环介导等温扩增技术检测食源性致病菌的研究进展

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环介导等温扩增技术在食品安全检测领域的应用研究进展

环介导等温扩增技术在食品安全检测领域的应用研究进展范安妮;佘之蕴;张娟;周臣清;梁宇斌【摘要】环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年发展起来的一种新型核酸检测技术其采用特异识别靶序列上6个位点的4条引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在等温条件下进行核酸扩增,与传统核酸检测技术(PCR法、实时荧光定量PCR法)相比,具有操作简单、特异性强、灵敏度高、可肉眼判读结果等优点核酸检测是食品安全检测技术的一个重要手段,本文综述了LAMP技术在食品微生物检测、转基因成分检测、过敏原成分检测和动物源性成分检测领域的应用研究进展,探讨了LAMP技术在食品检测领域的发展前景,以期为食品快速、高通量检测技术建立提供参考%loop-mediated isothermal amplification(LAMP) is a novel nucleic acid amplification method developed in recent years.The nucleic acid amplification is performed ender isothermal conditions by a set of four specially designed primers and a DNA polymerase with strand displacement pared with the traditional nucleic acid detection technology (PCR and real-time fluorescence quantitative PCR),it has the advantages of easy operation,high specificity,sensitivity and visual interpretation.Nucleic acid detectiou is an important means of food safety detection.This review summarized the application research progresses mainly focused on food safety detection,including food microorganisms testing,genetically modified organisms testing,food allergens testing and food derived ingredients testing.In addition,the perspectives of LAMP in food detectiou were discussed for better and high volume testing in food safety detection.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)010【总页数】5页(P330-334)【关键词】环介导等温扩增技术(LAMP);食品安全;检测;核酸扩增【作者】范安妮;佘之蕴;张娟;周臣清;梁宇斌【作者单位】广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300;广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300;广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300;广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300;广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300【正文语种】中文【中图分类】TS207.3核酸扩增是分子生物学研究领域的一项重要技术,目前已广泛应用于医学诊断、食品检测、动植物检验检疫等行业中。

环介导等温扩增技术

总之,LAMP方法是一种特异性强、灵敏度高、方便快捷的检测方法,为金黄色葡萄球菌的检测提供了新的方法,具有很高的使用价值。
谢谢欣赏！
采自奶场的125份样品进行了检测。结果表明,LAMP检测出阳性样品81份, GB/T 4789.10- 2003检测出阳性样品84 份,LAMP阳性检出率为96.43%。
图5 金黄色葡萄球菌LAMP特异性的检测结果
M:DL2000 DNA Marker; 1:金黄色葡萄球菌ATCC25923;2:沙门氏菌 CGMCC 111552; 3:沙门氏菌ATCC13067;4:沙门氏菌HJ- 004; 5: ETEC: 44247 (6∶15∶16) ;6: EPEC: 44706 (111∶58∶- ) ; 7:荧光假单胞菌 CGMCC 111802;8:恶臭假单胞菌CGMCC111819; 9:铜绿假单胞菌 ATCC27853;
散法、免疫学方法、基因芯片法、基因探针法、测试片法、PCR 法等。
环介导恒温扩增技术( loop -mediated isothermal amp lification, LAMP)是Notomi等2000年发明的一种新颖的扩增技术,其特点是针对靶基因的6个区域设计4 种特异引物,在DNA聚合酶(B st DNA polymerase)的作用下,恒温条件下进行核酸扩增,具有操作简单、特异性强特点。另外通过环引物的添加,大大加快了反应的速度。国外报道,LAMP被广泛食品等病原菌的检测中, 如巴西芽生菌、锥虫病、沙门氏菌、虾中的白斑综合
测金黄色葡萄球菌特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为快速检测金黄色葡萄球菌的新方法。
简介：金黄色葡萄球菌( S taphy lococcus
aureus)是引起食物中毒的主要致病菌之一,也是引起奶牛患乳房炎的重要病原菌 ,在自然界中广泛存在,食品受污染的机会很多。近年来随着抗生素的大量使用,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

基于LAMP技术的微生物病原诊断研究进展

立的 LAMP 检测结果，在检出率以及检测时限上，后者更加具备优势［2］。在植物病毒的应用上，各大研究机构陆续建立 LAMP 检测。汤等通过建立辣椒黄脉病毒ＲT － LAMP［3］，证明其与ＲT － PCＲ相比，在使用成本、检出率上性能更优，操作简便，更适应基层检测需求，该点也被多家实验机构所证实。在细菌的检测方面，LAMP 技术在副溶血弧菌［4］，大肠埃希菌，猪链球菌等多类菌种的检测应用上体现较好的发展潜力，具备较高的研究价值。LAMP 技术在检测时间，人力耗费以及相关准确度上，与 PCＲ，ＲT － PCＲ相比表现出较好的效果，对多菌种的三重 LAMP 技术构建实验，有结果显示检出率可高达 PCＲ检测的 1 000 倍。在虫媒螺旋体等地区病原大面积普查上，LAMP 技术操作简单，却有着重要的指示价值。
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Industrial & Science Tribune 2018 （17） 1
产业与科技论坛 2018 年第 17 卷第 1 期
基于因子分析的河北省公共服务均等化水平评价研究
一、引言临床常见微生物病原主要为细菌，病毒和寄生虫三大类。鉴于社会发展过程中，各类病原变异株的出现，现代医学诊治技术已将诊疗目标延伸至分子诊疗层次。传统检测技术多见 ELISA、PCＲ、ＲT － PCＲ。在实际的临床应用中，上述三项技术表现出较多弊端： ELISA 的使用需基于单克隆抗体，灵敏度较低，诊断误差较大； PCＲ法，易因交叉感染而造成假阳性，影响诊疗效果；误差较小，灵敏度较为准确的ＲT － PCＲ则因为其较高的使用成本，难以适用于基层检测。相较三者，LAMP 技术具有干扰性强，具有较高特异性，且突破了传统技术在仪器昂贵等成本上的限制，适用于野外采样等快速检测，其应用普及在疫病防控，病原检测研究等方面具有重要意义。二、技术简介 LAMP，全名为环介导等温扩增技术，是一项基于核酸扩增原理的分子技术。目前除了原有 LAMP 技术，还有双重 LAMP，三重 LAMP，ＲT － LAMP 等应用，现易广泛应用于生命科学的 DNA 与ＲNA 领域。传统检测技术多见 ELISA、PCＲ和ＲT － PCＲ，但在实际的临床应用中，传统三项技术表现出诸多弊端： ELISA 的使用需基于单克隆抗体，灵敏度较低，诊断误差较大； PCＲ法，易因交叉感染而造成假阳性，影响诊疗效果；误差较小，灵敏度较为准确的ＲT － PCＲ则因为其较高的使用成本，难以适用于基层检测。相较三者，LAMP 技术具有干扰性强，具有较高特异性，且突破了传统技术在仪器昂贵成本上的限制，适用于野外采样等快速检测，其应用普及在疫病防控，病原检测研究等方面具有重要意义。三、LAMP 技术在病毒，细菌检测中的应用国内赵等应用 LAMP 技术，建立了肠道腺病毒的肉眼可视化检测［1］，广西大学梁等比对家蚕 BmNPV 常规 PCＲ与建

等温扩增技术的原理及其在病原检测中的应用

动物医学进展。２０１７，３８（８）：１０３－１０９
ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ
等温扩增技术的原理及其在病原检测中的应用
高瑶。，孟星宇，罗玉子，胡永浩，仇华吉¨
（１．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨１５００６９；２．甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州７３００７０）
摘要：等温扩增技术（ＩＡＴ）作为一种新型的体外核酸扩增技术，与ＰＣＲ相比，该技术具有特异性强、敏感性高、简单便捷和成本低等优点。目前，等温扩增技术在病原检测方面得以应用，论文对环介导等温扩增（ＬＡＭＰ）、依赖解旋酶的等温扩增（ＨＤＡ）、依赖核酸序列的等温扩增（ＮＡＳＢＡ）、链置换等温扩增（ＳＤＡ）、交叉引物扩增（ｃＰＡ）５种扩增技术的原理、特点及应用分别予以介绍，为该技术在病原检测的实际应用提供参考。关键词：等温扩增技术；原理；病原检测
ｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ，ＳＤＡ）和交叉引物扩增（ｃｒｏｓｓ — ｐｒｉｍｉｎｇ
优点：该方法在等温条件下进行，不需要循环仪等昂贵的仪器；扩增反应快，一般在１ｈ内完成；扩

用环介导等温扩增方法检测牛奶中致病微生物

5. 仪器与设备：生化培养箱，购自上海新苗医疗器械制造有限公司。拍击式均质器，西班牙 IUL 公司。灭菌器，山东省新华医疗器械股份有限公司。
（二）方法 1. 准确度试验。取牛奶样品 20 份，随机加入培养的沙门氏菌悬液 4～6 份，混匀后取样，增菌后用沙门氏菌核酸 LAMP 检测试剂盒进行检测，同时采用 GB 4789.4－2010 《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》 [7]进行检测。比较检测试剂盒和国家标准方法的结果。沙门氏菌核酸 LAMP 检测试剂盒检测方法：样本前处理、增菌按照国家标准方法进行。取增菌液 200 μL 加到 1.5 mL 无菌离心管中， 14 000 r/min 离心 2min，弃上清液。加入 80 μL DNA 提取液，重悬菌体， 95℃孵育 10 min； 14 000 r/min 离心 2 min，中层透明液体即为核酸模板。加 22.5 μL 复溶液到冻干 LAMP 反应体系中，加 30 μL 石蜡油，加入 2.5 μL 模板到上述反应体系中， 65℃恒温反应 60 min。反应管颠倒约停留 5s，使反应液与显色液（显色液在盖中）充分混合，观察结果。反应管绿色为阳性，橙色为阴性。副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌 O157、志贺氏菌、单增李斯特菌的检测分别采用对应的核酸 LAMP 检测试剂盒和国家标准， [8～12] 其他试验方法同上。 2. 重复性试验。取同一污染的牛奶，分别用 3 个批次试剂盒重复检测 5 次，记录检测结果。 3. 灵敏度试验。将培养的沙门氏菌进行 10 倍梯度稀释成 5 个浓度，加到经过检测的沙门氏菌阴性的牛奶中，混匀取样增菌。用沙门氏菌核酸LAMP 检测试剂盒进行检测，同时采用 GB 4789.4－2010 《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》进行检测。比较检测试剂盒和国家标准方法

环介导等温扩增技术

简单，快速，准确的基因扩增法
四、问题分析
1.随机采取鸽子翅或尾部羽髓样，用试剂盒提取DNA
01
2.在家鸽在W染色体上找到保守基因并以LAMP引物设计
02
软件设计引物
3.进行应用LAMP法扩增目的基因、不断优化dNTPs、
03
Mg2+、甜菜碱浓度，反应体系温度，反应结果由紫红色
变为天蓝色为雌性，否则为雄性
80℃水浴，5min，结束反应，加指示剂
LAMP反应体系
三、应用
1、LAMP在食品安全中的应用：
水产品和水体中灿烂弧菌现场可视化环介导等温扩增快检方法的建立及应用；环介导等温扩增技术快速检测植物蛋白饮料中大豆成分等
2、LAMP在动植物疫病检测中的应用：
环介导等温扩增技术检测鼠疫感染动物敏感性的应用性研究；
感谢各位观看
Thank You
3、LAMP在人类疾病检测中的应用：
环介导等温扩增技术在新型冠状病毒检测中的应用研究进展；环介导等温扩增技术（LAMP）在肺结核诊断中的应用研究
四、问题分析
生产上的鸽子性别鉴定主要通过PCR 和翻肛鉴别，不太适用于养殖户
鉴别方法比较
LAMP法
PCR法
翻肛鉴别
温度时间产物量特异性检测
试剂
二、原理
设计四条引物，包括两条内引物和两条外引物，利用DNA链在 60-65℃的恒温条件下处于解链和退火的动态平衡状态，在DNA 聚合酶的驱动下结合靶序列启动DNA合成，反应中生成LAMP反应特有的焦磷酸镁白色沉淀，运用HNB指示剂显色反应。
二、流程
制作LAMP反应体系，12.5uL，如右图放入200uL PCR管中，离心混匀 64℃水浴，90min

LAMP方法在食源性副溶血性弧菌属检测的应用论文

LAMP方法在食源性副溶血性弧菌属检测的应用【摘要】目的：探讨副溶血性弧菌属（vibrio parahaemo lyticus， vp）环介导等温扩增（lamp）在食源性食物检测中的应用价值。

方法：利用文献报道的lamp检测方法和分离培养法分别对12类286份食源性食品标本进行副溶血性弧菌检测；检测结果经统计学分析来评价lamp法和分离培养法的差异性。

结果：lamp 法从64份动物性水产标本中检出44份副溶血性弧菌阳性菌株，阳性率为68.75%，电泳和加荧光染料染色后均能判断结果；国标法从64份动物性水产标本中检出33份副溶血性弧菌阳性菌株，阳性率为51.6%。

两种方法的检测结果经统计学分析，p<0.005，结果有显著性差异，lamp法阳性率高于培养法。

lamp法可在24小时内从食品中检测出副溶血性弧菌，而国标法检出副溶血性弧菌需要4-7天，lamp法更快速。

结论：副溶血性弧菌属lamp法检测阳性率高于国标法，lamp法可用于食源性食物副溶血性弧菌属的快速检测。

【关键词】环介导等温扩增；副溶血性弧菌属；食源性；检测【中图分类号】r155 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2012）13-0555-02随着生活水平的不断提高，食源性食物的安全越来越受到全社会和政府各级部门的高度重视与关注，而与食源性食物安全相关的微生物检测已成为食品保障的重要措施之一[1]。

用lamp法可以快速、简便、准确的检测出食源性食物中致病性微生物，大大缩短检测时间，提高致病性微生物的检出率，为致病性微生物的分离培养提供指导方向和科学依据。

副溶血性弧菌是引起人类急性胃肠炎和食物中毒的一种重要的食源性致病菌，在海水产品中其感染水平可达80%[2]，在细菌性食物中毒中，由副溶血性弧菌引起的居首位[3]。

传统的副溶血性弧菌国标法[4]检测时间长，检出率低，不宜快速出结果。

环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，lamp）技术[7]是一种新型等温核酸扩增方法，针对靶基因设计4-6条引物，利用一种具有链置换活性的bst dna聚合酶，在恒温条件（60-65 ℃）保温约 60 分钟，即可完成核酸扩增反应，产物为针对靶基因扩增产生的各种大小的茎环状dna混合物，副产物为肉眼可见的白色焦磷酸镁沉淀。

环介导等温核酸扩增技术快速检测食源性致病菌应用进展

作者简介：李秀桂（１９６５一），男，广西贵港市人，副主任技师，主要从事食品卫生微生物检验与研究工作。
１／２—１／３。直接靠扩增副产物焦磷酸镁沉淀的浊度进行判断是否发生反应。ＬＡＭＰ技术具有高特异性、高效率和便捷等特点１４１。１．２引物设计ＬＡＭＰ引物的设计比常规ＰＣＲ要复杂。一个反应至少包括４条引物，包括一对内引物（ＦＩＰ和ＢＩＰ）和一对外引物（Ｆ３和Ｂ３）；外部引物限定了扩增片段的大小范围，同时也为内部引物提供了模板，如果再增加一对环引物（１００ｐｐｒｉｍｅｒ），会明显加快等温扩增的速度，大大提高检测效率，检测率比没有加环引物的高７个数量级１５，６１。国外已建立
６１
要的食源性致病菌，感染导致肠炎疾病，发病率呈逐年上升趋势。副溶血性弧菌致病因子是其携带的ｔｄｈ和ｔｄｌ编码毒力基因，采用常规检测方法无法解决风险监测和评估。徐芊等“７首次报道了利用ＬＡＭＰ技术检测副溶血性弧菌，针对副溶血性弧菌不耐热溶血素基因（ｔｌＩＩ）设计４条特异引物进行ＬＡＭＰ扩增，对扩增反应进行优化，最佳反应时间为６０ｍｉｎ，反应温度为６０℃，特异性为１００％，且副溶血性弧菌基因组ＤＮＡ和纯培养物的检测灵敏度分别为９０ｆｇ和２４ｃｆｕ／ｍＬ，对模拟样品检测，检测限为８９ｃｆｕ／ｇ，整个过程ｌ小时能完成检测。２．５阪崎肠杆菌检测２００２年国际食品微生物标准化委员会（ＩＣＭＳＦ）把阪崎肠杆菌列为“严重危害特定人群，危害生命或慢性实质性后遗症或长期影响”致病菌［１８１，该菌能引起严重的新生儿脑膜炎、菌血症和坏死性小肠结肠炎，并可能遗留严重的神经系统后遗症，死亡率２０％一５０％Ｉｔ９Ｊｏ贺楠等∞参照阪崎肠杆菌标准株（ＡＴＣＣ５１３２９）１６ＳｒＲＮＡ基因设计４条特异性引物。方法最低检测限可达到０．３ｐｇＤＮＡ，当稀释度１０５时才检测不到扩增产物，而ＰＣＲ方法稀释度１０２时就检测不到扩增物。而胡莲霞ｍ１则以１６Ｓ。２３ＳｒＲＮＡ间区序列作为靶序列，采用带有２条环引物（ＬＦ和ＬＢ）的改良ＬＡＭＰ方法检测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌，灵敏度为０．１０１ｃｆｕ／ｍＬ，人工污染阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉的检出限为１．１ｅｆｕ／ｇ，而对照ＰＣＲ方法检测阪崎肠杆菌的灵敏度为１０１ｃｆｕ／ｍＬ，人工污染阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉的检出限为１１００ｃｆｕ／ｇ，改良ＬＡＭＰ方法比较ＰＣＲ方法，其灵敏度提高了ｌ０００倍，检测耗时仅为ｌ～３ｈ。２．６金黄色葡萄球菌检测金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，导致感染性疾病是其产生的肠毒素造成的，且耐药性金黄色葡萄球越来越广泛。申建维等勉荆用多重ＬＡＭＰ法同时扩增金黄色葡萄球菌耐药基因ｍｅｃＡ和ｆｅｍＡ，在反应过程中，两种分子信标荧光探针分别与ｍｅｃＡ和ｆｅｍＡ基因的扩增产物序列互补结合，最后检测反应管中的两种荧光值。结果显示该方法的检测下限为１０ｃｆｕ／ｍＬ，与传统的Ｍ２Ｈ培养基苯唑西林药敏实验结果比较，灵敏度为９９．９％，特异度为９０．９％。适用于直接快速检测临床标本中的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。２．７单核细胞增生李斯特氏菌单核细胞增生李斯特氏菌是一种能够引起人畜共患疾病的食源性致病菌，ＷＨＯ已将其列为２０世纪９０年代食品中四大

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ｇｅｎｗｉｔｈｈｉｇｈｅｉｃｆｉｅｎｃｙ，ｓｔｒｏｎｇｓｐｅｃｉｉｃｆｉｔｙａｎｄｓｉｍｐｌｅｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｐｒｉｎｃｉｐｌｅ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ａｐｐｌｉｃａ — ｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｓｐｅｃｔｗｅｒｅｒｅｖｉｅｗｅｄｉｎｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅ．Ｉｔｐｒｏｖｉｄｅｄａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｆｕｔｈｒｅｒｒｅｓｅａｒｃｈ．
．．．肉品安全与检测．．．
由凌≯ 业
ＭＥＡＴ１ＮＤＵＳＴＲＹ
２０１４年第５期总第３９７期
环介导等温扩增技术检测食源性致病菌的研究进展
彭乃才中山市技师学院食品化工系广东中山５２８４０３徐明悦
１环介导等温扩增技术
测。对ＬＡＭＰ的原理、特点、应用及展望进行综述，为后续研究提供理论依据。 ຫໍສະໝຸດ 关键词环介导等温扩增技术
食源性致病菌检测
Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｄｅｔｅｃｔｉｎｇｆｏｏｄ— —ｂｏｒｎｅｐａｔｈｏｇｅｎｂｙＬＡＭＰｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
数逐年递增；世界范围内７０％的食源性疾病是致病
菌引起的。
张静通过对四省鸡肉样品的检测，发现金黄
色葡萄球菌的检出率高达２０．２８％；陶晓亚等研究
发现，陕西省关中地区的猪肉样品中金黄色葡萄球
等五大类。本文详细介绍分子生物学检测技术中的环介导等温扩增技术在食源性致病菌检测中的研
斯特菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌等致病菌主要污染肉制品，在世界范围内广泛分布。卫生部统计数据
显示 ¨ Ｊ，在我国由食源性致病菌导致的食物中毒人
究进展、存在不足，为后续研究提供理论支持。
菌的检出率为３３．３３％；郝宏珊研究了中国八个省
鸡肉样品，沙门氏菌的平均污染率高达５２．３％；游勇来等通过对某一进出口动物源食品为期６个月的
Ｋｅｙｗｏｒｄｓｌｏｏｐ — ｍｅｄｉａｔｅｄｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｍｐｌｉｉｃｆａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｙ；ｆｇｏｏｄ—ｂｏｒｎｅｐａｔｈｏｇｅｎ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ｃｌｅｉｃａｃｉｄａｍｐｌｉｉｃｆａｔｉｏｎａｆｔｅｒＰＣＲｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｗｈｉｃｈｃａｎａｍｐｌｙｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｔｏ１０９ｌｅｖｅｌｕｎｄｅｒｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｃｏｎｓｔａｎｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｔ６０～６５ｉｎｌｈ．Ｉｔｈａｓｂｅｅｎｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｑｕｉｃｋｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｆｏｏｄ —ｂｏｒｎｅｐａｔｈｏ－
ＡｂｓｔｒａｃｔＬｏｏｐ—ｍｅｄｉａｔｅｄｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ（ＬＡＭＰ）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｓａｎｅｗｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｎｕ —
近年来，微生物污染食品的安全事件时有发生。其中，沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李
围食源性疾病发生埋下隐患。如何杜绝隐患，保证餐桌食品安全成为迫切需要解决的问题，而通过检测发现问题又成为当前食源性致病菌研究的热点。目前，食源性致病菌的检测方法有很多，常用的方法有免疫学检测技术、分子生物学检测技术、代谢学检测技术、生物传感器检测技术、噬菌体识别技术
摘要
卢可可
西南大学食品科学学院
重庆４００７１６
环介导等温扩增（ＬＡＭＰ）技术是继ＰＣＲ技术之后又一新型核酸扩增技术，恒温（６０—６５ ℃）条件下可
在１ｈ内将目的基因扩增到１０９，具有效率高、特异性强、操作简单等优点，已被广泛应用于食源性致病菌的快速检