基本银染和微波快速银染步骤-中文翻译
银染方法总汇及注意事项
ptotocol是这样的，请看哪里不妥：蛋白银染步骤步骤溶液时间固定甲醇100ml冰醋酸25ml加双蒸水至250ml 30min冲洗双蒸水3次敏化甲醇75ml戊二醛（25%w/）1.25ml硫代硫酸钠(5%w/) 10ml醋酸钠（17g）加双蒸水至250ml 30min冲洗双蒸水3次银反应硝酸银溶液(2.5%w/) 25ml甲醛(37%w/) 0.1ml加双蒸水至250ml 20min冲洗双蒸水2次显色碳酸钠(6.25g)甲醛(37%w/) 0.05ml加双蒸水至250ml2-5min终止EDTA-Na22H2O(3.65g)加双蒸水至250ml 10min冲洗双蒸水3次建议使用silia的方法！！简单，快！本人的银染方法：1. 固定：100ml MeOH, 24ml H Ac, 56ml 0.04%HCHO, 20ml ddH2O,洗三次，每次>=20分钟；2. 50％EtOH洗PAGE胶三次，每次20分钟；3. 预处理：0.02％Na2S2O3 处理一分钟；4. 水洗：ddH2O漂洗三次，每次20秒；5. 染色：0.8ml 20％AgNO3+72ml 0.04%HCHO处理PAGE胶20分钟；6. 水洗：同上；7. 显色：25ml 12％Na2CO3, 24ml 0.04%HCHO, 1ml 0.02％Na2S2O3, 漂洗10－15分钟；8. 水洗：同上；9. 终止：50％MeOH, 12％H Ac,10分钟。
以上步骤从中科院生化所学来，过程和silia 的基本一致，不知道是否有出入，请大家指正。
谢谢！！！5.2.2.3 银染色1 银染液1（1000ml）：甲醇50％乙酸12％甲醇500ml 冰醋酸120ml2 银染液2（1000ml）：甲醇30％，乙酸钠0.4M，戊二醛0.5%，硫代硫酸钠0.1%，（含乙酸1－2ml）甲醇300ml 乙酸钠54.4g 戊二醛10ml 硫代硫酸钠1g 乙酸1－2ml3 显色液(1000ml) 无水碳酸钠2.5% 甲醛0.02%无水碳酸钠25g，甲醛1.5ml4 硝酸银（100ml）：20%硝酸银（过滤后待用）染色步骤：1 银染液1 洗2次，每次5分钟2 银染液2 洗1次，每次30分钟3 超纯水洗2次，每次1分钟4 0.5%硝酸银洗30分钟5 超纯水洗5次，每次1分钟（关键步骤，共计5分钟）显色液显色6 看到各条带，则倾去显色液, 1％乙酸中止我感觉浸银后、显色前的水洗非常关键，时间不能太长，次数不能太多，否则可能会染不上颜色。
银染步骤——精选推荐
银染方法一实验操作程序：固定：30min或者更长时间100ml 乙醇40% 乙醇25ml冰醋酸 10% 冰醋酸加水到250ml致敏：30min75ml 乙醇30% 乙醇17g 乙酸钠28.2g 三水乙酸钠0.5g硫代硫酸钠加水到终体积250ml水洗：3 x 10min银染：20min0.625g AgNO3100 ul 37%甲醛（在使用前加入）加水到终体积250ml水洗：2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色) 显色：视情况而定6.25 g Na2CO350 ul 37% 甲醛（在使用前加入）加水到终体积250ml终止：10min3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸加水到终体积250ml保存：1% 冰醋酸，4 ℃注意事项：1．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。
2．甲醛在使用前加入。
3．最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液，显色到点清晰。
4．显色过程很快，要注意把握时间，避免染色过度。
5．银染液和显色液需要预冷。
6．所用器皿要很洁净，不用手直接接触，以免杂蛋白污染！7．清洗用水尽量用高纯度去离子水，蒸馏水更佳，可以减少背景着色。
银染方法二固定乙醇100ml 60 min冰醋酸25ml纯水加至250ml敏化醋酸钠17g（先溶于适量水30 min乙醇75mlNa2S2O3 0.5g (临用前加)加纯水至250ml漂洗纯水5min×3银染AgNO3 0.625g（临用配）20 min加纯水至250ml漂洗纯水1min×2显色无水碳酸钠6.25g 约4min（根据显色速度和实验目的调整）甲醛100μl（临用加）加纯水至250ml终止冰醋酸12.5ml 10 min加纯水至250ml漂洗纯水5min×3注意事项：1。
敏化：百分之0.02硫代硫酸钠，1MIN;水洗两次；2。
染色：百分之0.1硝酸银（100mL硝酸银染液加75微升百分之37甲醛）20min;3。
三种蛋白染色方法在SDS_聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用_陈琳
三种蛋白染色方法在SDS 2聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用陈 琳,张亚东,赵艳华,马 平,卜凤荣(军事医学科学院野战输血研究所,北京 100850)[摘要] 目的:比较S DS 2聚丙烯酰胺凝胶电泳(S DS -PAGE )中蛋白染色的3种方法。
方法:将S DS 2PAGE 中的蛋白分别用银染、铜染和考马斯亮蓝染色,并对铜染或考马斯亮蓝染色后的蛋白进行相应的复染。
结果:快速银染法灵敏度最高,但操作步骤繁琐,染色时间约50min ;考马斯亮蓝染色灵敏度最低,需染色和脱色,时间约为1h ;铜染灵敏度介于银染和考马斯亮蓝染色之间,但染色时间仅5min ,不需脱色,且可直接用考马斯亮蓝或快速银染法复染。
结论:用S DS 2PAGE 进行蛋白检测时,铜染可作为蛋白快速分析的首选方法。
[关键词] 电泳,聚丙酰凝胶;蛋白染色方法;蛋白质类;银染色[中图分类号] Q503 [文献标识码]A [文章编号] 100025501(2000)0420292202Application of three kinds of staining methods for protein in SDS 2PAGECHEN Lin ,ZH ANG Ya 2dong ,ZH AO Yan 2hua ,MA ping ,BU Fong 2rong(Institute of Field T rans fusion ,Academy of M ilitary Medical Sciences ,Beijing 100850,China )[Abstract] Objective :T o com pare three kinds of staining methods for proteins in S DS 2PAGE.Methods :The proteins in S DS 2PAGE were stained with coomassie brilliant blue staining ,copper staining and silver stain 2ing.Then the proteins were restained after coomassie brilliant blue staining or copper staining.R esults :The silver staining was the m ost sensitive ,the sensitivity of the copper staining was the former between that of silver staining and the coomassie brilliant blue staining.It took only five minutes to stain proteins with copper stain 2ing.A fter copper staining ,the proteins could be restained by silver staining or coomassie brilliant blue stain 2ing.Conclusions :C opper staining could be the first choice for rapid analysis of proteins in S DS 2PAGE.[K ey w ords] electrophoresis ,polyacrylamide gel ;protein staining ;proteins ;silver staining S DS 2PAGE 是Shapiro 于1967年建立的,经过不断的改进、完善,现在已广泛应用于蛋白质分析。
银染法的名词解释
银染法的名词解释对于普通人来说，银染法可能是一个陌生的名词，但对于纺织品行业的从业者来说，它却是一个非常重要的工艺。
银染法是一种利用化学方法将银离子引入纺织品中，以达到防菌、抗菌、净化空气等功能的一种技术。
下面，我们将深入探讨银染法的详细内容。
一、银染法的原理银染法利用的是银离子的抗菌性能。
事实上，早在古代，人们就发现银具有抗菌的作用。
在现代，科学家们通过研究发现，银离子能够干扰细菌的细胞膜和核酸的复制，从而抑制细菌的生长和繁殖。
为了将银离子引入纺织品中，银染法应运而生。
二、银染法的流程银染法的流程主要包括：纺织品预处理、银染剂的配制、浸染银染剂、干燥和固定银离子等步骤。
首先，在纺织品进行预处理。
预处理主要包括漂白、洗涤、软化、充电等步骤，以去除纺织品表面的杂质，使其更加适合染色。
接着，配制银染剂。
银染剂通常由银盐和染料组成。
不同的银盐可以产生不同的效果，例如硝酸银可以产生较强的抗菌效果，氧化银则可以产生净化空气的效果。
然后，将纺织品浸泡在银染剂中。
这个步骤中，纺织品会吸收银离子，并且银离子会与纺织品的纤维结合，从而实现功能的目的。
完成浸染后，需要将纺织品进行干燥。
干燥的目的是除去多余的水分，使银离子更好地固定在纺织品上。
最后，采用适当的固定剂将银离子固定在纺织品上。
固定剂能够与银离子进行反应，形成稳定的化学结构，从而增加银离子在纺织品上的使用寿命。
三、银染法的应用银染法在现代纺织品行业中应用广泛。
首先是医疗纺织品领域。
由于银离子的抗菌性能，银染法在生产医用口罩、手术衣等产品时被广泛采用，可以有效地阻止细菌的传播，保护医护人员和患者的健康。
另外，银染法也被应用于家纺领域。
银染法可以制作出带有抗菌功能的床上用品，例如枕头套、被套等。
这些产品可以减少细菌的滋生，为家庭提供一个干净、健康的生活环境。
此外，银染法还可以应用于户外装备领域。
例如，登山服、户外鞋等产品采用了银染法，不仅可以抑制细菌的生长，还有效防止异味产生，让户外运动更加舒适。
银染方法
银染方法1.搪瓷盘中倒入2000ml左右70%乙醇，把胶做好标记卸入乙醇中，摇床上固定15min2.回收乙醇(可重复用3-5次)，蒸馏水洗2遍，每遍2-3min，尽可能把水倒净3.190ml蒸馏水中加入3.6%的NaOH4.2ml、20%AgNO33.6ml、氨水2ml混匀配成染色液。
倒入染色液，染色30min。
4.倒掉染色液，蒸馏水洗3遍，每遍2-3min，尽可能把水倒净5.200ml蒸馏水中加入1%柠檬酸钠1ml，甲醛100ul混匀配成显色液。
倒入显色液显色至清晰。
6.倒掉显色液，加蒸馏水停显，并洗2-3遍测序板的硅化处理1:每块玻璃板的面都需硅化处理，以防止凝胶与两块玻璃板紧贴并减少电泳完毕后从胶模中取出凝胶时凝胶发生破裂的可能性。
硅化方法为；将拟硅化的玻璃板置于通风橱中，并戴手套操作，在拟硅化板面上加2-3ml 5％二氯二甲基硅烷(二氯二甲基硅烷5％溶于氯仿中)，用纸巾将硅化液涂布均匀，然后用去离子水洗净玻璃板,再用乙醇冲洗后晾干。
如需要从玻璃板上去除原有的硅，可用KOH-甲醇擦拭之。
KOH-甲醇配制为100ml甲醇中加5g片状KOH即可。
测序板的硅化处理2:1.浓度：4%二氯二甲基硅烷2.成分：二氯二甲基硅烷，三氯甲烷4.用途：制备聚丙稀酰胺凝胶时，可用Repel-silane处理小玻板，使凝胶易于剥离。
5.使用方法：测序用玻璃板必须彻底洗净。
先用温水和洗涤剂洗净，用水洗掉洗涤剂,再用去离子水冲洗干净。
最后用乙醇洗板。
1）长玻璃板的处理每次铺胶前均需用亲和硅烷对长玻璃板进行处理。
1、用镜头纸蘸取亲和硅烷溶液少许（1ml左右），涂在长玻璃板上。
要将整块板都涂满、涂匀。
2、4~5分钟后，用95%乙醇洗长玻璃板三次，以去除多余的亲和硅烷。
2）短玻璃板的处理每次铺胶前均需用剥离硅烷对短玻璃板进行硅化处理。
1、处理短玻璃板前先更换手套，以防与亲和硅烷交叉污染。
2、用镜头纸蘸取剥离硅烷溶液适量（1.5ml左右），涂在短玻璃板上。
银染中每步的原理
银染中每步的原理
银染是一种将金属银沉积在物体表面的染色方法，主要用于改变物体的颜色和增加其抗氧化能力。
其原理主要包括以下几个步骤：
1. 表面处理：首先需要对物体表面进行适当的处理，以去除表面的杂质和氧化物，以便银能够更好地沉积在物体表面。
常用的表面处理方法有机械打磨、电化学抛光等。
2. 银溶液制备：制备含有银离子的溶液，通常使用银盐（如硝酸银）和适当的酸性溶液配制而成。
溶液的酸性有助于提供适当的环境，使银离子可以稳定存在，同时可调节酸碱度来控制银沉积的速率和均匀性。
3. 沉积过程：将待染物体放入银溶液中，并加上适当的电压，通过电解作用将银离子还原成金属银，并沉积在物体表面，形成一层均匀的银膜。
电压的选取要根据染色效果和物体材质等因素进行调节。
4. 清洗和后处理：将染色后的物体从银溶液中取出，经过适当的清洗，以去除残留的银离子和其它杂质。
清洗后，还可以进行一些后处理步骤，如漂白、封闭等，以增加染色层的光亮度和耐久性。
总的来说，银染的原理是通过电解作用，将银离子沉积在物体表面，形成一层均匀的银膜。
这一过程的关键是控制电解条件和后处理步骤，以确保银染效果的稳
定和持久。
银染操作步骤(精)
银染操作步骤1. 固定:电泳结束后,取凝胶放入约 100ml 固定液中,在摇床上室温摇动 20分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
固定 40分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。
固定液的配制:依次加入 50ml 乙醇、 10ml 乙酸和 40ml MilliQ级纯水或双蒸水,混匀后即成 100ml 固定液,可大量配制室温存放。
2. 30%乙醇洗涤:弃固定液,加入 100ml 30%乙醇,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
30%乙醇的配制:70ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 30ml 乙醇,混匀后即成 100ml 30%乙醇。
3. 水洗涤:(洗 2次弃 30%乙醇,加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
4. 增敏:(辅染现配现用弃水,加入 100ml 银染增敏液 (1X,在摇床上室温摇动 2分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
银染增敏液 (1X的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 1ml 银染增敏液 (100X,混匀后即为银染增敏液 (1X。
银染增敏液 (1X配制后需在 2小时内使用。
银染增敏液 (100X的配制:即 2.8%硫代硫酸钠溶液,需用黑袋包裹避光保存。
5. 水洗涤 (共 2次 :弃原有溶液,加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 1分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
弃水,再加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 1分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
6. 银染:弃水,加入 100ml 银溶液 (1X,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
银溶液 (1X的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 1ml 银溶液 (100X,混匀后即为银溶液 (1X。
银溶液 (1X配制后需在 2小时内使用, 最好是现配现用。
快速银染试剂盒
银溶液(1X)的配制：
99ml MilliQ 级纯水或双蒸水中加入 1ml 银溶液(100X)，混匀后即为银溶液(1X)。银溶
液(1X)配制后需在 2 小时内使用。
2、水洗涤：
弃原有溶液，加入 100ml MilliQ 级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动 1-1.5 分钟，摇
动速度为 60-70rpm。
2、需自备乙醇、冰醋酸及 MilliQ 级纯水或双蒸水。
3、下述使用说明中各种溶液的使用量适用于大小为 8×10cm 厚度为 0.75-1mm 的凝胶。
对于更大的凝胶，各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大，对于更厚的凝胶，作用时间
需按照厚度的比例适当延长。
4、本说明书所指的常温温为 20-25℃，操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降，各
快速银染试剂盒
产品编号 BL620A
产品名称 快速银染试剂盒
规格 25 T
产品简介：
快速银染试剂盒(Fast Silver Stain Kit)是一种快速简单、可用于 SDS-PAGE 或非变性
PAGE 等蛋白银染的试剂盒。本试剂盒也可以用于 2D 凝胶的银染，并且染色后兼容后续的质
谱检测。本试剂盒只需约 90 分钟内可以完成凝胶的银染。对于 BSA 蛋白，检测灵敏度可以
（3）凝胶中原有的缓冲液等未在固定步骤中去除干净。一方面需确保固定的时间和固 定液的用量，另一方面对于不是最常用的 Bis-Tris 缓冲的凝胶需要更长的固定时间以充分 去除凝胶中的原有缓冲成分，以降低背景。
（4）水的纯度太低。需使用大于 16 MΩ·cm 的高纯度水。 2、 蛋白条带非常浅： （1）蛋白的半胱氨酸(Cysteine)残基的含量特别低或几乎没有。半胱氨酸残基的存在 对于银染非常重要，半胱氨酸残基的含量过低会导致检测灵敏度下降。 （2）银染后水洗涤时间过长。在银溶液染色时需严格控制水洗涤的时间，水洗涤的时 间不能超过 1.5 分钟，否则会导致过多的银离子被洗去，导致检测灵敏度下降。 （3）样量不足。本试剂盒检测 BSA 的灵敏度可以达到 0.3ng，对于不同的蛋白检测灵 敏度可能不同。对于一些蛋白可能需要大于 1ng 的蛋白量才能被检测到。 （4）固定步骤后的洗涤不够充分。导致少量乙酸残留，影响后续检测。确保 30%乙醇 洗涤和水洗涤的用量和时间，可以适当延长洗涤时间。 3、凝胶上出现小点或或其它非蛋白的痕迹： （1）凝胶没有充分被溶液浸没。请注意选择大小合适的容器，并加入足量的各种溶液， 同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。 （2）用于银染的容器没有充分洗涤干净。容器需先用洗涤剂充分洗涤，随后用自来水 充分冲洗，最后用高纯度水再洗涤数次。该容器最好能专用于银染，并注意避免各种可能的 蛋白污染。为确保充分洗涤干净，对于耐硝酸的容器，例如玻璃容器，可以在上述洗涤剂及 自来水洗涤后用 50%硝酸洗涤，随后用高纯度水充分洗涤。 （3）指纹或其它压痕。请注意戴手套操作，切勿直接接触皮肤。操作时请注意尽量勿 挤压、折叠或摩擦凝胶。 （4）有金属物质接触凝胶。金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。 4、在 60-70 kD 处出现一片模糊的蛋白染色背景： 皮肤上脱落的角蛋白(keratin)污染了蛋白样品。一方面需注意戴手套操作，另一方面 需注意盛放蛋白样品的容器盖子尽量不要敞开，甚至在取放蛋白样品时在超净台内进行以避 免可能的角蛋白污染。 5、在凝胶的顶端处出现黄色背景： （1）样品中 DTT 浓度很高。采用其它适当的还原试剂，或者在许可范围内适当减少 DTT 的用量。 （2）采用 Tris-Glycine-SDS 电泳体系。Tris-Glycine-SDS 电泳体系中的 Glycine 会 导致背景凝胶的顶端出现轻微的黄色背景。 6、银在染色器皿中出现沉淀： 染色器皿中可能含有残余的洗涤剂或上次银染时的残余试剂。需确保把染色器皿洗涤干 净。 保存条件： 常温保存，开封后一年有效。
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基本的银染步骤：（90min）
材料：
超纯水（>18 megohm/cm全程）、塑料染色托盘、摇床、塑料搅拌棒、10mL 一次性管、干净的玻璃杯、量筒、30%乙醇、100%乙醇、固定液（40%乙醇、10%乙酸）
注意事项：
1.在拿胶前确定用去离子水清洗橡胶手套。
2.用干净的容器，并标明银染专用。
3.当摇动时，确保容器大小可使胶在里面自由移动，染色时溶液能完全沫过胶面。
4.在拿胶或换溶液时，避免徒手摸胶或用金属物品接触，及避免对胶施加压力。
5.用有铁氟龙图层的棒和干净的玻璃容器准备试剂。
6.避免试剂交叉污染。
7.用新鲜配置的溶液。
样品含有高浓度的DTT：
如果你的样品含有高浓度的DTT （>50mM）,银染时可能导致条带拖尾和黄色背景。
为避免拖尾按照下面的方法还原和烷基化样品：
1. 用新鲜配制的DTT还原你的样品到终浓度为17mM，并在70℃加热10min.
2. 用新鲜配制的碘乙酰胺烷基化你的样品到终浓度为35mM，并在70℃加热10min.
3. 加不含DTT的SDS样品buffer到还原和烷基化后的样品中。
进行电泳，并按手册进行银染。
在开始之前：
用试剂盒中的试剂准备如下溶液用于银染：
程序：下面的程序用于8*8厘米预制胶，1.0mm厚。
如果要染两块小胶或1.0mm厚的大胶（18*18），保证孵育时间，将所有溶液的体积加倍。
注意：如果你的胶的尺寸和上面提到的不一样，你可能必须通过调整孵育时间和溶液体积来选择银染策略。
所有的孵育应该在一个旋转摇床上进行，以1圈/秒的速度在室温下进行。
确保每个胶有100ml的溶液。
1. 电泳后，将胶取出至合适尺寸的银染托盘内，用超纯水简单的清洗一下。
2. 用100ml固定液在摇床上缓慢旋转，固定胶20min。
如果你用的是Tricine 胶，那么就固定1小时。
注意：如果没有足够的时间完成银染程序，胶可以在固定液中存放一夜。
长时间的固定在某些情况下可能会改善灵敏度和背景。
3. 倒出固定液，用30%乙醇洗胶10min。
4. 倒出乙醇，加入100ml敏化液，孵育10min.
5. 倒出敏化液，100ml 30%乙醇洗胶10min.
6. 用100ml超纯水洗胶10min.
7. 用100ml 染色液孵育胶15min.
8. 染色完成后，倒掉染色液，用100ml 蒸馏水洗胶20-60秒。
注意：如果洗胶超过1min会使银离子减少，影响灵敏度。
9.在100ml 的显影液中孵育胶4-8min，直到条带开始出现，想要的条带强度达到。
10. 当适当的染色强度达到后，立刻加
入10ml终止液（stopper）（胶仍然浸没在显影液中）。
轻轻摇动胶10min。
颜色从粉红色到无色说明反应终止。
11. 倒掉终止液，用100ml超纯水清洗胶10min。
银染考马斯亮蓝染色后的胶：
1. 用超纯水彻底的清洗gel 10min。
2.同银染步骤。
可能得到的背景比较深。
快速染色方案：
注意：用微波染色，小心着火，将盖
子盖松些，可以减少着火的概率。
材料：
超纯水、微波染色托盘、微波炉、摇床、塑料棒、10ml一次性管、干净的玻璃杯、刻度量筒、30%乙醇、100%乙醇、固定液（40%乙醇、10%乙酸）用试剂盒中的试剂准备如下溶液用于银染：
8*8cm预制胶，1mm厚；用100ml。
1. 电泳后，将胶至于可以微波的容器中，用超纯水清洗干净。
2. 到入100ml 固定液，微波高档（700W）30s。
取出后室温下轻轻搅动
5min。
倒掉固定液。
3. 100ml 30%乙醇洗胶，H档30s。
取出后室温下轻轻摇5min。
倒掉乙醇。
4. 加入100ml 敏化剂，H档30s。
轻轻摇2min。
倒掉敏化剂。
5. 用100ml超纯水洗两次胶，H档30s，摇2min。
6.加入100ml染色液，H档30s。
取出后室温下轻轻摇5min。
7. 倒掉染色液，用100ml超纯水洗20-60s。
不要超过1min!
8. 加入100ml 显影液，直接摇床孵育5min。
（不微波）
9. 当想要的条带出现后，立刻加入10ml 终止液。
轻轻摇10min,颜色从粉色变为无色。
10. 用100ml超纯水清洗10min.
银染脱色计划：（用于质谱）
材料：
干净的手术刀、1.5ml无菌离心管、超纯水。
程序：
1. 银染后，用超纯水彻底清洗。
2. 用手术刀小心的切去感兴趣的条带，并放入1.5ml离心管内。
3. 在gel的空白处切取同样尺寸的胶到离心管内，作为胰蛋白酶消化对照。
4. 加入50ul脱色液A和50ul脱色液B 到每一个离心管内。
（如果你需要处理大量的样品，可以将需要量的A和B 混合，并立即用完，因为A与B混合后不能存放太长时间）
5. 彻底的混合离心管内的成分，在室温下孵育15min. 胶块将缓慢的下降到管底儿。
6. 用一干净枪头吸去上清。
7. 加入200ul 超纯水到离心管内，混合好，室温下孵育10min.
8. 重复6,7步骤两次，进去胰酶消化阶段。
用于质谱的样品：
需要的材料：
测序级别的胰蛋白酶、50mM碳酸氢铵、100%甲醇、30%甲醇、含有0.1%三氟乙酸的50%乙腈、100mM 包含30%乙腈的碳酸氢铵、浓缩仪、37度水浴、1.5ml无菌离心管。
胰酶消化：(和对照组一起)
1. 使脱色后的gel脱水，用100%甲醇在室温下处理5min.
2. 再用30%甲醇脱水5min
3.用超纯水洗10min 两遍。
4. 用100mM碳酸氢铵（含30%乙腈），洗10min三次。
最后一次洗完后，将胶切成小块，用超纯水洗胶块。
5. 在浓缩仪中干燥胶30min。
6. 用50mM碳酸氢铵重悬碎胶片。
（加入大概5ul buffer/mm2胶）确保溶液可以没过胶。
7. 加入5-10ng/ul胰酶，37度孵育过夜。
8. 用最大转速离心1min,将上清转移到干净的离心管内。
9. 用10-20ul 含有0.1%三氟乙酸的50%乙腈室温下提取剩余胶中的多肽，最后结合8和9中的提取物。
10. 用浓缩仪浓缩步骤9中的样品至4-5ul。
用于质谱分析。
进行质谱分析：
1. 10ul体积样品浓度为20-50uM。
2. 这个样品应该完成的在超纯水、甲醇或乙腈中。
3. 这个样品必须在<10mM buffer 或盐中。
4. 常用的基质：肉桂酸、对羟基甲苯、芥子酸。
质谱分析后，可以用于查询的蛋白数据库：
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/entrez
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http://www.expasy.ch/tools
page6：样品含有高浓度的DTT：
如果你的样品含有高浓度的DTT（>50mM）,银染时可能导致条带拖尾和黄色背景。
为避免拖尾按照下面的方法还原和烷基化样品：
1. 用新鲜配制的DTT还原你的样品到终浓度为17mM，并在70℃加热10min.
2. 用新鲜配制的碘乙酰胺烷基化你的样品到终浓度为35mM，并在70℃加热10min.
3. 加不含DTT的SDS样品buffer到还原和烷基化后的样品中。
进行电泳，并按手册进行银染。