几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究
9种药用植物内生或附生真菌的分离及其杀虫、抑菌活性
抑制 真菌活性 测定 ： 株发酵液 １ 与９ 融化 的 将菌 ｍＬ ｍＬ Ｐ Ａ培养 基混 匀 ， 入无 菌 的培养 皿 中制成带 药培 养基 平 Ｄ 倒 板 。待培 养 基凝 同后 ， 每个 培 养基 平 面上 放 １ 在 个供 试 菌
基平 板上 ， ４ ２ ２ ～ ６℃ 下避 光培 养”。 ’ 表 １ 内生 、 附生 真 菌 的分 离 结 果
植物样品
坐
内 菌 菌株 生真 ／
株 编 号
１ ． 菌株的纯化 ＿２ ２
尖 端 蔺 丝 挑 取 法 对 所 分 离 的 内生 、 生 真 菌 进 附 行 纯 化 。 定 期 观 察 其 生 长情 况 ． 新 长 的菌 丝 挑 取 将
本研究选用9种药用植物采用5种植物病原真菌5种病原细菌1种蚊幼虫进行系统的生物测定以期评价这些植物内生附生真菌的生物活性为筛选结构新颖的农药活性化合物和综合开发利用植物资源提供依据
第 ４ 卷第 ４ ８ 期
农 药
ＡＧＲ０ＣＨＥ＾ 缸ＣＡＬ Ｓ
Ｖ ． ８ ＮＯ ４ ｂ１ ４ ． ．
至
Ａｐ ． ０９ １ ２０
挑取 少量 蔺落接种 于培养 瓶 巾 ， 在转 速为 １ ０ ２ ０ｒ ｉ 的 ～ ０ ／ ｎ ８ ａ ｒ
摇床 上于 ２～ ８Ｇ培养 ７ １ ： ６ ２ （ ： ～ ２ｄ １ ． 发 酵产 物 处理 ＿４ ２ 发酵终止后 ， 滤 纸过滤发 酵产物 ， 液备用 。 用 滤
１２５ 生 物 活 性 测 定 ＿．
均 可 分 离 到 较 多 的 附生 真菌 或 内生 真 菌 ， 比例依 次为 其
附生 真菌 的分 离培养 ： 采 集 的新鲜 植物各 部分 组织 ２ ．４ ３ ．８ 、 ２６ ％ 、９５ ％（ 将 ３７ ％、 ４０ ％ ２ ．３ １ ．５ 见表 １ 。 ） 用 来 水 冲洗 ， 去表 面 附着 的泥 沙 ， 内晾 干后 直接 在 除 室 超 净 Ｔ作 台上 ｊ无 菌 刀片切 成小块 样品 ， ＝ ｝ ＿ Ｊ 紧贴于 分离 培养
药用植物乌头内生真菌抗菌活性研究
药用植物乌头内生真菌抗菌活性研究摘要对从乌头(Aconitum Carmichaeli Debx.)植物中分离获得的内生真菌进行抗菌活性筛选,其中59株内生真菌(占总菌数的35.98%)有抗菌活性,高活性菌株(抑菌圈直径>15mm)有42株(占抗菌活性菌株的71.19%),抗菌谱广的菌株有3株,它们分别是曲霉(Asp-ergillus)、毛壳菌属(Chaetomium)和毛霉(Mucor),表明乌头植物内生真菌中广泛分布着有抗菌活性的菌株。
关键词乌头;内生真菌;抗菌活性AntipathogenicActivityofEndophyticFungifromPharmaceuticalPlantofAconitum Carmichaeli Debx.LI Zhi-yingLI Shao-lanYANGLi-yuanCHEN You-weiWU Shao-hua(Institute ofMicrobiology,Yunnan University,Kunming Yunnan 650091)AbstractScreening antipathogenic activity of endophytic fungi from Aconitum Carmichaeli Debx.,59 straims(35.98% of total strains)endophytic fungi had antipathogenic activity,and 42 straims(71.19% of antipathogenic activity strains)had high antimicrobial activities(inhibitone zone diameter>15mm));3 straims of endophytic fungi had a broad antipathogenic spectrum,comprising Aspergillus,Chaetomium and Mucor. It was shown that there were many antipathogenic strains distributed in Aconitum Carmichaeli Debx.Key wordsAconitum Carmichaeli Debx.;endophytic fungi;antipathogenic activity乌头(Aconitum Carmichaeli Debx.)为毛莨科属多年生草本植物,该植物全株有毒,主要成分为二萜类双酯型生物碱。
云南几种药用植物内生真菌及其活性代谢产物研究的开题报告
云南几种药用植物内生真菌及其活性代谢产物研究的开题
报告
一、研究背景
云南是我国重要的药用植物资源地区，具有丰富的植物物种和独特的地理环境。
其中，药用植物中常含有大量的内生真菌，这些真菌具有丰富的生物活性代谢产物，可以作
为新型药物的重要来源。
近年来，越来越多的研究表明，云南药用植物内生真菌的活
性代谢产物具有广泛的药理作用，为药物开发提供了新的思路。
二、研究目的
本研究旨在对云南几种药用植物内生真菌进行分离、鉴定，分析其代谢产物，并探究
其生物活性及药用价值，为深入开发利用云南药用植物资源提供基础研究支持。
三、研究内容
（一）云南几种药用植物内生真菌的分离和鉴定
本研究将选择云南常见的药用植物，通过表层消毒和分离培养的方法，从其根、茎、叶、花等部位上分离出内生真菌，通过形态学特征和分子生物学鉴定方法对其进行系
统学的分类和鉴定。
（二）真菌代谢产物的分离和鉴定
本研究将从不同的内生真菌菌株中分离出各种代谢产物，并通过色谱分离、核磁共振
等多种分离技术进行纯化和鉴定。
（三）真菌代谢产物的活性评价
本研究将对从内生真菌中分离出的代谢产物进行活性评价，包括抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗氧化等多种生物活性测定方法，分析其生物活性和药用价值。
四、研究意义
本研究将为深入了解云南药用植物内生真菌的多样性和代谢产物的生物活性提供重要
数据支持，为药物研发提供新的思路和方法，同时也为云南药用植物资源的保护和利
用提供科学依据。
从柏科植物中分离具有抗肿瘤、抗真菌、抗菌活性的内生真菌
从柏科植物中分离具有抗肿瘤、抗真菌、抗菌活性的内生真菌摘要最近的研究可以看出柏科植物体内分离的内生真菌的生物勘探情况。
本篇文章主要探讨健康寄主植物如柏木属、杉属、侧柏属体内高活性的内生真菌菌种。
本文中，内生链格孢菌、链格孢菌、链格孢属是从健康的桧柏球体内分离出的。
内生真菌生物活性和生物多样性的恢复是一个生物地理学和主机标识。
我们同样研究了链格孢菌的代谢产物，突出了他们的抗增殖、抑制生长的能力以及对稻瘟、梨火疫病菌和丁香假单胞菌等模型目标菌的抗菌活性。
总之，自从链格孢菌被发现，它们总是作为致病性和致敏真菌被报道，我们的研究表明了它们在桧柏植物叶面组织的一个可能的其它生态位。
此外，在这项研究中，我们还报道了柏科植物家族之间内生链格孢属的显著的生物活性。
引言目前正在对从许多寄主植物中分离物种的生物多样性和植物内生菌的生物活性进行调查。
最近的研究强调，柏科植物中寄宿了许多种类的内生菌。
我们的研究进一步表明，柏科植物内生菌具有一定宽度范围的生物活性。
例如，抗真菌、抗细菌和抗增殖活动。
在最近几年，已经常证明寄主植物的内生菌可以产生与寄主植物相同的生物活性分子。
柏科植物家族的物种广泛被用于药材中。
因此，由桧柏球植株体内的内生微生物生产的代谢产物的生物活性可能与植物本身的代谢产物生物活性类似。
因此，一些药物发现的项目表明，可以利用柏科植物体内的一些内生真菌来生物合成抗癌因子。
因此，研究柏科植物中内生真菌的定植可能会发现除真菌多样性之外的其他生物活性分子来源。
链格孢属的真菌（座囊菌纲、子囊菌门）广泛分布在植物，土壤，食品，环境和室内空气中。
链格孢属物种作为植物病原菌、弱兼性寄生菌、腐生菌以及内生菌已经适应了各种各样的生活方式。
特别是在免疫功能低下的人群中一些链格孢属菌已成为人体的病原体，它们是人类常见的过敏原。
其中哮喘，暗色丝孢霉病，灰指甲，鼻窦炎，溃疡皮肤感染，角膜炎，内脏感染骨髓炎都是由链格孢属真菌引起的，其中链格孢是最常见的一种。
药用植物内生真菌研究进展
药用植物内生真菌研究进展药用植物是一个重要的药源，内生真菌在药用植物中的生物学功能和化学成分方面起着重要的作用。
随着现代科学技术的发展，人们对内生真菌的研究逐渐深入，逐步揭示了内生真菌在药用植物中的作用机理及其药理学活性。
本文将从药用植物内生真菌的分类、生物学功能与药理学活性、内生真菌类药物及其应用等方面进行详细介绍。
内生真菌属于真菌界的一支，是在植物的根际土壤中与植物形成一种特别的合生关系，形成菌根。
目前，已经确定了许多药用植物中的内生真菌，这些内生真菌根据不同的分类特征可被大致分成两类：外生菌根和内生菌根。
1. 外生菌根：外生真菌在植物根表面形成菌丝，在植物体内与根的皮层细胞相间穿梭。
药用植物内生真菌的生物学功能与药理学活性药用植物内生真菌中存在着丰富的生物学功能与药理学活性，其中一些物质甚至具有天然的药物活性。
具体来说，药用植物内生真菌在以下几个方面具有着重要的作用。
1. 产生生长激素药用植物内生真菌可以产生一些植物激素，如肽类激素和生长调和激素等。
这些激素能刺激植物的生长和发育，提高植物对病害的抵抗力。
2. 制造抗生素药用植物内生真菌可以制造一些对人类有益的抗生素。
例如，药用植物人参的内生真菌能制造一种重要的抗菌物质，它具有广谱的抗菌作用，可以有效地控制许多疾病的传播。
3. 产生次生代谢产物药用植物内生真菌可以产生许多有益的次生代谢产物，如黄酮、生物碱、苯乙醇类化合物等。
这些化合物具有很强的抗氧化、抗菌、抗炎等多种生物活性，对人体健康有益。
药用植物中的内生真菌是值得进一步发掘和利用的珍贵资源。
在过去的几十年中，许多药用植物中的内生真菌被提取出来，制成类似药物的产品，并被广泛地应用于医药、保健等领域。
1. 菌丝体类药物菌丝体类药物是从药用植物中提取的内生真菌中制备出来的。
它们的主要基质是内生真菌的菌丝体和细胞壁等。
这些药物可以用于治疗心血管系统、神经系统、免疫系统、消化系统等多种疾病。
总之，药用植物中的内生真菌是一个非常重要的药源，在医药、保健等领域中具有广泛的应用前景。
三种药用植物内生真菌抗菌活性菌株的筛选
三种药用植物内生真菌抗菌活性菌株的筛选黄银芳;范志英;章方珺;刘幸;姚韶莹;王丽薇【摘要】目的筛选具有抗多种植物病原真菌活性的药用植物内生真菌菌株.方法以常见的植物病原真菌包括灰葡萄孢( Botrytis cinerea)、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)、终极腐霉(Pythium ultimum)与立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)菌株为指示菌,对分离自天南星、多花黄精、银杏三种药用植物的73株内生真菌菌株进行抗菌活性筛选.结果共有20株菌株对至少一种指示菌有抑制活性,占总菌株数的27.4％;其中天南星内生真菌ZJCWF006茎点霉Phoma sp.、多花黄精内生真菌ZJCY610变灰青霉Penicillium canescens与银杏内生真菌TMSFI69团青霉Penicillium commune对四种指示菌均有较强抑制活性.结论药用植物内生真菌对植物病原菌有较高抑制活性.【期刊名称】《健康研究》【年(卷),期】2012(032)002【总页数】5页(P94-96,102,封2)【关键词】药用植物;内生真菌;抗菌活性【作者】黄银芳;范志英;章方珺;刘幸;姚韶莹;王丽薇【作者单位】杭州师范大学健康管理学院药学教研室,浙江杭州310036;杭州师范大学健康管理学院药学教研室,浙江杭州310036;杭州师范大学健康管理学院药学教研室,浙江杭州310036;杭州师范大学健康管理学院药学教研室,浙江杭州310036;杭州师范大学健康管理学院药学教研室,浙江杭州310036;杭州师范大学健康管理学院药学教研室,浙江杭州310036【正文语种】中文【中图分类】R284植物内生菌几乎存在于所有目前己研究过的植物内部组织中，由于内生真菌生境的特殊性，其次生代谢产物非常丰富［1］。
自从1993年Stierle等［2］从短叶红豆杉Taxus brevifolia中分离到一株产紫杉醇的内生真菌Taxomyces andreanae 以来，已经从不同植物的内生真菌中分离到多种结构新颖的化合物，这些物质具有多种生物活性，如抗肿瘤［3］、抗菌［4］、免疫抑制［5］、抗氧化［6］等活性。
5种药用植物内生真菌的分离及其抑菌活性的研究
２ ０ 年 １ 月 ０７ ２
徐 州 师范 大学 学 报 （ 自然 科 学 版 ）
Ｊ ｆＸｕ ｈ ｕ Ｎｏ ｍａ Ｕｎ ｖ Ｎａ ｕ ａ ｃｅ ｃ ｉｉｎ ．ｏ ｚ ｏ ｒ ｌ ｉ．（ ｔ ｒ ｌＳ ｉｎ ｅ Ｅｄ ｔ ） ｏ
摘 要 ： 樟 树 、 贞 、 大 功 劳 、 股 蓝 及 荔 枝 草 的 叶 片 、 柄 、 和 枝 条 等 部 位 分 离 内 生 真 菌 ， 以 金 黄 色 葡 萄 球 从 女 十 绞 叶 茎 并
菌 、 草芽孢杆菌 、 枯 大肠 杆 菌 、 脓 杆 菌 为 试 验 菌 对 分 离 的 内 生 真 菌 进 行 了 抑 菌 活 性 筛选 ． 果 从 ５种药 用植 物 中共 分 离 绿 结
步探讨 抑 菌活性 菌株 与其 宿主植 物 的某 些相 关性 ， 我们 从 这 ５种 药用 植 物 中分 离 了 内生 真菌 并 进行 了
其菌 株抑 菌活性 的研究 ， 步发现 部分 菌株 具有 抑菌 活性． 初
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
植物 样品 来源
樟树、 女贞 、 十大 功劳 、 绞股蓝 、 枝草均 采 自徐州 师范 大学校 园． 材部位 为 叶片 、 荔 取
内生 真菌 （ｎ ｏ ｈ ｔ ｕ ｇ ｓ 是指 那些 在其 生 活史 中某一 段 时 期 生活 在 活 的植 物组 织 内， ｅ ｄ ｐ ｙｉ ｆｎ ｕ ） ｃ 对植 物 组织 不引起 明显 病 害症状 的真菌 ， 包括 那些 在其 生活 史 中的某 一 阶段 营 表 面生 的腐 生 真 菌 和对 宿 主暂 时没 有伤 害 的潜 伏性病 原 真菌 和菌根 菌 ． ］ 已有研 究 表 明 ， 可从 各 种 内生 真 菌 中发 现新 抗 生 素 ． ］ 近两
初探紫薇内生真菌的抑菌活性
２ 结果 与分 析
２ ． １ 结果 统计 （ 表２ ） ２． ２ 内生 真菌 的活 茵对 ２ 种真菌 的 抑制 作用 以青霉 菌 、 黑 曲霉 菌 为拮抗 作用 指示 菌 ， 对从 紫薇树 中分 离得 到２ １ 株 内生 真菌 进行 抑制 试验 。 由表可 见紫薇 ２ １ 株 内生 真菌 中有 １ ８ 株对 １ 种 或多 种指 示菌 有抑 菌作用 ， 占总分 离株数 的９ ０ ％。 其 中对 黑 曲霉菌有 抑 菌作用 的有 １ ８ 株， 对青 霉菌 有抑 菌作 用的 ２ Ｏ 株。 以青 霉菌为 测试 菌 的活性 菌株 中 ， 抗菌 活性 多 以中等 黑 曲霉菌
＋＋ 上
表 １内生 真 菌抗 霉 菌 活性 结 果
编号
ＺＯ Ｉ Ｚ０ ２
Ｎｕ ｍｂ ｅ ｒ ｓ 活性 ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ 青 霉菌 Ｑｉ ｎ ｇ Ｍｅ ｉ Ｊ ｕ ｎ
＋＋＋ ＋
Ａｓ ｐ ｅ ｒ ｇ ｉ Ｕ ｕ ｓ
活性为主 ， 为９ 株， 占总活性菌株数的４ ５ ％， 高涪 陛次之 ， 为６ 株， 占总活性菌株数
分 离所 用 材料 采 自某校 ， 树体 健壮 ， 无其 他病 虫 害紫薇 树 的茎 、 叶。
（ ２ ） 培养 基 ： Ｐ Ｄ Ａ固 体培 养基 ： 马铃 薯 ２ ０ ０ ｇ ， 葡萄 糖２ ０ ｇ ， 琼 脂２ ０ ｇ ， 水１ ０ ０ ０ ｍＬ ， 自然 ｐ Ｈ，
菌丝（ 菌落） ， 取切 口处菌丝 ， 转接至新Ｐ Ｄ Ａ培养基上培养， 编号并保存。
２ ． ２ห้องสมุดไป่ตู้． ２ 抑菌 活 性测 试
在１ ２ １ ℃的 温度 下 灭菌 ２ ０ ｍｉ ｎ （ ３ ） 菌种：
药用植物内生真菌研究进展
药用植物内生真菌研究进展药用植物内生真菌是指生长在药用植物内部的真菌，与药用植物相互作用并相互补充，对植物生长发育和生理生化过程都具有一定的促进作用。
因此，对药用植物内生真菌的研究一直受到广泛的关注。
本文将着重介绍药用植物内生真菌的研究进展，包括内生真菌的物种、分离与鉴定方法以及与药用植物的相互作用等几个方面。
已经证实的药用植物内生真菌主要有以下几个物种：细菌属（Burkholderia）、丝状菌属（Streptomyces）、放线菌属（Actinomycetes）、拟青霉属（Aspergillus）、黄曲霉属（Penicillium）等。
这些菌株可以从药用植物中分离得到，并且有着一定的生物活性。
例如，Burkholderia物种可以产生一些有机酸、激素等物质，促进植物的生长发育；而Streptomyces物种则是天然产生的许多新药物的来源。
二、药用植物内生真菌的分离与鉴定方法药用植物内生真菌的分离与鉴定是研究该领域的重要方面。
目前，常用的内生真菌分离方法有以下几种：表面消毒法、体内钻孔法、均质法、泥土拍板法等。
其中，表面消毒法是最为常用的一种方法，其基本原理是通过对植物表面进行消毒，去除外部微生物的干扰，然后将植物分段切割并移植到适宜的培养基上进行分离。
鉴定方法则包括形态学、生理生化和分子生物学等多个方面。
其中，形态学是最为直观的一种鉴定方法，主要是通过观察内生真菌的形态、菌落、孢子等特征进行判断。
而生物学和分子生物学方法则可以更加准确地鉴定内生真菌的种类和亲缘关系。
三、药用植物内生真菌与药用植物的相互作用药用植物内生真菌与药用植物之间的相互作用是研究药用植物内生真菌领域的重点。
这种相互作用是一种共生关系，内生真菌通过促进植物生长发育、提高植物免疫力、产生各种有益物质等方式来帮助植物生长，而植物则为内生真菌提供适宜的生长环境和营养物质。
一些研究表明，药用植物内生真菌可以增加植物的抗氧化能力、抗病毒性能力等。
药用植物内生真菌研究进展
药用植物内生真菌研究进展随着生物多样性的逐步发现和了解，药用植物内生真菌的研究逐渐引起了广泛关注。
内生真菌是一类生活在植物体内或外周的真菌。
在药用植物内，内生真菌不仅与植物共生、互利共赢，对植物的生长发育也具有一定的促进作用，并产生种类繁多的次生代谢产物，有些次生代谢产物（如生物碱、多糖等）则具有重要的药用价值。
因此，药用植物内生真菌的研究引人关注。
1. 药用植物内生真菌种类及其药用价值目前已经发现，药用植物内生真菌种类繁多，包括拟青霉菌、链霉菌、放线菌、灰色链格孢菌等。
这些真菌可以合成多种次生代谢产物，有些次生代谢产物被用于药物研发。
以拟南芥为例，拟南芥是多年生草本植物，生长在欧洲、北非、亚洲等地区，其内生真菌多样性丰富。
其中一种内生真菌Epicoccum nigrum产生抗氧化活性成分，具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗氧化等功效。
另外，拟青霉菌、放线菌等内生真菌还合成了大量酮酸、生物碱、多糖等次生代谢产物，这些次生代谢产物不仅具有药用价值，而且对生态环境的保护也起到重要作用。
2. 药用植物内生真菌的生态和代谢机制药用植物内生真菌具有较强的适应性和竞争力，对于药用植物的生长发育具有重要的影响。
内生真菌与植物之间形成复杂的代谢网络，这种代谢网络不能简单地用“毒药/抗生素”形容，它更像是一种相互斗智斗勇的生态竞争过程。
内生真菌通过与植物形成真菌-植物共生体，可以生产多种次生代谢产物，这些次生代谢产物具有多样的生物活性。
植物的生长发育状态是影响内生真菌次生代谢产物数量和质量的一个关键因素。
而植物自身合成的次生代谢产物如生物碱和黄酮类物质则可以影响内生真菌的生长，因此内生真菌与植物之间的代谢相互作用非常活跃且复杂。
药用植物内生真菌产生的次生代谢产物具有广泛的药用价值和应用潜力。
目前，拟青霉菌已经被开发为几类抗肿瘤药物的先导化合物，比如氟达拉滨等。
此外，基于药用植物内生真菌的次生代谢产物，研究者可以开发具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等作用的天然产物药。
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几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究#64#微生物学通报 2001年28(6)参考文献[1]MasatoshiGOTO,EijiKUWANO,WerasitKANLAYAKRIT,ShinsakuHAYASHIDA,BiosiBiotechB iochem,1995,59:16~20.[2]MASTOSHGOTO,TSUYOSHISEMIMARU,KENSUKEFURUKAWA,SHINSAKUHAYASHIDA,APPLENVIRONM I-CROBIOL,1994,60:3926~3930.[3]KeijiKAINUMA,HiroshiISHIGAMI,ShoichiKOBAYASHI,JJpnSoc.Starchsci,1985,31:136 ~141.[4]ShinsakuHAYASHIDA,andPerfectoQ.FLOR,AgricBiolChem,1981,45:2675~2681.[5]Cheor-lHoKim,Suk-TaeKwon,HajimeTaniguchi,Dae-SilLee,BiochimicaetBiophysicaActa,1992,1122:243~250.[6]HiroshiMorita,KouheiMizuno,MayumiMatsunage,YusakiFujio,JApplGlycoci,1999,46 :15~21.[7]Jun-ichiABE,SusumuHIZUKURI,JJpnSocStarchSci,1988,35:p.43~47.[8]TomokoTAKAHASHI,KeikoKATO,YoshioIKEGAMI,MasachikaIRIE,JBiochem,1985,98:663-671.[9]KohsaiFukuda,YujiTeramoto,M.Goto,J.Sakamoto,S.Mitsuiki,Hayashida,BiosciBiot echBiochem,1992,56:556~559.[10]MittsuruMONMA,etal,AgricBiolChem,1989,53:1503~1508.几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究*李桂玲王建锋黄耀坚郑忠辉苏文金(厦门大学生命科学院厦门 361005)**摘要:从三尖杉,南方红豆杉及香榧中分离出172株内生真菌,对其进行抗菌活性检测,结果表明共90株内生真菌对一种或多种植物病原真菌,如红色面孢霉(Neurosporasp.),木霉(Trichodermasp.),镰刀菌(Fusariumsp.)等有抑制作用,来自三尖杉、南方红豆杉和香榧的抗菌活性菌株比例分别为40%,5412%及5711%。
其中平板抑菌圈直径大于15mm的高抗菌株有35株。
按Ainsworth等鉴定系统和方法进行鉴定,具有抗菌活性的内生真菌主要分布于拟青霉属、镰孢菌属等18个属中。
关键词:内生真菌,抗真菌作用中图分类号:Q93915 文献标识码:A 文章编号:0253-2654(2001)06-0064-05STUDYONTHEANTIFUNGALACTIVITIESOFENDOPHYTICFUNGIISOLATEDFROMSEVERALPHARMACEUTICALPLANTSLIGu-iLing WANGJian-Feng HUANGYao-Jian ZHENGZhong-Hui SUWen-Jin(LifeSciencesInstituteofXiamenUniversity,Xiamen,361005)Abstract:Onehundredandseventy-twostrainsofendophyticfungiwereisolatedfromTaxusmairei,CephalotaxusfortuneiandTorreyagrandiscv.merrillia.Theresultoftheantifungalassayshowsthatni netystrainsofthefungihaveantagonismagainstoneormorebotanicalpathogenicfungi,suchasNeurosporasp.,Tri chodermasp.,Fusar-iumsp.etc.Thepercentageofantifungalstrainstotestedstrainsareasfollows:40%Cephal otaxusfortunei,*教育部高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(No.96038402)**通讯联系人收稿日期:2000-11-13,修回日期:2001-01-312001年28(6) 微生物学通报#65#5412%Taxusmairei,5711%Torreyagrandiscv.merrillia.Thirty-fivestrainshavehighantifungalactivities,andtheirinhibitionzonediameterisatleast15mm.Theactiveendophyticfungiwereidentifie das18genera,mostofwhichbelongtoPaecilomycesandFusariumetc.Keywords:endophyticfungi,antifungalaction真菌是由不同进化途径的类群组成的,现已发现69,000种,而且每年尚以1000余种的新种递增。
保守的估计,全世界真菌的总数可达150万余种[1],故真菌有/生物资源的宝库0之称。
真菌和植物的相互关系极其有趣和复杂,它们可以是寄生、共生或互生。
其共生关系主要表现在:一方面,植物为内生真菌提供光合产物和矿物质;另一方面内生真菌的代谢物能刺激植物的生长发育。
业已证明,内生真菌能够参与植物活性成分的合成,或者对植物次生代谢产物进行转化。
目前人们所利用的微生物资源仅是自然界存在微生物的一小部分,现存的微生物资源急需环境的有效保护、大量的分离和培养菌种才能有效地保存和利用。
但是环境资源保护并不能使资源优势转化为具有经济效益的天然产品,真菌资源的真正价值在于受到切实重视和有效的利用。
从这个意义上说,内生真菌的研究对于植物-真菌共生生态、天然产物的开发等有着重要的意义。
本文旨在通过对分布于福建省的几种珍稀药用植物的内生真菌抗真菌活性的初步研究,确定抗真菌活性菌株的生态分布及其抗菌特性,从而为植物-真菌生态关系的研究以及植物内生真菌资源的利用提供依据。
1 材料111 材料及来源南方红豆杉(Taxusmairei)树皮样品:采自福建省尤溪县汤川和黄林两地及福建省武夷山自然保护区,树径为20~80cm,海拔800~900m。
三尖杉(Cephalotaxusfortunei)树皮样品:采自福建省武夷山自然保护区,树径为10~50cm,海拔800~900m。
香榧(Torreyagrandiscv.merrillia)树皮样品:采自福建省武夷山自然保护区,树径为30~120cm,海拔900m左右。
112 拮抗测定指示菌红色面孢霉(Neurosporasp.),葡萄状穗霉(Stachybotryssp.),弯孢霉(Curvular-iasp.),轮枝孢霉(Verticilliumsp.),镰刀菌(Fusariumsp.),木霉(Trichodermasp.)。
2 方法211内生真菌分离采用平板倾注法[2,3]。
上述南方红豆杉、三尖杉、香榧植物样品(带有少量木质部的树皮)采集后即予处理分离。
即用无菌小刀去除外皮层和木质部,取内皮层及韧皮部用70%乙醇消毒3min,无菌水冲洗3min。
将大约015g的树皮加2mL的无菌水于研钵中充分研磨后,取011mL的匀浆液于培养皿中,加入10~15mL的含终浓度50mg/L庆#66#微生物学通报 2001年28(6)大霉素的PDA培养基,25e培养,待菌丝长出后,经过纯化,挑出单菌落于斜面上。
212 内生真菌液体培养及发酵液处理液体培养采用PDA液体培养基,取菌丝块接种,25e,120r/min培养7d。
发酵液经冻融,匀浆后,4000r/min离心5min,取上清液,过滤除菌。
213 抑菌实验采用滤纸片法[4~7]。
将斜面培养的指示菌用无菌水洗下其孢子,与适量培养基混匀(孢子终浓度约为106个/mL),倒平板。
待培养基凝固后,将无菌滤纸片( =5mm)用样品浸湿,贴放于培养基上,25e培养48h,测量抑菌圈直径。
214菌株鉴定按Ainsworth等真菌鉴定系统和方法进行鉴定[8,9]。
3 结果及分析311 植物内生真菌的抗真菌活性从上述3种植物中共分离得内生真菌172株,其中红豆杉107株,三尖杉30株,香榧35株。
内生真菌拮抗实验结果见表1。
从表1可以看出,172株供测菌株中,共有90株内生真菌对一种或多种指示菌有抑制作用(占总分离菌株数的5213%)。
3种植物内生真菌的抗菌活性菌株所占比例都超过40%,香榧抗菌活性菌株所占比例最高,达5711%。
这表明,植物内生真菌中存在着广泛的抗真菌资源。
表1 内生真菌的抗真菌活性及宿主分布宿主植物红豆杉三尖杉香榧总计供测菌株(株)1073035172抗菌活性菌株数(百分比)58(5412%)12(40%)20(5711%)90(5213%)抗菌活性菌株的分布(株)A 49 18 1582B92415C2091140D291535A:无抗菌活性,B:抑菌圈直径15mm.从表1还可以看出,3种植物内生真菌活性菌株的分布有较大差别。
红豆杉内生真菌抗真菌高活性菌株(抑菌圈直径>15mm)所占比例最高,三尖杉的最低。
而香榧内生真菌中,一般活性菌株(抑菌圈直径10~15mm)所占比例最高,低活性菌株(抑菌圈直径312 香榧内生真菌抑菌活性香榧内生真菌的抗菌活性主要表现在对葡萄状穗霉的抗性上,35株供测菌株中,共有14株(占40%)对葡萄状穗霉有抗菌活性,对镰刀菌有抗性的菌株也较多,占供测菌株的2816%,但未发现对弯孢霉有抗性的菌株。
香榧内生真菌高抗菌株较少,5株抗真菌高活性的菌株主要对轮枝孢霉起抑制作用。
高活性菌株多数分布在隔指孢属(Dactylium)中。
313 红豆杉内生真菌抑菌活性红豆杉内生真菌中,对红色面孢霉有抗菌活性的菌株最多,共有28个菌株(占供测菌株的2614%),而对轮枝孢霉有抗菌活性的菌株最少,仅有4株(约占总供测菌株2001年28(6) 微生物学通报#67#的318%)。
其活性菌株主要分布在拟青霉属(Paecilomyces)及头孢霉属(Cephalospo-rium),高抗菌株也主要为拟青霉属的菌株,且多数可以抑制红色面孢霉的生长。