EDTA脱钙液
介绍一种改良的Neutral EDTA脱钙液
介绍一种改良的Neutral EDTA脱钙液
马恒辉;章如松;周航波;周晓军
【期刊名称】《诊断病理学杂志》
【年(卷),期】2005(12)5
【总页数】2页(P391-391)
【关键词】Neutral脱钙液;改良;免疫组化
【作者】马恒辉;章如松;周航波;周晓军
【作者单位】南京军区南京总医院病理科
【正文语种】中文
【中图分类】R361.2
【相关文献】
1.一种改良脱钙液的配置与脱钙方法 [J], 李晓未;朱雪明
2.改良EDTA脱钙液在骨髓活检组织中染色效果观察 [J], 翁丹枫;张声;李国平;王鹏程;黎三艳
3.介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用 [J], 陈世梁;卢志承;董玉英
4.混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析 [J], 吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣
5.介绍一种改良的Plank·Rycho脱钙液 [J], 胥维勇;杨红;李科;杨群
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三种关节组织脱钙液的应用比较
骨组 织脱 钙 技 术 是 病 理 实 验 室 常 用 技 术 之 一 ，直 接 关 系 到 骨 组 织 切 片 的制 备 和 观 察 。 大 鼠关 节 组织 制 片 的关 键 步骤 即是 脱 钙 ，其 直 接 影 响 到 制 片 的 成 败 。选 用 合 适 的脱 钙 液 进 行 脱 钙 ，既 能 较 快 达 到 脱 钙 目的便 于 切 片 ，又 不 破 坏 组 织 结 构 完 整 性 影 响 后 期 染 色 。 因此 制 备 病理诊 断 所 需要 的理 想 标 本 ，显 得 十分 必 要 。本研究 在 大 鼠关 节组 织石 蜡 制 片 实 验 中 ， 分 别用 Ｓｃｈｒｉｄｄｅ液 、５％ 甲盐酸 和 １５％ ＥＤＴＡ对 关 节 组织 进行 脱 钙 处 理后 制 片染 色 ，镜 下观 察 脱 钙 效果 及着 色 效果 ，从 中选 择 一种 较 为适 宜 的关 节组 织脱 钙方 法 。 ｌ 材料与方法 １．１ 标本 制备 选 取 大 鼠踝 关 节组织 标 本 ，共 计 ３Ｏ个 ，经 １２％ 中性 甲醛 液 固定 ４８ ｈ后备 用 。 １．２ 试 剂及 仪 器 所有 试剂 均 为 国产 分 析纯 。 ＣＨ３０光学 显 微 镜 ，奥 林 巴斯 株 式 会 社 ；ＬＥＩＣＡ ＴＰ１０２０组 织 自动脱 水机 ，德 国球 卡仪 器 有 限公 司 ；ＴＢ一７１８Ｅ生 物组 织 自动 包 埋 机 ，湖 北 泰 维 医疗科 技有 限责任 公 司 ；ＬＥＩＣＡ ＲＭ２３５轮转 切 片机 ，德 国球 卡仪器 有 限公 司 ；ＴＲ一１８０生 物组 织 自动染 色机 ，湖 北 泰 维 医疗 科 技 有 限责 任 公 司 。 １．３ 脱 钙 液 的 配 制 Ｓｃｈｒｉｄｄｅ液 ：２０ ｍ１浓 硝 酸 加 １００ ｍｌ １２％ 中性 甲醛 溶 液配 制 而成 。５％
电解脱钙液(甲酸法)
电解脱钙液(甲酸法)货号：G2672规格：500ml保存：室温避光，12个月。
产品说明：在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。
这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。
对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。
然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。
用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。
在有机酸中，甲酸、乙酸比较适合于骨髓组织脱钙。
电解脱钙液的优点：①脱钙速度快；②适用于大多数组织的脱钙。
其缺点：①对组织有一定的损害；②脱钙后需要硫酸钠溶液进行碱处理。
操作步骤(仅供参考)：1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。
2、组织固定后，用PBS清洗3次。
3、组织用蒸馏水洗清洗3次。
4、安装电解装置：取铂金丝一根，将标本用铂金丝一端缠绕数圈，置于容器底部一侧，铂金丝另一端连接电源正极。
在容器的另一侧将一只钢片或炭精棒的下端插入容器内，上段与电源负极相连。
5、加入电解脱钙液，置于恒温水浴箱中。
一般采用直流电源6V，如有整流器可调至8～10V。
6、用流水冲洗数小时。
7、入5%硫酸钠溶液进行碱处理。
8、常规脱水、包埋。
注意事项：1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10min～3h即可。
第1页，共2页2、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。
脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。
3、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。
4、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
附录：脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。
物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。
混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析
混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣【摘要】目的比较不同脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异,探讨其对HE染色的影响.方法选取16例大鼠胫骨标本,运用两种常用的脱钙液(混合脱钙液和EDTA脱钙液)进行脱钙,比较其脱钙效果和对HE染色的影响.结果两种脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别.结论混合脱钙液时间最短,但切片和染色效果最差;EDTA脱钙液对骨组织损伤小,HE染色效果最好,但用时较长.【期刊名称】《医学信息》【年(卷),期】2017(030)026【总页数】2页(P180-181)【关键词】混合脱钙液;EDTA脱钙液;HE染色【作者】吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣【作者单位】第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032;中国人民解放军天津疗养院,天津 300381;第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032;第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032;第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032;第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032【正文语种】中文【中图分类】R361骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成。
骨基质内含大量无机盐，质地坚硬，不能直接进行石蜡或冷冻切片，因此在制作病理切片过程中，常常需要经过脱钙处理，才能进行切染色[1]。
试验中脱钙过度或不足会影响染色效果，严重影响结果的判读，因此，脱钙时间和脱钙液的选择十分重要。
为了更好地了解脱钙技术对骨组织切片HE染色结果的影响，本文重点对比SD大鼠胫骨上段骨组织通过两种不同脱钙液的脱钙以及HE染色效果进行对比，现报告如下。
标本为第四军医大学西京医院骨科动物实验中心提供的大鼠8只。
取双侧胫骨上端16例标本，长约0.8 cm，用纱布包好随机标记为A组和B组，在10%中性福尔马林固定3 d，投入脱钙液中，A组为EDTA脱钙液，B组为混合脱钙液。
EDTA脱钙液
EDTA脱钙液产品简介：在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。
这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。
对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。
然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。
用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（EDTA）以及电解脱钙。
EDTA 是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。
但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。
Jimei EDTA脱钙液主要由EDTA、磷酸盐等组成，pH值为7.2。
其优点是：①经EDTA 脱钙的组织染色结果好；②对组织的结构损害小。
其缺点是：①脱钙速度很慢，不适合常规标本脱钙使用；②脱钙后组织会稍微变硬；③不宜用化学方法确定脱钙终点。
产品组成：自备材料：1、PBS2、蒸馏水3、加热装置或微波炉操作步骤（仅供参考）1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。
2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。
3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。
4、组织转移至20~30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10~30天或更长时间。
如果想加快脱钙速度，可以置于37。
C进行脱钙。
如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周~3个月即可，每周更换一次直至终点。
亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3~5min，中间间隔3~5min。
5、用蒸馏水冲洗数次。
6、常规脱水、包埋。
注意事项：1、厚度5 mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可，大多数在14~60天即可。
2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37~40。
C，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60。
C。
3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。
方法选择12例骨组织，随机分为3组。
A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA 脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。
结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。
PLANK 脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。
结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。
但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK 脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。
硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。
标签：脱钙液；骨组织；免疫组化染色骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。
如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。
本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。
1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。
1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。
③脱钙液Ⅲ：PLANK脱钙液，配制方法为氯化铝10 g，甲酸50 mL，10%福尔马林10 mL，冰乙酸1.5 mL，加蒸馏水至总体积100 mL。
骨组织脱钙液介绍
骨组织脱钙液介绍骨组织脱钙液概述在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。
由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。
骨组织含钙量最多。
除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。
脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。
为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织的抗原不受破坏，需要对含钙的织固定之后再进行脱钙或采用固定兼有脱钙的液体处理，固定并脱钙。
然后再行常规制片。
用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid EDTA）除此之外还有电解脱钙法。
强有机酸，如硝酸和盐酸可用于密皮质骨的脱钙，在短时间内可除去大量的钙。
令人遗憾的是这些强酸对组织形态会产生不良影响，脱钙作用强对组织破坏性大。
细小的组织，例如，骨髓组织不推荐用强酸脱钙。
虽然可以使用各种附加剂，如缓冲液具有保护组织的作用，但也降低了脱钙速度。
因此，各种脱钙液的配方都围绕着脱钙速度和消除对组织的不良影响而设计。
在酸类脱钙液中醋酸和甲酸比较适合于骨髓组织脱钙。
甲酸是一种使用范围较广的脱钙剂。
甲酸脱钙 10% 浓度比较合适。
醋酸和甲酸的作用比较弱，脱钙速度比较慢，它们不适合密皮质骨的脱钙。
EDTA 是一种比较温和的脱钙剂（EDTA 不是酸）。
对组织的渗透性差，作用慢。
大剂量使用价格较贵。
电解脱钙对组织损害最小，因为它的脱钙速度太慢，所以，不适合常规使用。
不同的脱钙液对骨组织的脱钙作用不同，脱钙效果也不完全相同。
为了达到良好的脱钙效果，建议使用EDTA脱钙液，该脱钙液对组织损伤较小，缺点就是脱钙时间会比较长些，但脱钙时间也要根据组织块大小而定。
目前国内生产EDTA脱钙液的公司也很少，个人感觉上海舜百生物的EDTA脱钙液使用效果还不错，脱钙脱的比较彻底，而且对组织损伤很小，就是周期长了些。
脱钙方法总结
（1）该液对细胞核作用较慢，使细胞核着色较差。
（2）要用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少12小时。
4．Perenyi’s液：
10%硝酸4份，0.5%铬酸3份，无水乙醇3份。
5mm厚的骨组织块脱钙时间需要2-7天。
优点：
（1）该液是一种暖和的脱钙液，可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。
厚度5mm骨组织块脱钙3-7天。
优点：
（1）细胞核染色相当好。
（2）不需要水洗，脱水时酸就会首先被脱出来。
缺点：使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
6．甲酸液：
甲酸10ml，10%福尔马林盐90ml。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要3-7天。
优点：
（1）脱钙同时可以对组织固定。
（2）对细胞核染色比较好。
（2）细胞核和细胞浆细微结构着色均好。
（3）推荐该液作为常规脱钙使用。
（4）组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。脱钙组织直接移到90%乙醇中。
缺点：
（1）脱钙较慢，因此，紧急情况下不能使用。
（2）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
5．Von Ebener’s液：
饱和水溶液氯化钠50ml，蒸馏水50 ml，浓盐酸8 ml。
9．AFIP甲酸-柠檬酸钠液：
A液：甲酸25ml，蒸馏水25ml。B液：枸橼酸钠（结晶）10g，蒸馏水50ml。
临用时A液和B液等量混合，每日换1次，因为柠檬酸钠可以和钙离子螯合，具有促进脱钙的作用。
10．蒋维中（Jangweizhong’s）液：
盐酸80ml。甲酸70ml，三氯化钙50g，冰醋酸25ml甲醛100ml，生理盐水900ml。
缺点：脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。
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EDTA脱钙液
产品简介：
在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。
这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。
对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。
然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。
用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（EDTA）以及电解脱钙。
EDTA 是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。
但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。
Jimei EDTA脱钙液主要由EDTA、磷酸盐等组成，pH值为7.2。
其优点是：①经EDTA 脱钙的组织染色结果好；②对组织的结构损害小。
其缺点是：①脱钙速度很慢，不适合常规标本脱钙使用；②脱钙后组织会稍微变硬；③不宜用化学方法确定脱钙终点。
产品组成：
自备材料：
1、PBS
2、蒸馏水
3、加热装置或微波炉
操作步骤（仅供参考）
1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。
2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。
3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。
4、组织转移至20~30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10~30天或更长时间。
如
果想加快脱钙速度，可以置于37。
C进行脱钙。
如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周~3个月即可，每周更换一次直至终点。
亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3~5min，中间间隔3~5min。
5、用蒸馏水冲洗数次。
6、常规脱水、包埋。
注意事项：
1、厚度5 mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可，大多数在14~60天即可。
2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37~40。
C，温度过高容易使骨组织
造成松散解体，尤其不可大于60。
C。
3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。
脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时
尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。
4、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。
5、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减
少组织的损伤程度。
6、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色
结果。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
附录：
脱钙终点的测定（物理法）：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。
物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。
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