酵母双杂交子孢子和裂殖子cDNA文库质量鉴定报告

酵母双杂交子孢子和裂殖子cDNA文库质量鉴定报告
第一部分：文库表观检测
检测主要内容：文库滴度、文库的容量
具体的实验检测方法：
1.室温解冻公司已经构建好的酵母双杂交子孢子和裂殖子cDNA文库酵母菌液
2.取公司已经构建好的酵母双杂交子孢子和裂殖子cDNA文库酵母菌液各100μL 于盛有900μL的生理盐水之中为菌液稀释10倍的储存液（10-1），然后依次做倍稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5，再将其均匀涂布于SD/-Leu缺陷性固体培养基上，30度生化培养箱中培育3-5天。

3．观察酵母菌的生长情况
结果：
第一排为酵母双杂交子孢子cDNA文库
其只在10-2稀释倍数下生长。

然后计算其滴度为：
滴度：1.16×105cfu/ml 文库容量：1.11×107cfu
第二排为酵母双杂交裂殖子cDNA文库
其只在10-3稀释倍数下生长。

然后计算其滴度为：
滴度：8×104cfu/ml 文库容量：7.68×106cfu
第二部分：文库插入片段的检测
挑取上述在SD/-Leu生长出来的酵母菌单克隆于液氮和100度沸水中反复冻融，然后使用公司构建文库报告中提供的引物序列进行PCR扩增旨在获得文库中插
入目的片段的大小范围
结果：
Fig：酵母双杂交子孢子和裂殖子cDNA文库酵母单菌落PCR鉴定（酵母双杂交文库通用引物）
M（DL2000）DNA分子量大小标准
1-8：子孢子酵母双杂交cDNA文库酵母单菌落，
9-16：裂殖子酵母双杂交cDNA文库酵母单菌落，
本次PCR检测的目的基因插入片段大小为250bp-500bp之间，所挑酵母菌落来源于最高稀释倍书稀释的SD/-Leu营养缺陷性培养基上的酵母菌落。