琼脂糖凝胶电泳检测质粒
实验八质粒DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测
当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复 pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两 条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准 确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此 已完全分开，复性就不会那么迅速而准确， 它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体 DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复 合物等一起沉淀下来而被除去。
2.简要叙述酚氯仿抽提ＤＮＡ体系后出现的现象及其成 因?
3.沉淀ＤＮＡ时为什么要用无水乙醇及在高盐、低温条 件下进行？
质粒3种构型
1.超螺旋的共价闭合环状质粒DNA(covalelltly closed circular DNA，简称cccDNA); 2.开环质粒DNA，即共价闭合环状质粒DNA的一条链 断裂，(open circular DNA，简称ocDNA); 3.线形质粒DNA，即共价闭合环状质粒DNA 两条链发 生断裂(linear DNA，简称LDNA)。
2. 琼脂糖凝胶电泳检测DNA
一、实验目的
通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测 DNA的方法和技术。
二、实验原理
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子 筛效应。DNA分子在高于等电点的pH 溶液中带负 电荷，在电场中向正极移动。由于糖—磷酸骨架在 结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有 等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方 向移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速 度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构 型。具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度 不一样，可进行分离。DNA分子的迁移速度与相对 分子质量的对数值成反比关系。
２．取1.4 ml培养液至Eppendorf管中，12000rpm离心30 秒，弃上清，取沉淀。
３．将细菌沉淀悬浮于100µl预冷溶液Ⅰ中，振荡混匀。 ４．加入200µl溶液Ⅱ，缓慢颠倒离心管，混匀（勿剧烈
一、质粒的提取及琼脂糖凝胶电泳检测
三、实验步骤（2）
加入150μL冰冷的溶液Ⅲ，盖紧后，温和颠倒3-5次使混匀，产生白色 絮状物，冰上放置15 min。
10000rpm× 5 min，取上清液于另一干净的离心管中。
向上清液中加入等体积（约400μL）酚：氯仿/异戊醇（25：24:1， v/v），振荡混匀，10000rpm × 10 min，将上清液转移至新的离心 管中。
二、实验用品
1、仪器 恒温摇床，高压灭菌锅，超净工作台， 10、100、1000μL取液器各一支， 台式高速离心机，制冰机，漩涡器。
台式高速离心机 漩涡混合器
微量移液器 制冰机
二、实验用品
2、材料： 含质粒pUC18大肠杆菌 1.5ml塑料离心管 EP管架 微量取液器和取液器吸头 常用玻璃器皿（如三角瓶、量筒、试剂瓶等）
一、实验原理
在质粒提取的过程中，由于操 作原因，提取的质粒可能有三种： 线性DNA、开环DNA 、闭环超螺 旋DNA 。
当提取的质粒DNA电泳时,同一质 粒 DNA泳动速度：闭环超螺旋〉线 状〉开环。
但有时也有也会出现相反情况， 因为与琼脂糖浓度、电流强度、离 子强度及核酸染料含量有关。
二、实验用品
分离质粒DNA的方法一般包括三个基本步骤： 培养细菌使质粒扩增
收集和裂解细菌
分离和纯化质粒DNA
一、 实验原理（碱裂解法）
溶液 Ⅰ ：50mmol/L 葡萄糖，
10mmol/ EDTA-Na，
作用：分散细胞，螯合金属离
25mmol/L Tris-HCl (pH8.0) 子使酶失活，防止DNA的降解
分子生物学实验室规则
自我防护：实验服、一次性手套 请勿吃东西 正确操作实验器材，保管好自己的实验器材 实验废液和废物不可乱扔进垃圾桶污染环境 保持实验清洁卫生 分组做实验、团队合作交流，勤动手、动脑
质粒DNA的酶切鉴定原理
质粒DNA的酶切鉴定原理质粒DNA的酶切鉴定是一种常用的实验方法，用于确定质粒DNA的大小和纯度。
酶切鉴定是通过用特定的限制性内切酶切割质粒DNA，然后利用琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段，并通过染色或脱染观察分离结果。
限制性内切酶是一类特殊的酶，它们能够识别DNA的特定序列，并在该序列上切割DNA分子，产生特定的DNA片段。
酶切鉴定的原理主要包括限制性内切酶的选择、质粒DNA酶切、琼脂糖凝胶电泳和染色观察。
首先，选择适当的限制性内切酶。
限制性内切酶是依据其能够识别的特定DNA 序列而命名的。
在酶切鉴定中，通常使用两个不同的限制性内切酶，因为单个限制性内切酶的选择性有限。
选择限制性内切酶时需考虑酶切位点的位置和数量，以及酶切位点的特异性和完整性。
其次，进行质粒酶切。
通常将质粒DNA与适当的缓冲液和限制性内切酶混合，反应一段时间。
反应结束后，通过热灭活限制性内切酶，停止酶切反应。
酶切反应完成后，会得到经限制性内切酶切割的DNA片段。
然后，进行琼脂糖凝胶电泳分离。
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分子量测定方法。
它通过将DNA样品加入琼脂糖凝胶槽中，在电场作用下，DNA片段按照大小被分离。
较小的DNA片段在电场中移动更快，较大的DNA片段移动较慢。
通过检测琼脂糖凝胶上的DNA迁移距离，可以获得质粒DNA的分子量信息。
最后，通过染色观察和图像分析来确定质粒DNA的大小和纯度。
琼脂糖凝胶电泳结束后，通常需要染色来显示DNA片段。
常见的染色剂有溴化乙锭和SYBR Green等。
经过染色的琼脂糖凝胶可以进行观察和记录，并通过分析软件对分离的DNA片段进行测量和分析，得到质粒DNA的大小和纯度信息。
总之，质粒DNA酶切鉴定是通过限制性内切酶切割质粒DNA，然后通过琼脂糖凝胶电泳分离和染色观察来确定质粒DNA的大小和纯度。
这种方法简便易行，可用于快速鉴定质粒DNA的酶切效果和测定其分子量。
质粒DNA纯度检测方法及注意事项
质粒DNA纯度检测方法及注意事项确定提取的质粒DNA纯度可以通过以下几种方法：
1.紫外吸收检测：由于核酸和蛋白质的吸收光谱特性不同，可以利用紫外分
光光度计测量DNA样品在260nm和280nm波长下的吸光度值。
纯净的DNA其A260/A280的比值应该接近1.8。
若比值高于1.8，则可能意味着DNA样品中的RNA未完全去除。
比值低于1.8可能说明样品中含有酚类或蛋白质。
同时，如果在270nm存在高吸收，这可能表明有酚的干扰。
2.琼脂糖凝胶电泳：可以使用水平琼脂糖凝胶电泳，并在胶中加入EB（溴化
乙锭）染料。
电泳结束后，在紫外灯下观察DNA条带的亮度和清晰度。
纯净的质粒DNA应该显示出清晰、单一的条带。
如果观察到多条带或模糊的条带，这可能意味着样品中存在RNA、蛋白质或其他杂质。
3.荧光分光光度法：对于浓度较低的DNA样品，可以使用荧光分光光度法来
测量DNA的浓度和纯度。
这种方法通常比紫外吸收法更灵敏，可以检测更低浓度的DNA。
需要注意的是，以上方法只能提供关于DNA纯度的间接信息。
为了确保DNA的纯度，最佳的做法是结合多种方法进行分析，并在可能的情况下，通过进一步的实验（如克隆、测序等）验证DNA的质量。
质粒dna的提取及电泳检测实验报告
质粒dna的提取及电泳检测实验报告一、实验目的本实验的主要目的是学习质粒DNA的提取方法和电泳检测技术，并通过实验观察质粒DNA的提取情况和电泳检测结果。
二、实验原理质粒DNA的提取方法主要采用碱裂解法，通过将细胞裂解后，用酸性物质中和碱性物质，使DNA分离出来，最后用酒精沉淀纯化。
电泳检测是通过将DNA 样品置于琼脂糖凝胶上，加上电场后，DNA在凝胶中移动，通过电泳带电的原理，将DNA分离出来，从而观察DNA的大小和形状。
三、实验步骤1.准备样品：将含有目标DNA的菌落挑出放入EP管中，加入100μl TE缓冲液（10mmol/L Tris-HCl,1.0mmol/L EDTA,pH8.0），用微量移液器均匀混合。
2.制备裂解液：取10μl 0.25mol/L NaOH加入菌液中，轻轻摇匀，并立即加入200μl 1%SDS（十二烷基硫酸钠）液，翻转混匀。
3.裂解DNA：加入150μl NaOH-SDS溶液，翻转10次，置于80℃水浴中裂解细胞壁和细胞膜，20min后取出，加入150μl冷KAc/EDTA溶液（3mol/L KAc，pH5.2，0.5mol/L EDTA），翻转混匀，冰上静置5min。
4.离心沉淀：10000r/min离心10min，将上清液移至新的96孔板中，加入0.6倍体积的冰凉乙醇，反复翻转，置于-20℃上进行冷却，离心12000r/min 10min，去掉上清液，用95%乙醇洗涤沉淀物，最后用300μl TE缓冲液溶解沉淀DNA。
5.电泳检测：取相同浓度的DNA样品，加入琼脂糖，混合后加入电泳槽中，通电检测10min。
四、实验结果经过实验操作后，取出DNA样品，通过电泳检测，观察到有一条长度合适的条带，证明质粒DNA已经成功提取，并且检测结果与对照组差异不大，说明实验操作规范，结果可信。
五、实验结论本次实验通过碱裂解法成功提取了质粒DNA，并通过电泳检测技术检测到了DNA条带，证明提取质粒DNA的方法可行，同时也说明电泳检测是一种可靠的分子生物学技术，对于DNA分离和检测有着重要的应用价值。
质粒DNA的提取与琼脂糖凝胶电泳鉴定
实验题目质粒DNA的提取与琼脂糖凝胶电泳鉴定实验目的掌握质粒提取的原理与各种试剂的作用和琼脂糖凝胶电泳原理和操作实验原理质粒存在于细菌，线粒体等，独立于染色体之外，能够稳定遗传并自我复制，是一个双链环装DNA。
对数期大肠埃希菌含有质粒。
溶液一可使细菌充分重悬，溶液二使细菌裂解，释放质粒和基因组DNA.溶液三起到中和作用，使得质粒DNA迅速复性，而基因组DNA因为分子巨大，复性时间长。
离心后，质粒DNA留在上清液，而基因组DNA和细胞碎片沉淀在离心管。
琼脂糖凝胶电泳蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此泳动的速度不同，根据这个原理可将其分开。
电泳缓冲液的pH在6~9之间，离子强度0.02~0.05为最适。
常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。
用各种浓度的琼脂糖凝胶可以分离长度为200bp至近50bp的DNA。
此外，直接用低浓度的核酸染料进行染色，可以确定DNA 在凝胶中的位置。
实验主要步骤质粒DNA提取1.取4ml细菌平均分两份加入离心管，以12000r/min离心1min，去除上清液2.加100ul用冰预冷溶液I，移液枪打散细菌沉淀使其成为悬浮液3.加入200ul溶液II，盖紧盖口，翻转五次，充分混合，避免振荡，置于冰上4.加入150ul冰预冷溶液III，盖紧盖口，翻转离心管5次，温和摇匀直到粘稠的细菌裂解物出现，放于冰上5min5.离心管以12000r/min离心5min6.取上清液加入等量的酚：氯仿混合液，轻轻摇匀，以12000r/min离心7min7.取上清液加入2倍体积100%乙醇沉淀DNA，轻轻摇匀，12000r/min离心5min，去除上清液，倒置在滤纸上干燥8.用1ml70%乙醇洗涤DNA沉淀，按照步骤7去除上清液，空气干燥10min9.用50ul无菌水溶解质粒DNA琼脂糖凝胶电泳：1.制胶。
将电泳缓冲液和琼脂糖在微波炉中熔化,混匀,冷却至55°℃,加入EB染料,倒入已封好的凝胶灌制平台上,插上样品梳。
质粒后续各项检测指标
质粒后续各项检测指标质粒是环状DNA分子，常用于基因工程研究和重组蛋白生产。
在质粒构建和质粒表达的过程中，需要进行各项检测来确保质粒的完整性、正确性和稳定性。
下面将介绍质粒后续各项检测指标。
1.齐凝胶电泳检测：齐凝胶电泳是一种常见的DNA检测方法，包括琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
通过将待检测的质粒样品与DNA标准样品一同进行电泳，可以确定质粒的大小和线性或环形结构。
同时，通过该方法还可以初步评估质粒的纯度和质量。
2.质粒限制性酶切：质粒限制性酶切是一种用于确定质粒重组后正确性的方法，通过切割特定的酶切位点来验证质粒的重组结构是否与设计一致。
该方法可以用于确认外源基因的插入，并且可以通过酶切图谱来判断质粒的线性或环形结构是否完整。
3. DNA测序验证：通过DNA测序可以直接确定质粒中基因的序列是否与设计一致。
通过对质粒DNA进行PCR扩增，再提取扩增产物进行测序，可以确保质粒表达载体中的外源基因的正确性。
4. PCR检测：PCR方法可以用于迅速检测质粒中所含基因的碱基序列以及是否成功地将外源基因插入到表达载体中。
通过针对特定基因引物的PCR扩增，可以快速检测质粒的一致性和正确性。
5.质粒稳定性检测：质粒稳定性是指质粒在细胞中传递和复制过程中的稳定性。
稳定性检测可以通过选择性培养基和各化学试剂的添加来进行。
例如，在选择性培养基上生长能力的观察，可以评估质粒在细胞中的稳定性。
此外，还可以利用流式细胞术或筛选系统来检测质粒的稳定性。
6.克隆稳定性检测：克隆稳定性检测主要用于评估质粒在细胞系中的稳定性。
通过通过筛选多个克隆株并对其进行长期培养，可以确定质粒在细胞系中的稳定性和保持能力。
7.表达水平检测：表达水平检测是用来评估质粒在宿主细胞中的表达效果，主要通过分析外源基因所编码的蛋白质含量和活性。
可以通过Western blot 和ELISA等方法来检测蛋白质表达水平。
总结起来，质粒后续检测的各项指标包括齐凝胶电泳检测、限制性酶切、DNA测序验证、PCR检测、质粒稳定性检测、克隆稳定性检测和表达水平检测等。
addgene质粒鉴定方法 -回复
addgene质粒鉴定方法-回复Addgene质粒鉴定方法引言：在分子生物学实验中，质粒常用于基因克隆、基因表达和遗传转化等研究。
为了保证实验的可靠性和结果的准确性，对于所使用的质粒进行鉴定是至关重要的。
Addgene是一个非营利性的生命科学研究资源库，为全球科学界提供各类质粒。
本文将介绍Addgene质粒鉴定的方法，帮助科研人员准确、可靠地使用Addgene中的质粒。
一、菌种鉴定1. 培养样品中含有质粒的菌株。
Addgene质粒资源库提供的质粒常以大肠杆菌(Escherichia coli)为宿主菌株，因此在使用之前需要确认宿主菌株的鉴定结果。
2. 菌株的培养和扩增。
从低温保存的菌种中挑取一部分菌落，接种到含有适当抗生素的LB （Luria-Bertani）培养基中。
培养至菌落生长形成后，进行菌株的扩增。
3. 菌株鉴定方法。
常见的菌株鉴定方法包括形态特征观察、生理生化试验和分子生物学方法。
菌株形态特征观察主要包括菌落形状、色素产生和荧光等。
生理生化试验则通过菌株对特定试剂的反应，如碳源利用测试、酶活性检测等，来判断菌株的种属。
分子生物学方法则利用特定的引物和PCR扩增技术检测菌株的特定基因片段，进行鉴定。
二、质粒鉴定1. DNA提取将质粒DNA提取出来，可采用常规的DNA提取试剂盒进行提取，也可以使用自制的提取方法。
2. 琼脂糖凝胶电泳将提取的质粒DNA进行琼脂糖凝胶电泳分析，通常选择1琼脂糖凝胶进行分离。
加入DNA电泳缓冲液和DNA加载缓冲液后，将DNA样品加载到琼脂糖凝胶孔中，接通电源进行电泳。
3. DNA转印将电泳后的DNA迁移到合适的膜上，如尼龙膜（nylon membrane）或硝酸纤维膜（nitrocellulose membrane）。
4. DNA固定和杂交用含有标记DNA探针的杂交液（例如荧光标记的探针或放射性同位素标记的探针）将DNA固定在膜上，然后在适当的条件下进行固定与杂交。
质粒的酶切琼脂糖凝胶电泳分离DNA
6. 室温下约30-45分钟后，琼脂糖溶液完全凝固，小心 垂直拔出梳子和挡板，清除碎胶，将凝胶放入电泳槽 中。
实验步骤
酶切体系
调制酶切体系如下: (共 20μL)
无菌水 6μL，
质粒
10 μL
Buffer K 2μL,
EcoR I 1μL,
BamH I 1 μL
37℃酶切1.5小时。
琼脂糖凝胶制备
1. 洗净电泳槽、制胶槽、梳子、挡板，晾干。 2. 插好挡板、梳子。 3. 根据实验所需称取0.4克琼脂糖，放入制胶
11. 等溴酚蓝泳动至凝胶前沿后，将电压（或电 流）回零，关闭电源，停止电泳。
12. 取出凝胶，在紫外观测仪上观察电泳结果。
13.. 根据需要切下DNA条带，放入1.5ml Ep管中， 放于4℃保存，以中一般为三条带，最前面 的条带为超螺旋构型，中间为线型，最后为单链 有缺刻的构型。
pBC SK map
它的原理是溴化乙锭在紫外光照射下能发射 荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向 正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动， 这样溴化乙锭分子就会嵌入DNA分子中形成 络合物，使DNA在紫外光下发射很强的荧光。 在溴化乙锭足够的情况下，荧光的强度正比 于DNA的含量，这样就可以检测DNA的浓度。
如提取过程中有机械损伤，可能在胶上出现弥散。 影响RE(限制性内切酶)活性的主要因素：DNA的
纯度；DNA的甲基化程度；温度；缓冲液成分 （DDT，BSA）等。
使用3 mg的DNA Marker DL 2,000（500 ng/条带）进行1% 的琼脂糖凝胶电泳后，各DNA条带自上至下分别为2kb，1Kb， 750bp，500bp，250bp，100bp。
质粒的提取及凝胶糖凝胶电泳鉴定
实 验 步 骤
50 mM 葡萄糖 25 mM Tris-HCl 10 mM EDTA-Na2
200 mM NaOH 1% （W/V） SDS
2
5 min
3 M NaAC
省去Leabharlann 30 min 以上四、DNA的琼脂糖凝胶电泳原理
不同的DNA片段由于其电荷、分子量大小及构型的不同，在电 泳时的泳动速率就不同，从而可以区分出不同的区带。
8.12000rpm，4℃，离心10min，弃上清，将管口倒置于纸巾上使所有液体尽 可能流出。
9.加入1ml70%乙醇洗沉淀一次。12000rpm，4℃，离心10min。 10.弃上清，将管口倒置于纸巾上使液体流尽，放置干燥或真空干燥，即得质粒 DNA制品。 11.将沉淀溶于20ulTE缓冲液，（临用前加入1u 或20ug/ml RNaseA）待用。
细菌质粒是基因工程中常用的基因载体，也是 分子生物学中研究基因结构、功能及其复制、表达 的好材料。
二、实验原理
碱变性抽提法法是常用的方法之一. 此法基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性差异而达
到分离的目的。
在pH高达12.6的条件下，染色体DNA的氢键断裂、双螺 旋解开而变性；质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺 旋共价闭合环状结构的两条互补链未完全分离，当用 pH4.8 的 Kac 高 盐 缓 冲 液 调 节 pH 至 中 性 时 ， 变 性 的 质 粒 DNA又恢复到原来的构型，以可溶性状态存在于液相中， 而染色体DNA不能复性，形成缠绕的网状结构，与不稳 定的大分子RNA、蛋白质等一起沉淀出来。
2.凝胶板的制作： 用1cm宽的胶带纸沿平板电泳槽模板两 端边缘围成高4mm的墙，在其一端放置样品梳。将准备好的 模板置于水平台上，迅速将上面 胶液倒在模板的中央，让胶液自 由流向四周。待胶液充分冷却凝 固，将胶纸围墙慢慢取下，制备 好的凝胶板放入电泳槽中，加电 泳缓冲液直至没过胶面约1mm深， 取出样品梳。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一、实验原理
琼脂糖凝胶电泳：是常用的用于分离、鉴定及纯化DNA分 子标准方法，这种电泳方法以琼脂糖凝胶作为支持物，利 用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离 混合物的目的。
• 实验仪器：电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波 炉，紫外透射检测仪等
• 实验试剂：琼脂糖，TAE电泳缓冲液，溴化乙锭（EB），上样 缓冲液
上样缓冲液
常用的10X上样缓冲液
Ⅰ 0.25%溴酚蓝 ，0.25%二甲苯青 ，40%蔗 糖水溶液 Ⅱ 0.25%溴酚蓝 ，0.25%二甲苯青 ，30%甘 油水溶液 各成分的作用？
• 加样缓冲液可以增大样品密度，以确保DNA均匀进入样品孔内， 还可以使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利。
• 溴酚蓝在琼脂糖凝胶中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍, 溴 酚蓝在琼脂糖凝胶中移动的速率约与长300bp的双链线性DNA 相同,而二甲苯青FF在琼脂糖凝胶中移动的速率则与4kb双链线
电泳结束后，在紫外观测仪上进行观察
结果分析
Thanks
琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔， 凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。
电泳缓冲液
1. Tris—乙酸（TAE） 2. Tris—硼酸（TBE） 3. Tris—磷酸（TPE）
PH为7.5—8.0,这些缓冲液均含有EDTA。
溴化乙锭（EB）
• 溴化乙锭（EB）是一种吖啶类染料，它在紫外灯照射下能发 射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中电泳时，琼脂糖凝胶中 的EB就插入DNA分子中形成荧光络合物，使DNA发射的荧光 增强几十倍，电泳后就可直接紫外灯照射下检测琼脂糖中的 DNA。
DNA分子的构象
• 不同构象DNA分子在电场中移动的距离不同。具有相同分子量 的线状、开环状和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度不同。
• 迁移速度？
二、实验方法
制备1%的琼脂糖胶液： 取0.4g琼脂糖溶于40mL TAE中。
在短时间里加热琼脂糖全部熔化。使溶液冷却至60℃。(加 入EB ，使EB的终浓度为1μg/mL)。
性DNA相同。
迁移方向
DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷 DNA迁移方向？ 点样孔朝向？
பைடு நூலகம்响DNA迁移率的因素
• DNA分子大小 • DNA分子的构象
DNA分子大小
• 线形的双链DNA分子在凝胶中迁移的速率与其碱基数的对数成 反比。
• 分子越大，迁移越慢。一是摩擦阻力越大，二是大分子通过凝 胶孔径的效率低于较小的分子。
将温热琼脂糖倒入胶床中，凝胶的厚度在3—5mm之间，凝固 约30min。
在凝胶完全凝固之后，小心移去梳子，将胶床放在电泳槽内， 加样孔一侧靠近阴极（黑极）。 向电泳槽中注入适量的TAE缓冲液，通常缓冲液高于胶面1cm。
将适量的质粒样品与加样缓冲液混合,用移液枪将样品 加入加样孔。
正确连接电泳槽和电源，设定稳压为3-5V/cm。