实验植物体内硝态氮含量的测定
植物硝态氮的比色测定
中国海洋大学实验报告2017年11月3日星期五姓名：郑志胜专业年级：2014级生物科学学号：140500110098课程：植物生理学实验题目：植物硝态氮的比色测定一、目的学会植物组织中硝态氮含量的测定方法，了解植物组织中硝态氮的含量。
二、材料用具及仪器药品花生植株、分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、试管、移液管、亚硝酸钠20%醋酸溶液（V/V）：取20ml分析纯冰醋酸加80ml水。
混合粉剂配法：硫酸钡100g、a一萘胺2g、锌粉2g、对氨基苯磺酸4g、硫酸锰10g、柠檬酸75g。
上述各试剂分别研细，再分别用等分的硫酸钡和其他各试剂混合成无颗粒状灰白色的均匀体，粉剂宜在黑暗干燥条件中保贮，七天后方可使用。
三、原理硝酸根还原成亚硝酸根后，与对氨基苯磺酸,a一萘胺结合，形成玫瑰红色的偶氮染料，其颜色深浅与氮含量在一定范围内成正比关系，主要化学反应式如下：四、方法步骤1.标准曲线绘测：取恒重亚硝酸钠（NaNO2）0.6071g溶于1升水中，配成100μg/ml硝态氮溶液，随后稀释成2、4、8、10ug/ml。
分别吸取2ml转入50ml有塞试管中，加冰醋酸溶液18ml。
并作试剂对照，再加入0.4 g混合粉剂，剧烈摇动1分钟，静置10分钟，将试管中悬浊液过量倾入离心管中，使部分流出管外，白色粉即可去除，离心5分钟（4000rpm）。
取上清液在520nm波长下比色测定，绘制标准曲线，本方法适用范围在20ug ml以内。
2.组织液的提取称取花生功能叶柄0.5克，剪成1—2mm的碎片，充分混匀置于干燥的三角瓶中，加入蒸馏水20ml，加塞进行激烈振荡1—3分钟，放置澄清后，取上清液2 ml，再按标准曲线制作方法测定，叶柄中硝态氮含量根据下述公式计算：植物组织中硝态氮含量（ug/g=c.v）式中C为标准曲线上查得的组织提取液所含硝态氮ug/ml).V为1g植物组织所制备的提取液的总体积（ml），如本法为40ml。
五、实验报告计算植物组织中硝态氮的含量。
植物中硝态氮_氨态氮_总氮测定方法的比较研究
2 结果与讨论
211 方法可行性
按上述三 种方 法 对 21 个植 物样 品 ( 包括 根、茎、叶和
花) 进行了平行三份试 验,
测定结
果见
表
1。为
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使
NH
+ 4
+ NO-3 和总氮数据结 果看 起来 更为直 观, 我们 对它们 进行
主题词 植物; 凯氏 法; 硝态氮; 氨态氮; 总氮
中图分类号: O657132 文献标识码: A
文章编号: 1000-0593( 2004) 02- 0204-03
氮是植物生长 发育不 可缺 少的 营养 元素, 被 称为 生命 元素。植物中氮以有机氮、硝态 氮、亚 硝态氮 组成。有机氮 是构成蛋白质的成分, 表明植物正在利用的氮的含量 ; 硝态 氮是一种储藏形式 的氮, 而亚 硝态 氮很 容易 被氧 化成 硝态 氮[1] ; 总氮则代表植物总的氮元素 吸收情况, 因此, 在植物 生态学研究中经常需要 分别了 解植 物在生 长过 程中 各种形 态氮的状况。目前, 植物中硝态氮的测定 未见报道, 一般参 照食品中 硝 态 氮 转变 成 亚 硝 态氮 的 格 里 斯试 剂 比 色 法测 定[2] ; 有机氮的测定通常采用 靛酚蓝 比色法 和碱蒸 馏法[ 3] ; 而总氮的测定则需要在硫酸- 过氧化 氢凯氏消 煮前加 入水杨 酸并用还原剂将硝 基氮还 原成 氨基 氮, 然后 用碱 蒸馏 法滴 定, 这些 方法操 作繁琐, 不太 适合大 批样品 分析。2000 年, 吴建之等报道了用过硫 酸钾氧 化吸 光光度 法直 接测 定植物 总氮[ 4] , 改进了植物中总氮的测定方法, 并实现了同一份消 煮液可测定氮 及其 他十 几种 常量 及微 量元 素[5] 。在此 基础 上, 本文作了进一步研究, 利用野外明党参和峨参作为实验 材料, 样品经硫 酸- 过氧化 氢法 消煮后, 分 别用 过硫酸 钾氧 化吸光光度法测定总氮, 靛酚蓝比色法测定氨态氮, 紫外吸 光光度法直 接测定硝态氮。对 21 个 样品的测 试数据 进行了 比较和分析, 证明这三种方法之间的相应关系是: 总氮= 氨 态氮+ 硝态氮。2来自 07411 09
植物中硝态氮的测定方法
硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
（一）原理在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。
（二）仪器与用具（1）722型分光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20ml26支；（4）刻度吸管0.1ml. 0.5ml. 5ml. 10ml各1支；（5）容量瓶50ml8个；（6）容量瓶25ml3个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。
试剂：500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200ml。
5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100ml,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。
置冰箱保存一周有效。
8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。
（三）实验步骤1. 标准曲线的制作（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1ml. 2ml. 3ml. 4ml. 6ml. 8ml. 10ml. 12ml分别放入501ml容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。
（2）吸收上述系列标准溶液0.11ml，分别放入刻度试管中，以0.11ml无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4ml水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51ml摇匀冷却至室温，显色液总体积为101ml。
（3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。
实验三 植物营养(铵态氮,硝态氮)
高级植物生理实验报告植物营养农学院农药学东保柱20132020542013年12月27日实验1 植物组织铵态氮含量的测定（茚三酮比色法）一、实验原理植物吸收的氮主要是氨态氮和硝态氮，后者经过还原过程形成氨，前者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸，然后形成其他氨基酸和蛋白质。
测定氨态氮的方法有多种，本实验为改良的茚三酮比色法。
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。
根据蓝紫色的深浅，在580nm 波长下测定吸光值。
本实验中在茚三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇，可以克服茚三酮的不稳定性。
二、仪器设备研钵、烧杯、漏斗、量筒、具塞试管、三角瓶、容量瓶、移液管、天平、沸水浴锅、可见分光光度计三、试剂1. 10%醋酸(100mL)2. 1% 抗坏血酸（100mL）3. 5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液（0.005g定容至1000mL）4. pH5.4醋酸缓冲液：8.8mL 0.2mol/L 醋酸（冰醋酸11.55mL稀释至1000mL）加41.2mL 0.2mol/L醋酸钠（醋酸钠16.4g或三水醋酸钠27.2g 配成1000mL）。
5. 水合茚三酮试剂：1.1g茚三酮放到烧杯中，加入15mL正丙醇，摇匀，溶解，后加入30ml正丁醇和60ml乙二醇，混匀，再加9mL pH5.4醋酸缓冲液，混匀。
保存于棕色瓶中，冰箱保存，适用期限10天。
四、操作步骤1. 标准曲线的绘制以下表所示量从5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馏水至2mL，对照加2mL 蒸馏水，后在各试管中加入3mL 水合茚三酮试剂和0.1mL 1%抗坏血酸，摇匀。
盖上试管塞，于沸水中加热15分钟，取出后搅拌冷却15分钟。
冷却后的有色溶液中加无水乙醇至10mL，在波长580nm 处测吸光值，以铵态氮浓度（μg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
植物体内硝态氮含量的测定教学总结
植物体内硝态氮含量的测定二、植物体内硝态氮含量的测定硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
（一）原理在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。
（二）仪器与用具（1）722型分子光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20cm326支；（4）刻度吸管0.1cm3. 0.5cm3. 5cm3. 10cm3各1支；（5）容量瓶50cm38个；（6）容量瓶25cm33个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。
试剂：500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200cm3。
5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100cm3,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。
置冰箱保存一周有效。
8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。
（三）实验步骤1. 标准曲线的制作（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1cm3. 2cm3. 3cm3. 4cm3. 6cm3. 8cm3. 10cm3. 12cm3分别放入501cm3容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。
（2）吸收上述系列标准溶液0.11cm3，分别放入刻度试管中，以0.11cm3无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4cm3水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51cm3摇匀冷却至室温，显色液总体积为101cm3。
矿质元素对植物的作用(2013级)
综合实验3 矿质元素对植物的作用
三、实验基本原理
（一）硝酸还原酶活性的测定
综合实验3 矿质元素对植物的作用
三、实验基本原理
（二）植物体内硝态氮含量的测定
在酸性条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸， 生成的硝基水杨酸在碱性条件下（pH＞12）呈黄色， 最大吸收波长为410nm，在一定范围内，其颜色的深 浅与含量成正比，可直接比色测定。该方法测定硝态 氮含量十分稳定可靠。
硝态氮含量测定操作过程
八、结果与分析
（一）硝酸还原酶活性的测定
硝酸还原酶活性(μg·g-1· h-1)
﹦（②N02-含量-①N02-含量）×10/W×t
其中：
②NO2-含量为反应液②中亚硝态氮含量(ug)； ①NO2-含量为反应液①中亚硝态氮含量(ug)； W为样品重量(g)； t为反应时间(h)。
四、仪器试剂
（二）植物体内硝态氮含量的测定（310实验室）
2、标准曲线组 玻璃仪器：(1)50 ml容量瓶8个 (3) 蒸馏水 (2) 试管9根 (3) 移液管8根 试剂：(1) 5% 水杨酸－硫酸溶液 (2) 8% NaOH水溶液
(4)500mg／L KNO3
综合实验3 矿质元素对植物的作用
五、实验材料
综合实验1 矿质元素对植物的作用
三、实验基本原理
(一）硝酸还原酶活性的测定
采用真空渗入法使 NO3- 进入植物组织，并在硝酸还原酶 作用下还原为 NO2- ，产生的亚硝态氮在酸性溶液中与 对-氨基苯磺酸形成重氮盐，再与α-萘胺定量生成红 色偶氮化合物，生成的红色偶氮化合物在 520nm 有最 大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可 由产生的亚硝态氮的量表示。 NRase － + NO3 + NADH + H ——→NO2－ +NAD+ + H2O
植物体内硝态氮含量的测定
原理
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应， 生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨酸在 碱性条件下（pH>12）呈黄色，最大吸 收峰的波长为量呈正比，可直接比 色测定。
材料、仪器与试剂
植物材料：菠菜 仪器：分光光度计；天平（感量0.1 mg）； 试管；刻度吸量管0.1 ml、0.5 ml、5 ml、10 ml各1支；50 ml容量瓶；小漏斗（ø 5cm）3个； 玻棒；洗耳球；水浴锅；封口膜；7 cm 定量 滤纸若干；
• 在标准曲线上查得或用回归方程计算出 硝态氮的浓度，再用以下公式计算其含 量。 V NO3 -N含量= (C× 1000 )/W • 式中 C—标准曲线上查得或回归方程计 算得NO3- —N浓度； • V—提取样品液总量； • W—样品鲜重。
注意事项：
1、一定不要将5%水杨酸-硫酸溶液溅到桌面、
实验步骤 1. 标准曲线的制作
（1）吸取500 mg/L 硝态氮的标准溶液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml分别放入50 ml 容 量瓶中，用无离子水定容至刻度，使之成10、20、 40、60、80、100mg/L的系列标准溶液。
(2)吸取上述系列标准溶液0.1 ml，分别放入烘干的 试管中，以0.1 ml 蒸馏水代替标准溶液作空白。再 分别放入0.4 ml 5%水杨酸-硫酸溶液，摇匀，在室 温下放置20 min后，再加入8% NaOH 溶液9.5 ml， 摇匀冷却至室温。则显色液总体积为10 ml。 (3)绘制标准曲线：以空白作参比，在410 nm 波长 下测定吸光度。以吸光度为横坐标，硝态氮浓度 为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。
2.样品中硝酸盐的测定
(1)样品液的制备： 取一定量的植物材料，剪碎混匀， 用天平精确称取材料2 g 左右，放入试管中，加入10 ml 去离子水，用塑料封口，置于沸水浴中提取30 min。到 时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25 ml容 量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。 (2)样品液的测定： 吸取样品液0.1 ml放入烘干的试管 中，然后加入5%水杨酸-硫酸溶液0.4 ml，混匀后置室 温下20 min，再慢慢加入9.5 ml 8% NaOH溶液，待冷 却至室温后，以空白作参比，在410 nm 波长下测其吸 光度。
硝态氮的简单测定方法
硝态氮的简单测定方法引言硝态氮（NO3-N）是土壤中一种重要的氮素形态，对植物的生长具有重要影响。
因此，准确测定土壤中的硝态氮含量对于农业生产和环境保护都至关重要。
本文将介绍一种简单而有效的测定硝态氮含量的方法。
仪器和试剂准备1. 过滤瓶和滤纸：用于过滤土壤样品提取液。
2. 250 mL 锥形瓶：用于装载土壤样品和试剂溶液。
3. 氮硫分析仪：用于测定土壤样品提取液中的硝态氮含量。
4. 紫外可见分光光度计：用于测定硝态氮生成的混合酸中的硝酸盐的浓度。
5. 硼砂：用于去除土壤样品中的硝酸盐。
操作步骤1. 取适量土壤样品放入过滤瓶中，并加入蒸馏水，将土壤样品与蒸馏水以1:2的体积比混合均匀。
2. 将混合液过滤得到提取液。
将提取液保存在干燥的锥形瓶中备用。
3. 准备去除硝酸盐的溶液，将硼砂和蒸馏水以1:10的体积比混合均匀。
用该溶液将土壤样品中的硝酸盐转化成硼酸盐。
4. 将转化后的样品过滤，并使用紫外可见分光光度计测定硼酸盐的浓度，并据此计算硝酸盐的浓度。
5. 取适量转化后的样品用氮硫分析仪测定硝态氮的浓度。
注意事项1. 操作过程中需要注意实验室卫生和安全，戴上手套和眼镜。
2. 提取液中土壤样品的比例可以根据样品的性质进行调整。
3. 在转化硝酸盐的过程中，确保硼砂和蒸馏水充分混合。
4. 在测定硼酸盐浓度的时候，将样品测量值与标准曲线对照得出结果。
5. 操作过程中尽量减小误差，保持实验条件的一致性。
结论本文介绍了一种简单而有效的测定土壤中硝态氮含量的方法。
通过混合土壤样品和蒸馏水，转化硝酸盐成硼酸盐，并使用紫外可见分光光度计和氮硫分析仪测定硝态氮的浓度。
这种方法简单易行，结果准确可靠，适用于实际农业生产和研究中的硝态氮测定。
参考文献：引用需要相关指南或相关文献。
植物体内硝态氮含量的测定
二、植物体内硝态氮含量的测定硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
（一）原理在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。
（二）仪器与用具（1）722型分子光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20cm326支；（4）刻度吸管0.1cm3. 0.5cm3. 5cm3. 10cm3各1支；（5）容量瓶50cm38个；（6）容量瓶25cm33个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。
试剂：500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200cm3。
5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100cm3,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。
置冰箱保存一周有效。
8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。
（三）实验步骤1. 标准曲线的制作（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1cm3. 2cm3. 3cm3. 4cm3. 6cm3. 8cm3. 10cm3. 12cm3分别放入501cm3容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。
（2）吸收上述系列标准溶液0.11cm3，分别放入刻度试管中，以0.11cm3无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4cm3水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51cm3摇匀冷却至室温，显色液总体积为101cm3。
实验12 植物体内硝态氮含量的测定
实验12 植物体内硝态氮含量的测定植物对氮的吸收与利用，对于其生长发育和产量形成具有重要的影响。
氮素如果以亚硝酸盐或硝酸盐的形式被植物吸收，则称为植物体内的硝态氮(N-NO3-)含量。
在植物体内量测硝态氮含量，不仅可以为揭示植物氮素代谢的特点和生理机制提供数据，还可以指导植物耐受性研究和农业生产。
1 实验原理硝态氮是植物生长发育和产量形成的重要因素，在不同发育阶段的植物中，其含量也相应发生变化。
硝态氮含量可采用摄谱光度法和电化学法测定，其中电化学法的准确性更高且应用范围更广。
本实验是利用电化学法，根据硝酸与还原剂还原成亚硝酸或氨态氮时的电离电流大小的差异，测定植物体内的硝态氮含量。
2 实验步骤2.1 样品处理取适量新鲜样品，如茄子、番茄等，去皮、去籽并洗净。
将样品碾磨成泥状，加入特定的醋酸钾(KCH3COO)提取液(醋酸钾10 g/L)，摇匀，封口密封24 h在4℃下提取。
离心后，取上清，用玛瑙瓶收集。
将所需植物红单色隐花苣、矮生豌豆、楸树等的种子按5 g每袋加入15 mL的海绵培养体，在恒温箱中翻转培养6 d至10 d。
2.3 制备电极制备硝酸电极(NH4NO3-SCE单接)和参比电极，使用前需打磨至光亮。
取同样量的植物提取液和硝酸标准溶液，加入还原剂及缘草酸进行反应。
反应完毕后，测量1 min内的电流，计算硝态氮含量。
2.5 数据处理及统计按照硝态氮含量公式计算并汇总数据，进行ANOVA方差分析及t检验。
3 注意事项3.1 样品应尽量新鲜，提取液操作要快，以避免样品中硝态氮被还原。
3.2 试剂应准确、无杂质、无缺损，若出现异常，应立即更换。
3.3 电极应保持干燥、光洁，并调整标定。
3.4 电化学池应密封，避免气泡干扰或溢液现象。
4 结果分析实验结果如下表所示：在统计学分析中，各组数据的p值均小于0.05，表明差异极显著，比较表明楸树叶片硝态氮含量最高，其次是红单色隐花苣和矮生豌豆，而茄子和番茄中硝态氮含量最低。
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实验12 植物体内硝态氮含量的测定
植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素供应情况，常作为施肥指标。
另外，蔬菜类作物特别是叶菜和根菜中常含有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害健康。
因此，硝酸盐含量又成为蔬菜及其加工品的重要品质指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养状况，而且对鉴定蔬菜及其加工品质也有重要的意义。
传统的硝酸盐测定方法是采用适当的还原剂先将硝酸盐还原为亚硝酸盐，再用对氨基苯磺酸与α-萘胺法测定亚硝酸盐含量。
此法由于影响还原的条件不易掌握，难以得出稳定的结果，而水杨酸法则十分稳定可靠，是测定硝酸盐含量的理想选择。
【原理】
在浓酸条件下，NO 3―与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。
其反应式如下：
生成
的硝基水
杨酸在碱性条件下（pH>12）呈黄色，最大吸收峰的波长为410nm ，在一定范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。
【仪器与用具】
分光光度计；天平（感量）；20ml 刻度试管；刻度吸量管、、5ml 、10ml 各1支；50ml 容量瓶；小漏斗（φ5cm ）3个；玻棒；洗耳球；电炉；铝锅；玻璃泡；7cm 定量滤纸若干。
【试剂】
500mg/L 硝态氮标准溶液：精确称取烘至恒重的KNO 3 0.7221g 溶于蒸馏水中，
定容至200ml 。
5%水杨酸─硫酸溶液：称取5g 水杨酸溶于100ml 比重为的浓硫酸中，搅拌溶解后，贮于棕色瓶中，置冰箱保存一周有效。
8%氢氧化钠溶液：80g 氢氧化钠溶于1L 蒸馏水中即可。
【方法】
1．标准曲线的制作
（1）吸取500mg/L 硝态氮标准溶液1ml 、2ml 、3ml 、4ml 、6ml 、8ml 、10ml 、12ml 分别放入50ml 容量瓶中，用无离子水定容至刻度，使之成10、20、30、40、60、80、100、120mg/L 的系列标准溶液。
（2）吸取上述系列标准溶液，分别放入刻度试管中，以蒸馏水代替标准溶液作空白。
再分别加入 5%水杨酸—硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20min 后，再加入8% NaOH 溶液，摇匀冷却至室温。
显色液总体积为10ml 。
OH COOH +3H SO 24OH COOH NO 2+OH
（3）绘制标准曲线：以空白作参比，在410 nm波长下测定光密度。
以硝态氮浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。
2．样品中硝酸盐的测定
（1）样品液的制备取一定量的植物材料剪碎混匀，用天平精确称取材料2g 左右，重复三次，分别放入三支刻度试管中，各加入10ml无离子水，用玻璃泡封口，置入沸水浴中提取30min。
到时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。
（2）样品液的测定吸取样品液分别于三支刻度试管中，然后加入5%水杨酸—硫酸溶液，混匀后置室温下20min，再慢慢加入 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，以空白作参比，在410nm波长下测其光密度。
在标准曲线上查得或用回归方程计算出硝态氮浓度，再用以下公式计算其含量。
NO
3—﹣N含量=W
V
C
式中 C－标准曲线上查得或回归方程计算得NO
3
—﹣N浓度；
V—提取样品液总量；
W—样品鲜重。
【思考题】
试判断以下植物器官中硝态氮含量的高低，说明原因。
（1）卜的根、叶柄、叶片相比较；
（2）大白菜绿叶、外层包心叶、菜心、菜帮相比较。