高效液相色谱法同时测定葛根散中葛根素、大豆苷的含量
葛根素注射液—葛根素的测定—高效液相色谱法
山东省药品检验所250012葛根素注射液为新型血管扩张药，用于冠心病、心肌梗塞、心绞痛的治疗，其主成分葛根素为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi 的干燥根中提取、分离得到的以葛根素为主的异黄酮苷类，其含量测定方法，卫生部药品标准(试行)［1］为紫外分光光度法。
在生产和检验过程中发现，按100 %投料，紫外法测定其含量可达标示量的103 %左右，经薄层检查，其原料葛根素含杂质，易导致注射液测定含量偏高。
本文采用高效液相色谱法，使葛根素与杂质得到良好分离后，测定葛根素的含量，其方法准确，结果可靠。
1 仪器与试药TSP高效液相色谱仪(包括P 2000泵，AS 3000自动进样器，UV 2000检测器，IBM 350—450 DX2数据站)。
葛根素对照品(中国药品生物制品检定所提供)；对-羟基苯甲醛内标物(山东省药物研究所精制，色谱纯)。
乙醇(优级纯)，重蒸馏水，丙二醇(分析纯)，葛根素注射液(烟台中策药业有限公司提供)。
2 色谱条件色谱柱：Turner C18H37，5 μm 4.6 mm×150 mm；流动相：乙醇—水(43∶207)；流速：1 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：250 nm；理论板数按葛根素计，不低于3000，与内标峰分离度大于5。
3 线性关系试验取对-羟基苯甲醛适量，加流动相制成0.5 mg/mL的内标溶液。
取105 ℃干燥至恒重的葛根素对照品适量，精密称定，用流动相溶解，制成0.3 mg/mL的溶液，精密取该溶液1、3、5、10、20 mL，分别精密加入内标溶液10 mL，摇匀，取各溶液10 μL进样，记录色谱图(见图1)。
以葛根素峰面积和内标峰面积之比Y与浓度X(mg/mL)做线性回归，得回归方程为：Y＝11.98X+5.673×10-3r=0.9991即葛根素在0.027～0.2 mg/mL浓度范围内线性关系良好。
图1 色谱图1.葛根素2.内标3～6.杂质4 校正因子的测定取在105 ℃干燥至恒重的葛根素对照品约20 mg，精密称定，置100 mL 量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，精密取该溶液与内标溶液各10 mL 混匀，取10 μL进样，记录色谱图，按对照品与内标的峰面积比计算校正因子。
高效液相色谱法测定川葛颗粒中葛根素的含量-最新年文档
高效液相色谱法测定川葛颗粒中葛根素的含量试药：葛根素对照品,由中国药品生物制品检定所提供（批号：725-200108，供含量测定用）。
甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
色谱条件与系统适用性试验：①色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（25∶75）为流动相；检测波长为250nm。
理论板数按葛根素峰计算应不低于5000。
②对照品溶液的制备：取葛根素对照品约10g，精密称定为9.04mg，置100ml 量瓶中，加30％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置20ml量瓶中，加30％乙醇至刻度，摇匀，即得。
③供试品溶液的制备：取本品装量差异项下内容物，研细，混匀，取约1g，精密称定置具塞锥形瓶中，精密加入30％乙醇50ml，称定重量，超声处理（功率100W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
④测定法：精密吸取对照溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
⑤空白试验：按供试品溶液制备时取样量，折算成处方中除葛根外其他药材的取样量，按制法制成空白颗粒，再按供试品溶液制备方法制成空白溶液。
取一定量的对照品、供试品及空白溶液，按上述色谱条件审查，结果供试品及对照品溶液在相应的保留时间处有吸收峰，而空白溶液无吸收，说明空白溶液无干扰。
结果方法学考察:线性关系的考察：精密吸取对照品溶液2、5、10、15、20μl,按上述色谱条件分别注入液相色普仪，测定峰面值，以峰面积积分值为纵坐标，以进样量为横坐标，结果见表1。
回归方程：Y＝4343279.44X＋2667.00，γ＝0.9999[LL] 试验结果表明：葛根素对照品在进样量0.0904～0.9040μg 范围内，才能与峰面积呈良好的线性关系。
精密度试验：吸取对照品溶液10μl，连续进样5次，依法测定，结果见表2。
由上所示，本方法有良好的精密性。
稳定性试验：取批号050508样品，同一供试品溶液，依法测定，相隔一定时间进样一次，试验结果表明，葛根素在供试品溶液中24小时内是稳定的。
HPLC法快速分析葛根中的葛根素和大豆甙
#) !
精密度 取同一样品溶液， 进样量为 %$!(， 重复 " 次， 结果
见表 +。
注： 上图为标样， 下图为葛根提取液。% 葛根素 # 大豆甙
6
结论 以上结果表明，采用微波短时间歇处理样品并结
图!
葛根素和大豆甙的色谱图
%&’( ""， )&( * !! "##$，
《食品科学》
表! 含 量+, 精密度实验 平均值 "( $!0 #( !*1 "( $/! #( !*! 标准偏差 #( #$01#2 #( #"1#""
经对两种提取方法的 > 均值进行 1 检验， 1 ? %) 6%
种类
部位
@1 $) $"A %B ? #) %$，说明微波辐射处理 #478 与超声波提 葛根素 块根 藤 取 6$478，对葛 根总异黄酮的 提取效果无 显著性差 异。 表 % 中的标准偏差和变异系数均较小， 表明二者的 “ ” 精密度较高； 同时也说明了本 样品处理 方法基本能 消除微波的不均匀性。因此， 在适当的温度下， 采用微 波间歇处理实现葛根总黄酮的快速提取是完全可行 的。 #) # 色谱的定性与分离 采用保留时间对照法和标准追加法确定葛根素和 （见图 %） 葛根素、 大豆 大豆甙峰的位置 。从图 % 可知， 甙与其它组分达到了较好的基线分离，二者的保留时 间分别为 +) 6B478 和 B) %"478。
;@=
（色谱纯）乙酸铵、 （均为分析 甲醇 乙醇 %) %) # 试剂： （自制） 纯）超纯水 葛根素对照品购于中国药品生物制 品检定所 大豆甙对照品购于中国医学科学院药物研 究所 %) %) @ 仪器：5/3-.G !$$ 色谱泵和 #"CD 双波长紫外 检测器 采用随机的 H0((-I,J@# 色谱数据处理系统进 行数据分析处理 岛津 K& < %F$ 紫外可见分光光度计
高效液相色谱测定葛根素注射液中葛根素的含量
高效液相色谱测定葛根素注射液中葛根素的
含量
葛根是一种常用中药，具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻之功效，葛根素是葛根中的主要活性成分之一。
呈白色针状结晶，能溶于水，但溶解度小，其水溶液为无色或微黄色。
具有改善心脑血管循环、降低心肌耗氧量，降低血糖，防止高血压及动脉硬化，提高机体免疫力，抗菌，抗病毒等多种药理作用。
葛根素因毒性小，安全范围广，疗效好而极具临床应用价值。
目前市场上葛根素有多种剂型，但是其剂型和标准各不相同，本文比较了两种葛根素注射液的外观质量和内在质量，并用HPLC测定了其主要有效成分葛根素的含量，具有方便、准确，便于控制产品的质量等优点。
仪器准备
仪器简介
LC-600A智能全控液相色谱系统由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。
使用WS600工作站可以同
时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等，实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。
应用领域
化合物检测、法医毒物分析、蛋白质组学食品检测、药物分析、环境分析、聚合物分析
色谱条件：
色谱柱
SymmetryC18柱（3.9mm×150mm，5μm）
流动相
甲醇-水（体积比为35:65）
检测波长
250nm
进样量
10μL
流速
1.0ml/min
谱图分析：。
高效液相色谱法测定葛根素注射液中葛根素含量
参考文献
1. 彭兆斌, 范艳冰，汤婉. 高效液相色谱法测定颈康胶囊中葛 根 有 效 成 分 葛 根 素 的 含 量 [J]. 世 界 中 西 医 结 合 杂 志 , 2009,4(7):480-482
2. 王红团,吉训恋. HPLC测定健听颗粒中葛根素含量[J]. 中国 中药杂志, 2008,33(15):1916-1917
色谱条件
色谱柱：VP-ODS(1504.6mm)
流动相：甲醇/0.1%柠檬酸=40/60（体积比） 流量：1.00 mL/min 检测波长：250 nm 进样量：10μL
依次测定对羟基苯甲醛内标液、葛根素标样在该色 谱条件下的峰面积，记为A对（标） 、A葛（标） 测定样品溶液中对羟基苯甲醛内标液及葛根素在该 色谱条件下的峰面积，记为A对（样） 、A葛（样）
蛋白质是重要的生物大分子，是体内生物功能的执 行者。高效液相色谱法是用于制备高纯度蛋白质和多肽 等生物制品的主要方法。我院耿信笃教授领导的现代分 离科学研究所在蛋白质分离纯化领域具有深厚的基础， 并进行与之有关的学科前沿研究。
色谱柱是液相色谱的心脏，因此高性能色谱填料的 开发一直是色谱领域的主要研究内容之一。我院卫引茂 教授课题组在高选择性和高容量色谱分离介质制备方面 进行了一系列创新性研究工作。
1. 溶液配制
内标液
准确称取0.6250 g对羟基苯甲醛于500 mL容量瓶中，
用甲醇稀释至500 mL，得1.25 mg/mL的内标溶液。 葛根素标准溶液 准确称取25 mg葛根素纯品（99%）于50 mL容量瓶 中，用甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀备用。
准确移取上述标准溶液1.00 mL于10 mL容量瓶中，
高压泵
泵体材料耐酸、耐碱、耐化学腐蚀 耐压30 ～ 60MPa，能连续工作 输出流量稳定，重复性佳 输出流量范围宽，对填充柱：0.1 ～ 100mL／min
高效液相色谱法测定葛根中葛根素的含量
和葛 根样 品溶 液 各 2 L 0 ,进 入 高 效 液相 色谱 仪
维普资讯
20 0 8年第 1 0期
25 m . 0n
中 国饲 料
表 3 葛根素的 回收率
24 3 作 曲线 称 取 0 1 根 素 标 准 品 , . - . 0g葛 0 用
w s la dtem bl p a e a ta o: a r( 5 5 , eU ee t n w v ln t a 2 0n T ee a o d l e r a 8 n o i h s w s h n l t 2 : )h V d tc o a e ghw s 5 m. r w s o n a C h e me w e 7 t i e h g i r a o s i i i te cn e t t nrn eo 0～1 0 I / f u rr a i P ea a o aa r 0 9 9 . ea — e t n hpw t nh o c nr i g f li h ao a 2 4 g ~ mL o p eai i R dx u r ieL b t nn r e(= . 9 ) h V 9 T
3 0%乙醇溶 液溶 解 并定 容至 2 ,该溶 液浓 度 5mL 为 4 0 ~ / L 移 取 葛 根 素 标 准 贮 备 液 0 gm .
05 1 ,.,., .,.,. mL分别 用 3 .. . 1 20 25 30 3 0 5 5 0%乙醇 溶 液稀 释并 定 容 至 1 L 0m .其 相 应 浓 度分 别 为 : 2 ,0 6 ,0 10 10 10~ / L 现 配现 用 .分 0 4 ,0 8 ,0 ,2 ,4 gm .
维普资讯
中 国饲 料
20 0 8年 第 l 0期
HPLC测定葛根中葛根素和大豆苷的含量
蒸 馏 水 ；其 他 试 剂 均 为 分 析 纯 。 ２ 色谱 条 件 色 谱 柱 Ｂ ｓ ｎＡ ａ ｔ ｏｔ ｎｌ ｉ ｏ ｙ ｃ柱 （ ． ２ ０ ｍ，３ ４ ６× ５ ｍ ｍ） ；流 速 ０ ５ Ｌ ・ ｎ ；检测 波 长 为 ２ ０ ｍ；流 动相 为 乙腈 （ ． ｍ ｍｉ～ １ｎ Ａ）
（ｏｔｉｉｇ ．５ Ｈ Ｐ ４ａｄ０ ０ ％ ｔｒｅｅ ｙ ｍ ｎ ） ．Ｔ ｅｆ ｗｒｔ ｗ ｓ ． ｍ ｉ ｃｎａｎ ０ ％ ３ Ｏ ｎ ．５ ｈｅ ｔ ｌ ｉｅ ｎ０ ｈａ ｈ ｏ ｅ ａ ５ Ｌｍｎ一１ ｕｒｒ ｎ ａ ｚ ａ ｏ ｉｒｄａ ｌ ａ ０ ．Ｐ ｅａｉ ａｄｄｉ ｉ ｗ ｓ ｎｔ ｅ ｔ ｎ ｄｎ ｍ ｏ
素和大豆苷的测定 。
【 关键词】 高效 液相色谱 ；葛根 ；葛根 素；大豆苷 【 中图分类号 】Ｒ ２． ９７２ 【 文献标识码 】 Ａ 【 文章编 号】１０ ８ １ （０２ ９ ０３ — ３ ０７— ５７ ２ １ ）０ — ０ １ ０
Ｓｔ ｄｙ ｎ ｅ ｅ ｍ ｉ ｔｏ ｏｆＰｕｅ ａ ｉ ｕ ｏ Ｄ ｔ ｒ ｎａ ｉ ｎ ｒ ｒ ｎ ａｎｄ ｄａ ｄ ｉ ｎＰｕｅ ａ ｉ ｉｚｎ ｉ ｒ ｒａｅ
Ａｂｔａｔ ｓｒｃ ：Ｏｂｅｔ ｅ ｉ ｅｆ ｍａｃ ｑ ｉ ｃｒｍ ｔ ｒｐ ｙｍ ｔｏ （ Ｌ ｊｃｉ ：Ｈｇ ｐｒ ｒ ｎｅｌ ｕｄ ｈｏ ａ ｇａ ｈ ｅｈｄ ＨＰ Ｃ）ｆｒｈ ｅ ｒ ｎｔ ｎｏ ｕｒｒ ｎｐ ｅａｉ ｖ ｈ ｏ ｉ ｏ ｏ ｅｄｔ ｍｉ ｉ ｆ ｅａｉ ｉ ｕｒｒ ｅ ｔ ｅ ａｏ ｐ ｎ ａ ｌ ａ ｅｒｄｘ ｙｏｔ ｉｎ ｈｏ ａ ｇａ ｈ ｏ ｄｔｎ ａ ｓ ｄｅ．Ｍ ｅｈｄ：Ｔ ｅｍ ｂｌ ｐ ａｅｃｎｉｅ ｆ ｃｔ ｉｉ （ ） 一 ａ ｒ ｏ ｔ ｉ ｂ ｉ ｚ ｇｃｒｍ ｔ ｐ ｙｃｎｉｏｓ ｓ ｔ ｉｄ ｂ ａ ａ ｐｍ ｉ ｏ ｒ ｉ ｗ ｕ ｔｏ ｈ ｏ ｉ ｈｓ ｏｓ ｔｄｏ ａｅ ｎｔｌ Ａ ｅ ｓ ｏ ｒｅ ｗｔ ｅ
高效液相色谱法测定葛黄颗粒中葛根素的含量
葛黄颗粒为解放军 ２１医院 自制制剂 ， ５ 由葛根 、 黄 芩等药材加 工而成 ， 有解痉 止痛 、 具 活血 化瘀 、 生津 止
渴之功效。主要用于高血压 、 头疼 、 眩晕 、 心病、 冠 心绞 ｐｃ ＰＯ Ｓ（． ． Ｓｉ ａｋＶ —Ｄ ４ ６ ｍ
［ ｂｔ ｃ］ ＯｂｅｔｅＴ ｓｂｉ ｅｏｍｎｅｌｕ ｈｏ ａ ｇａｈ ｅ ｏ ｒ ｅ ｒｉａｏ ｅ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｊｃｉ ｏ ｔ ｌｈａ ｔ ｈｐｒｒ ａｃ ｑｉ ｃｒｍ ｔ ｒ ｙ ｔ ｄｏ ｔｍｎｔｎｏｐ ｒ ｖ ｅ ａ ｓ ｎｒ ｇ ｆ ｉ ｄ ｏ ｐ ｍ ｈ ｆ ｄｅ ｉ ｆｕ －
Ｕ ｕ ｐ ｎ ， Ｉ ｉ — ｕ ＹＯＵ Ｇｕ ｎ — Ｙ － ｉ ｇ Ｌ Ｕ Ｊｎ ｈ ａ， ａ ｇｆ ｕ
Ｄ ｐ ｒ ｅ ｔ ｆ ｈ ｒ ｃ ， ｏ ２ ｓｉ ｌ ｆ Ｌ Ｚ ａ ｇ ａｏ ０ ５ ０ ， ｈｎ ｅ ａ ｍ ｎ ａｍａｙ Ｎ ． ５ ｐｔ Ａ，ｈ ｎｊ ｋ ｕ ７ ０ ０ Ｃ ｉ ｔ ｏＰ １ Ｈｏ ａ ｏ Ｐ ｉ ａ
ｈ ｔｏ ｓ ｏｄ ｉ ｅ ａａ ｌｙ， ｒｄ ｃｂｌｙａ ｄｓｎ ｉｖｔ Ｔ ｅｍｅｈ ｄ ｉ ｇ ｏ ｎｓｐ ｒ ｉｔ ｒｐｏ ｕ ｉｉｔ ｎ ｅ ｓ ｉｉ ． ｂ ｉ ｅ ｉ ｔ ｙ
［ ｙ ｗ ｒ ｓ ｈｇ ｅｆ ａ ｃ ｑ ｉ ｃｒｍａ ｇａ ｈ ；Ｇ ｈ ａｇｇａｕｅ ｐ ｅａ ｎ Ｋｅ ｏｄ ］ ｉ ｐ ｒ ｒ ｎ ｅｌ ｕｄ ｈｏ ｔ ｒｐ ｙ ｅ ｕ ｎ ｒｎ ｌ ；ｕ ｒｆ ｈ ｏ ｍ ｉ ｏ ｉ
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
摘 要：目的 建立同时测定葛根散中葛根素和大豆苷含量的方法。方法 色谱柱为Inertsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），乙腈-0.1 %磷酸水溶液（10:90）为流动相，葛根素、大豆苷检测波长为250 nm，流速1.00 ml/ min。结果 葛根素、大豆苷质量浓度与峰面积呈良好线性关系，葛根素和大豆苷的线性范围分别是1.4~90 μg/ml（r=1.0000），2.5~160 μg/ml（r=1.0000），加样回收率分别为97.57 %（RSD=1.75 %）和99.64 % （RSD=1.96 %）。结论 该方法快速、准确，适用于葛根散中葛根素和大豆苷的含量测定。 关键词：葛根散；葛根素；大豆苷；HPLC 中图分类号：R927 文献标识码：A 文章编号：1672-979X（2019）02-0124-03 DOI：10.3969/j.issn.1672-979X.2019.02.009
t/min A. 对照品，B. 样品，1. 葛根素，2. 大豆苷
Simultaneous Determination of Puerarin and Daidzin in Gegen Powder by HPLC
SHI Jin-min1, 2, ZHANG Cai-guang2, ZHOU Can1, WANG Jia1, YU Wen-feng1, YU Xu-ming1 (1. Department of Pharmacy, Shiyan People’s Hospital (The Affiliated People’s Hospital of Hubei University of Medicine),
葛根散是由甘草、干葛花、葛根、缩砂仁、 贯众等5种中药材组成，出自《儒门事亲》卷 十二，用于治疗饮酒过度，酒毒内蕴者[1-3]。该制 剂除贯众外均为药食两用药材，有研究表明，葛根 素和大豆苷为其主要活性成分[4]。因此，本实验首 次建立了同时测定葛根素和大豆苷2种指标性成分 的含量测定方法，可用于葛根散的质量控制，亦为 进一步开发保健品提供数据支持。
Shiyan 442000, China; 2. School of Pharmacy, Hubei University of Medicine, Shiyan 442000, China) Abstract: Objective To develop an HPLC method for determination of puerarin and daidzin in Gegen Powder. Methods The Inertsil C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) was used. Acetonitrile-0.1 % phosphonic acid (10:90) was used as the mobile phase. The flow rate was 1.00 ml/min. The detection wavelength was 250 nm. Results The linear range of puerarin and daidzin was 1.4-90 μg/ml (r=1.0000), 2.5-160 μg/ml (r= 1.0000), respectively. The average recoveries were 97.57 % and 99.64 %, respectively, with RSDs of 1.75 % and 1.96 %, respectively. Conclusion The established method is fast and accurate, which is suitable for the determination of puerarin and daidzin in Gegen Powder. Key Words: Gegen Powder; puerarin; daidzin; HPLC
食品与药品 Food and Drug 2019年第 21卷第2期
125
2 方法与结果[5-9] 2.1 色谱条件
色谱柱Inertsil C18柱（250 mm×；流速1.00 ml/min，柱温为35 ℃，进样 10 μl，葛根素和大豆苷检测波长250 nm；在此条 件下，葛根素和大豆苷色谱峰分离度，峰形等均符 合要求。色谱图见图1。
收稿日期：2018-06-07 基金项目：十堰市科学技术研究与开发项目（编号：16Y36）；十堰市科学技术研究与开发项目（编号：16Y40）；
湖北医药学院学生科研基金资助（编号：201810929064） 作者简介：石金敏，硕士，主管药师，研究方向：中药制剂研究 E-mail: weian510@ *通讯作者：余绪明，硕士，主管药师，研究方向：中药制剂研究 Tel: 0719-8637253 E-mail: 455594819@
124
食品与药品 Food and Drug 2019年第 21卷第2期
高效液相色谱法同时测定葛根散中葛根素、大豆苷的含量
石金敏1, 2，张彩光2，周 灿1，王 佳1，余文锋2, 余绪明1*
（1. 十堰市人民医院（湖北医药学院附属人民医院） 药学部，湖北 十堰 442000；2. 湖北医药学院 药学院， 湖北 十堰 442000）
1 仪器与试药 日 本 岛 津 L C - 2 0 AT 、 L C - 2 0 A 高 效 液 相 色 谱
仪；分析天平（FA2004，上海天平仪器厂）。 葛根素（批号：110752-201615）、大豆苷（批
号：111738-201603），均购于中国食品药品检定 研究院；葛根散（我院制剂室制备的水煎合剂，批 号：20180107，20180108，20180109）。乙腈（色 谱纯），水为纯化水，其他试剂均为分析纯。