液体硫乙醇酸盐培养基配制使用操作规程
硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查记录
硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查记录
硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查记录 R-
培养基批号生产厂家检验起止日期规格检验依据：《中国药典》（20xx 年版二部附录“无菌检查法”）。
2.
3.将各菌株的上述培养物以0.9%无菌氯化钠溶液倍比稀释后,取不同稀释级的菌悬液1ml 注皿，再加入营养琼脂培养基,在30~35℃倒置培养48小时后,计数。
注: 1ml含菌数小于100cfu的稀释级即为检验用稀释级.
4.制备培养基:
称取供试用培养基g，加入纯化水ml，加热搅拌至完全溶解。
分装至9支具塞试管中，每管12ml。
在℃湿热灭菌min。
5.分别向各支培养基中接种各菌株检验用稀释级的菌悬液（小于100cfu/ml）1ml，在30~35℃培养3天、观察：
[合格标准：空白管培养基无菌生长，加菌的培养基管均生长良好。
]
结论：
本批硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查。
检验人复核人。
硫乙醇酸盐流体培养基
文件编号: JL-8.2.4-04
一、物料配比
物料名称
规定称重（g/L）
实际称重
生产批号
生产厂家
备注
酪蛋白胨
15.00
三门峡GS
规定用量为29.2g/L
酵母粉
3.00
武汉AQ
牛肉浸出粉
3.0
上海GM
葡萄糖
5.00
天津JH
硫代乙醇酸钠
0.50
上海YJ
L-胱氨酸
0.5
河北HH
氯化钠
2.50
天津JH
理化：（□通过，□不通过，）时间：________签名_________
技术总监：（□通过，可中试；□不通过，调整）时间：________签名__________
备注______________________________________________________________________
刃天青
0.001
上海YT
琼脂
0.5
青岛HK
二、理化性质检测
高温高压（121℃，15min）后25℃测定（可通过水冷降温）。
1澄清度：_________②粉末颜色：__________③水分__________④成品颜色_________
⑤平行样一的pH值（温度）：__________（指标pH 7.1±0.2）
平行样二的pH值（温度加入琼脂0.5g/L
（2）加入琼脂0.7g/L
（3）加入琼脂0.9g/L
分装试管高度5cm灭菌，静置14天，每24小时观察一次氧化层高度（用直尺测量），并记录。不做细菌学。
三、审核
试验人员：________________时间：________
硫乙醇酸盐流体培养基适用性检查记录-年回收
培养基名称
硫乙醇酸盐流体培养基
来源
批号
培养基名称
硫乙醇酸盐流体培养基
来源
中国食品药品鉴定研究院
批号
检验依据
2015年版《中国药典》及《培养基适用性检查标准操作规程》
检验日期
至
报告日期
培养箱型号
培养箱编号
稀释液
□0.9%无菌氯化钠溶液；
稀释液配制批号
□pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
11
12
13
14
□符合规定 □不符合规定
标准
若培养基无菌生长，则该培养基无菌性检查符合规定。
“+”代表：有菌生长，“—”代表：无菌生长。
3.2、灵敏度检查
培养温度：℃
培养时间：至
菌种名称
培养基
培养时间（天）
是否符合规定
1
2
3
金黄色葡萄球菌
管1
□符合规定 □不符合规定
管2
铜绿假单胞菌
管1
□符合规定 □不符合规定
胰酪大豆胨液体培养基配制批号
硫乙醇酸盐流体培养基配制批号
菌种
金黄色葡萄球菌
实验室编号
菌种
铜绿假单胞菌
实验室编号
菌种
生孢梭菌
实验室编号
检验方法：
1、无菌性检查：每批硫乙醇酸盐流体培养基（FTM）随机取不少于5支（瓶），置于30℃~35℃培养14天；应无菌生长。
2、灵敏度检查:
2.1、菌液制备：用接菌环分别挑斜面培养基上的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的单菌落，接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24小时；取上述培养物用稀释液10倍递增稀释,制成不大于100cfu的菌悬液。将生孢梭菌接种于硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；取上述培养物用稀释液10倍递增稀释,制成不大于100cfu的菌悬液。
培养基的制备和灭菌操作规程
1 目的
1.1 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
1.2 掌握培养基的配制方法。
1.3 掌握压力蒸汽灭菌器的操作方法。
2 范围
规程适用于我司产品、环境的微生物检测。
3 职责
质量部实验室负责依据本规范实施操作。
4 程序内容
4.1 实验材料
4.1.1 培养基：营养琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、硫乙醇酸盐
流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基
4.1.2 仪器及玻璃器皿：电子天平、压力蒸汽灭菌器、试管、量筒、锥形瓶、培养皿、镊子
4.1.3 其他物品：药匙、75%酒精棉、棉线、牛皮纸（或报纸）、记号笔、酒精灯
4.2 操作步骤
4.2.1 玻璃器皿的洗涤
玻璃器皿在使用前必须洗刷干净，将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂
的水中，用毛刷刷洗，然后用自来水及纯化水冲净。
4.2.2 灭菌前培养皿的包扎
培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
4.2.3 培养基的配制过程
（a）称量：一般可用精度不低于0.01g的电子天平称量，先按培养基配方计算出用量．然后进行准确称量。
（b）溶解：将称好的培养基置于锥形瓶中，用量筒加入量好的蒸馏水，用玻璃棒轻轻搅动加热。
硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查分析评价记录
稀释倍数
菌落数（cfu/ml）
平皿1
平皿2
平均菌落数
金黄色葡萄球菌
10-5
不可计
不可计
不可计
10-6
67
120
10-7
20
11
铜绿假单胞菌
10-5
10-6
10-7
枯草芽孢杆菌
10-5
不可计
不可计
不可计
10-6
74
76
10-7
9
8
生孢梭菌
10-5
10-6
10-7
菌液制备分析：
选取菌悬液含菌量小于100cfu的稀释级作为验证用稀释级，各试验菌株的验证稀释级分别为：
金黄色葡萄球菌：10-7；
铜绿假单胞菌：；
枯草芽孢杆菌：10-7；
生孢梭菌：。
3.培养基接种
取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另取1支不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察，结果如下：
菌种名称
稀释倍数
生孢梭菌CMCC(B) 64941第3代
2.菌液制备
接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，33.5℃培养20小时。
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液分别稀释至10-5、10-6、10-7，各稀释级分别取1ml注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每个稀释级平行制备2个平皿，混匀，凝固，置33.5℃培养箱中培养48小时，观察并计数，取2个平皿的平均值作为该菌悬液含菌浓度，结果如下：
试管编号
培养天数
ADV质检方法
附录五：无菌检查方法1材料：1.1样品：1.2试剂：流体硫乙醇酸盐培养基（中国药品生物制品检定所，批号：990303，250克）改良马丁培养基（中国药品生物制品检定所，批号：990128，250克）1.3仪器：PYX-DHS-40x50-BS型隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗仪器厂）2实验方法与步骤：2.1配制培养基：2.1.1准备硫乙醇酸盐液体培养基：称取流体硫乙醇酸盐培养基30g，加蒸馏水1L，加热使之溶解均匀，按15ml/管分装于试管内，116℃灭菌20分钟。
2.1.2准备改良马丁培养基：称取改良马丁培养基28.9g，加蒸馏水1L，加热使之溶解均匀，按15ml/管分装于试管内，116℃灭菌20分钟。
2.1.3培养基检查及保存将硫乙醇酸盐液体培养基和改良马丁培养基分别放于35℃和25℃的培养箱内3天，无菌生长的可以用于检测。
培制好的培养基可室温保存2周，保存期间如发现硫乙醇酸盐培养基的含氧层超过1/3者，须加热驱氧，并冷却至45℃以下备用。
2.2接种待检品按1ml/管分别街终于硫乙醇酸盐液体培养基和改良马丁培养基中，并设置阴性、阳性对照。
（具体管号及温度设置见下表）连续培养不少于14天，每天记录结果。
3质检标准：3.1无杂菌生长判为合格。
3.2无菌试验发现杂菌生长，可复试。
复试样品量应加倍，无杂菌生长判为合格。
若复试仍有杂菌生长，则该样品无菌试验判为不合格。
附录六：支原体检查方法1 PCR方法1.1材料：1.1.1样品：1.1.2对照品：含支原体的培养上清1.1.3试剂：TaKaRa Ex Taq TM PCR扩增试剂盒（TaKaRa）分子量标记：DL-2000（TaKaRa, Code No. D501 CA）引物（TaKaRa公司合成）：F1：5’-ACACCATGGGAG(C/T)TGGTAAT-3’First Stage R1：5’-CTTC(A/T)TCGACT(C/T)CAGACCCAAGGCAT-3M78：5’-AAAGTGGGCAATACCCAACGC-3’M89：5’-TCACGCTTAGATGCTTTCAGCG-3’F2：5’-GTG(C/G)GG(A/C)TGGATCACCTCCT-3’Second stage R2：5’-GCATCCACCA(A/T)A(A/T)AC(C/T)CTT-3’R34： 5’-CCACTGTGTGCCCTTTGTTCCT-3’1.1.4仪器与器材：EBA 12型高速离心机（Ttettich Zentrifugen）Y6型恒温水浴锅（Grant）Personal Cycler PCR仪（Biometra）Power PAC 3000型电泳仪（BIO-RAD）DYY-Ш33B型电泳槽（北京六一仪器厂）Fluor-S TM MultiImager凝胶成像系统（BIO-RAD）微量移液器：20μl（金花），5-40μl（Labsystems）1.2方法与步骤：1.2.1样品处理：取20μl培养上清液，置于沸水浴中煮沸5分钟，取5μl用于检测。
培养基配制SOP
培养基配制SOP1.目的确保各种培养基及稀释液配制过程标准、规范。
2.范围2.1.本SOP适用于pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的配制，pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液可作为供试品稀释液。
2.2.本SOP适用于营养肉汤培养基的配制，营养肉汤培养基用于一般细菌培养。
2.3.本SOP适用于改良马丁培养基的配制，改良马丁培养基用于生物制品无菌试验，检查真菌和腐生菌。
2.4.本SOP适用于改良马丁琼脂培养基的配制，改良马丁琼脂培养基用于生物制品无菌试验，检查真菌和腐生菌。
2.5.本SOP适用于硫乙醇酸盐流体培养基的配制，硫乙醇酸盐流体培养基用于药品及生物制品等的无菌试验，检查需氧菌和厌氧菌。
2.6.本SOP适用于玫瑰红钠琼脂培养基的配制，玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌总数测定。
2.7.本SOP适用于营养琼脂培养基的配制，营养琼脂培养基用于一般细菌培养。
2.8.本SOP适用于胰酪胨大豆肉汤培养基的配制，胰酪胨大豆肉汤培养基用于真菌、需氧菌无菌检查。
2.9.本SOP适用于0.1％蛋白胨水溶液配制，0.1％蛋白胨水溶液可作为供试品稀释液。
2.10.本SOP适用于胰酪胨大豆琼脂培养基的配制，用于一般细菌分离培养。
2.11.本SOP适用于品红亚硫酸钠琼脂培养基的配制，用于饮用水、水源水中总大肠菌群的选择性分离和鉴别。
2.12.本SOP适用于酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基的配制，用于含蜜浆剂酵母菌数测定。
3.定义无4.职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行；4.2.QA、QC组长质量管理部经理负责本规程的审核；4.3.质量总监负责批准本规程；4.4.QA负责本规程执行的监督。
5.引用标准厂家说明书6.材料6.1.pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液（干粉），营养肉汤培养基（干粉），改良马丁培养基（干粉），改良马丁琼脂培养基（干粉），硫乙醇酸盐流体培养基（干粉），玫瑰红钠琼脂培养基（干粉），营养琼脂培养基（干粉），胰酪胨大豆肉汤培养基（干粉），蛋白胨（干粉），胰酪胨大豆琼脂培养基（干粉），酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（干粉），品红亚硫酸钠琼脂（干粉）。
YYT 752021 硫乙醇酸盐流体培养基
YY-T 0575-2021 硫乙醇酸盐流体培养基1、ICS11.700C44yy中华人民共和国医药行业标准YY/T0575-2021硫乙醇酸盐流体培育基Fluidthioglycollatemedium2021-12-07发布2021-12-01实施国家食品药品监督管理局发布nYY/T0575-2021前言本标准全部技术条款为强制性。
本标准是在参考《中华人民共和国药典》(2021年版)基础上，结合中国国情及实际状况和要求而制定。
本标准附录A为规范性附录。
本标准由国家食品药品监督管理局提出。
本标准由中国药品生物制品检定所归口。
本标准由中国药品生物制品检定所负责起草。
本标准主要起草人:高尚先、孙彬裕、曲守方、康国华、刘艳。
nYY/T0575-2021硫乙醇酸盐流体培育基范围本标准规定了硫乙醇酸盐流体培育基的质量要求、检验方法2、、使用说明、标志、标签以及包装、运输、贮存。
本标准适用于需氧菌、厌氧菌培育的硫乙醇酸盐流体培育基。
2规范性引用文件以下文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后全部的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓舞依据本标准达成协议的各方讨论是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T191包装储运图示标志中华人民共和国药典(2021年版)IIF1070-200。
定量包装商品净含量计量检验规则术语和定义以下术语和定义适用于本标准。
3.1培育荃culturemedium由人工方法协作而成的，专供微生物培育、分别、鉴别、讨论和保存使用的混合养分物制品。
3.2菌落形成单位colonyform3、ingunit,cfu菌落形成单位是指在活菌培育计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培育基上生长繁殖所形成的集落，以其表达活菌的数量培育墓配方单位为:g/L,胰酪蛋白陈15.0g酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g抓化钠与5gL-胧氨酸(或半胧氨酸盐酸盐)0.5g硫乙醇酸钠0.5g琼脂0.65g^-0.75g刃天青(Resazurin)0.001g质t要求5.1理化要求5.1.1外观应为均一的类白色至浅黄色粉末。
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江门大诚医疗器械有限公司
标准操作规程文件编号版本号
标题：液体硫乙醇酸盐培养基配制使用操作规程页码1/1
目的：建立液体硫乙醇酸盐培养基配制使用操作规程。
范围：本操作规程适用于液体硫乙醇酸盐培养基的配制使用。
职责：质检室质检员负责本操作规程的执行，质保室质监员负责本操作规程的监督检查。
内容：：
1．仪器与试剂：
1.1 JY2002电子天平、85_2数显恒温磁力搅拌器、LDZX-50FA立式压力蒸汽灭菌器、电冰箱、250ml三角瓶、500ml量筒、线绳、试管、棉塞。
1.2. 纯化水、液体硫乙醇酸盐培养基、75%酒精。
2.操作方法
2.1. 使用JY2002电子天平称取液体硫乙醇酸盐培养基7.25克，于250ml三角瓶内，加入250ml新沸的冷却水，溶解后，将培养基分装入试管中，塞好棉塞，包好牛皮纸扎紧试管口。
2.2. 置LDZX-50FA立式压力蒸汽灭菌器内，于115℃高压灭菌30分钟，灭菌后，可直接加样或取出放置至室温后，放入冰箱，备用（冰箱温度控制在1－4℃）。
2.3. 使用前培养基氧化层（粉红色层）的高度不得超过培养基深度的1/5，否刚需经100℃水浴加热到粉红色消失（不超过20分钟）迅速冷却，只限加热一次，再使用。
2.4. 使用时，用75%乙醇擦瓶子外围，打开包扎的牛皮纸和棉塞，加入样品，完毕后，立即包好试管口，用线绳扎好，放入三菱瓦斯厌氧培养盒，再放入培养箱中培养。
3.注意事项
3.1.要用新沸放冷的水配，记得沸的时间长一点。
3.2.分装的时候要边搅拌边分装。
3.3.灭菌好后使用前发现红色层过多（超过整个层高的1/5)，可在沸水浴中加热一次（仅一次，时间不得过20分钟）。
4.参考文件：85_2数显恒温磁力搅拌器操作规程
LDZX-50FA立式压力蒸汽灭菌器操作规程
JY2002电子天平校准规程
303-0B电热恒温培养箱操作规程。