银染方法总汇及注意事项
蛋白质染色(银染法)标准操作规程
蛋白质染色（银染法）标准操作规程（编号：041）
1、目的及适用范围
检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质，实验原理是在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。
染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。
2、主要仪器
摇床、避光盒
3、试剂及配制方法
乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛，去离子水
固定液：100mL乙醇（40%乙醇），25mL冰醋酸（10%冰醋酸）加水到250mL；
致敏液：75mL 乙醇（30%乙醇）17g 乙酸钠，28.2g 三水乙酸钠（34g乙酸钠），0.5g硫代硫酸钠加水到终体积250mL；
银染液：0.625g AgNO3，100 uL37%甲醛（在使用前加入）加水到终体积250mL；
显色液：6.25 g Na2CO3，50 μL 37%甲醛（在使用前加入）加水到终体积250mL；
终止液：3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸加水到终体积250mL
保存液：1% 冰醋酸
4、操作步骤
4.1固定：50mL固定液中固定30min或者更长时间
4.2致敏：50mL致敏液中致敏30min
4.3水洗：3 x 10min
4.4银染：50mL银染液中染20min （保持避光）
4.5水洗：2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色)
4.6显色：50mL显色液中显色，时间视显色程度而定
4.7终止：50mL终止液中终止10min
4.8保存：1% 冰醋酸，4 ℃
5、注意事项
88。
鞭毛染色液(银染法)
鞭毛染色液(银染法)简介：细菌鞭毛是细菌的运动器官，幽门螺杆菌能够从强酸性的胃内腔穿过胃上皮细胞上的黏液层达到胃上皮细胞的中性环境，这就是鞭毛运动作用的很好例证。
通过鞭毛染色，可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一。
Leagene 鞭毛染色液(银染法)采用镀银染色法，该染色法的优点是采用氨银染色液作为核心染料，试剂比较灵敏，操作简单，结果判断更可靠。
组成：自备材料：1、 酒精灯2、 载玻片3、 蒸馏水操作步骤(仅供参考)：1、 在洁净无油脂的载玻片上滴加2滴蒸馏水。
2、 用接种环挑取无菌蒸馏水，再与血平板上菌落接触，允许细菌游到接种环蒸馏水中，再将接种环移到玻片上蒸馏水顶部轻点2次。
3、 轻轻摇动玻片，使细菌分布均匀。
切勿研磨和搅动，以防鞭毛脱落。
4、 置室温或恒温箱内干燥固定。
5、 临用前取A1、A2等量混合，即为鞣酸染色液。
取刚配制的鞣酸染色液加入干净容器或者试管中，充分混匀，用酒精灯缓慢加热，稍微冷却，立即进行染色步骤。
6、 滴加经加热处理的鞣酸染色液于载玻片上染色，蒸馏水缓慢冲洗，甩干。
7、 滴加氨银染色液，小火焰加热至冒气泡，蒸馏水缓慢冲洗，自然干燥。
8、 镜检：从涂片边缘开始，由外及里，逐渐移至中心。
细菌分布少的地方，鞭毛容易观察。
细菌密集的地方，鞭毛被菌体挡住，不易观察。
编号 名称 DM0033 2×100ml Storage 试剂(A): 鞣酸染色液 A1: 鞣酸溶液 50ml RT 避光 A2: 鞣酸稀释液 50ml RT 试剂(B): 氨银染色液 100ml 4℃ 避光 使用说明书 1份染色结果：菌体深褐色，鞭毛为褐色。
注意事项：1、玻片应洁净，无油污。
2、染色的菌种应连续传代多次，处于生长活跃期。
3、染色过程应小心操作，防止鞭毛脱落。
4、配制好的鞣酸染色液不宜久置，尽量在10min内使用。
5、氨银染色液不稳定，应严格4℃避光保存，出现严重浑浊时应弃用。
质谱银染的试剂
质谱银染的试剂
质谱银染是一种在质谱分析中用于增强蛋白质或肽段的检测灵敏度的方法。
通常使用的质谱银染试剂是银离子的溶液，它会与蛋白质或肽段中的氨基酸残基反应，形成银颗粒，从而增强质谱信号。
以下是一种常用的质谱银染试剂的制备步骤：
1.制备酸性银溶液：
o将银硝酸（AgNO₃）溶解在蒸馏水中，得到
酸性的银溶液。
2.加入酸：
o向银溶液中加入一些酸，通常是甲酸
（HCOOH）或乙酸（CH₃COOH），以调整溶
液的酸性。
酸性条件有助于促使银离子与蛋
白质发生反应。
3.加入还原剂：
o添加一种还原剂，如脱氢乙酸（HCHO）或亚
硫酸氢钠（NaHSO₃），以还原银离子为银颗
粒。
4.反应蛋白质或肽：
o将待检样品中的蛋白质或肽与银离子反应，
形成银沉淀。
5.洗涤：
o将反应后的样品进行洗涤，去除未反应的试
剂和其他杂质。
6.干燥：
o将样品干燥，以得到质谱银染后的样品。
使用质谱银染的优势在于其增强了质谱信号，使得低丰度的蛋白质或肽段更容易被检测到。
然而，该方法可能对某些质谱仪器的灵敏度产生影响，因此在使用时需要谨慎优化条件。
Gomori银染色法
[试剂配置]
氨性银溶液甲液:硝酸银10.2g，蒸馏水 100ml，乙液：氢氧化钠3.1g，蒸馏水 100ml。 取甲液5ml，滴加氨水至溶解清亮为止。 再加入5ml乙液，此时该溶液突然变为黑 色，在滴加氨水至清亮为止。补加4滴氨 水，用蒸馏补足50ml。
染色步骤
（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片5um，常规脱蜡至水 （2）高锰酸钾氧化液（高锰酸钾0.5g，蒸馏水95ml，在加入5ml 3%硫酸）5min。再用自来水洗1min。 （3）2%草酸漂白2min，水洗2min （4）2%硫酸铁氨媒染2min （5）水洗1min，蒸馏水洗2次 （6）加入氨性银溶液内1min。 （7）蒸馏水洗2次后。用20%甲醛液还愿5min。 （8）蒸馏水浸洗2次 （9）0.2%氯化金液1min，蒸馏水洗2次 （10）用丽春红S苦味酸染色液复染3-5min。 （11）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
结果：
网状纤维呈黑色，胶原纤维呈红色，背景 呈黄色。
注意事项：
()
Gomori银染色法
主讲：李磊
姜明星
概述：
网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维， 由交错排列的纤维组成，还有大量堆积时 则形成致密的网状，固有网状纤维之称。 若用银氨液浸染能使纤维变成黑色，固又 称为嗜银纤维（argentaffin fibres）
原理：
由于组织蛋白质与银化合物的结合，在经 过甲醛还原成为金属银而沉淀于组织内及 表面的物质。
DNA的银染
（下列加液量以刚好覆盖凝胶为宜）
电泳完毕后，撬开玻璃板，将粘有凝胶的玻璃板置于塑料盘（ 不要碰凝胶表面！）
用蒸馏水漂洗两次，并取出玻璃板 去水后，用10%乙醇进行凝胶固定 10 min，轻摇 去乙醇，水洗、加入1%硝酸，轻摇5min 吸出硝酸，用蒸馏水漂洗2次
加入0.2%硝酸银溶液，轻摇20min 蒸馏水漂洗3次 去水后，加入显色液，在非直射光线下观察显色 观察区带出现，效果最佳时移除显色液 加入3%乙酸，轻摇5min 移除3%的乙酸溶液，10%乙醇洗涤1次 观察结果
聚丙烯酰胺凝胶中DNA的银染
原理
在弱酸环境下银离子可以与DNA结合，碱性甲
醛溶液可以将结合的银离子还原成金属银，显影成
DNA非变性PAGE胶 试剂及其功能：
10%乙醇 1%硝酸 0.2%硝酸银 显色液（3% Na2CO3，1%甲醛，新鲜配制）
3%乙酸
实验操作及注意事项
银染法的名词解释
银染法的名词解释对于普通人来说，银染法可能是一个陌生的名词，但对于纺织品行业的从业者来说，它却是一个非常重要的工艺。
银染法是一种利用化学方法将银离子引入纺织品中，以达到防菌、抗菌、净化空气等功能的一种技术。
下面，我们将深入探讨银染法的详细内容。
一、银染法的原理银染法利用的是银离子的抗菌性能。
事实上，早在古代，人们就发现银具有抗菌的作用。
在现代，科学家们通过研究发现，银离子能够干扰细菌的细胞膜和核酸的复制，从而抑制细菌的生长和繁殖。
为了将银离子引入纺织品中，银染法应运而生。
二、银染法的流程银染法的流程主要包括：纺织品预处理、银染剂的配制、浸染银染剂、干燥和固定银离子等步骤。
首先，在纺织品进行预处理。
预处理主要包括漂白、洗涤、软化、充电等步骤，以去除纺织品表面的杂质，使其更加适合染色。
接着，配制银染剂。
银染剂通常由银盐和染料组成。
不同的银盐可以产生不同的效果，例如硝酸银可以产生较强的抗菌效果，氧化银则可以产生净化空气的效果。
然后，将纺织品浸泡在银染剂中。
这个步骤中，纺织品会吸收银离子，并且银离子会与纺织品的纤维结合，从而实现功能的目的。
完成浸染后，需要将纺织品进行干燥。
干燥的目的是除去多余的水分，使银离子更好地固定在纺织品上。
最后，采用适当的固定剂将银离子固定在纺织品上。
固定剂能够与银离子进行反应，形成稳定的化学结构，从而增加银离子在纺织品上的使用寿命。
三、银染法的应用银染法在现代纺织品行业中应用广泛。
首先是医疗纺织品领域。
由于银离子的抗菌性能，银染法在生产医用口罩、手术衣等产品时被广泛采用，可以有效地阻止细菌的传播，保护医护人员和患者的健康。
另外，银染法也被应用于家纺领域。
银染法可以制作出带有抗菌功能的床上用品，例如枕头套、被套等。
这些产品可以减少细菌的滋生，为家庭提供一个干净、健康的生活环境。
此外，银染法还可以应用于户外装备领域。
例如，登山服、户外鞋等产品采用了银染法，不仅可以抑制细菌的生长，还有效防止异味产生，让户外运动更加舒适。
银染方法
银染方法1.搪瓷盘中倒入2000ml左右70%乙醇，把胶做好标记卸入乙醇中，摇床上固定15min2.回收乙醇(可重复用3-5次)，蒸馏水洗2遍，每遍2-3min，尽可能把水倒净3.190ml蒸馏水中加入3.6%的NaOH4.2ml、20%AgNO33.6ml、氨水2ml混匀配成染色液。
倒入染色液，染色30min。
4.倒掉染色液，蒸馏水洗3遍，每遍2-3min，尽可能把水倒净5.200ml蒸馏水中加入1%柠檬酸钠1ml，甲醛100ul混匀配成显色液。
倒入显色液显色至清晰。
6.倒掉显色液，加蒸馏水停显，并洗2-3遍测序板的硅化处理1:每块玻璃板的面都需硅化处理，以防止凝胶与两块玻璃板紧贴并减少电泳完毕后从胶模中取出凝胶时凝胶发生破裂的可能性。
硅化方法为；将拟硅化的玻璃板置于通风橱中，并戴手套操作，在拟硅化板面上加2-3ml 5％二氯二甲基硅烷(二氯二甲基硅烷5％溶于氯仿中)，用纸巾将硅化液涂布均匀，然后用去离子水洗净玻璃板,再用乙醇冲洗后晾干。
如需要从玻璃板上去除原有的硅，可用KOH-甲醇擦拭之。
KOH-甲醇配制为100ml甲醇中加5g片状KOH即可。
测序板的硅化处理2:1.浓度：4%二氯二甲基硅烷2.成分：二氯二甲基硅烷，三氯甲烷4.用途：制备聚丙稀酰胺凝胶时，可用Repel-silane处理小玻板，使凝胶易于剥离。
5.使用方法：测序用玻璃板必须彻底洗净。
先用温水和洗涤剂洗净，用水洗掉洗涤剂,再用去离子水冲洗干净。
最后用乙醇洗板。
1）长玻璃板的处理每次铺胶前均需用亲和硅烷对长玻璃板进行处理。
1、用镜头纸蘸取亲和硅烷溶液少许（1ml左右），涂在长玻璃板上。
要将整块板都涂满、涂匀。
2、4~5分钟后，用95%乙醇洗长玻璃板三次，以去除多余的亲和硅烷。
2）短玻璃板的处理每次铺胶前均需用剥离硅烷对短玻璃板进行硅化处理。
1、处理短玻璃板前先更换手套，以防与亲和硅烷交叉污染。
2、用镜头纸蘸取剥离硅烷溶液适量（1.5ml左右），涂在短玻璃板上。
银染中每步的原理
银染中每步的原理
银染是一种将金属银沉积在物体表面的染色方法，主要用于改变物体的颜色和增加其抗氧化能力。
其原理主要包括以下几个步骤：
1. 表面处理：首先需要对物体表面进行适当的处理，以去除表面的杂质和氧化物，以便银能够更好地沉积在物体表面。
常用的表面处理方法有机械打磨、电化学抛光等。
2. 银溶液制备：制备含有银离子的溶液，通常使用银盐（如硝酸银）和适当的酸性溶液配制而成。
溶液的酸性有助于提供适当的环境，使银离子可以稳定存在，同时可调节酸碱度来控制银沉积的速率和均匀性。
3. 沉积过程：将待染物体放入银溶液中，并加上适当的电压，通过电解作用将银离子还原成金属银，并沉积在物体表面，形成一层均匀的银膜。
电压的选取要根据染色效果和物体材质等因素进行调节。
4. 清洗和后处理：将染色后的物体从银溶液中取出，经过适当的清洗，以去除残留的银离子和其它杂质。
清洗后，还可以进行一些后处理步骤，如漂白、封闭等，以增加染色层的光亮度和耐久性。
总的来说，银染的原理是通过电解作用，将银离子沉积在物体表面，形成一层均匀的银膜。
这一过程的关键是控制电解条件和后处理步骤，以确保银染效果的稳
定和持久。
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ptotocol是这样的，请看哪里不妥：
蛋白银染步骤
步骤溶液时间
固定甲醇100ml
冰醋酸25ml
加双蒸水至250ml 30min
冲洗双蒸水3次
敏化甲醇75ml
戊二醛（25%w/）1.25ml
硫代硫酸钠(5%w/) 10ml
醋酸钠（17g）
加双蒸水至250ml 30min
冲洗双蒸水3次
银反应硝酸银溶液(2.5%w/) 25ml
甲醛(37%w/) 0.1ml
加双蒸水至250ml 20min
冲洗双蒸水2次
显色碳酸钠(6.25g)
甲醛(37%w/) 0.05ml
加双蒸水至250ml
2-5min
终止EDTA-Na22H2O(3.65g)
加双蒸水至250ml 10min
冲洗双蒸水3次
建议使用silia的方法！！
简单，快！
本人的银染方法：
1. 固定：100ml MeOH, 24ml H Ac, 56ml 0.04%HCHO, 20ml ddH2O,洗三次，每次>=20分钟；
2. 50％EtOH洗PAGE胶三次，每次20分钟；
3. 预处理：0.02％Na2S2O3 处理一分钟；
4. 水洗：ddH2O漂洗三次，每次20秒；
5. 染色：0.8ml 20％AgNO3+72ml 0.04%HCHO处理PAGE胶20分钟；
6. 水洗：同上；
7. 显色：25ml 12％Na2CO3, 24ml 0.04%HCHO, 1ml 0.02％Na2S2O3, 漂洗10－15分钟；
8. 水洗：同上；
9. 终止：50％MeOH, 12％H Ac,10分钟。
以上步骤从中科院生化所学来，过程和silia 的基本一致，不知道是否有出入，请大家指正。
谢谢！！！
5.2.2.3 银染色
1 银染液1（1000ml）：甲醇50％乙酸12％
甲醇500ml 冰醋酸120ml
2 银染液2（1000ml）：甲醇30％，乙酸钠0.4M，戊二醛0.5%，硫代硫酸钠0.1%，（含乙酸1－2ml）
甲醇300ml 乙酸钠54.4g 戊二醛10ml 硫代硫酸钠1g 乙酸1－2ml
3 显色液(1000ml) 无水碳酸钠2.5% 甲醛0.02%
无水碳酸钠25g，甲醛1.5ml
4 硝酸银（100ml）：20%硝酸银（过滤后待用）
染色步骤：
1 银染液1 洗2次，每次5分钟
2 银染液2 洗1次，每次30分钟
3 超纯水洗2次，每次1分钟
4 0.5%硝酸银洗30分钟
5 超纯水洗5次，每次1分钟（关键步骤，共计5分钟）显色液显色
6 看到各条带，则倾去显色液, 1％乙酸中止
我感觉浸银后、显色前的水洗非常关键，时间不能太长，次数不能太多，否则可能会染不上颜色。
但水洗不充分又可能导致背景较深。
我个人一般是用水洗三遍，每次半分钟左右。
固定液：50%乙醇，10%冰醋酸，40%水
浸泡液：30%乙醇，6.8% NaAc，50%戊二醛0.625ml，0.2% NaS2O3•5H2O
银染液：0.1% AgNO3，0.02% 甲醛
显色液：2.5% Na2CO3，0.01% 甲醛
终止液：1.46% EDTA-2Na•2H2O
silia wrote:
我室固定的蛋白银染方法，效果很不错，也很简单，步骤如下：
1）PAGE胶切下后用50％乙醇（100ml左右）洗三次，每次20分钟
2）2％硫代乙醇酸钠稀释50倍作用1分钟，双蒸水洗3次，每次20秒
3）2％硝酸银稀释10倍作用20分钟，双蒸水洗3次，每次20秒
4）6％碳酸钠溶液显色，直到条带清晰为止，一般几分钟，大量水冲洗
5）加中止液10％乙酸中止即可
银染的方法种类很多，目前有文献报道的就有100 多种。
但是其准确的染色机制还不是特别的清楚。
大致的原理是银离子在碱性pH 环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显色。
由于银染的灵敏度很高，可染出胶上低于1 ng/蛋白质点，故广泛的用在2D 凝胶分析上，及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。
这里介绍的是我们实验室成功运用的银染方法，对关键操作及要求做了补充！主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测！如内源性GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究
银染操作规程
实验目的：检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。
实验原理：在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。
染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。
银染的详细机制还不是非常清楚。
试剂：乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛
实验操作程序：
固定：30min或者更长时间
100ml 乙醇40% 乙醇
25ml冰醋酸10% 冰醋酸
加水到250ml
致敏：30min
75ml 乙醇30% 乙醇
17g 乙酸钠28.2g 三水乙酸钠
0.5g硫代硫酸钠
加水到终体积250ml
水洗：3 x 10min
银染：20min
0.625g AgNO3
100 ul 37%甲醛（在使用前加入）
加水到终体积250ml
水洗：2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色)
显色：视情况而定
6.25 g Na2CO3
50 ul 37% 甲醛（在使用前加入）
加水到终体积250ml
终止：10min
3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸
加水到终体积250ml
保存：1% 冰醋酸，4 ℃
注意事项：
1．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。
2．甲醛在使用前加入。
3．最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液，显色到点清晰。
4．显色过程很快，要注意把握时间，避免染色过度。
5．银染液和显色液需要预冷。
6．所用器皿要很洁净，不用手直接接触，以免杂蛋白污染！
7．清洗用水尽量用高纯度去离子水，蒸馏水更佳，可以减少背景着色。
银染注意事项:
1. 银染主要出现在胶的表面，用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
2. 对于考马斯亮蓝染色的胶，可用甲醇将胶漂洗后，继续进行银染。
乙酸会干扰银染，因此要确保将凝胶中的乙酸彻底洗净。
如果凝胶被过度银染，可用Rapid Fix脱色，并用考马斯亮蓝二次染色。
3. 不同蛋白质对银染的反应是不一样的，尤其是碱性蛋白染色效果差。
因此，不宜用银染测定不同蛋白的比例。
4. 染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择40-60 rpm.
5. 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程操作中都应带手套。
6. 凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的，所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS 的去离子水。
7. 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面，可能是在几步漂洗过程中洗得不够彻底，或是染色过程时温度太低。
8. 较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。
9. 在最初甲醇洗脱时就应该先除去甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100和两性电解质这些干扰性物质。
10. 室温操作，温度的波动往往会干扰银染的效果，恒温水浴可以解决这个问题。
11. 当蛋白质中含有核酸或金属时，银染则不会奏效。
改变固定剂和染色之前对胶进行漂洗可以改进染色效果。
12. SDS凝胶中的巯基乙醇会导致在60 KDa或67 KDa处出现两条水平线。
减少巯基乙醇的用量即可避免。
13. 凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高40倍。
14. 染色使用的玻璃器皿必须非常干净，用酸浸泡可以满足要求。
15. 银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带会变浅，而背景会加深。