生物指示剂
生物指示剂数量标准
生物指示剂数量标准生物指示剂数量标准是用于评估环境质量和生态系统健康状况的重要工具。
生物指示剂是指在特定环境条件下对环境变化敏感的生物种群或群落，通过对其数量和分布的观察和测量，可以反映出环境质量的变化。
生物指示剂数量标准的制定与应用可以帮助我们更好地了解和保护自然环境。
生物指示剂数量标准的制定需要考虑以下几个方面：1. 物种选择：选择适合特定环境的生物种群或群落作为生物指示剂。
不同的生物种类对不同的环境因素有不同的敏感性，因此在选择生物指示剂时需要根据具体的环境条件进行合理选择。
2. 数量观测：通过对生物指示剂数量的观测和测量，可以了解到环境质量的变化趋势和程度。
观测可以采用定点观测、定期观测等方式进行，以确保数据的准确性和可比性。
3. 数据分析：将观测到的生物指示剂数量数据进行统计和分析，得出相应的指标和标准。
这些指标和标准可以用于评估环境质量的好坏，并为环境管理和保护提供科学依据。
4. 标准制定：根据数据分析的结果，制定相应的生物指示剂数量标准。
标准可以包括最低限度数量、优良数量、丰富数量等不同级别，以便评估环境质量的不同水平。
5. 应用范围：生物指示剂数量标准可以应用于各种不同类型的环境，包括水体、土壤、空气等。
不同类型的环境可能对应不同的生物指示剂和数量标准，需要根据具体情况进行制定和应用。
生物指示剂数量标准的制定和应用对于环境保护和生态系统健康具有重要意义。
通过对生物指示剂数量的观测和分析，可以及时发现环境质量的变化，并采取相应的措施进行保护和改善。
同时，生物指示剂数量标准也可以为环境管理和决策提供科学依据，帮助制定合理的环境政策和措施。
总之，生物指示剂数量标准是评估环境质量和生态系统健康状况的重要工具，通过对生物指示剂数量的观测和分析，可以了解到环境质量的变化趋势和程度，并为环境管理和保护提供科学依据。
在今后的环境保护工作中，我们应该进一步加强对生物指示剂数量标准的研究和应用，为保护自然环境做出更大的贡献。
3m生物指示剂说明书
3m生物指示剂说明书
3M生物指示剂的使用说明书可能因具体型号而有所不同。
以下是1292型
生物指示剂的使用说明：
1. 适用范围：适用于121℃下排气及132℃预真空压力蒸汽灭菌器灭菌效果监测。
2. 使用方法：将生物指示剂放入生物测试包中，置于压力蒸汽灭菌器内最难灭菌的位置处，执行正常装载灭菌过程。
灭菌完毕后，取出指示剂冷却10
分钟后，将指示剂内部安瓿瓶压碎，在专用的3m快速生物阅读器内培养3小时左右，在3m快速生物阅读器上观察荧光反应。
3. 结果阅读：荧光阳性表示灭菌失败，荧光阴性表示灭菌合格。
只有对照管为阳性，其生物监测结果才算有效。
4. 注意事项：该生物指示剂不能用于121℃预真空和132℃下排气压力蒸汽灭菌锅，及干热、化学蒸汽、环氧乙烷和其他的低温灭菌过程。
5. 有效期：24个月。
此外，有些型号的生物指示剂使用方法可能包括将指示剂放于标准测试包中，按国家规范，分别将各测试包放于锅内不同位置，灭菌处理完毕，取出生物指示剂。
挤破内含的安瓿，与一支对照管一起放于37℃恒温箱，48小时后，
阅读结果。
灭菌管不变色（呈绿色），表示灭菌通过；灭菌管变色（呈黄色），表示灭菌不通过；同时培养的对照管应为阳性（黄色）。
以上信息仅供参考，具体使用方法请参照相应型号的生物指示剂说明书。
生物指示剂的培训资料
生物指示剂相关知识与使用1.生物指示剂概念生物指示剂（BI）：系一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。
用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的孢子。
2.生物指示剂形式2.1 一定数量的孢子附着在惰性载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等。
2.2 孢子悬浮液密封于安瓿中。
3.生物指示剂特性3.1 具有较高的耐受性、贮存稳定性、批与批之间的一致性、无致病性、易于培养和制备的细菌芽孢。
3.2 耐受性要高于灭菌前产品中污染菌的耐受性。
3.3 符合地方、国内、国际相关法规要求。
3.4 可根据灭菌程序的设计要求而制备。
4. 生物指示剂分类4.1 第一类生物指示剂：由微生物孢子和载体包装而成。
4.2 第二类生物指示剂：由可接种在产品表面或内部的孢子悬液构成。
4.3 第三类生物指示剂：包含微生物恢复生长培养基的类型。
5 生物指示剂选择7. 生物指示剂采购、验收、质量信息登记7.1 生物指示剂使用部门根据年度验证总计划内容及临时需求说明填写生物指示剂购买申请，采购部门根据申请从有资质的生产厂家及供应商处购得相应生物指示剂，购买的生物指示剂应附有相应的合格质量检验报告单。
7.2 生物指示剂进厂验收部门为库房，库房人员应该仔细核对品名、规格、批号、数量、生产日期、有效期、生产厂家，检查外包装应完好，封口严密，标签完整，内容清晰，不合格的生物指示剂退回厂家处理。
8. 生物指示剂储存、发放8.1 验收合格的生物指示剂由使用部门领回并填写《生物指示剂接收与发放记录》，生物指示剂使用部门负责按照该种生物指示剂使用说明书储存要求进行储存。
9. 生物指示剂使用9.1 生物指示剂放置位置及放置数目。
9.1.1 放置位置按照确认与验证方案执行，建议放置位置：①在灭菌器中最大包装的中心；②灭菌器排气口，往往不易达到灭菌温度；③靠灭菌器的门口和底部；④不同的生物指示剂摆放要求不同。
生物指示剂
生物指示剂：1.芽孢悬液CICC芽孢悬液采用国际通用标准菌株，参照国家药典、相关标准、卫生部《消毒技术规范》等、经严格质量控制制备而成。
芽孢悬液中含有一定数量、具有特定抗性的细菌芽孢，可直接接种，也可用于自制生物指示剂。
萎缩芽孢杆菌芽孢悬液产品名称芽孢悬液菌种名称萎缩芽孢杆菌（B. atrophaeus）ATCC 9372（曾用名：枯草芽孢杆菌黑色变种）产品规格B9372-9 芽孢数：109CFU/ml；包装：5 ml/瓶B9372-8 芽孢数：108CFU/ml；包装：5 ml/瓶B9372-7 芽孢数：107CFU/ml；包装：10 ml/瓶B9372-6 芽孢数：106CFU/ml；包装：10 ml/瓶用途可用于各种化学消毒剂、干热、环氧乙烷等灭菌效果的验证和评价，无菌冷灌装生产线的性能验证，染菌载片的制备以及生物安全柜灭菌效果的验证等。
贮藏条件2~8℃，避免阳光直射和接触灭菌剂。
有效期生产日起12个月嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢悬液短小芽孢杆菌芽孢悬液注：CICC亦可按照客户要求提供不同规格包装。
另外根据客户要求可提供：生孢梭菌（Clostridium sporogenes），枯草芽孢杆菌（B. subtilis），巨大芽孢杆菌（B. megaterium），蜡状芽孢杆菌（B. cereus）等的芽孢悬液。
2.工业生物指示剂工业生物指示剂是根据工业企业实际情况，按照标准要求定制加工而成，以满足企业的特殊需求，通常采用不同的载体材料和包装形式，例如钢片、钢线、纸片、棉线、塑料片和滑石粉等，它与芽孢条、自含式等标准生物指示剂相比更具优势。
CICC可按照客户要求提供定制工业生物指示剂。
染菌滑石粉CICC研制的标准专用染菌滑石粉，以符合标准要求的滑石粉为载体，选用CICC 自行生产的微生物材料萎缩芽孢杆菌ATCC 9372芽孢悬液，按标准要求精制而成，每批染菌滑石粉产品均经过芽孢含量检验，确保质量稳定。
生物指示剂的原理
生物指示剂的原理随着科学技术的不断进步，人们对生物指示剂的应用越来越广泛。
生物指示剂是指一种能够反映环境污染程度的生物物种，它们可以作为环境监测和评估的工具，帮助我们了解环境质量的变化和趋势。
那么，生物指示剂的原理是什么呢？本文将从生物指示剂的概念、分类、应用和原理等方面进行介绍。
一、生物指示剂的概念和分类生物指示剂是指一种能够反映环境质量的生物物种，它们可以作为环境污染的指示器或监测工具。
根据其生物学特性和对环境污染的敏感程度不同，生物指示剂可以分为以下几类：1. 植物指示剂：植物是地球上最早出现的生命形式之一，它们在生长和发育过程中受到环境的影响非常大。
因此，植物可以作为环境污染的指示器，反映出环境中污染物的类型、浓度和分布等信息。
例如，苔藓植物可以用于检测大气中的重金属污染，水生植物可以用于检测水体中的有机物和微量元素污染等。
2. 动物指示剂：动物是生物链中的重要组成部分，它们对环境的反应和适应能力也很敏感。
因此，动物可以作为环境污染的指示器，反映出环境中污染物的类型、浓度和分布等信息。
例如，鱼类可以用于检测水体中的有机物和重金属污染，蜜蜂可以用于检测大气中的有机物和重金属污染等。
3. 微生物指示剂：微生物是生物界中数量最多、种类最多的一类生物，它们对环境的反应和适应能力也非常敏感。
因此，微生物可以作为环境污染的指示器，反映出环境中污染物的类型、浓度和分布等信息。
例如，细菌可以用于检测土壤中的有机物污染，真菌可以用于检测空气中的微生物污染等。
二、生物指示剂的应用生物指示剂的应用非常广泛，主要包括以下几个方面：1. 环境监测和评估：生物指示剂可以作为环境监测和评估的工具，帮助我们了解环境质量的变化和趋势。
通过对生物指示剂的观察和分析，可以判断环境中污染物的类型、浓度和分布等信息，从而指导环境保护和治理工作。
2. 污染源识别和溯源：生物指示剂可以帮助我们识别和溯源污染源，找出污染物的来源和传播途径。
生物指示剂使用方法
生物指示剂使用方法生物指示剂是一种用来检测生物体活性、生长情况或生物学过程的工具。
根据不同的应用目的和需要，生物指示剂可以是细菌、酵母、植物细胞等。
下面将详细介绍生物指示剂的使用方法。
首先，使用生物指示剂前需要准备好培养基，并确保培养基的成分符合需要。
培养基是供生物指示剂生长发育所必需的营养物质，可通过配制或购买得到。
通常的培养基成分包括碳源、氮源、生长因子、无机盐等。
根据具体需求，可以添加适当的药品或抗生素以防止细菌污染。
接着，取出所需的生物指示剂，可以是培养基上生长的细菌或培养好的酵母细胞等。
要保证生物指示剂的纯度和活性，可以通过无菌技术操作来确保。
然后，在制备好的培养基上均匀涂布生物指示剂。
可以使用吸管、滴管或移液器等工具将生物指示剂均匀涂布在培养基表面。
为了确保涂布的均匀性，可以采用十字交叉或螺旋形涂布法，将生物指示剂涂布在培养基的不同位置。
接下来，将涂布好生物指示剂的培养基放置在适当的温度和湿度条件下进行培养。
不同的生物指示剂对培养条件有不同的要求，需要根据实验和应用目的进行合理调整。
通常情况下，细菌和酵母的培养温度为30-37摄氏度，湿度为相对湿度80-90%。
在培养过程中，需要定期观察生物指示剂的生长情况和表现。
可以通过目测、显微镜观察或光密度测定等方法来评估生物指示剂的活性和生长情况。
观察指标可以根据实验目的和应用需求来确定，例如细菌生长的菌落形态、颜色、大小等。
最后，根据实验或应用的需要，可以选择在生物指示剂生长达到一定程度后进行各种实验或应用。
例如，可以用生物指示剂来测试特定物质的抗菌活性、抗真菌活性、细胞毒性等。
需要注意的是，在使用生物指示剂的过程中，应该注意无菌操作，避免外源性细菌或真菌的污染。
同时，要严格按照实验室和安全卫生要求进行操作，避免对人体和环境造成危害。
总结起来，生物指示剂的使用方法包括准备培养基、涂布生物指示剂、培养、观察和实验等步骤。
通过合理操作和观察，可以使用生物指示剂来检测生物体活性、生长情况或生物学过程。
灭菌方法与生物指示剂
❖ 化学指示剂验证：物品包外用化学指示剂用于验证物品是 否经过灭菌处理，物品包内中心部位的化学指示剂才可作 为物品是否达到灭菌的参考标志。
❖ 生物指示剂验证：将已知其耐热性的生物指示剂直接接种 在产品溶液或相似溶液中进行验证, 是评判灭菌工艺杀灭 效果最直观有效的方法, 也是灭菌工艺验证必不可少的试 验。
生孢梭菌孢子 Clostridium sporogenes
枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis
保藏号
NCTC 10007 NCIMB 8157 ATCC 7953
NCTC 8594 NCIMB 8053 ATCC 7955
NCIMB 8058 ATCC 9372
短小芽孢杆菌 Bacillus pumilus
置于放射剂量25kGy条件下，D值约3kGy。
harmony
过滤除菌法
系利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理以 除去气体或液体中微生物的方法。
适用范围：
对热不稳定的药物溶液、气体、水或原料的除菌。
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常用生物指示剂
➢ 滤膜孔径为0.22μm的滤器 ：缺陷假单胞菌 (Pseudomonas diminuta, 如ATCC19 146)
无菌保证水平 一批物品的无菌特性只能相对地通过物品中活微 生物的概率低至某个可接受水平来表述，即SAL （sterility assurance level）。
我国及欧美药典都把SAL不得大于百万分之一 作为最终灭菌产品无菌保证的要求，即 SAL≤10－6
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灭菌工艺验证
❖ 验证一个灭菌工艺系统能否使产品灭菌后达到无菌要求, 通常认为灭菌后微生物残存概率小于1×10-6。
自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂使用方法
自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂使用方法
以下是自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂的使用方法：
1. 按照灭菌器说明书要求，将生物指示剂放置在灭菌器内不易被灭菌的部位。
2. 按照规定的灭菌温度和时间进行灭菌处理。
3. 灭菌完毕后，将生物指示剂取出，确认标签上的化学指示剂由蓝色变成黑色后，放置15分钟以上冷却至室温。
4. 将生物指示剂垂直放入夹子中，直到外管底部安定，手指按夹子上部将内部玻璃管夹破，使菌片浸在培养基中。
5. 将生物指示剂竖直放入56℃恒温培养箱中，同时放1支未经灭菌程序处
理的生物指示剂作为阳性对照，一并培养48小时，观察结果。
6. 确认灭菌效果后，将标签取下粘贴在记录薄留存。
使用过程中应注意安全，按照说明书和相关规定进行操作，如有疑问，建议咨询专业人士。
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制备生物指示剂用微生物的基本要求
不同的灭菌方法使用不同的生物指示剂，制备生 物指示剂所选用的微生物必须具备以下特性： ①菌种的耐受性应大于需灭菌产品中所有可能污染 微生物的耐受性； ②菌种应无致病性； ③菌株应稳定。存活期长，易于保存； ④易于培养。 • 若使用休眠孢子，生物指示剂中休眠孢子含量要 在90%以上。
Verify TM自含培养基式生物指示剂
生物指示剂采购来源和要求
一个合格的生物指示剂供应商必须符合如下条件： （1）制造商负责确定生物指示剂的最初的性能指标。 制造商应该为每批生物指示剂附加一份 COA（分 析报告） ，用于说明生物指示剂性能指标。 （2）制造商应该标明生物指示剂的用途，即用于评 估灭菌工艺类型。 （3）制造商还应该提供如下信息：D 值、D 值测定 的方法、微生物数量、生物指示剂在有效期内耐 受能力、推荐的储存条件、使用指令等。 （4）生物指示剂制造商还应该提供使用后生物指示 剂处置的注意事项，确保实验人员安是一群特定的微生物和载体 结合而制成，对相应的灭菌模式有高度抵 抗，指示微生物的死亡真实可靠地反映灭 菌状况.能正确反映灭菌过程中有关时间、 温度和湿度的关系。
生物指示剂的组成形式
目前，常用于灭菌工艺验证的生物指示剂主 要有三种形式，它们都是用对特定灭菌工艺具有 一定耐受性并已知其种类的微生物芽孢制备而成。 有些生物指示剂可能含有两种不同类微生物，并 且两种微生物的含量也不相同。 1 .芽孢条（spore strip) 2.芽孢悬浮液（spore suspension) 3.自含型生物指示剂（self-contained indicator)
生物指示剂 相关知识
目录
• 生物指示剂的定义 • 生物指示剂的组成形式 • 生物指示剂的制备 • 生物指示剂的选择和使用
生物指示剂的定义
生物指示剂，简称为BI（biological
indicator),是对特定灭菌工艺具有一定耐受性并 且能够定量测定效力的微生物制剂，适用于制备 生物指示剂的微生物多为芽孢类细菌，这是因为 ，除辐射灭菌外，芽孢类细菌比常规的生长态微 生物对灭菌工艺具有更强的耐受性。生物指示剂 既可用来测定一个给定的灭菌工艺条件的灭菌效 果，也可判别它是否符合无菌保证要求。
芽孢条
将芽孢加在载体上，如接种于滤纸片、 玻璃/塑料等薄片或条状物，并用特定的材 料包起来以保持其完整性和生物活性，俗 称芽孢条。此类指示剂比较适用于验证和 监控非溶液类物品的灭菌工艺。
Spordex®和Spordi®孢子条和孢子片
芽孢悬浮液
芽孢悬浮液可被接种于代表性的待灭菌 产品溶液或模拟产品溶液中。可用此芽孢 悬浮液直接接种于产品内或产品外表面， 这样能更加直观的考察产品的实际灭菌效 果。
生物指示剂的制备
• 生物指示剂的制备应按一定的程序进行，制备前，需先确 定所用微生物的特性，如D值（微生物的耐热参数，系指 一定温度下，将微生物杀灭90%所需的时间，以分表示） 等。菌株应用适宜的培养基进行培养。培养物应制成悬浮 液，其中孢子的数量应占优势，孢子应悬浮于无营养的液 体中保存。 • 生物指示剂中包含一定数量的一种或多种孢子，可制成 多种形式，通常是将一定数量的孢子在惰性的载体上，如 滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等；孢子悬浮液也可密 封于安瓿中；有的生物指示剂还配有培养基系统。生物指 示剂应选用合适的材料装，并设定有效期。载体和包装材 料在保护生物指示剂不被污染和损耗的同时，还应保证灭 菌剂穿透并能与生物指示剂充分接触。载体和包装应设计 原则是便于贮存、运输、取样、转移接种。 • 有些生物指示剂可直接将孢子接种至液体灭菌物或具有与 其相似的物理和化学特性的替代品中。使用替代品时，应 用数据证明二者的等效性。
生物指示剂的选择和使用
四.环氧乙烷灭菌用生物指示剂 在环氧乙烷灭菌工艺中，常采用枯草芽孢 杆菌的亚种，即枯草芽孢杆菌黑色变种 （Bacillus subtilis var.niger)的芽孢作为生物 指示剂来对该工艺进行控制。环氧乙烷灭 菌中，枯草芽孢杆菌孢子D值大于2.5分钟， 在环氧乙烷浓度为600mg/L，相对湿度为 60%，温度为54℃下灭菌，60分钟应被杀灭。
生物指示剂的选择和使用
五.液态过氧化氢灭菌用生物指示剂 在液态过氧化氢灭菌工艺中，常采用嗜 热脂肪芽孢杆菌芽孢，但也可用梭状芽孢 杆菌芽孢或枯草芽孢杆菌芽孢，还可选用 其他类的微生物芽孢，只要证明其对过氧 化氢的耐受性不低于上述3种芽孢的耐受性 即可。
小结
保证无菌产品无菌是产品质量保证的核心问 题。无菌生产工艺是保障产品无菌的关键手段。 而只有经过充分验证后的灭菌（无菌）生产工艺， 才能保证生产出无菌的产品。微生物挑战试验是 无菌生产工艺验证的重要环节。而选择适当的生 物指示剂则是微生物挑战试验结果获得认可的关 键。
Spordex®Suspension(Spordex悬浮液)
自含型生物指示剂
这种指示剂是将芽孢条（或片）加入到 含有指示剂的培养基包装内（如：小瓶 内），这些培养基实现单独包装并与芽孢 载体分离，经灭菌处理后，挤碎培养基小 瓶使芽孢条（或片）浸没在培养基内，在 适当温度和时间内培养，通过观察培养基 内的酸碱指示剂的颜色变化判断其生长状 况。
生物指示剂的选择和使用
一.湿热灭菌用生物指示剂 湿热灭菌法最常用的生物指示剂为嗜 热脂肪芽孢杆菌孢子。D值为1.5~3.0分钟， 每片活孢子数5×105~5×106个，在121℃、 19分钟下应被完全杀灭。此外，还可使用 生胞梭菌孢子，D值为0.4~0.8分钟。
生物指示剂的选择和使用
二.干热灭菌用生物指示剂 干热灭菌法最常用的生物指示剂为枯草芽 孢杆菌孢子。D值大于1.5分钟，每片活孢子 数5× 105~5×106个。内毒素挑战去热原工 艺验证常被用来替代生物指示剂验证，因 为内毒素比微生物芽孢更难杀灭。
生物指示剂的选择和使用
三.离子辐射用生物指示剂 • 辐射灭菌法最常用的生物指示剂为短小芽 孢杆菌孢子。每片活孢子数107~108个，置 于放射剂量25kGy条件下，D值约3kGy。但 应注意灭菌物品中所负载的微生物可能比 较短小芽孢杆菌孢子显示更强的抗辐射力， 因此短小芽孢杆菌孢子可用于监控灭菌过 程，但不能用于灭菌辐射剂量建立的依据。