生物指示剂GMP
分析我国GMP与欧盟GMP的区别
分析我国GMP与欧盟GMP的区别GMP在我国已推行多年，作为药品生产的直接监管法规，它的推行使制药生产面貌得到极大改善，大多数生产企业达标并通过GMP认证。
尽管如此，我国的制药行业整体水平与国外同行相比还有很大差距，最能说明问题的事实是我国药品出口的现状：我国出口的药品绝大多数是低价的原料药，高附加值的制剂出口仅为一些口服剂，而无菌药品的出口量几乎为零。
随着我国的经济发展和与国际的不断接轨，我们有必要重新审视我国与国际先进水平的差距，监管部门也顺应这一形势，已经于新近发布了修订后的药品生产质量管理规范（即GMP），据悉，新版的GMP接近欧盟GMP要求。
下面将从制药工艺与设备这两个方面来具体阐述欧盟GMP与我国现行GMP的不同要求，这些不同主要反映在无菌药品上。
1.欧盟GMP与我国现行GMP在非无菌药品方面的不同要求在欧美国家，洁净级别是对无菌药品而言，因此欧盟GMP对非无菌药品类的管理相对宽松，无环境检测的强制规定，只是提到生产区的设计应有适当的气流，并可能达到10万级水平，需定期做环境检测我国现行GMP对非无菌药品规定了10万级和30万级两个级别，而新版GMP对非无菌药品30万级级别的要求可能将取消，全部按10万级标准设计，并作静态考核验收。
2.欧盟GMP与我国现行GMP在无菌药品方面的不同要求欧盟对无菌药品生产的管理较严，欧盟GMP附录1就是针对无菌药品的生产而设立的，共有93条，现将其与我国现行GMP的不同之处作专门列举。
2.1关于生产环境方面（1）欧盟GMP将无菌药品生产所需的洁净区分为4个级别：A级为高风险操作区。
如灌装区，放置胶塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的区域及无菌装配/连接操作的区域，通常用层流操作台（罩）来维护该区的环境状态。
层流系统在其工作区域必须均匀送风，风速为0.36～0.54m/s（指导值）。
应有数据证明层流的状态并须验证；B级指无菌配制和灌装A级区所处的背景区域；C、D级指生产无菌产品过程中重要程度较次的清洁操作区。
3m生物指示剂说明书
3m生物指示剂说明书
3M生物指示剂的使用说明书可能因具体型号而有所不同。
以下是1292型
生物指示剂的使用说明：
1. 适用范围：适用于121℃下排气及132℃预真空压力蒸汽灭菌器灭菌效果监测。
2. 使用方法：将生物指示剂放入生物测试包中，置于压力蒸汽灭菌器内最难灭菌的位置处，执行正常装载灭菌过程。
灭菌完毕后，取出指示剂冷却10
分钟后，将指示剂内部安瓿瓶压碎，在专用的3m快速生物阅读器内培养3小时左右，在3m快速生物阅读器上观察荧光反应。
3. 结果阅读：荧光阳性表示灭菌失败，荧光阴性表示灭菌合格。
只有对照管为阳性，其生物监测结果才算有效。
4. 注意事项：该生物指示剂不能用于121℃预真空和132℃下排气压力蒸汽灭菌锅，及干热、化学蒸汽、环氧乙烷和其他的低温灭菌过程。
5. 有效期：24个月。
此外，有些型号的生物指示剂使用方法可能包括将指示剂放于标准测试包中，按国家规范，分别将各测试包放于锅内不同位置，灭菌处理完毕，取出生物指示剂。
挤破内含的安瓿，与一支对照管一起放于37℃恒温箱，48小时后，
阅读结果。
灭菌管不变色（呈绿色），表示灭菌通过；灭菌管变色（呈黄色），表示灭菌不通过；同时培养的对照管应为阳性（黄色）。
以上信息仅供参考，具体使用方法请参照相应型号的生物指示剂说明书。
发酵罐的生物指示剂挑战试验方法设计
２０ ０ ８年 ６月
广 西 轻 工 业
Ｇ Ａ Ｇ Ｉ Ｏ Ｒ Ａ ＦＬ Ｈ Ｄ ＳＲ Ｕ Ｎ Ｘ Ｕ Ｎ ＬＯ Ｉ ＴＩ Ｕ Ｔ Ｙ Ｊ Ｇ Ｎ 食 品 与 生 物
第 ６ （ 期 总第 １ ５期 ） １
发 酵 罐 的 生物 指 示剂 挑 战试 验方 法 设计
【 关键词 】 发酵 生 罐； 物指示剂挑战试验； 设计 【 中图分类号 】Ｑ ８ １７ 【 文献标识码 】 Ａ
【 文章编号 】 １ｏ— ６３ ０８ ６ Ｏ — ２ ｏ３ ２７（ ０） 一 １ ０ ２ ０
１ 前言
生物指示验确认 发酵罐系统能 够在设定 的程序下 杀灭 所接人 的微 生物芽孢 。发酵罐在应用过 程中作为培养基灭菌器 ， 通过
（ Ｍｉｉｏｅ０ ５ ｎ 微 孑 滤 膜 ： ｌ ｐ ｒ 司 生 产 ， ５） ｌ ｐ ｒ ． ｌ Ｌ ｌ ４ Ｍｉｉｏｅ公 ｌ 直 径为 ５ ０ｍｍ。
４ 试 验 方法
生物 指示 剂挑战试验 的设计应 当考虑工 艺要求 的各 个方
面， 由此 制 定 试 验 考 察 要 点 和 接 受 标 准 。
李俊 华 ， 丽君 ， 斌 张 张
（ 深圳 生 物 医药产 业基地 规划 建设 领导 小组 办公 室， 广东 深圳 ５ ８ ３ ） １ ０ ４
【 摘 要 】 生物指示剂挑战试验是考察发酵罐灭菌性能的重要试验， 发酵罐在应用过程中 作为 培养基灭菌器， 通过
生物 指 示剂挑 战试验 验证 其 灭菌性 能 。根 据 ＧＭＰ要 求设 计发 酵罐 Ａ 的生物 指示 剂挑 战试验 方法 ， 它进 行验 证 。 对
温度 范围内灭菌 ３ ０分钟 ， 既能够 达到无菌保证度的要求 ， 也不 会 大量破坏 营养基成分 。 本试验 的 目的设 定为 ：比较全面地 考察发酵 罐的灭菌性 能， 通过试验确认发酵罐系统能够在设定 的程序下杀灭接人罐
灭菌用生物指示剂指导原则(新增)
灭菌用生物指示剂指导原则（新增）生物指示剂是一种对特定灭菌程序有确定及稳定的耐受性的特殊微生物制成品，可用于灭菌设备的性能确认、特定物品的灭菌工艺研发及建立、产品灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控、灭菌程序的定期再验证、隔离器和无菌洁净室灭菌效果的验证评估等。
生物指示剂的分类生物指示剂主要有以下三种类型，其特征需符合《医疗保健产品灭菌生物指示物》GB18281的要求。
（1）由微生物芽胞和载体经包装而成，载体可以是碟形或条状的滤纸、玻璃、塑料或其它材料。
载体和内层包装不得含有物理、化学或微生物的污染物，避免影响生物指示剂的性能和稳定性；不得被特定的灭菌工艺降解；能被灭菌介质（蒸汽、射线、化学试剂、过滤等）穿透并使灭菌介质与生物指示剂能充分接触。
载体和包装的设计应保证生物指示剂不受污染、并使其所含的微生物在贮存、运输和使用过程中损失最小，且方便取样、转移和接种。
（2）芽胞悬液生物指示剂，该类生物指示剂是将芽胞混悬于液体中。
若用于液体物品灭菌，建议测定生物指示剂在灭菌液体物品中的芽胞数和、D值和Z 。
（3）自含式生物指示剂，该类生物指示剂是由芽孢和能够恢复微生物生长的培养基组成的系统。
系统中的培养基用于培养灭菌后的生物指示剂，应制定程序确认该培养基能保证残存微生物的生长。
自含式生物指示剂的耐受性是针对整个系统而言。
自含式系统所采用的材料不应该含有或在使用过程释放出抑制残存微生物生长的物质。
该系统的设计应能够承受运输和使用过程中的影响，不发生破损，并使原始接种的微生物损失减少到最小。
生物指示剂用微生物的基本要求生物指示剂含有对灭菌模式有明确耐受性的一种或两种微生物。
除了电离辐射外，微生物芽孢较菌体有更强的耐受性。
一般认为含芽胞的细菌更适合用于制备生物指示剂。
不同灭菌工艺使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的（1）菌种的耐受性应大于需灭菌物品中所有可能污染菌的耐受性。
（2）菌种应无致病性。
（3）菌株应稳定，存活期长，易于保存。
GMP检查要点
药品 GMP 检查要点包括化学药品注射剂 GMP 检查要点、中药注射剂 GMP 检查要点、血液制品 GMP 检查要点、重组产品 GMP 检查要点、疫苗菌苗 GMP 检查要点等，遵循以下原则。
根据申请认证的剂型，选择该剂型中产量大、工艺复杂、质量不稳定等高风险品种，从原料购进到成品出厂进行全过程检查。
每一个剂型至少选择 3 个品种，不足 3 个品种的全部检查。
核对并确认其是否能够按其注册申报的处方和工艺生产。
要检查关键工艺参数的验证资料对激素类或者抗肿瘤类化学药品与其它药品共用同一设备和空气净化系统的，要重点检查其防止交叉污染的措施及验证数据。
检查生产和质量管理的现状和各种记录、台帐、凭证，从深层次查清其真实运作情况，即要从表象查到真象。
根据药品 GMP 原则要求，结合注射剂生产影响药品质量的关键环节，提出化学药品注射剂 GMP 跟踪检查要点，旨在督查企业质量保证体系的变更情况和实际运行状态。
检查组须对如下内容按照药品 GMP 要求，逐一核实，并详细陈述。
1、药品 GMP 认证检查提出缺陷项目的整改落实情况。
2、企业的组织机构是否有变动、是否能够确保履行职责；企业负责人、质量保证负责人及其人员、质量控制负责人及其人员、药品生产、物料管理负责人员专业、学历、资历及其履行职责的实际能力。
3、生产厂房及其设施、生产设备、仓储条件、检测仪器等是否发生变更及其符合药品GMP 情况。
4、新增生产品种的工艺验证及相关文件的补充和完善情况；生产规模及其生产品种扩增或者调整与生产及检验能力是否匹配。
5、物料供应商审计，包括选择原则、审计内容、实地考核周期、认可标准、审计人员资格、批准及变更供应商的审批程序等是否能够确保物料质量；是否与物料供应商签定合同；物料验收、抽样、检验、发放标准、程序及其执行情况。
6、物料及产品按规定条件秩序合理存放，有明确的状态标志；货位卡内容齐全、清晰，物卡相符；每种原料、辅料使用情况，如采用计算机控制系统，其验证情况。
GMP级别要求
返回欧盟GMP与我国现行GMP在工艺与设备方面的不同要求GMP在我国已推行多年，作为药品生产的直接监管法规，它的推行使制药生产面貌得到极大改善，大多数生产企业达标并通过GMP认证。
尽管如此，我国的制药行业整体水平与国外同行相比还有很大差距，最能说明问题的事实是我国药品出口的现状：我国出口的药品绝大多数是低价的原料药，高附加值的制剂出口仅为一些口服剂，而无菌药品的出口量几乎为零。
随着我国的经济发展和与国际的不断接轨，我们有必要重新审视我国与国际先进水平的差距，监管部门也顺应这一形势，已经于新近发布了修订后的药品生产质量管理规范（即GMP），据悉，新版的GMP接近欧盟GMP要求。
下面将从制药工艺与设备这两个方面来具体阐述欧盟GMP 与我国现行GMP的不同要求，这些不同主要反映在无菌药品上。
1欧盟GMP与我国现行GMP在非无菌药品方面的不同要求在欧美国家，洁净级别是对无菌药品而言，因此欧盟GMP对非无菌药品类的管理相对宽松，无环境检测的强制规定，只是提到生产区的设计应有适当的气流，并可能达到10万级水平，需定期做环境检测。
我国现行GMP对非无菌药品规定了10万级和30万级两个级别，而新版GMP对非无菌药品30万级级别的要求可能将取消，全部按10万级标准设计，并作静态考核验收。
2欧盟GMP与我国现行GMP在无菌药品方面的不同要求欧盟对无菌药品生产的管理较严，欧盟GMP附录1就是针对无菌药品的生产而设立的，共有93条，现将其与我国现行GMP的不同之处作专门列举。
2.1关于生产环境方面（1）欧盟GMP将无菌药品生产所需的洁净区分为4个级别：A级为高风险操作区。
如灌装区，放置胶塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的区域及无菌装配/连接操作的区域，通常用层流操作台（罩）来维护该区的环境状态。
层流系统在其工作区域必须均匀送风，风速为0.36～0. 54 m/s（指导值）。
应有数据证明层流的状态并须验证；B级指无菌配制和灌装A级区所处的背景区域；C、D级指生产无菌产品过程中重要程度较次的清洁操作区。
SMP-QC-0031-00生物指示剂标准管理规程
1.0 目的1.1规范生测组对生物指示剂的接收、质量检查、储藏、使用、销毁标准操作规程。
2.0 范围2.1验证或监控用生物指示剂的管理。
3.0 职责3.1质量控制（QC）部对本操作规程实施负责。
4.0 定义生物指示剂简称BI，是一类特殊的活微生物制品，是对特定灭菌工艺有一定耐受性并且能够定量测定灭菌效力的微生物制剂，可用于确定灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。
5.0 规程5.1生物指示剂管理流程图：5.2生物指示剂的接收5.2.1根据验证要求，确定所需要的生物指示剂。
新购入的生物指示剂应由生测组组长接收，购买的生物指示剂应附有相应的质量报告，内容包括微生物种类、孢子量、D 值、有效期等，仔细检查生物指示剂包装是否破损，有破损的剔出，核对生物指示剂的有效期，过期的剔出，核对生物指示剂是否与计划的相一致，不可用的剔出。
5.2.2登记：核对无误后及时填写《生物指示剂接收与发放记录》(R-SMP-QC-0031-02)内容包括生物指示剂名称、批号、数量、规格、生产厂家、接收日期、接收人、领用日期、领用人等。
5.3生物指示剂质量检验：测试内容包括含指示剂菌种形态学鉴别（Gram染色和芽孢染色）、载菌量检测和D值测定。
5.3.1生物指示剂菌种形态学鉴别（Gram染色和芽孢染色）5.3.1.1革兰氏染色操作步骤见《菌种鉴定标准操作规程》（SOP-QC-0009-00）。
5.3.1.2芽孢染色5.3.1.2.1染色试剂：5％孔雀绿水溶液、0.5％番红液5.3.1.2.2染色步骤5.3.1.2.2.1在载玻片上滴上一滴的超纯水，用无菌接种环挑取一颗菌落均匀涂开；5.3.1.2.2.2将载玻片通过酒精灯火焰上方快速来回 2～3 次使之干燥、固定；5.3.1.2.2.3涂片冷却后，滴加5％孔雀绿水溶液，微火加热，使冒蒸汽，但不干涸（随时补加染液）保持 5min；5.3.1.2.2.4倾去染液，待载玻片冷却后用已灭菌去离子水冲洗涂片至孔雀绿不再褪色为止；5.3.1.2.2.5在涂片上方滴加 0.5％番红液复染 1min 后水洗；5.3.1.2.2.6用滤纸吸干后镜检。
生物指示剂标准-概述说明以及解释
生物指示剂标准-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容可以描述生物指示剂标准的基本概念和背景。
可以包括以下内容：生物指示剂是一种用来评估、监测和验证环境中生物多样性和生态系统健康状况的工具。
它们可以是某种生物物种、种群或者生态系统，在发生环境变化或者受到干扰时，表现出特定的反应或者指示作用。
生物指示剂广泛应用于环境监测、生态研究、生态风险评估以及环境污染和气候变化等方面。
生物指示剂标准的制定是为了确保生物指示剂的使用和结果的准确性、可重复性和可比性。
标准的制定需要考虑多个因素，包括生物指示剂的选择、监测方法和指标以及数据分析和解释等。
通过制定生物指示剂标准，可以实现对于环境变化和生态系统健康的准确评估和监测。
标准可以提供统一的指导和规范，确保不同机构和研究者使用相同的方法和指标进行生物指示剂的研究和应用。
标准还可以促进不同研究和监测结果的比较和合理解释，从而增加生物指示剂在环境保护和生态恢复中的可信度和可行性。
本文将重点介绍生物指示剂标准的制定过程、应用领域以及其重要性、优势和限制，并对未来发展趋势进行展望。
1.2文章结构文章结构部分的内容可以包括以下几点：1.2 文章结构本文将按照以下结构来探讨生物指示剂标准的问题：第一部分是引言部分，概述了生物指示剂标准的背景和相关的重要性。
其中1.1部分简要介绍了生物指示剂的概念和应用领域，1.2部分则详细介绍了本文的文章结构，以便读者了解整个文章的框架和逻辑。
最后，1.3部分明确了本文的目的，即通过探讨生物指示剂标准的制定、重要性、优势与限制以及未来发展趋势，为相关领域的研究和实践提供参考和借鉴。
第二部分是正文部分，主要分为3个小节。
首先，2.1节将详细阐述生物指示剂的定义，以便读者对该概念有更深入的理解。
接着，2.2节将介绍生物指示剂在不同领域的应用，包括环境监测、食品安全、生物疫苗等。
最后，2.3节将探讨生物指示剂标准的制定过程，涉及到相关的标准机构、制定流程和参考标准等内容。
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17.9 生物指示剂的管理
《中国药典》附录XVⅡ灭菌法中对生物指示剂有较详细的描述。
生物指示剂，简称BI，是一类特殊的活微生物制品，是对特定灭菌工艺有一定耐受性并且能够定量测定灭菌效力的微生物制剂，可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。
用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的孢子。
17.9.1制备生物指示剂用微生物的基本要求
不同的灭菌方法使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的微生物必须具备以下特性：菌种的耐受性应大于需灭菌物品中所用可能污染的耐受性；
菌种应无致病性；
菌株应稳定，存活期长，易于保存；
易于培养。
若使用休眠孢子，生物指示剂中休眠孢子含量要在90%以上。
17.9.2生物指示剂的制备
生物指示剂的制备应按一定的程序进行，制备前，需先确定所用微生物的特性，如D值等。
菌株应用适宜的培养基进行培养。
培养物应制成悬浮液，其中孢子的数量应战优势，孢子应悬浮于无营养的液体中保存。
生物指示剂中包含一定数量的一种或多种孢子，可制成多种形式。
通常是将一定数量的孢子附着在惰性的载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等；孢子悬浮液也了密封于安瓶中；有的生物指示剂还配有培养基系统。
D值与灭菌条件相关外，还与微生物存在的坏境有关。
因此，一定形式的生物指示剂制备完成后，应测定D值和孢子总数。
生物指示剂应选用合适的材料包装，并设定有效期。
载体和包装材料在保护生物指示剂不致污染的同时，还应保证灭菌剂穿透并能与生物指示剂充分接触，载体和包装的设计原则是便于贮存、运输、取样、转移接种。
有些生物是指示剂可直接将孢子接种至液体灭菌物或具有与其相似的物理和化学特性的替代品中。
使用替代品时，应用数据证明二者的等效性。
17.9.3生物指示剂的应用
在灭菌程序的验证中，尽管克通过灭菌过程某些参数的监控来评估灭菌效果，但生物指示剂的被杀灭程度，则是评价一个灭菌程序有效性最直观的指标。
克使用市售的标准生物指示剂，也可使用由日常生产污染菌监控中分离的耐受性最强的微生物制备的孢子。
在生物指示剂验证试验中，需确定孢子在实际灭菌条件下的D值，并测定孢子的纯度和数量。
验证时，生物指示剂的微生物用量应比日常检出的微生物污染量大，耐受性强，以保证灭菌程序有更大的安全性。
在最终灭菌法中，生物指示剂应放在灭菌柜的不同部位。
并避免指示剂直接接触到被灭菌物品。
生物指示剂按设定的条件灭菌后取出，分别置培养基中培养，确定生物指示剂中的孢子是否被完全杀灭。
过度杀灭产品灭菌验证一般不考虑微生物污染水平，可采用市售的生物指示剂。
对灭菌手段耐受性差的产品，设计灭菌程序时，根据经验预计在该生产工艺中产品微生物污染的水平，选择微生物指示剂的菌种和把瓶子数量、耐受性和灭菌程序验证羧获得的数据进行评估。
17.9.4常用生物指示剂
湿热灭菌法
湿热灭菌法最常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子。
D值为1.5~3.0分钟，每片活孢子数5×105~5×106个，在121℃、19分钟下应被完全杀灭。
此外，还可使用生胞梭菌孢子，D值为0.4~0.8分钟。
干热灭菌法
干热灭菌法最常用的生物指示剂为枯草芽孢杆菌孢子。
D值大于1.5分钟，每片活孢子数5×105~5×106个。
取热原验证时大肠埃希菌内毒素，加量不小于1000细菌内毒素单位。
辐射灭菌法
辐射灭菌法最常用的生物指示剂为短小芽孢杆菌孢子。
每片活孢子数107~108个，置于放射剂
量25kGy条件下，D值约3kGy。
但应注意灭菌物品中所负载的微生物可能比较短小芽孢杆菌孢子显示更强的抗辐射力，因此短小芽孢杆菌孢子可用于监控灭菌过程，但不能用于灭菌辐射剂量建立的依据。
气体灭菌法
环氧乙烷灭菌最常用的生物指示剂为枯草芽孢杆菌孢子。
气态过氧化氢最常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子。
每片活孢子数1×106~5×106个。
环氧乙烷灭菌中，枯草芽孢杆菌孢子D 值大于2.5分钟，在环氧乙烷浓度为600mg/L，相对湿度为60%，温度为54℃下灭菌，60分钟应被杀灭。
过滤除菌法
过滤除菌法最常用的生物指示剂为缺陷假单胞菌，用于滤膜孔径为0.22um的滤器；黏质沙雷菌用于滤膜孔径为0.45um的滤器。
17.9.5生物指示剂的实验室管理
生物指示剂作为一种特殊的物料，为了安全、合理地使用，一般应对生物指示剂进行控制管理。
购买的生物指示剂应附有相应的质量报告，内容包括微生物种类、含量、D值、有效期等，实验室在使用前要对BI进行质量复核，进行微生物数量的确认。
进行登记并按说明存放。
进行微生物数量确认时，将原BI的所有含有微生物的部分转移到生理盐水中，稀释后进行计数，与质量报告中的数量进行比较。
常用的生物指示剂以纸条、不锈钢片等作为载体。
对于纸条式生物指示剂，因其不易打碎，可在液体中加入无菌的玻璃珠，然后再震荡打碎，制成纸浆悬液进行计数。
文件要求：典型的微生物数量复核报告包含以下内容。
NI含菌确认、生产商、菌名、批号、标示含菌量、D值、效期、稀释过程、稀释倍数、计数结果、每个BI含菌量、是否合格等。
可用将BI 的产品质量报告或其复印件与上述文件一起存放。
检验合格的BI要经过批准和发放后才可使用。
领用时要登记领用人、日期、数量等。