银染操作步骤
银染方法总汇及注意事项

ptotocol是这样的,请看哪里不妥:蛋白银染步骤步骤溶液时间固定甲醇100ml冰醋酸25ml加双蒸水至250ml 30min冲洗双蒸水3次敏化甲醇75ml戊二醛(25%w/)1.25ml硫代硫酸钠(5%w/) 10ml醋酸钠(17g)加双蒸水至250ml 30min冲洗双蒸水3次银反应硝酸银溶液(2.5%w/) 25ml甲醛(37%w/) 0.1ml加双蒸水至250ml 20min冲洗双蒸水2次显色碳酸钠(6.25g)甲醛(37%w/) 0.05ml加双蒸水至250ml2-5min终止EDTA-Na22H2O(3.65g)加双蒸水至250ml 10min冲洗双蒸水3次建议使用silia的方法!!简单,快!本人的银染方法:1. 固定:100ml MeOH, 24ml H Ac, 56ml 0.04%HCHO, 20ml ddH2O,洗三次,每次>=20分钟;2. 50%EtOH洗PAGE胶三次,每次20分钟;3. 预处理:0.02%Na2S2O3 处理一分钟;4. 水洗:ddH2O漂洗三次,每次20秒;5. 染色:0.8ml 20%AgNO3+72ml 0.04%HCHO处理PAGE胶20分钟;6. 水洗:同上;7. 显色:25ml 12%Na2CO3, 24ml 0.04%HCHO, 1ml 0.02%Na2S2O3, 漂洗10-15分钟;8. 水洗:同上;9. 终止:50%MeOH, 12%H Ac,10分钟。
以上步骤从中科院生化所学来,过程和silia 的基本一致,不知道是否有出入,请大家指正。
谢谢!!!5.2.2.3 银染色1 银染液1(1000ml):甲醇50%乙酸12%甲醇500ml 冰醋酸120ml2 银染液2(1000ml):甲醇30%,乙酸钠0.4M,戊二醛0.5%,硫代硫酸钠0.1%,(含乙酸1-2ml)甲醇300ml 乙酸钠54.4g 戊二醛10ml 硫代硫酸钠1g 乙酸1-2ml3 显色液(1000ml) 无水碳酸钠2.5% 甲醛0.02%无水碳酸钠25g,甲醛1.5ml4 硝酸银(100ml):20%硝酸银(过滤后待用)染色步骤:1 银染液1 洗2次,每次5分钟2 银染液2 洗1次,每次30分钟3 超纯水洗2次,每次1分钟4 0.5%硝酸银洗30分钟5 超纯水洗5次,每次1分钟(关键步骤,共计5分钟)显色液显色6 看到各条带,则倾去显色液, 1%乙酸中止我感觉浸银后、显色前的水洗非常关键,时间不能太长,次数不能太多,否则可能会染不上颜色。
蛋白质染色(银染法)标准操作规程

蛋白质染色(银染法)标准操作规程(编号:041)
1、目的及适用范围
检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质,实验原理是在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以使银颗粒沉积在蛋白带上。
染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关,不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。
2、主要仪器
摇床、避光盒
3、试剂及配制方法
乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛,去离子水
固定液:100mL乙醇(40%乙醇),25mL冰醋酸(10%冰醋酸)加水到250mL;
致敏液:75mL 乙醇(30%乙醇)17g 乙酸钠,28.2g 三水乙酸钠(34g乙酸钠),0.5g硫代硫酸钠加水到终体积250mL;
银染液:0.625g AgNO3,100 uL37%甲醛(在使用前加入)加水到终体积250mL;
显色液:6.25 g Na2CO3,50 μL 37%甲醛(在使用前加入)加水到终体积250mL;
终止液:3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸加水到终体积250mL
保存液:1% 冰醋酸
4、操作步骤
4.1固定:50mL固定液中固定30min或者更长时间
4.2致敏:50mL致敏液中致敏30min
4.3水洗:3 x 10min
4.4银染:50mL银染液中染20min (保持避光)
4.5水洗:2 x 1 min (注意把握时间,水洗时间长显色速度慢,点的颜色偏黄色)
4.6显色:50mL显色液中显色,时间视显色程度而定
4.7终止:50mL终止液中终止10min
4.8保存:1% 冰醋酸,4 ℃
5、注意事项
88。
基本银染和微波快速银染步骤-中文翻译

基本的银染步骤:(90min)材料:超纯水(>18 megohm/cm全程)、塑料染色托盘、摇床、塑料搅拌棒、10mL 一次性管、干净的玻璃杯、量筒、30%乙醇、100%乙醇、固定液(40%乙醇、10%乙酸)注意事项:1.在拿胶前确定用去离子水清洗橡胶手套。
2.用干净的容器,并标明银染专用。
3.当摇动时,确保容器大小可使胶在里面自由移动,染色时溶液能完全沫过胶面。
4.在拿胶或换溶液时,避免徒手摸胶或用金属物品接触,及避免对胶施加压力。
5.用有铁氟龙图层的棒和干净的玻璃容器准备试剂。
6.避免试剂交叉污染。
7.用新鲜配置的溶液。
样品含有高浓度的DTT:如果你的样品含有高浓度的DTT (>50mM),银染时可能导致条带拖尾和黄色背景。
为避免拖尾按照下面的方法还原和烷基化样品:1. 用新鲜配制的DTT还原你的样品到终浓度为17mM,并在70℃加热10min.2. 用新鲜配制的碘乙酰胺烷基化你的样品到终浓度为35mM,并在70℃加热10min.3. 加不含DTT的SDS样品buffer到还原和烷基化后的样品中。
进行电泳,并按手册进行银染。
在开始之前:用试剂盒中的试剂准备如下溶液用于银染:程序:下面的程序用于8*8厘米预制胶,1.0mm厚。
如果要染两块小胶或1.0mm厚的大胶(18*18),保证孵育时间,将所有溶液的体积加倍。
注意:如果你的胶的尺寸和上面提到的不一样,你可能必须通过调整孵育时间和溶液体积来选择银染策略。
所有的孵育应该在一个旋转摇床上进行,以1圈/秒的速度在室温下进行。
确保每个胶有100ml的溶液。
1. 电泳后,将胶取出至合适尺寸的银染托盘内,用超纯水简单的清洗一下。
2. 用100ml固定液在摇床上缓慢旋转,固定胶20min。
如果你用的是Tricine 胶,那么就固定1小时。
注意:如果没有足够的时间完成银染程序,胶可以在固定液中存放一夜。
长时间的固定在某些情况下可能会改善灵敏度和背景。
快速银染银染步骤及相关药品配制

快速银染银染步骤及相关药品配制银染步骤及相关药品配制一.银染基本步骤1.洗板和擦板电泳槽板先用无水乙醇擦一遍,5分钟后用配制的剥离硅烷(repel)溶液涂抹均匀。
放置15-30分钟玻板(用过的玻板先用NaOH溶液浸泡,直至废胶脱落)先用抹布蘸少许洗洁精在自来水下洗净,再用无水乙醇擦一遍,5分钟后用新鲜配制的亲和硅烷(binding)溶液涂抹均匀。
放置15-30分钟2.装板玻板在下,电泳槽板在上,中间放两根压条(涂抹repel和binding的面相互靠近),对齐后,用三对夹子将波板与电泳槽板夹紧。
3.灌胶用针筒吸取6%的聚丙烯酰胺凝胶溶液,缓慢均匀的从灌胶口将胶灌入,灌好后取下靠近灌胶口的夹子,倒插入梳子,注意不要起汽泡,插好后,再夹上夹子。
凝胶需要1-2个小时。
4.预电泳取下夹子,拔出倒插的梳子,在自来水下将灌胶口冲洗干净,放入电泳槽,卡紧,灌入缓冲液,上下槽各300ml左右,注意用夹子夹紧上槽排放缓冲液的胶管。
80W衡功率电泳半小时。
5.点样用吸管吹干净灌胶口的废胶,将梳子顺插入灌胶口,开始点样,注意不要串样,梳齿不要将胶面弄坏。
6.电泳80W衡功率电泳1小时左右。
7.银染将玻板放入配制好的银染液中,银染半小时左右10.显影从银染液中拿出玻板快速水洗3-5秒,然后放入新鲜配制的显影液中,室温显影,直至条带清晰11.用自来水轻轻冲洗板子正反面几次,洗净残余的NaOH。
二.药品配制1.6%聚丙烯酰胺凝胶(PA):Urea: 420.42gAcr: 60g 丙烯酰胺Bis: 3.16g10×TBE: 50ml加超纯水定容至 1L8% 聚丙烯酰胺PA:尿素 420.42gAcr: 80gBis: 4.212g10*TBE: 100ml加超纯水定容至 1L2. 10×TBETris-base: 216g硼酸:110gEDTA-Na2:14.88g3. binding(亲和硅烷)无水乙醇:2mlBinding原液:8ul冰醋酸:8ul4.Repel (剥离硅烷)三氯甲烷:100mlRepel:2ml5.Loading buffer:甲酰氨:49ml10mM EDTA(PH=8.0):1ml溴酚蓝:0.125g二甲苯青:0.125g7.银染液蒸馏水:1500ml无水乙醇:150ml硝酸银溶液(1g/ml):1500ul 8.显影液蒸馏水:1500ml氢氧化钠:30g甲醛:6ml硫代硫酸钠(10mg/ml):300ul。
银染法的名词解释

银染法的名词解释对于普通人来说,银染法可能是一个陌生的名词,但对于纺织品行业的从业者来说,它却是一个非常重要的工艺。
银染法是一种利用化学方法将银离子引入纺织品中,以达到防菌、抗菌、净化空气等功能的一种技术。
下面,我们将深入探讨银染法的详细内容。
一、银染法的原理银染法利用的是银离子的抗菌性能。
事实上,早在古代,人们就发现银具有抗菌的作用。
在现代,科学家们通过研究发现,银离子能够干扰细菌的细胞膜和核酸的复制,从而抑制细菌的生长和繁殖。
为了将银离子引入纺织品中,银染法应运而生。
二、银染法的流程银染法的流程主要包括:纺织品预处理、银染剂的配制、浸染银染剂、干燥和固定银离子等步骤。
首先,在纺织品进行预处理。
预处理主要包括漂白、洗涤、软化、充电等步骤,以去除纺织品表面的杂质,使其更加适合染色。
接着,配制银染剂。
银染剂通常由银盐和染料组成。
不同的银盐可以产生不同的效果,例如硝酸银可以产生较强的抗菌效果,氧化银则可以产生净化空气的效果。
然后,将纺织品浸泡在银染剂中。
这个步骤中,纺织品会吸收银离子,并且银离子会与纺织品的纤维结合,从而实现功能的目的。
完成浸染后,需要将纺织品进行干燥。
干燥的目的是除去多余的水分,使银离子更好地固定在纺织品上。
最后,采用适当的固定剂将银离子固定在纺织品上。
固定剂能够与银离子进行反应,形成稳定的化学结构,从而增加银离子在纺织品上的使用寿命。
三、银染法的应用银染法在现代纺织品行业中应用广泛。
首先是医疗纺织品领域。
由于银离子的抗菌性能,银染法在生产医用口罩、手术衣等产品时被广泛采用,可以有效地阻止细菌的传播,保护医护人员和患者的健康。
另外,银染法也被应用于家纺领域。
银染法可以制作出带有抗菌功能的床上用品,例如枕头套、被套等。
这些产品可以减少细菌的滋生,为家庭提供一个干净、健康的生活环境。
此外,银染法还可以应用于户外装备领域。
例如,登山服、户外鞋等产品采用了银染法,不仅可以抑制细菌的生长,还有效防止异味产生,让户外运动更加舒适。
银染方法

银染方法1.搪瓷盘中倒入2000ml左右70%乙醇,把胶做好标记卸入乙醇中,摇床上固定15min2.回收乙醇(可重复用3-5次),蒸馏水洗2遍,每遍2-3min,尽可能把水倒净3.190ml蒸馏水中加入3.6%的NaOH4.2ml、20%AgNO33.6ml、氨水2ml混匀配成染色液。
倒入染色液,染色30min。
4.倒掉染色液,蒸馏水洗3遍,每遍2-3min,尽可能把水倒净5.200ml蒸馏水中加入1%柠檬酸钠1ml,甲醛100ul混匀配成显色液。
倒入显色液显色至清晰。
6.倒掉显色液,加蒸馏水停显,并洗2-3遍测序板的硅化处理1:每块玻璃板的面都需硅化处理,以防止凝胶与两块玻璃板紧贴并减少电泳完毕后从胶模中取出凝胶时凝胶发生破裂的可能性。
硅化方法为;将拟硅化的玻璃板置于通风橱中,并戴手套操作,在拟硅化板面上加2-3ml 5%二氯二甲基硅烷(二氯二甲基硅烷5%溶于氯仿中),用纸巾将硅化液涂布均匀,然后用去离子水洗净玻璃板,再用乙醇冲洗后晾干。
如需要从玻璃板上去除原有的硅,可用KOH-甲醇擦拭之。
KOH-甲醇配制为100ml甲醇中加5g片状KOH即可。
测序板的硅化处理2:1.浓度:4%二氯二甲基硅烷2.成分:二氯二甲基硅烷,三氯甲烷4.用途:制备聚丙稀酰胺凝胶时,可用Repel-silane处理小玻板,使凝胶易于剥离。
5.使用方法:测序用玻璃板必须彻底洗净。
先用温水和洗涤剂洗净,用水洗掉洗涤剂,再用去离子水冲洗干净。
最后用乙醇洗板。
1)长玻璃板的处理每次铺胶前均需用亲和硅烷对长玻璃板进行处理。
1、用镜头纸蘸取亲和硅烷溶液少许(1ml左右),涂在长玻璃板上。
要将整块板都涂满、涂匀。
2、4~5分钟后,用95%乙醇洗长玻璃板三次,以去除多余的亲和硅烷。
2)短玻璃板的处理每次铺胶前均需用剥离硅烷对短玻璃板进行硅化处理。
1、处理短玻璃板前先更换手套,以防与亲和硅烷交叉污染。
2、用镜头纸蘸取剥离硅烷溶液适量(1.5ml左右),涂在短玻璃板上。
银染操作步骤(精)

银染操作步骤1. 固定:电泳结束后,取凝胶放入约 100ml 固定液中,在摇床上室温摇动 20分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
固定 40分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。
固定液的配制:依次加入 50ml 乙醇、 10ml 乙酸和 40ml MilliQ级纯水或双蒸水,混匀后即成 100ml 固定液,可大量配制室温存放。
2. 30%乙醇洗涤:弃固定液,加入 100ml 30%乙醇,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
30%乙醇的配制:70ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 30ml 乙醇,混匀后即成 100ml 30%乙醇。
3. 水洗涤:(洗 2次弃 30%乙醇,加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
4. 增敏:(辅染现配现用弃水,加入 100ml 银染增敏液 (1X,在摇床上室温摇动 2分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
银染增敏液 (1X的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 1ml 银染增敏液 (100X,混匀后即为银染增敏液 (1X。
银染增敏液 (1X配制后需在 2小时内使用。
银染增敏液 (100X的配制:即 2.8%硫代硫酸钠溶液,需用黑袋包裹避光保存。
5. 水洗涤 (共 2次 :弃原有溶液,加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 1分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
弃水,再加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 1分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
6. 银染:弃水,加入 100ml 银溶液 (1X,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
银溶液 (1X的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 1ml 银溶液 (100X,混匀后即为银溶液 (1X。
银溶液 (1X配制后需在 2小时内使用, 最好是现配现用。
我们实验室用的银染方法

我们实验室用的银染方法1.50%甲醇浸泡15分钟(置于摇摆床上,以下省略,本步骤两次,每15分钟更换一次)2.10%甲醇浸泡10分钟3.水漂洗3次,每次数秒4.2μM DTT溶液浸泡20分钟5.0.1%硝酸银溶液浸泡20分钟6.水漂洗3次,每次不超过15秒(每次约150ML)7.显色液漂洗3次,每次不超过15秒(每次约100ML)8.显色液浸泡显色至看到目的蛋白带(约200ML)9.10G柠檬酸定影显色液:15G无水碳酸钠溶于500ml水,用前加入250μL福尔马林搅拌均匀水用双蒸水就可以,纯度越高越好,其他试剂用分析纯,据书上说甲醇用化学纯的比分析纯更灵敏此方法出自冷泉港蛋白质技术指南(实际上是其蛋白质技术会议的总结)灵敏度稍低于分子克隆上老方法,但是非常方便,也比其他方法快速,只需要1.5小时,我染出来的胶非常漂亮,有需要的话可以上传给大家看看一般来说,高背景是由于杂质产生的,银染的水质很重要,最好要用去离子水或双蒸水,装胶的器皿也一定要洗得很干净。
固定、银染之后均需充分的漂洗。
其实银染就是银镜反应,可能是你的样品浓度高,所以白了,浓度更高还会变成一条能反光的带。
固定时间不需加长,我有时来不及还减少固定时间,银染关键是器皿和溶液干净,显色前胶一定要漂干净大板本来效果就差点,浓度越大,条带形状越差,这也很正常,银染薄点的胶效果要好些,因为染的是表面的蛋白1.取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.2. 0.1% 硝酸银染色10分钟.3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.显色液配方: 10克氢氧化钠+0.2克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到500ml.这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长.材料没什么要求,玻璃会更好一点,但不好搞到,我们是见到什么大小合适就用什么。
液体的量一般是胶体积的5倍,比如13×13×0.1cm的胶,用一百ml一定够,80也行。
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银染操作步骤
1. 固定:
电泳结束后,取凝胶放入约100ml固定液中,在摇床上室温摇动20分钟,摇动速度为
60-70rpm。
固定40分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。
固定液的配制:依次加入50ml乙醇、10ml乙酸和40ml MilliQ级纯水或双蒸水,混匀后即成100ml固定液,可大量配制室温存放。
2. 30%乙醇洗涤:
弃固定液,加入100ml 30%乙醇,在摇床上室温摇动10分钟,摇动速度为60-70rpm。
30%乙醇的配制:70ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入30ml乙醇,混匀后即成100ml 30%乙醇。
3. 水洗涤:(洗2次)
弃30%乙醇,加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动10分钟,摇动速度为60-70rpm。
4. 增敏:(辅染)现配现用
弃水,加入100ml银染增敏液(1X),在摇床上室温摇动2分钟,摇动速度为60-70rpm。
银染增敏液(1X)的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入1ml银染增敏液(100X),混匀后即为银染增敏液(1X)。
银染增敏液(1X)配制后需在2小时内使用。
银染增敏液(100X)的配制:即2.8%硫代硫酸钠溶液,需用黑袋包裹避光保存。
5. 水洗涤(共2次):
弃原有溶液,加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动1分钟,摇动速度为60-70rpm。
弃水,再加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动1分钟,摇动速度为
60-70rpm。
6. 银染:
弃水,加入100ml银溶液(1X),在摇床上室温摇动10分钟,摇动速度为60-70rpm。
银溶液(1X)的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入1ml银溶液(100X),混匀后即为银溶液(1X)。
银溶液(1X)配制后需在2小时内使用,最好是现配现用。
银溶液(100 X)的配制:称取5g硝酸银,加水溶解并稀释至500ml,摇匀即得1%的硝酸银溶液,需用黑袋包裹避光保存。
7. 水洗涤:
弃原有溶液,加入100ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动1-1.5分钟,摇动速度
为60-70rpm。
注意:水洗涤的时间不能超过1.5分钟。
8. 显色:
弃水,加入100ml银染显色液,在摇床上室温摇动3-10分钟,直至出现比较理想的预期蛋白条带,摇动速度为60-70rpm。
银染显色液的配制:90ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入10ml银染基本显色液(10X),再加入0.05ml银染显色加速液(2000X),混匀后即为银染显色液。
银染显色液配制后需在20分钟内使用。
银染基本显色液(5X)的配制:称取碳酸钠60g,加水溶解并稀释至500ml,摇匀即得12%碳酸钠溶液。
9. 终止:加适量EDTA-2Na(乙二胺四乙酸二钠)终止
弃银染显色液,加入100ml银染终止液(1X),在摇床上室温摇动10分钟,终止时有气体产生属正常现象,产生的气体为二氧化碳。
银染终止液(1X)的配制:95ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入5ml银染终止液(20X),混匀后即为银染终止液(1X)。
银染终止液(1X)配制后宜当天使用。
10. 水洗涤:
弃银染终止液,加入100ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动2-5分钟,摇动速度为60-70rpm。
11. 保存:
可在MilliQ级纯水或双蒸水中保存。
或采用适当的方式制备成干胶。
常见问题:
1. 背景太深:
a. 显色时间过长。
通常显色反应会在10分钟内结束,显色反应时间过长会导致背景很深。
b. 洗涤不充分。
洗涤时间过短,或洗涤液加入的量不足,或者容器过于狭小导致摇动时溶液不易充分混合,或摇动速度过慢,导致混匀不充分。
请按照说明书的建议确保各种溶液的用量和作用时间,摇床的推荐速度为60-70rpm。
c. 凝胶中原有的缓冲液等未在固定步骤中去除干净。
一方面需确保固定的时间和固定液的用量,另一方面对于不是最常用的Bis-Tris缓冲的凝胶需要更长的固定时间以充分去除凝胶中的原有缓冲成分,以降低背景。
d. 水的纯度太低。
需使用大于16 MΩ·cm的高纯度水。
2. 蛋白条带非常浅:
a. 蛋白的半胱氨酸(Cysteine)残基的含量特别低或几乎没有。
半胱氨酸残基的存在对于银染非常重要,半胱氨酸残基的含量过低会导致检测灵敏度下降。
b. 银染后水洗涤时间过长。
在银溶液染色时需严格控制水洗涤的时间,水洗涤的时间不能超过1.5分钟,否则会导致过多的银离子被洗去,导致检测灵敏度下降。
c. 上样量不足。
本试剂盒检测BSA的灵敏度可以达到0.3ng,对于不同的蛋白检测灵敏度可能不同。
对于一些蛋白可能需要大于1ng的蛋白量才能被检测到。
d. 固定步骤后的洗涤不够充分。
导致少量乙酸残留,影响后续检测。
确保30%乙醇洗涤和水洗涤的用量和时间,可以适当延长洗涤时间。
3. 凝胶上出现小点或或其它非蛋白的痕迹:
a. 凝胶没有充分被溶液浸没。
请注意选择大小合适的容器,并加入足量的各种溶液,同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。
b. 用于银染的容器没有充分洗涤干净。
容器需先用洗涤剂充分洗涤,随后用自来水充分冲洗,最后用高纯度水再洗涤数次。
该容器最好能专用于银染,并注意避免各种可能的蛋白污染。
为确保充分洗涤干净,对于耐硝酸的容器,例如玻璃容器,可以在上述洗涤剂及自来水洗涤后用50%硝酸洗涤,随后用高纯度水充分洗涤。
c. 指纹或其它压痕。
请注意戴手套操作,切勿直接接触皮肤。
操作时请注意尽量勿挤压、折叠或摩擦凝胶。
d. 有金属物质接触凝胶。
金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。
4. 在60-70 kD处出现一片模糊的蛋白染色背景:
皮肤上脱落的角蛋白(keratin)污染了蛋白样品。
一方面需注意戴手套操作,另一方面需注意盛放蛋白样品的容器盖子尽量不要敞开,甚至在取放蛋白样品时在超净台内进行以避免可能的角蛋白污染。
5. 在凝胶的顶端处出现黄色背景:
a. 样品中DTT浓度很高。
采用其它适当的还原试剂,或者在许可范围内适当减少DTT的用量。
b. 采用Tris-Glycine-SDS电泳体系。
Tris-Glycine-SDS电泳体系中的Glycine会导致背景凝胶的顶端出现轻微的黄色背景。
换用Tris-Tricine-SDS电泳体系则可显著消除此黄色背景。
6. 银在染色器皿中出现沉淀:
染色器皿中可能含有残余的洗涤剂或上次银染时的残余试剂。
需确保把染色器皿洗涤干净。