脱钙液
快速脱钙液在骨组织脱钙中的应用效果-病理学论文-基础医学论文-医学论文
快速脱钙液在骨组织脱钙中的应用效果-病理学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——含有骨质的肿瘤，钙化组织及骨髓穿刺组织都很坚硬，要想制成几微米的漂亮HE 切片是很困难的。
脱钙液是决定骨骼、牙齿、病理性钙化或骨化组织切片质量、染色效果的关键技术之一。
目前使用的脱钙液大多数是无机强酸类制剂，虽然脱钙效果好，但造成组织形态，特别是细胞结构的破坏。
因此，在本实验中我们选择了传统的脱钙液和快速脱钙液两种脱钙液进行比较，进而寻找一种更适合于骨组织脱钙的方法。
研究中发现快速脱钙液在不破坏组织结构及影响染色的同时，它可促进脱钙并加快脱钙速度，防止纤维性组织过度膨胀，并且保证了切片的质量，现报道如下。
1 材料与方法1．1 材料收集内蒙古医科大学附属医院2009 －2011 年手术切除的骨肿瘤、病变骨及骨髓穿刺病人标本共40 例。
根据标本的不同将骨组织取成体积为1．5cm 1．5 cm 0．5 cm 的薄片( 骨髓一般直径均为0．1 cm) ，放入10% 中性福尔马林固定24 h，用于脱钙实验。
1．2 普通脱钙液及脱钙方法与步骤普通脱钙液是5%的硝酸，即5 ml 硝酸加入95ml 蒸馏水配制而成。
具体脱钙步骤: ①先把大块骨组织标本切成小段，小块骨组织标本不用改刀，然后放入10%中性福尔马林中固定24 h 左右后再进行脱钙。
②将待脱钙的标本放入5% 硝酸脱钙液中，脱钙液不少于待脱钙标本总体积的10 倍。
③室温下进行脱钙: 骨髓穿刺标本需30 －60 min，肋骨、指趾骨需3 －6 d，皮质骨需要5 －7 d。
④脱钙后的组织经流水冲洗后进行取材、脱水、透明、常规石蜡包埋、制片。
1．3 快速脱钙液及脱钙方法与步骤快速脱钙液是由36% －38% 盐酸8 ml、冰醋酸5 ml、水杨酸10 g 、蒸馏水87 ml 混合而成。
用微波炉进行微波时，微波辐射可加速组织内部分子运动，加快脱钙速度，因标本在酸性溶液中滞留的时间短，所以对组织的损伤小。
EDTA 脱钙液使用说明书
EDTA脱钙液使用说明书储存条件：常温保存，有效期1年。
产品内容：Components SL1500 EDTA脱钙液（pH7.2-7.4）500mL说明书1份产品说明：1.在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。
由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。
骨组织含钙量最多。
除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。
脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。
2.为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织中的抗原不受破坏，需要对含钙的组织固定之后再进行脱钙。
然后再行常规制片。
3.EDTA与羟基磷灰石结晶的外层钙结合，形成可溶性的非离子化合物，同时又促进晶体内层的结合钙向外转移。
借助这种连续性的作用使羟基磷灰石晶体逐渐融解，pH中性时可起螯合作用。
其特点是脱钙时间长，对骨组织的损伤少，酶活性(碱性磷酸酶)和细胞抗原性保存较好，制作的切片可用于组织化学和免疫组化分析。
4.主要用途：用于骨组织、牙齿等脱钙。
使用说明：1.骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。
2.组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。
3.组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。
4.组织转移至20～30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10～30天或更长时间。
如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。
如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周～3个月即可，每周更换一次，直至终点。
亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3～5min，中间间隔3～5min。
5.用蒸馏水冲洗数次。
6.常规脱水、包埋。
注意事项：1．为使脱钙更为充分，每次最好更换新液，这既弃去脱掉的钙盐，增加脱钙强度，又起到降低脱钙的温度。
2．脱钙时间以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。
3．脱钙温度不要太高，一般以室温(25℃)为宜，高温可加快脱钙速度，但可破坏组织中的核酸而影响染色效果。
冰醋酸脱钙液配制方法
冰醋酸脱钙液配制方法
冰醋酸脱钙液的配制方法如下：
1. 根据实际需要，如果要求不高，可以用量杯或量筒来量取冰醋酸。
如果要求有更高的精度，建议使用天平来量取冰醋酸。
2. 冰醋酸是弱酸，有腐蚀性，有刺激性，配制时需戴好口罩、眼镜和手套。
3. 取一定量的冰醋酸（例如20毫升），再量取适量的水（例如80毫升），将冰醋酸倒入水中。
4. 使用搅拌棒轻轻搅拌，确保冰醋酸和水混合均匀。
5. 静置一段时间后，将溶液装瓶。
请注意，冰醋酸脱钙液是一种强酸性的溶液，具有腐蚀性，因此应小心操作，避免直接接触皮肤和眼睛。
同时，配制时应遵循相关安全规定和指导，确保操作安全。
福尔马林-EDTA脱钙液说明书
产品组成：
产品名称 福尔马林-EDTA 脱钙液
规格 500ml
保存条件 RT
说明书 1份
有效期 1年
ห้องสมุดไป่ตู้
自备材料： 1、PBS 2、蒸馏水 3、加热装置或微波炉
操作步骤(仅供参考)： 1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约 5mm。 2、组织固定后，用 PBS 清洗 3 次，每次 20min。 3、组织用蒸馏水洗清洗 3 次，每次 20min。 4、组织转移至 20~30 倍体积的福尔马林-EDTA 脱钙液中，脱钙 10～30 天或更长时间。如 果想加快脱钙速度，可以置于 37℃进行脱钙；如果必要，更换新的 EDTA 脱钙液继 续脱钙，多数组织脱钙 2 周～3 个月即可，每周更换一次，直至终点；亦可采用微波快速脱 钙法：微波炉设在 200W 左右的档位，每次加热 5min，依据组织厚度和密度重复 3～5min， 中间间隔 3～5min。 5、用蒸馏水冲洗数次。 6、常规脱水、包埋。
福尔马林-EDTA 脱钙液说明书
本产品仅供体外研究使用，不得用于临床诊断
产品简介： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片， 这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进 行脱钙或二者同时进行，然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片；用于脱钙的 试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙，EDTA 是 一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经 EDTA 脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱 需要数周至数月。
附录： 脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力 感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害， 尽量避免用力过大或反复检测。
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。
方法选择12例骨组织，随机分为3组。
A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA 脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。
结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。
PLANK 脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。
结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。
但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK 脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。
硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。
标签：脱钙液；骨组织；免疫组化染色骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。
如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。
本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。
1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。
1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。
③脱钙液Ⅲ：PLANK脱钙液，配制方法为氯化铝10 g，甲酸50 mL，10%福尔马林10 mL，冰乙酸1.5 mL，加蒸馏水至总体积100 mL。
骨组织脱钙液介绍
骨组织脱钙液介绍骨组织脱钙液概述在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。
由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。
骨组织含钙量最多。
除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。
脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。
为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织的抗原不受破坏，需要对含钙的织固定之后再进行脱钙或采用固定兼有脱钙的液体处理，固定并脱钙。
然后再行常规制片。
用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid EDTA）除此之外还有电解脱钙法。
强有机酸，如硝酸和盐酸可用于密皮质骨的脱钙，在短时间内可除去大量的钙。
令人遗憾的是这些强酸对组织形态会产生不良影响，脱钙作用强对组织破坏性大。
细小的组织，例如，骨髓组织不推荐用强酸脱钙。
虽然可以使用各种附加剂，如缓冲液具有保护组织的作用，但也降低了脱钙速度。
因此，各种脱钙液的配方都围绕着脱钙速度和消除对组织的不良影响而设计。
在酸类脱钙液中醋酸和甲酸比较适合于骨髓组织脱钙。
甲酸是一种使用范围较广的脱钙剂。
甲酸脱钙 10% 浓度比较合适。
醋酸和甲酸的作用比较弱，脱钙速度比较慢，它们不适合密皮质骨的脱钙。
EDTA 是一种比较温和的脱钙剂（EDTA 不是酸）。
对组织的渗透性差，作用慢。
大剂量使用价格较贵。
电解脱钙对组织损害最小，因为它的脱钙速度太慢，所以，不适合常规使用。
不同的脱钙液对骨组织的脱钙作用不同，脱钙效果也不完全相同。
为了达到良好的脱钙效果，建议使用EDTA脱钙液，该脱钙液对组织损伤较小，缺点就是脱钙时间会比较长些，但脱钙时间也要根据组织块大小而定。
目前国内生产EDTA脱钙液的公司也很少，个人感觉上海舜百生物的EDTA脱钙液使用效果还不错，脱钙脱的比较彻底，而且对组织损伤很小，就是周期长了些。
脱钙方法总结
（1）该液对细胞核作用较慢，使细胞核着色较差。
（2）要用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少12小时。
4．Perenyi’s液：
10%硝酸4份，0.5%铬酸3份，无水乙醇3份。
5mm厚的骨组织块脱钙时间需要2-7天。
优点：
（1）该液是一种暖和的脱钙液，可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。
厚度5mm骨组织块脱钙3-7天。
优点：
（1）细胞核染色相当好。
（2）不需要水洗，脱水时酸就会首先被脱出来。
缺点：使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
6．甲酸液：
甲酸10ml，10%福尔马林盐90ml。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要3-7天。
优点：
（1）脱钙同时可以对组织固定。
（2）对细胞核染色比较好。
（2）细胞核和细胞浆细微结构着色均好。
（3）推荐该液作为常规脱钙使用。
（4）组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。脱钙组织直接移到90%乙醇中。
缺点：
（1）脱钙较慢，因此，紧急情况下不能使用。
（2）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
5．Von Ebener’s液：
饱和水溶液氯化钠50ml，蒸馏水50 ml，浓盐酸8 ml。
9．AFIP甲酸-柠檬酸钠液：
A液：甲酸25ml，蒸馏水25ml。B液：枸橼酸钠（结晶）10g，蒸馏水50ml。
临用时A液和B液等量混合，每日换1次，因为柠檬酸钠可以和钙离子螯合，具有促进脱钙的作用。
10．蒋维中（Jangweizhong’s）液：
盐酸80ml。甲酸70ml，三氯化钙50g，冰醋酸25ml甲醛100ml，生理盐水900ml。
缺点：脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。
edta脱钙液配制方法
edta脱钙液配制方法EDTA脱钙液是一种常用的化学试剂，适用于在生化、分子生物学以及细胞生物学实验中，去除镁和钙离子的干扰。
本文将介绍一种EDTA脱钙液配制方法。
1.原料准备：1) 乙二胺四乙酸(EDTA)：分子式为C10H16N2O8，化学纯，实验室常备品，一定要质量优良。
2) 纯水：经过蒸馏或离子交换处理的自来水。
3) 氢氧化钠(NaOH)：实验室常备品，化学纯。
4) 氯化钙(CaCl2)：实验室常备品，纯度要求95%以上。
2. 配制方法：1) 取EDTA 10克，加入100毫升蒸馏水中，并充分搅拌至完全溶解。
2) 用氢氧化钠溶液调节pH值至8.0，溶液会变成无色透明。
3) 用蒸馏水将溶液加至总体积200毫升，均匀混合。
4) 氯化钙和氯化镁分别加入到50毫升蒸馏水中，若有残留颗粒，则需过滤至溶液无颗粒为止。
5) 将氯化钙和氯化镁溶液缓慢滴加到EDTA水溶液中，同时用磁力搅拌器搅拌，注意滴加时不要加的过快，需滴加至完全反应。
6) 倒入500毫升容量瓶中，并用蒸馏水加至刻度处，摇匀。
3. 注意事项：1) 在配制EDTA脱钙液时，应严谨操作，确保实验的准确性。
2) 水溶液的pH值应被精确地测量，并调节至8.0，以确保溶液的准确性与稳定性。
3) 在溶液调节和滴加氯化钙和氯化镁的过程中，应缓慢平稳，反应完全，避免产生沉淀和反应失误。
4) 为了得到稳定的EDTA脱钙液，应将其保存在阴凉、避光的环境中，并尽量降低其与大气中的CO2接触的机会。
总结：以上就是制备EDTA脱钙液的方法，这是适用于实验室的一种方法。
在添加脱钙剂到实验中时，确保您了解反应的机理和适用于您实验的最佳体系。
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脱钙液
（一）酸性溶液脱钙法
1．硝酸-间苯三酚液：浓硝酸10ml，间苯三酚1g，通风橱内混合。
混合时会产生浓的棕黄色双硫磷烟雾。
然后加10%硝酸100ml。
骨组织块5mm 厚脱钙时间12-24 小时。
优点：该液脱钙速度非常快，大概是所有脱钙液中速度最快的一种脱钙液。
缺点：（1）细胞核染色很差。
（2）如果脱钙时间太长对组织有较大的损害。
（3）用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少24小时。
（4）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
2．硝酸水溶液：浓硝酸5-10ml，蒸馏水加至100ml。
厚度5mm 骨组织块脱钙12-24 小时。
优点：（1）硝酸水溶液是一种迅速的脱钙液。
（2）对组织损害较少，细胞核着色比福尔马林-硝酸液要好。
（3）组织可直接通过70%乙醇去除酸。
缺点：脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。
3．福尔马林-硝酸液：40%甲醛5ml，浓硝酸10ml，蒸馏水85ml。
5mm 厚的骨组织块脱钙时间需要1-3 天。
优点（1）福尔马林-硝酸液是一种迅速的脱钙液。
（2）该液脱钙的组织比间苯三酚-硝酸液细胞核染色好。
（3）可作为紧急活检脱钙用。
（4）该液和5-10%硝酸水溶液一样对组织几乎没有损害。
缺点：（1）该液对细胞核作用较慢，使细胞核着色较差。
（2）用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少12小时。
4．Perenyi’s 液：10%硝酸4 份，0.5%铬酸3 份，无水乙醇3 份。
5mm 厚的骨组织块脱钙时间需要2-7 天。
优点：（1）该液是一种温和的脱钙液，可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。
（2）细胞核和细胞浆细微结构着色均好。
（3）推荐该液作为常规脱钙使用。
（4）组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。
脱钙组织直接移到90% 乙醇中。
缺点：（1）脱钙较慢，因此，紧急情况下不能使用。
（2）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
5．Von Ebener’s 液：饱和水溶液氯化钠50ml，蒸馏水50 ml，浓盐酸8 ml。
厚度5mm 骨组织块脱钙3-7 天。
优点：（1）细胞核染色相当好。
（2）不需要水洗，脱水时酸就会首先被脱出来。
缺点：使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
6．甲酸液：甲酸10ml，10%福尔马林盐90ml。
厚度5mm 骨组织块脱钙时间需要3-7 天。
优点：（1）脱钙同时可以对组织固定。
（2）对细胞核染色比较好。
（3）推荐用于小块组织和牙齿脱钙。
缺点：（1）脱钙比较慢，不推荐作为常规标本脱钙使用。
（2）不推荐作为密皮质骨脱钙使用。
（3）要用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少18 小时。
7．三氯醋酸液：三氯醋酸5g，10%福尔马林盐95ml。
厚度5m 骨组织块脱钙时间需要5-8 天。
优点：（1）对细胞核染色好。
（2）脱钙之后不需要水洗，酸乙醇可以去除。
缺点：（1）脱钙作用慢，仅仅推荐用作骨的细针脱钙。
（2）不推荐作为密皮质骨脱钙使用。
8．Flemming’s 液：1%铬酸15ml，2%四氧化锇4ml，冰醋酸1ml。
Flemming’s 液虽然是一种固定液可作为微细骨针脱钙用。
液体需要新鲜配制，并在容器底部会形成沉淀。
脱钙后如果直接通过乙醇可以形成不能溶解的色素。
脱钙之后标本必需充分流水冲洗去除过多的铬盐。
使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
用苏木精染色时细胞核受抑制。
9．AFIP 甲酸-柠檬酸钠液：A 液：甲酸25ml，蒸馏水25ml。
B 液：枸橼酸钠（结晶）10g，蒸馏水50ml。
临用时A 液和B 液等量混合，每日换 1 次，因为柠檬酸钠可以和钙离子螯合，具有促进脱钙的作用。
10．蒋维中（Jangweizhong’s）液：盐酸80ml。
甲酸70ml，三氯化钙50g，冰醋酸25ml 甲醛100ml，生理盐水900ml。
此液脱
钙迅速，0.5cm 厚的松质骨6-20 小时就可以完成脱钙。
对组织影响极小，染色效果好。
配制简便，脱钙后不需要用碱性液中和。
11、10%盐酸福尔马林液：40%甲醛5ml，浓盐酸10ml，蒸馏水85ml。
此液脱钙比较迅速，对组织影响极小，染色效果好。
配制简便，脱钙后流水冲洗。
一般用于骨髓或含钙成分较少的组织脱钙。
12、30%盐酸福尔马林液：40%甲醛5ml，浓盐酸30ml，蒸馏水65ml。
此液脱钙迅速，对组织影响极小，染色效果好。
配制简便，脱钙后流水冲洗。
（二）螯合脱钙剂脱钙法
EDTA 是一种良好的脱钙液螯合剂，它对组织破坏极小，不产生气泡，不影响染色，如果加温至37℃，可以加快脱钙速度。
EDTA 脱钙液：乙二胺四乙酸（EDTA）5.5g，10%中性福尔马林100ml。
厚度5mm 骨组织块脱钙时间需要7-21 天。
优点：（1）经EDTA 脱钙的组织染色结果好。
（2）对组织的结构损害小。
（3）用化学方法测试可以确定脱钙的终点。
缺点：（1）脱钙速度相当慢，不适合常规标本脱钙使用。
（2）脱钙后组织会稍微变硬。