凝胶过滤层析分离蛋白质实验中三种过滤介质分离效果的比较
凝胶层析法(凝胶过滤)脱盐和分离蛋白质-1
凝胶层析法(凝胶过滤)脱盐和分离蛋白质-1原理凡盐析所获得的粗制蛋白质（盐析得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，这类将影响以后的纯化，所以纯化前均应除去，此过程称为“脱盐”（desalthing）。
脱盐常用透析法和凝胶过滤法，这两种方法各有利弊。
前者的优点是透析后析品终体积较小，但所需时间较长，且盐不易除尽；凝胶过滤法则能将盐除尽，所需时间也短，但其凝胶过滤后样品体积较大。
所以，要根据具体情况选择使用。
凝胶达滤后样品体积不会太增加，所以选用凝胶过滤法。
凝胶过滤（gel filtration），又称为凝胶层析（gel chromatograph y）、分子筛过滤（molecularsieve filtration）、凝胶渗透层析（gel osmotic chromatography）等。
它是20世纪60年代发展起来的一种层析技术。
其基本原理是利用被分离物质分子大小不同及固定相（凝胶）具有分子筛的特点，将被分离物质各成分按分子大小分开，达到分离的方法。
凝胶是由胶体粒子构成的立体网状结构。
网眼里吸满水后凝胶膨胀呈柔软而富于弹性的半固体状态。
人工合成的凝胶网眼较均匀地分布在凝胶颗粒上有如筛眼，小于筛眼的物质分子均可通过，大于筛眼的物质分子则不能，故称为“分子筛”。
凝胶之所以能将不同分子的物质分开是因为当被分离物质的各成分通过凝胶时，小于筛眼的分子将完全渗入凝胶网眼，并随着流动相的移动沿凝胶网眼孔道移动，从一个颗粒的网眼流出，又进入另一颗粒的网眼，如此连续下去，直到流过整个凝胶柱为止，因而流程长、阻力大、流速慢；大于筛眼的分子则完全被筛眼排阻而不能进入凝胶网眼，只能随流动相沿凝胶颗粒的间隙流动，其流程短、阻力小、流速快，比小分子先流出层析柱；小分子最后流出。
分子大小介于完全排阻不能进入或完全渗入凝胶筛眼之间的物质分子，则居中流出。
这样被分离物质即被按分子的大小分开。
用于凝胶层析的凝胶均为人工合成的产品，主要有交联葡聚糖（商品名为Sephadex）、琼脂糖（商品名为Sepharose）、聚丙烯酰胺凝胶（商品名为Bio–gel）及具有一定网眼的细玻璃珠等和这些凝胶的衍生物。
凝胶过滤色谱法和凝胶渗透色谱法的区别
凝胶过滤色谱法和凝胶渗透色谱法是生物化学领域常用的两种分离和纯化方法。
它们在分子大小分离和蛋白质结构分析中发挥着重要作用。
今天，我们将深入探讨这两种方法之间的区别，以便更好地理解它们的应用和优势。
一、原理1. 凝胶过滤色谱法：凝胶过滤色谱法是一种按照分子大小分离物质的方法。
它利用具有特定孔径大小的凝胶填料，大分子无法进入凝胶孔隙而直接流出，而小分子则能够进入孔隙而被滞留，从而实现分子的分离和纯化。
3. 凝胶渗透色谱法：凝胶渗透色谱法是一种根据分子在凝胶中的渗透速度来分离物质的方法。
它利用凝胶填料形成的三维网络结构，分子在凝胶中的渗透速度与其分子大小成反比，因此分子越大，其在凝胶中的渗透速度越快，分子越小，渗透速度越慢，从而实现分子的分离和纯化。
二、区别1. 分离原理不同：凝胶过滤色谱法是根据分子大小的不同把大分子和小分子分离开来的，而凝胶渗透色谱法则是根据分子在凝胶中的渗透速度的不同进行分离的。
2. 分子范围不同：在凝胶过滤色谱法中，适用于分离分子量较大的物质，而凝胶渗透色谱法适用于分离各种分子量的物质，并且对于高分子更为有效。
3. 分离效果不同：凝胶过滤色谱法可以获得较好的分离效果，但对于高分子的分离效果不如凝胶渗透色谱法。
而凝胶渗透色谱法可以实现对高分子的高效分离。
三、应用凝胶过滤色谱法常用于分离蛋白质、多肽和核酸等生物大分子，用来检测生物大分子的分子大小和形态。
而凝胶渗透色谱法除了用于生物大分子的分离外，还可以用于溶液中各种溶质的分子量测定。
四、个人观点以上就是凝胶过滤色谱法和凝胶渗透色谱法的区别和应用。
在实际科研工作中，选择合适的色谱方法对于提高分离效率和分析准确性非常重要。
我们需要根据样品的特性和需要进行全面评估，选择合适的色谱方法进行分离和分析。
总结回顾通过本文的讨论，我们对于凝胶过滤色谱法和凝胶渗透色谱法有了更全面的了解。
这两种色谱方法在生物化学和生物医药领域具有重要的应用价值，能够帮助科研人员进行生物大分子的分离、纯化和分析，对于推动生物技术和医药领域的研究具有重要的意义。
凝胶过滤法分离蛋白质实验报告
凝胶过滤法分离蛋白质实验报告
凝胶过滤法是一种分离蛋白质的方法。
本实验使用交联葡聚凝胶，其具有一定孔径的网络结构，能够根据分子大小的不同进行分离。
大分子物质只能沿着胶粒之间的间隙向下流动，所经路短，最先流出；而小分子物质要经过层层扩散向下流动，所经路程长，最后流出，通透性居中的分子则后于大分子而先于小分子流出。
从而实现分离的目的。
实验步骤包括凝胶溶胀、装柱、样品处理、上样和过滤、部分收集和凝胶回收。
在收集洗脱液的过程中，开始时为无色透明，但时间过去，试管中收集的红褐色开始变深，到最后，试管的颜色为深褐色，接着溶液的颜色开始变浅，红褐色几乎要消失。
接着又开始出现浅黄色，再到黄色，再黄色开始慢慢变浅，最后又变成无色透明。
这是因为分子的扩散有快有慢，少量的高铁血红蛋白与缓冲液一起滴出，使得溶液慢慢加深。
3.经过过滤后，溶液变成深褐色，这是高铁血红蛋白的本色。
颜色越深，表示过滤后蛋白质越纯。
4.随着洗脱的进行，红褐色开始变浅。
这是因为大部分高铁蛋白已经被洗脱，只剩下一小部分洗脱较慢的高铁蛋白。
5.开始呈现浅黄色，并逐渐变成无色，这是由于高铁氰化钾的扩散速度不同。
一部分高铁氰化钾扩散得很快，接着大部分K3Fe(CN)6被洗脱出来，最后全血几乎被洗脱完毕。
试管中接收的是缓冲液。
6.红褐色先释放出来，然后才是黄色。
这是因为血红蛋白与高铁氰化钾反应生成高铁血红蛋白，因为高铁血红蛋白的分子较大，洗脱速度较快。
而小分子的高铁氰化钾（黄色）洗脱较慢，因此红褐色先被洗脱出来，黄色则稍后。
根据分子大小分离蛋白质的方法
根据分子大小分离蛋白质的方法蛋白质是生命体中非常重要的分子，它们在细胞的结构和功能中起着关键作用。
为了研究蛋白质的特性和功能，科学家们经常需要对蛋白质进行分离和纯化。
分离蛋白质的一个重要方法是根据蛋白质的分子大小进行分离。
本文将介绍几种常用的根据分子大小分离蛋白质的方法。
一、凝胶过滤层析法凝胶过滤层析法是一种基于分子大小的常用分离技术。
其原理是利用孔径大小不同的凝胶材料，将大分子蛋白质滞留在凝胶中，而小分子溶质可以顺利通过凝胶。
常用的凝胶材料有琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶等。
根据需要选择不同的凝胶孔径，可以实现对不同分子大小的蛋白质进行分离。
二、聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离技术。
它利用电场作用将蛋白质分子按照大小进行分离。
在聚丙烯酰胺凝胶中，较大的蛋白质分子迁移速度较慢，而较小的蛋白质分子迁移速度较快。
通过调整电场强度和时间，可以实现对不同分子大小的蛋白质进行分离。
三、尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的变性凝胶电泳方法。
尿素是一种强变性剂，可以使蛋白质分子解离成单体，并且具有较好的可溶性。
在尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白质分子的迁移速度主要取决于它们的电荷和分子大小。
通过调整电场强度和时间，可以实现对不同分子大小的蛋白质进行分离。
四、尺寸排阻色谱尺寸排阻色谱是一种利用固定相孔径大小进行分离的色谱技术。
在尺寸排阻色谱中，较大的蛋白质分子无法进入固定相孔径，因此会以较快的速度从色谱柱中洗脱，而较小的蛋白质分子则会在固定相中发生多次扩散，从而保留更长的时间。
通过调整固定相的孔径，可以实现对不同分子大小的蛋白质进行分离。
五、离心过滤法离心过滤法是一种简便快速的蛋白质分离方法。
它利用离心力将大分子蛋白质沉淀在滤膜上，而小分子蛋白质则通过滤膜被洗脱出来。
通过选择不同孔径的滤膜，可以实现对不同分子大小的蛋白质进行分离。
根据分子大小分离蛋白质的方法有凝胶过滤层析法、聚丙烯酰胺凝胶电泳、尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳、尺寸排阻色谱和离心过滤法等。
蛋白纯化方法
蛋白纯化方法一、离心。
离心是一种常用的蛋白纯化方法，它利用蛋白质在不同离心速度下沉降速度的差异来分离蛋白。
通过逐步调整离心速度和时间，可以将混合物中的不同颗粒分离开来，从而得到目标蛋白的富集样品。
离心方法操作简单，适用于大多数蛋白质的初步富集。
二、凝胶过滤层析。
凝胶过滤层析是一种分子大小分离的方法，通过在凝胶柱中筛选不同大小的蛋白质分子，实现蛋白的分离和纯化。
这种方法操作简便，分离效果好，适用于大多数蛋白质的纯化。
三、离子交换层析。
离子交换层析是一种利用蛋白质表面电荷差异进行分离的方法。
在离子交换柱中，蛋白质会根据其表面电荷与离子交换树脂发生相互作用，从而实现蛋白质的分离和纯化。
这种方法操作简单，分离效果好，适用于具有不同电荷特性的蛋白质。
四、亲和层析。
亲和层析是一种利用蛋白质与亲和层析介质之间特异性结合进行分离的方法。
通过选择合适的亲和层析介质，可以实现对特定蛋白质的高效分离和纯化。
这种方法操作简单，适用于特定蛋白质的纯化。
五、逆流层析。
逆流层析是一种利用蛋白质与逆流层析介质之间的亲和性进行分离的方法。
通过逆流层析柱中的逆流洗脱，可以实现对蛋白质的高效分离和纯化。
这种方法操作简单，适用于特定蛋白质的纯化。
总结。
蛋白纯化是生物化学研究中不可或缺的重要步骤，选择合适的纯化方法对于获得高纯度的蛋白样品至关重要。
本文介绍了几种常用的蛋白纯化方法，包括离心、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析和逆流层析，希望能为您的实验提供一些参考。
在实际操作中，需要根据目标蛋白的特性和实验要求选择合适的纯化方法，并结合实际情况进行优化，以获得高质量的蛋白样品。
祝您的实验顺利，取得理想的结果！。
四种蛋白纯化方式的原理及优缺点的简述
一.分子筛（凝胶层析）原理：用一般的柱层析方法使相对分子质量不同的溶质通过具有分子筛性质的固定相（凝胶），从而使蛋白质分离。
优点：1.洗脱条件简单，往往只需要一种缓冲溶液，可以使用任何缓冲液。
2.实验操作相对简单3.条件温和，对蛋白活性保持率高4.既可以对标签蛋白纯化也可以对非标签蛋白纯化。
缺点：1. 工艺放大困难：分子筛层析无法遵循线性放大原则，即使遵循柱床高度不变的原则，工艺流速如何进行调整，也是需要面临的问题。
2. 层析柱装填困难3.对上样量有要求4.测定柱效困难5.反复使用层析柱困难二.亲和层析原理：亲和层析是一种吸附层析，亲和层析利用固相介质中的配基与混合生物分子之间亲和能力不同而进行分离，当蛋白混合液通过层析柱时，与配基能够特异性结合的蛋白质就会被吸附固定在层析柱中，其他的蛋白质对配体不具有特异性的结合能力，将通过柱子洗脱下来，这种结合在一定条件下是可逆的，选用适当的洗脱液，改变缓冲液的离子强度和pH 值或者选择更强的配体结合溶液将结合的蛋白质洗脱下来，而无亲和力的蛋白质最先流出层析柱。
优点:1. 亲和层析法是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。
2. 是最有效的生物活性物质纯化方法，它对生物分子选择性的吸附和分离，可以取得很高的纯化倍数。
此外蛋白在纯化过程中得到浓缩，结合到亲和配基后，性质更加稳定，其结果提高了活性回收率。
此外它可以减少纯化步骤，缩短纯化时间，对不稳定蛋白的纯化十分有利。
缺点：1.除特异性的吸附外，仍然会因分子的错误认别和分子间非选择性的作用力而吸附一些杂蛋白质，另洗脱过程中的配体不可避免的脱落进入分离体系。
2. 载体较昂贵，机械强度低，配基制备困难，有的配基本身要经过分离纯化，配基与载体耦联条件激烈等。
三.离子交换层析原理：离子交换层析根据样品表面电荷不同进行分离纯化的技术，根据不同蛋白样品在同一Ph条件下所带电荷正负以及带电荷量不同而将不同蛋白样品分离。
凝胶过滤层析技术在蛋白纯化中的应用
凝胶过滤层析技术在蛋白纯化中的应用在蛋白纯化领域，凝胶过滤层析技术是一种常用且有效的方法。
凭借其高度选择性和良好的分离能力，这一技术已广泛应用于蛋白质的提纯、分离和富集过程中。
本文将介绍凝胶过滤层析技术在蛋白纯化中的基本原理、操作步骤以及优势。
一、凝胶过滤层析技术的基本原理凝胶过滤层析技术是利用某种凝胶材料作为固相基质，利用其特殊的孔隙结构和吸附性质，实现对蛋白质的分离和富集。
常见的凝胶材料包括聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶和硅凝胶等。
在这些凝胶材料中，具有不同孔隙大小和表面化学性质，可以选择合适的凝胶材料根据待纯化蛋白的分子大小和亲疏水性进行分离。
凝胶过滤层析技术的工作过程主要包括样品加载、洗脱和洗涤。
首先，待纯化的样品通过一定方式加载到凝胶柱中，其中目标蛋白质会与凝胶表面上的固定相相互作用。
接着，通过适当的洗涤条件，将非目标蛋白质和干扰物从凝胶中洗脱，留下纯化后的目标蛋白质。
最后，目标蛋白质可以通过改变洗脱条件或者用适当的洗脱缓冲液将其洗脱出来。
二、凝胶过滤层析技术的操作步骤凝胶过滤层析技术在蛋白纯化中主要包括柱填充、样品加载、洗脱和洗涤等步骤。
以下将对每个步骤进行详细介绍，以帮助读者更好地理解和运用该技术。
1. 柱填充柱填充是凝胶过滤层析技术的一个重要步骤，对柱的填充质量和效果有很大影响。
首先，选择合适的凝胶材料，并对其进行活化处理。
活化处理方法包括温度处理、pH调节和溶剂调节等。
然后，将活化后的凝胶放入柱中，并使用适当的缓冲液进行平衡和稳定。
2. 样品加载样品加载是凝胶过滤层析技术的核心步骤，也是实现蛋白纯化的关键。
加载前，首先将待纯化的样品进行前处理，如去除颗粒物、浓缩和调整pH值等。
然后，将样品加载到柱中，通过重力或压力的作用，使样品与凝胶表面发生相互作用。
在这个过程中，目标蛋白会与凝胶上的固定相作用，并附着在凝胶上，而非目标蛋白质会通过洗涤缓冲液被冲洗出去。
3. 洗脱洗脱是凝胶过滤层析技术的重要步骤，用于将纯化后的目标蛋白从凝胶中洗脱出来。
凝胶层析的研究及其应用
凝胶层析的研究及其应用凝胶层析是一种常见的分离和纯化生物大分子的技术方法，广泛应用于生物化学、分子生物学、生物医学等领域。
本文将介绍凝胶层析的研究及其应用。
一、凝胶层析的原理和分类凝胶层析是利用凝胶作为分离介质，根据生物分子在凝胶中的分子大小、形状和电荷差异，通过毛细管效应和几何阻滞效应实现生物大分子的分离和纯化。
凝胶层析可分为凝胶过滤层析、凝胶吸附层析和凝胶电泳层析三种主要方法。
1.凝胶过滤层析：根据生物分子的大小和孔径大小的选择，将较大的生物分子滞留在凝胶中，而较小的生物分子则通过凝胶颗粒。
常用的凝胶过滤介质有琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等。
2.凝胶吸附层析：根据生物分子与凝胶吸附剂（如离子交换剂、亲和吸附剂）之间的亲和性差异，实现生物分子的分离纯化。
常用的凝胶吸附介质有离子交换凝胶、亲和性凝胶等。
3.凝胶电泳层析：根据生物分子的电荷差异，在电场作用下，通过凝胶孔隙内的离子迁移实现生物分子的分离。
常用的凝胶电泳介质有聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等。
二、凝胶层析的研究进展凝胶层析技术的研究中涉及到凝胶材料的制备与改性、凝胶层析流程的优化和成像技术的发展等方面。
1.凝胶材料的制备与改性：为了提高凝胶分离效果，研究人员常对凝胶材料进行制备和改性。
如调控凝胶孔隙大小、凝胶表面的亲和性等。
同时，还探索了新型的凝胶材料，如纳米凝胶和水凝胶。
2.凝胶层析流程的优化：凝胶层析的分离效果受到多种因素的影响，包括凝胶浓度、缓冲液pH值、离子浓度和柱床尺寸等。
因此，优化凝胶层析流程能够提高分离效率和纯化效果。
3.成像技术的发展：凝胶层析结合成像技术能够实时观察分离过程中的分子分布，提供有关分子大小、形状和电荷的信息。
如蛋白质凝胶电泳的银染色、荧光标记和质谱等技术的应用。
三、凝胶层析的应用凝胶层析在生物化学、分子生物学和生物医学等领域广泛应用于分离和纯化生物大分子。
1.蛋白质纯化：凝胶层析可以根据蛋白质的大小、电荷和亲和性等特性进行分离。
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（哈 尔 滨 医科 大 学 生化 教 研 室 ，黑 龙 江 哈 尔 滨 １５００８６）
［摘要 ］ 目的 探讨 凝胶过 滤层析分离 蛋 白质 的最 佳实 验效 果 。方 ｉ支 分别 采用 不 同规格 的 凝胶 过滤 层析 介 质 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０、Ｇ－７５、Ｇ－１００，通过 凝胶过滤层 析法分离 已知分子量 的混合蛋 白质。 结果 混合样 品得到分离 ，呈 现三 组分离样 品 的层 析 图。结论 从 大分子物 质中除去小 分子物 质时 应选 用 交联度 大 的介 质 Ｇ－５０。进行 中等蛋 白质 分离 时 ，选 用 Ｇ－７５较为合 适 。将小 分子物质浓 缩而除去大分 子物质 时 ，应选用 交联度小 的介质 ，如 Ｇ－１００或 Ｇ－２００。 ［关键词 ］ 凝胶 过滤层析 ；葡聚糖凝胶 ；洗脱 液 ；蛋 白质 ［中图分 类号 ］Ｒ一３３１ ［文献标识 码］Ａ ［文章编 号］１０００—１９Ｑ５（２００２）０３—０２４２—０２
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈａｒｂｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ １５００８６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｆｍｄ ｏｕｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｉｘｔｕｒｅ ｂｙ ｇｅｌ—ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ
Ｔｈｅ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ｅｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｒｅｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｇｅｌ—ｆ＇ｄｔｒａｔｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｍｅｄｉａ ｔｏ ｓｅｐａｒａｔｅ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍ ｉｘｔｕｒｅ
ＹＡＮＧ Ｇｅ—ｄｅ，ＪＬＡ．ＮＧ Ｙｕ—ｍｅｉ，ＺＨＯＵ Ｈｏｎｇ－ｂｏ
第 ３６卷 第 ３期 ２４２ ２Ｏ０２年 ６月
哈 尔滨 医 科 大 学 学 报
ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＨＡＲＢＩＮ ＭＥＤＩＣＡＬ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
维普资讯
Ｖ０１．３６Ｎｏ．３ Ｊｕｎ．．２００２
凝 胶 过 滤 层 析 分 离 蛋 白质 实 验 中三 种 过 滤 介 质 分 离 效 果 的 比较
取 葡 聚 糖 凝 胶 Ｇ－５０ １０ｇ溶 于 ３００ｍｌ＇Ｉｒ ｉｓ—ＨＣ１缓 冲液 中 ，浸 泡 ６ｈ以上 ，使 之 充 分 溶 涨 。将 溶 涨 后 的 凝胶 溶 液倒 入层 析 柱 中 ，约 需 ６０ｍｉｎ，凝 胶 可 完 全 平 衡 。此 时 柱 床 高 度 应 达 到 ４５ｃｍ。需 注 意 在 此 平 衡 过程中始终保持液体高于凝胶表面 ，防止空气进入。 打 开核 酸一蛋 白检 测 仪 ，于 ２８０ｎｍ 波 长处 检 测 ，加 人
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ Ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｉｘｔｕｒｅ ｏｆ ｗｈｉｃｈ ｋｎｏｗｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｗｅｉｇｈｔ ｂｙ ｇｅｌ—ｆ ｉｌ— ｔｒａ￣ｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｉｎ ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０，Ｇ一７５ ａｎｄ Ｇ－１００．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｐｒ ｏｔｅｉｎ ｍｉｘｔｕｒｅ ｗｅｒ ｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ＳＵＣ— ｃｅｓｓｆｕｌ ｌｙｂｙ ｇｅｌ—ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｃｈｒｏｍａ ｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎ ｄ ｔ ｈｅ ｃｈｒ ｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｓｅｐａｒａｔｅ ｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒ ｅ ｐｒｅｓｅｎｔｅ ｄ ｃｌｅａｒｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｓｅ ｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０ ａｒｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆ ｏｒ ｐｕｒ ｉｆｙｉｎｇ ｔ ｈｅ ｌａｒｇｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｐｒ ｏｔｅｉｎ，Ｇ－７５ ｆ ｏｒ ｔ ｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ｍｏ ｌｅｃｕｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｇ－１００ ａｎ ｄ Ｇ－２００ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｐｒ ｏｔｅｉｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｇｅｌ—ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｇｌｕｃｏｓａ ｎ ；ｅｌｕａ ｎ ｔ；ｐｒ ｏｔｅｉｎ
［收稿 日期 】２００１一ｌ１—１４；［修订 日期 】２Ｏ０２—０１—０８ （作者简介 】杨歌德 （１９５１一），男 ，黑龙 江哈 尔滨人 ，高级实验 师。
１ 材 料 与方 法
１．１ 材 料 １．１．１ 试 剂 ：Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０、Ｇ－７５、Ｇ－ＩＯ０（上 海 化 学 试 剂进 口分 装 厂 ）；牛 血 清 白蛋 白 、溶 菌 酶 ；洗 脱 液 ： ０．０５ｍ ｏ ｌ／Ｌ ｐＨ７．５＇Ｉｒ ｉｓ—ＨＣ１缓 冲液 。 １．１．２ 仪 器 ：ＨＤ一８８—５ＡＩ核 酸 一蛋 白检 测 仪 ；ＸＷＴ－Ｓ 台式 记 录 仪 ；部 分 收 集 器 ；玻 璃 层 析 柱 （１．５ｃｍ × ５０ｃｍ）。 １．２ 方 法
凝 胶 过 滤层 析 法 又 称凝 胶 排 阻层 析 或分 子 筛层 析 ，是 ６ｏ年代初发展起来的一种简便而有效的液相 柱 层 色谱 技 术 。利 用 某 些 化学 惰 性 的多 孔 网状 结构 的物 质 （凝胶 ）为 填料 ，通 过 洗 脱液 的连 续洗 脱 ，使混 合 物 中的各 种 物 质按 其 分 子 大小 不 同得 到 分离 。凝 胶 过 滤层 析 所 需 设 备 简 单 、操 作 方 便 、分 离 迅 速 ，不 影 响样 品 的生 物 活 性 优 点 ，广 泛 应 用 于 大分 子 物 质 的分离 纯 化 ，也 应 用 于 蛋 白 质 去 盐 及 分 子 量 的测 定 … 。我们 选 用 不 同 规 格 的葡 聚糖 凝 胶 ，商 品 名 为 “Ｓｅｐｈａｄｅｘ”Ｇ－５０、Ｇ一７５、Ｇ－１００为 填 料 ，以 分 子 量 不 同 的牛血 清 白蛋 白 、溶 菌 酶 为 样 品 ，通 过 凝 胶 过 滤 层 析 ，达 到分 离 目的 。 为 凝 胶 过 滤 层 析 分 离 蛋 白质 的 应 用 提供 了可 靠 的 实验 数 据 。