巨噬细胞条件培养基对人视网膜色素上皮细胞活性和增殖的影响_郭丽花
巨噬细胞胞葬作用及表型转化与慢性皮肤溃疡-北京中医研究所
慢性皮肤溃疡巨噬细胞表型转化与胞葬功能障碍的研究进展林燕何秀娟赵京霞薛妍蒙玉娇李萍*慢性皮肤溃疡是糖尿病、周围血管病、微生物感染、放疗等常见的并发症，是外科领域颇为棘手的难题。
虽然原发疾病是引起慢性皮肤溃疡的重要原因，但是创面局部微环境的异常也是影响创面难以修复的关键因素。
巨噬细胞被认为是创伤愈合和组织修复过程的“总指挥”，对整个愈合过程具有不可替代的调控作用[1]。
慢性皮肤溃疡以局部持续存在的炎症反应为主要特征，巨噬细胞作为炎症主要效应细胞，其功能和状态决定了炎症反应的强度和时间。
其中巨噬细胞胞葬功能及表型转化障碍在慢性皮肤溃疡炎症持续状态中的作用越来越受到重视[2]。
1 胞葬作用胞葬作用（Efferocytosis，来自拉丁语efferre）是吞噬细胞将程序性死亡的凋亡细胞移除的过程，这一过程可以理解为埋葬凋亡的细胞，因而称“胞葬”[2]。
它不仅由专职吞噬细胞：巨噬细胞和树突细胞完成，而且体内许多非专职细胞完成如上皮细胞、内皮细胞和纤维细胞也具有摄入凋亡细胞的能力。
在胞葬过程中，吞噬细胞会将凋亡细胞吞噬，并形成一个体积较大的包含有死亡细胞液泡。
这个泡被称作“胞葬体”，与吞噬体类似。
巨噬细胞胞葬作用在生物学进化过程中高度保守，识别及清除凋亡细胞主要涉及以下几个步骤：①“find-me”阶段。
早期凋亡细胞表面“do not eat me”信号（例如，CD31和CD47）消失，并且释放“eat me” 信号(例如, PS and ACAMPs) 与巨噬细胞受体P2Y2/CX3CR/G2A 等结合，诱导巨噬细胞至凋亡细胞附近，引发凋亡细胞被吞噬细胞识别[3,4]。
②“eat-me”阶段。
凋亡细胞通过“eat-me”信号分子与巨噬细胞的吞噬受体识别并结合，这些受体包括在PS受体（TIM4、stabilin-2和BAI1）、MERTK受体、SCARF1受体、CD36受体通过桥接分子（例如，TSP-1、 C1q、 Gas6、 MFG-E8和蛋白S）与整合素αVβ5结合来识别凋亡细胞。
【高中生物】巨噬细胞可激活皮肤干细胞 为头发再生找到新方法
【高中生物】巨噬细胞可激活皮肤干细胞为头发再生找到新方法【高中生物】巨噬细胞可激活皮肤干细胞为头发再生找到新方法许多中年男性都患有脱发，但一项新的研究能否解决这个问题？西班牙国家癌症研究中心（National Cancer Research Center）的科学家最近在《公共科学图书馆·生物学》（PLoS Biology）杂志上撰文称，他们首次发现巨噬细胞也负责激活皮肤中的再生干细胞并诱导毛发生长。
最新的研究可能会帮助科学家找到治疗脱发和脱发的新方法。
巨噬细胞是来自免疫系统的细胞，负责吞噬入侵的病原体。
在人的一生中，干细胞的再生能力可对皮肤进行补充，但不同的因素可能会减少它们的再生性，或促进它们的失控生长。
当这个过程出错时，就会导致衰老和疾病，包括皮肤癌。
因此，巨噬细胞可激活皮肤干细胞这一发现除了能为脱发开发新疗法外，或许还与组织再生、抗衰老和癌症研究有关。
BNVA基金会癌症细胞生物学项目的研究和上皮细胞生物学研究小组的负责人米纳？Piriz Moreno告诉《每日电讯报》：“过去，我们都认为巨噬细胞的主要作用是对抗感染和修复伤口，但我们没想到它们还能激活非炎症皮肤中毛囊干细胞的生长。
这是一个惊喜。
”米娜在进行另一个研究项目时，偶然获得了这一发现。
在研究过程中，当米娜让实验鼠服用抗炎症的药物时，她发现这些老鼠重新长出了毛发。
米娜认为，干细胞和免疫细胞之间的关联或许有助于解释这一现象，于是，她们开始测试与身体防御系统有关的不同类型细胞在头发生长过程中的作用。
经过调查，他们发现，当皮肤细胞处于休眠状态时，一些巨噬细胞会由于一种叫做凋亡的过程而死亡，但令人惊讶的是，这将从死亡和存活的巨噬细胞中分泌一些因子，从而刺激干细胞，头发开始再次生长。
巨噬细胞分泌的因子中，有一种被称为“wnt”的蛋白质，研究人员用一种wnt抑制剂来处理巨噬细胞，结果发现，头发生长的激活作用会被延迟，这就证明了来自于巨噬细胞的wnts参与了头发生长的激活过程。
(完整word版)巨噬细胞的原代培养(word文档良心出品)
1 原理巨噬细胞属天然免疫细胞，具有趋化运动、吞噬、分泌和参与免疫调节等功能，是科学工作者研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。
巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。
巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2－3周多用做原代培养，不易长期生存。
巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如P331、S774A.1、RAW309Cr.l等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。
目前，单核巨噬细胞株也有，比如RAW264.7，但价格比较贵，且保存也不方便。
培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，目前以小鼠腹腔取材法最为实用，而目前获取小鼠巨噬细胞的方法有两种，一种是直接用培养液灌洗实验动物腹腔，从腹腔灌洗液中分离巨噬细胞，还有一种方法向动物腹腔中注射刺激物（如牛血清，淀粉，糖原，脂多糖，矿物油，PRMI1640培养液等），这样使机体产生大量巨噬细胞后再腹腔灌洗，但由于许多刺激物能激活巨噬细胞，而被激活的巨噬细胞大量吞噬刺激物，有此得到的巨噬细胞培养用于培养时，细胞中的刺激物不能很快被消化而残留在细胞中，影响细胞代谢，同时也不能很好的模拟体内环境，所以我们直接用培养液灌洗实验动物腹腔，从腹腔灌洗液中分离巨噬细胞。
我们选择6周龄的昆明小鼠是因为此年龄小鼠能产生最多的巨噬细胞。
2试验材料昆明种小鼠10只体重约18g～25g（约6周龄）由广西医科大学动物实验中心提供公鸡1只PRMI1640培养基新生小牛血清HEPESD-Hanks液青霉素链霉素3试验仪器无菌操作台手术刀解剖剪解剖镊止血钳5m注射器注射针，试管、培养瓶（12），12孔培养板(12)等。
二氧化碳培养箱生物显微镜高速冷冻离心机低温冰箱4实验步骤4．1细胞培养液的制备及消毒制备方法:将RPMI1640干粉一袋，HEPES4. 77g加入800m1三蒸水中，充分溶解后缓慢加入碳酸氢钠并逐步添加三蒸水，使溶液的pH值处于7. 2-7. 4之间，容积为1000m1。
共培养系统中巨噬细胞对大鼠视网膜神经节细胞存活和轴突再生的影响
Ｃ ｒ ｓｏｄｎ ｕｈ ｒＨＵ ａ — ｉ ， ｍ ｉｆ ｕ ｙ ＠ ｍ ． ｕｃ ｏｒ ｐ ｎｉｇａ ｔ ： ＩＹ ｈ ｎａ Ｅ ａ ： ｅ ｏ ｎ ｌ ｍｍ ｈ ｎ ｆ ｍｕ ｄ．ｎ ｅ 【 ｓ ａｔ Ｏｂｅｔ ｅ Ｔ ｅ ｒ ｎ ｈ ｆ ｃ ｆｍ ｃｏｈｇ ｓｏ ｈ ｕ ｉ ｌａｄ ｘｎ ｌ Ａｂｔ ｃ】 ｒ ｊｃ ｖ ｏ ｄｔ ｍｉ ｔｅ ｅ ｅｔ ｏ ａｒ ａｅ ｎ ｔｅ ｓｒ ｖ ｎ ａｏ ａ ｉ ｅ ｅ ｆ ｓ ｐ ｖ ａ
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巨噬细胞ppt课件
II型活化
• 与经典活化一样，II型活化也需两个信号。 第一个是FcyRs的配体，FcyRs受体与配 体的结合必须与细胞因子产生的刺激信 号相偶联，这些刺激信号即使巨噬细胞II 型活化所需的第二信号。
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三、巨噬细胞的生物学功能
巨噬细胞参与非特异性免疫和特异性免疫。在非特异性免疫中，主 要通过吞噬作用杀灭和清除病原体和异物，并介导炎症反应；在特 异性免疫中，主要发挥免疫调节及抗原递呈功能。 1、吞噬和杀伤作用 2、介导炎症反映 3、免疫调节功能 4、加工和递呈抗原
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（1）、巨噬细胞吞噬溶酶体的低PH和低营养 状态不利于病原体的生长。 （2）、巨噬细胞产生毒性物质。 （3）、巨噬细胞可产生微生物静态效应分子， 抑制巨噬细胞内病原体的复制，但另一方面这 种作用可以导致病原体潜伏性（隐性）感染。
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（二） 巨噬细胞清除凋亡细胞 的作用
• 巨噬细胞通过PRR识别凋亡细胞ACAMP， 从而发挥清除凋亡细胞的作用，巨噬细 胞清除凋亡细胞的机制不同与清除病原 体，基本属于较为温和静息的过程，没 有炎症反应伴随发生。
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（3）其他：CD14通过血清中LBP与细菌 LPS结合，白细胞整合素CD11b/CD18（亦 称CR3或Mac-1）能识别许多病原体组分。
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六、巨噬细胞在先天免疫中的作用
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（一）巨噬细胞对病原体的天然防 御作用
1、巨噬细胞吞噬清除病原体的过程 2、巨噬细胞抑制吞入胞内的病原体复制的机制 3、巨噬细胞的细胞毒活性。
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五、巨噬细胞的表面受体
病原体突破上皮屏障进入宿主体组 织后，首遇的天然免疫细胞因素是 巨噬细胞，巨噬细胞除有Fc和补体 受体外，尚有多种能直接与 某些病
survivin对血小板源生长因子刺激的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响及机制
23Chen JS ，Huang XH ，Wang Q ，et al ．FAK is involved in invasion and metastasis of hepatocellular carcinoma 〔J 〕．Clin Exp Metastasis ，2010；27（2）：71-82.24Ｒidley AJ ，Schwartz MA ，Burridge K ，et al ．Cell migration ：integrating signals from front to back 〔J 〕．Science ，2003；302（5651）：1704-9.25Lev S ，Moreno H ，Martinez Ｒ，et al ．Protein tyrosine kinase PYK2in-volved in Ca （2+）-induced regulation of ion channel and MAP ki-nase functions〔J 〕．Nature ，1995；376（6543）：737-45.〔2018-08-06修回〕（编辑王一涵）survivin 对血小板源生长因子刺激的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响及机制孟岩刘宏伟孙鹏（佳木斯大学附属第一医院眼科，黑龙江佳木斯154002）〔摘要〕目的研究survivin 对血小板源生长因子（PDGF ）刺激的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响。
方法用PDGF 处理人视网膜色素上皮细胞hＲPE ，以qＲT-PCＲ和Western 印迹方法检测细胞内survivin 的表达水平。
在hＲPE 细胞中转染survivin siＲNA 和siＲNA control ，给予PDGF 处理，qＲT-PCＲ和Western 印迹方法检测细胞内survivin 的表达水平。
以噻唑蓝（MTT ）方法测定hＲPE 细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，Western 印迹检测细胞中剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水平解酶（Cleaved Caspase-3）蛋白水平，JC-1法检测线粒体膜电位，Western 印迹方法检测胞质中细胞色素（Cyt ）C 蛋白水平。
巨噬细胞对新生隐球菌活力和基因表达的影响
第三部分：巨噬细胞吞噬后，新生隐球菌的细胞增殖和周期变化与ＡＤＫｌ、 ＣＹＲｌ表达上调有关：出芽率的下降与ＩＳＣｌ０表达下调有关：细胞的活力下降则
ｍｉｅｒｏａｒｒａｙ，ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ
博士论文
摘要
巨噬细胞对新生隐球菌活力和基因表达的影响
摘要
研究背景： 新生隐球菌是临床上重要的致病真菌，它可引起致命的系统性感染，目前对 其致病机理还不很清楚，且尚无非常有效的治疗方法。现研究表明巨噬细胞是抗 新生隐球菌第一线反应细胞，对新生隐球菌有吞噬、杀菌、抗原提呈等作用，而 新生隐球菌本身存在着很强的毒性因子，起到逃避宿主免疫的作用，因而能在巨 噬细胞内寄生。但新生隐球菌逃避宿主免疫反应的机制是复杂的，研究人员仍在 努力探索新生隐球菌潜在的可能毒性因子，以期对新生隐球菌的致病机制和临床 上治疗新生隐球菌病有个重大突破。本课题共分四部分来研究新生隐球菌在被巨 噬细胞吞噬前后的存活力及基因表达差异，探讨新生隐球菌被巨噬细胞吞噬后的 出芽繁殖能力、凋亡率和细胞周期的变化、基因表达差异，这将有助于探讨巨噬 细胞对新生隐球菌的吞噬、杀菌作用机制，以及新生隐球菌逃避宿主免疫的可能 机制，寻找潜在的可能毒性基因，了解新生隐球菌的致病机制。 研究目的： 第一部分：分析巨噬细胞Ｊ７７４．１６对新生隐球菌野生株Ｂ３５０１、荚膜突变株 Ｃａｐ６０及白化株Ｍｅｌ一的存活力和出芽繁殖能力的影响。 第二部分：分析巨噬细胞Ｊ７７４．１６对新生隐球菌野生株Ｂ３５０１、荚膜突变株 Ｃａｐ６０及白化株Ｍｅｌ一的凋亡和细胞周期的影响。 第三部分：研究巨噬细胞对新生隐球菌野生株Ｂ３５０１的基因表达影响。 第四部分：研究巨噬细胞对新生隐球菌野生株Ｂ３５０１的主要毒性基因表达影
巨噬细胞 花环实验报告
巨噬细胞花环实验报告引言巨噬细胞是一类重要的免疫细胞，在机体的免疫防御中具有重要的作用。
为了更好地了解巨噬细胞的功能和特性，我们进行了巨噬细胞的花环实验，以观察和分析巨噬细胞的吞噬能力和活性。
本报告将详细介绍实验的步骤、结果和讨论。
实验方法材料准备- 巨噬细胞株- 无菌的培养基- 肉汤培养基- 贴壁培养皿- 细胞培养器、恒温箱等实验设备- 花环实验用的大肠杆菌实验步骤1. 将巨噬细胞株移植至含有肉汤培养基的细胞培养器中，依照标准的培养条件进行培养。
2. 培养巨噬细胞至较为密集和健康的状态后，将细胞进行收集和处理。
3. 将处理后的巨噬细胞加入含有花环实验用大肠杆菌的培养基中，并用恒温箱保持适宜的温度和湿度。
4. 观察实验样本培养的情况，并记录下巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬能力和活性。
实验结果根据实验步骤进行操作，我们观察到了以下结果。
1. 在花环实验中，巨噬细胞对大肠杆菌表现出了较强的吞噬能力。
大部分大肠杆菌在接触到巨噬细胞后很快被吞噬进入细胞内，并在细胞质泡中进行降解。
2. 实验样本中的巨噬细胞表现出了活跃的运动能力。
它们不停地在培养基中移动，并寻找并吞噬附近的大肠杆菌。
3. 巨噬细胞对不同种类的大肠杆菌表现出了差异性的吞噬能力。
一些大肠杆菌株被吞噬的时间较短，而另一些则需要相对较长的时间才能被巨噬细胞完全吞噬。
实验讨论通过花环实验，我们成功观察到了巨噬细胞的吞噬能力和活性。
巨噬细胞作为机体的一种重要的免疫细胞，能够主动吞噬病原微生物和细胞残骸，从而起到清除感染和修复组织的作用。
在实验中，巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬能力存在差异。
这可能是由于巨噬细胞对不同种类的大肠杆菌具有不同的识别和结合机制，或者由于巨噬细胞的吞噬能力受到其他因素的调控。
这些差异需要进一步的研究来解析。
此外，在实验过程中，我们也观察到巨噬细胞具有活跃的运动能力。
这种运动能力可能是巨噬细胞寻找并吞噬病原微生物的重要策略之一。
进一步研究巨噬细胞的运动机制和调控因素，可有助于更好地理解巨噬细胞的功能和作用。
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博士研究生学历,副主任医师。
主要从事玻璃体、视网膜病变的诊治工作。
巨噬细胞条件培养基对人视网膜色素上皮细胞活性和增殖的影响郭丽花1姜德咏2邝国平2万 华2(1武警广东边防总队医院眼科,深圳518029;2中南大学湘雅二医院眼科,长沙410011)摘 要 目的 探讨激活的巨噬细胞和未激活的巨噬细胞对视网膜色素上皮(Retinal pigment epithelial,RPE)细胞活性和增殖的影响。
方法 制备脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)激活的和未激活的人腹腔巨噬细胞条件培养基(M U C M ),取3种不同的浓度,分别施加于纯化培养的胎眼RPE 细胞,作用24、48、72h,用MTT 比色法测定RPE 细胞的OD 值。
结果 LPS 激活的M U CM(L-M U CM)和未激活的M U C M(N-M U CM)取不同浓度作用不同时间后均能不同程度地促进RPE 细胞的活性和增殖,其中L-M U CM 的作用明显强于N-M U CM 。
结论 M U C M 中含有促RPE 细胞增殖的因子,可能L -M U C M 中的促增殖因子在质和量上优于N -M U CM 。
关键词 巨噬细胞活化 视网膜色素上皮细胞 增殖Effect of macrophages conditioned media on proliferation of human retinal pigment epithelial cells in vitroGUO Lihua,JIA NG Deyong,KUA NG Guoping,and WAN Hua.Departm ent of Ophthalm ology,Guangdong Provincial Frontier defence Corps Hospital,Chinese People .s Armed Police Forces,Shenzhen 518029,ChinaAbstract Objective To study the influence of macrophages on p roliferation of hu man retinal pi gment epithelial(hRPE)cells.Methods Lipopolysaccharide(LPS)-activated and non -activated human peritoneal macrophage conditioned media (M U C M)i n three different concentra -ti ons were administered to puri fied cul tured hRPE cells for 24,48and 72hours.The OD values of RPE cells were measured by MTT colorimet -ric assay.Results Both LPS-activated M U C M (L-M U C M)and non-activated M U C M (N -M U C M )obviously enhanced the OD values of RPE cells in each concentrati on and at each testing time.The effect of L-M U C M was higher than that of N -M U C M.C onclusion M U C M con -tains some factors which can promote the proliferation of the RPE cells in vitr o .The factors promoting RPE cell proli feration in L-M U C M may be superior in q uali ty and quantity to these in N-M U C M.Key words Macrophage activation Retinal pigment epithelial cells Proli feration细胞之间的相互作用广泛存在于人体许多生理病理过程中,如炎症、免疫、组织修复、肿瘤等,细胞间相互作用的研究,对阐明一些重要眼病的发病机制作出了重要贡献。
研究表明,巨噬细胞和视网膜色素上皮(Retinal pigment epithelial,RPE)细胞是增殖性玻璃体视网膜病变(Proliferative vitreoretinopa thy, PVR)中的重要细胞组成成分,巨噬细胞在炎症早期和伤口愈合过程中起重要的调控作用,能启动、促进眼内细胞增殖。
而RPE细胞是视网膜前细胞性膜形成中的主要效应细胞,其增殖常能导致牵拉性视网膜脱离,PVR形成。
因此,巨噬细胞对RPE细胞的影响可能在PVR的形成过程中起着决定性的作用。
已有研究发现,巨噬细胞可促RPE细胞增殖,移行[1],但由于未激活的巨噬细胞细胞器不发达,表面受体少,处于静息状,受炎症刺激后才逐步活化并集聚到炎症灶附近,释放活性物质发挥作用。
所以,研究激活状态下巨噬细胞对RPE细胞的影响,更接近于临床。
本研究对激活状态和未激活状态的巨噬细胞对RPE细胞的促增殖作用进行了对比观察,现报道如下。
1材料和方法1.1一般材料脂多糖(LPS)(Sigma公司产品),淋巴细胞分离液(上海恒信试剂公司产品),二甲基亚砜(D MSO)(Sigma),噻唑兰(MTT)(Sigma)用PBS配成5g/L的溶液,过滤除菌备用,鼠抗人CD68单克隆抗体(福建迈新),SABC检测试剂盒(武汉博士德),AEC染色试剂盒(福建迈新),Wallscar MK-2酶标仪。
1.2方法1.2.1视网膜色素上皮细胞的分离和培养选择胎龄16~28周健康水囊引产胎儿,2h内在无菌操作下摘除眼球。
在超净工作台上,于角膜缘后2m m 处环形剪除眼前节及玻璃体,剥离并去除视网膜神经上皮层,使保留视网膜色素上皮层的眼球成杯状。
用D-hank.s液轻洗眼杯3次,加入0.02%ED TA及0.1%胰蛋白酶等量混合于眼杯中,置于37e5% CO2培养箱中消化45~50min,加入含20%胎牛血清的DME M终止消化,用吸管轻轻吹打数次使视网膜色素上皮细胞从脉络膜脱离。