抗体滴度与疾病活动性相关，可用于早期诊断、疗效判断、复发估计的指标，对临床治疗有重要的参考价值。
抗MPO抗体阳性高度提示坏死性血管炎或特发性NCGN，对诊断原发性小血管炎的特异性达到99％。
因而每一个不明原因的血管炎或肾小球肾炎的患者，都应该检测ANCA。
表三：ANCA与原发性小血管炎
（二）ANCA与药物诱导性血管炎
近年来不断有药物治疗引起的ANCA阳性的病例报道，如丙基硫氧嘧啶，肼苯哒嗪，普鲁卡因酰胺，青酶胺，美满霉素，他巴唑/甲巯咪唑等。
其中报道比较多的是长期使用丙基硫氧嘧啶引起的ANCA，其特点是滴度高，抗体谱广（抗原主要是MPO，也可同时伴有或单独出现其他靶抗原，如PR3，LF，Cath G，BPI，LYS等）。
药物诱导性血管炎患者临床表现与原发性血管炎类似，停止丙基硫氧嘧啶用药后，临床症状好转，ANCA可转阴。
因此，长期使用丙基硫氧嘧啶治疗过程中，应定期检测ANCA，及早发现药物诱导性血管炎。
（三）ANCA与其他疾病
除原发性血管炎外，其他一些疾病中也可出现ANCA，主要为p-ANCA，其靶抗原并非PR，MPO，而是LF，Cath G，BPI，LYS等
1、慢性炎症性肠病(CIBD)
CIBD是一种消化系统的自身免疫性疾病，包括溃疡性结肠炎（UC），克罗恩病（CD）两种。
以往的CIBD诊断依赖X线检查，内窥镜及组织学诊断，缺乏有效的试验室指标。
近年来研究发现UC病人血清中ANCA阳性率为60-80％，而CD患者的阳性率为10-20％，多为p-ANCA，相关靶抗原有BPI等。
滴度与疾病的活动度和病程无关。
因为p-ANCA在UC阳性率高，CD阳性率低，故可作为两者的鉴别诊断及UC早期诊断指标。
2、结缔组织病
在结缔组织病中，ANCA阳性主要见于SLE和RA，其他结缔组织病中少见。
但文献报道在SLE和RA阳性率差异特别大（16-69％），这可能与使用方法，抗原基质片及工作人员水平有很大关系。
SLE中ANCA阳性可能与慢性炎症反应有关，如动脉炎，浆膜炎和CRP增加等。
有报道抗MPO抗体与RA的关节外损害及血管损害有关。
3、自身免疫性肝病
在自身免疫性肝病中，也可检测到p-ANCA。
在原发性硬化性胆管炎(PSC)患者中，p-ANCA阳性率高达70-80％，是该病重要的血清学指标。
4、其他疾病
有文献报道，HIV,阿米巴，细菌感染以及不明原因的肺部慢性炎症及纤维化患者中有p-ANCA阳性。