甲酸脱钙液
三种关节组织脱钙液的应用比较
骨组 织脱 钙 技 术 是 病 理 实 验 室 常 用 技 术 之 一 ，直 接 关 系 到 骨 组 织 切 片 的制 备 和 观 察 。 大 鼠关 节 组织 制 片 的关 键 步骤 即是 脱 钙 ，其 直 接 影 响 到 制 片 的 成 败 。选 用 合 适 的脱 钙 液 进 行 脱 钙 ，既 能 较 快 达 到 脱 钙 目的便 于 切 片 ，又 不 破 坏 组 织 结 构 完 整 性 影 响 后 期 染 色 。 因此 制 备 病理诊 断 所 需要 的理 想 标 本 ，显 得 十分 必 要 。本研究 在 大 鼠关 节组 织石 蜡 制 片 实 验 中 ， 分 别用 Ｓｃｈｒｉｄｄｅ液 、５％ 甲盐酸 和 １５％ ＥＤＴＡ对 关 节 组织 进行 脱 钙 处 理后 制 片染 色 ，镜 下观 察 脱 钙 效果 及着 色 效果 ，从 中选 择 一种 较 为适 宜 的关 节组 织脱 钙方 法 。 ｌ 材料与方法 １．１ 标本 制备 选 取 大 鼠踝 关 节组织 标 本 ，共 计 ３Ｏ个 ，经 １２％ 中性 甲醛 液 固定 ４８ ｈ后备 用 。 １．２ 试 剂及 仪 器 所有 试剂 均 为 国产 分 析纯 。 ＣＨ３０光学 显 微 镜 ，奥 林 巴斯 株 式 会 社 ；ＬＥＩＣＡ ＴＰ１０２０组 织 自动脱 水机 ，德 国球 卡仪 器 有 限公 司 ；ＴＢ一７１８Ｅ生 物组 织 自动 包 埋 机 ，湖 北 泰 维 医疗科 技有 限责任 公 司 ；ＬＥＩＣＡ ＲＭ２３５轮转 切 片机 ，德 国球 卡仪器 有 限公 司 ；ＴＲ一１８０生 物组 织 自动染 色机 ，湖 北 泰 维 医疗 科 技 有 限责 任 公 司 。 １．３ 脱 钙 液 的 配 制 Ｓｃｈｒｉｄｄｅ液 ：２０ ｍ１浓 硝 酸 加 １００ ｍｌ １２％ 中性 甲醛 溶 液配 制 而成 。５％
不同脱钙液对钙化性主动脉瓣膜脱钙效果的比较
不同脱钙液对钙化性主动脉瓣膜脱钙效果的比较李灿波;李海清;叶晓峰;赵强【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2015(035)008【摘要】目的比较不同脱钙液对钙化性主动脉瓣膜标本的脱钙效果.方法选择6例主动脉瓣钙化患者的病变瓣膜标本,每个瓣膜等分成3份后随机分配到5％硝酸(硝酸组)、10％甲酸(甲酸组)、10％ EDTA(EDTA组)溶液中进行脱钙,观察和比较各组病理切片的苏木精-伊红染色(H-E染色)和免疫组织化学染色效果.结果 EDTA 组脱钙速度较慢,但显示瓣膜组织结构完整,形态清晰,脱钙及免疫组织化学染色效果最佳.硝酸组脱钙时间最短,也能获得良好的脱钙效果.甲酸组脱钙时间较短,但脱钙效果最差.结论在钙化性主动脉瓣的病理学研究中,EDTA脱钙液仍是脱钙的最佳选择.而在考虑时间因素的情况下,硝酸脱钙液则是良好的替代.甲酸脱钙液由于对钙化瓣膜的脱钙效果较差,不推荐使用.【总页数】4页(P1234-1237)【作者】李灿波;李海清;叶晓峰;赵强【作者单位】上海交通大学医学院附属瑞金医院心脏外科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院心脏外科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院心脏外科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院心脏外科,上海200025【正文语种】中文【中图分类】R542.52【相关文献】1.三种不同脱钙液在骨组织石蜡切片中的应用比较 [J], 杜洪;金荣2.临床病理检验中不同骨组织脱钙液效果的比较 [J], 李玉莲;徐晓艳3.不同脱钙条件下三种脱钙液脱钙效果的比较 [J], 陈敬文;张伟;王天娲;程俊;罗金风4.不同成份脱钙液对骨组织脱钙效果的比较 [J], 祁宏枝; 罗添友; 唐涛5.三种脱钙液对狗牙齿及牙槽骨脱钙效果的比较 [J], 于洪藻;李玉林;张丽红;王成坤;蔡家骏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
骨关节炎兔膝关节样品两种脱钙方法的比较
２ 结 果
显微镜下观察细胞及细胞外基质的染色 情况与结构 的完整 性。脱钙液 Ｉ 制备的关 节炎兔膝 关节 的关节软 骨虽轮廓 尚存 ，
但 可 见 断裂 处 ， 示 关 节 软 骨 的 完 整 性 已 被 破 坏 。软 骨 呈 红 黑 显
色， 其间可见成簇 的软骨细胞 ， 软骨各层难 以分辨 。软骨 下骨 但
呈 红 黑 色 ， 少 蓝 色 或 绿 色 着 色 ， 结 构 不 完 整 。部 分 样 品 上 ， 较 其 关节软骨 与软 骨 下 骨 之 间 的连 续 性 丧 失 ， 现 断 裂情 况 （ 出 图
１ 。 Ａ）
脱 钙液 ２ 所制备样 品显示 ， 兔膝关 节软 骨及 软骨 下骨结构
完 整 ， 节 软 骨 呈 红 色 ， 骨 下 骨 呈 蓝 绿 色 ； 节 软 骨 内 软 骨 细 关 软 关 胞 清 晰 可见 ， 为 成簇 分 布 ； 骨各 层 亦 清晰 可 辨 （ １ ） 多 软 图 Ｂ。
１ １ 材 料 ．
脱 钙 不 足或 过 度 ， 钙 液 中 的酸 性 物 质 较 多 ， 对 组 织 中 的抗 原 脱 会 损 害较 大 ， 影 响组 织 细胞 的形 态 结 构 。所 以 ， 择 适 当 的脱 钙 均 选 液 是制 作 骨 组 织 切 片 的关 键 。 研 究 表 明 ， 甲酸 、 酸 和 氯化 铝 为 主要 成 分 的 脱 钙 液 所 制 以 盐 备 兔膝 关 节 股 骨 髁 样 品 和 完 整 大 鼠膝 关 节 样 品 ［ ， 以 显 示 完 ３可 ］
３ 讨 论
密切相关 。笔者运用 两种不 同方法对骨关节炎兔 膝关 节样 品进
行 脱钙 处 理 ， 寻求 如 何 能 够 在 不 破 坏 组 织 结 构 及 影 响染 色 的 以
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响作者：张大贵等来源：《中国现代医生》2012年第24期[摘要] 目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。
方法选择12例骨组织，随机分为3组。
A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。
结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。
PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。
结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。
但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。
硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。
[关键词] 脱钙液；骨组织；免疫组化染色[中图分类号] R446.4+1 [文献标识码] B [文章编号] 1673—9701（2012）24—0101—03骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。
如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。
本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。
1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。
1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。
骨髓活检标本脱钙及除酸方法的改良
骨髓活检标本脱钙及除酸方法的改良骨髓病理在某些血液病的诊断中起着关键性的作用，但是由于骨髓塑胶包埋成本较高的缘故，好多医疗单位骨髓病理都没有作为常规工作开展，本文介绍应用50%的甲酸甲醛水溶液对骨髓病理标本进行脱钙处理2小时左右，并在切片染色前用5%的碳酸钠除去残留酸。
本法简单、方便，低耗、高效。
适合一般单位日常工作。
标签：骨髓;活检标本;脱钙;除酸;改良HGF染色过程为：Harris苏木素染色2-3分钟，流水冲洗3-5分钟，姬姆萨染2-3分钟，流水冲洗3-5分钟，酸性品红染色10-15秒，流水冲洗3-5分钟，75%、85%、95%乙醇3-5秒，无水乙醇1分钟脱水、透明、封固。
结果：本法处理的细胞结构完整，染色效果理想，各系各阶段细胞区分明显，核浆对比清楚。
免疫组织化学染色：常规操作如下：1）标本以2um厚连续切片，全部切片在60℃低温烘烤1～2小时备用。
2）石蜡切片经二甲苯脱蜡3次，每次10分钟。
3）放入的无水乙醇3次后水化，每次3分钟。
4）蒸馏水洗3分钟，5%的碳酸钠处理本法切片3-5分钟。
5）PBS 3次，每次3分钟。
6）3％H2O2去离子水（无色液体）孵育10分钟，以消除过氧化物酶活性。
7）PBS3次，每次3分钟后，按照要求进行抗原修复。
8）滴加一抗，37℃孵育1小时。
9）PBS冲洗3次，每次3分钟。
10）滴加酶标记的二抗，37℃孵育15分钟。
11）PBS冲洗3次，每次3分钟。
12）滴加显色剂。
13）自来水充分冲洗，清除残留显色液。
14）淡苏木素复染细胞核，自来水充分冲洗。
15）70％、80％、90％、95％、100％酒精脱水各一次，每次1分钟。
16）二甲苯透明2次，每次6分钟。
17）中性树胶封片。
结果：染色结果明显、阴阳对比清楚。
讨论：在以往的工作中，由于采用无机强酸，尽管浓度较低，时间仍不易控制，需要随时观察，否则可能会脱钙不彻底或脱钙过度，若脱钙不彻底，制片难度加大，甚至切不出蜡片。
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。
方法选择12例骨组织，随机分为3组。
A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA 脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。
结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。
PLANK 脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。
结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。
但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK 脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。
硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。
标签：脱钙液；骨组织；免疫组化染色骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。
如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。
本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。
1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。
1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。
③脱钙液Ⅲ：PLANK脱钙液，配制方法为氯化铝10 g，甲酸50 mL，10%福尔马林10 mL，冰乙酸1.5 mL，加蒸馏水至总体积100 mL。
骨组织甲酸脱钙浓度探讨
脱钙终点是充分利用两次取材 的间隔时间 ．下一次取材前检
查脱 钙 情 况 ， 后 用 水 冲 洗 残 余 的 甲酸 ２ ～Ｏｍ ｎ 无 须 特 别 然 ０３ ｉ， 提 示 ， 常 方便 ， 践 证 明 效 果 很 好 ， 数 骨 组 织 都 能 在 ２ 非 实 多 ４ｈ 脱 钙好 。 当 然 由 于 甲 酸 是 弱 酸 ， 果 是 硬 的 皮 质 骨 脱 钙 时 如
我 ｆ对 ２ ０例 骨 组 织 经 不 同浓 度 甲酸 脱 钙 后 的切 片 、 ｆ 】 ０ 染 色 结 果 分 ４级进 行评 价 。ｔ ： 片完 整 ， 明显 刀痕 ， Ｅ染色 』切 亡 无 Ｈ 核 质 清 晰 ， 质 鲜 艳 ； ： 片 完 整 ， 少 量 刀 痕 ， Ｅ染 色 核 胞 良 切 有 Ｈ
理想 ， 但染色不稳定 ， 核质有时偏 浅 ， 胞质有时偏红 ， 这可能是
甲酸 浓度 偏高 ，时 间偏 长 ，对组 织 结 构 有 所 破 坏 的缘 故 。经 ４ ％ 、０ ０ ３％甲 酸 脱钙 液 脱钙 的组 织 切 片 效 果 理 想 ， 色 稳 定 染 染 色 结 果 与不脱 钙 的组 织 比较 差 异 无 统 计 学 意 义 ；０ ４ ％与 ３ ％ ０ 甲酸 脱 钙 液 切 片 、 色 效 果 差 异 无 统 一 意 义 ， ３％ 甲 酸 染 学 丽 ０ 脱 钙 液 较 ４ ％甲 酸脱 钙 液 更 能 节 约 试 剂 成 本 。 实 践 证 明 ： ０ 为 了保 持 组 织结 构 的 完 整性 ， 细胞 核 的稳 定 性 ， 质 染 色 的埘 比 核 性 ， 钙液 的 浓 度 脱 钙 时 间 必 须 控 制 在 最 低 限 度 ， 此 ， 脱 ｊ 因 ３ ％甲酸 脱 钙 液作 为 日常 ： 液是 较 好 的 选择 。 ０ １ 作 脱 钙 剂 的温 度 越 高 脱 钙 速 度 越 快 ． 对 组 织 损 伤 也 越 严 但 重， 一般 在 ２ ～ ５（常 温下 最 适 宜 ； 仃选 择 常 温 下 ２ ０２ ＝ ｃ 我 】 ４ｈ为
脱钙液的配制
脱钙液配制30%盐酸溶液1000 ml(10%中性福尔马林液700 ml+浓盐酸300 ml)加入140 g 氯化钠,待其完全溶解后再加入20 ml冰醋酸。
在日常病理技术工作中,有多种对骨骼的脱钙方法和脱钙组织切片的制作方法,本文所述脱钙方法和脱钙液从脱钙速度,对组织的损伤程度以及切片染色等方面效果都比较理想,这种脱钙液与其他酸类脱钙液相比较,对组织损伤小,脱钙时间短,并作用温和,其中30%的盐酸溶液对脱钙组织造成的损害较小,对组织不膨胀,不至于导致脱钙过程缓慢,但核染色不佳。
加入氯化钠可以防止脱钙组织因经过盐酸脱钙后导致的切片染色偏红,加入冰醋酸可使脱钙组织软化,有利于切片,从而使制片效果更加理想。
对照组以单纯30%盐酸为主的脱钙液与新方法脱钙液对同等体积、大小、部位相同的骨组织同时进行脱钙,前者制作的骨骼切片不平整,染色偏红,胞核红染,核质不清晰,切片整体组织结构显示不清。
经新方法脱钙后所制作的切片组织结构显示清晰,切片中的软组织和骨组织结构均可完整显示,细胞染色清晰,核质对比鲜明,制片中所用的固定剂、脱水剂、透明剂等都为日常技术工作必备试剂,而且制作出的切片效果很好,在本方法中所用的固定、脱水、透明、浸蜡、染色试剂都可以数次重复使用,试剂配制和操作方法简单,值得临床推广应用。
王淑兰，制作骨骼组织切片的新脱钙液改良的Plank·Rycho脱钙液的配制:氯化铝7g ,盐酸815ml ,甲酸5ml ,甲醛15ml ,TritonX-1000.5ml ,蒸馏水100ml。
为了保持良好的骨组织形态结构,达到脱钙目的,我们在Plank·Rycho脱钙液中加入甲醛和TritonX-100 ,更加充分发挥各自的作用,使固定、脱脂、脱钙同时进行。
甲醛不仅是优良的固定剂,还可适度保护组织免受酸的侵蚀。
TritonX-100 (聚乙醇辛基苯基醚)是一种表面活性剂,虽不具备脱钙作用,但能溶解脂质,改善细胞膜的通透性〔1 ,2〕,使骨组织中的脂质在短时间内脱去,加快了脱钙速度。
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甲酸脱钙液
简介：
在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。
这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。
对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。
然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。
用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。
在有机酸中，甲酸、乙酸比较适合于骨髓组织脱钙。
甲酸脱钙液是一种使用范围广泛的脱钙剂，但是该法脱钙速度太慢，不适合密皮质骨的脱钙。
Leagene 甲酸脱钙液主要由甲酸、福尔马林等组成。
其优点：①对细胞核染色结果较好；②兼具脱钙和组织固定的作用；③适用于小块组织和牙齿的脱钙。
其缺点：①脱钙速度比较慢，不适合常规标本脱钙使用；②不适合密皮质骨脱钙使用；③脱钙后需要硫酸钠溶液进行碱处理。
组成：
自备材料：
1、 PBS
2、 蒸馏水
3、 5%硫酸钠溶液
操作步骤(仅供参考)：
1、 骨组织脱钙时，取材不易过厚。
2、 组织固定后，用PBS 清洗。
3、 组织用蒸馏水洗清洗。
4、 组织转移至甲酸脱钙液中，脱钙3～10天或更长时间。
如有必要，更换新的甲酸脱钙液继续脱钙直至终点，多数组织脱钙1周即可。
5、 用蒸馏水冲洗数次。
6、 组织立即入硫酸钠溶液进行碱处理。
7、 充分流水冲洗。
8、 常规脱水、包埋。
编号 名称 DD0012 Storage 甲酸脱钙液 500ml RT 避光 使用说明书 1份
注意事项：
1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙3~10天即可。
2、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。
脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。
3、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。
4、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
附录：
脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。
物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。
相关：
编号名称
DB0082 改良番红O-固绿软骨染色液
DF0111 中性福尔马林固定液(10%)
DG0005 糖原PAS染色液
DH0006 苏木素伊红(HE)染色液液
DZ0209 脱钙终点检测试剂盒(化学法)
IH0091 多聚赖氨酸溶液(10×PLL,1mg/ml)
TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。