大白栓菌的人工培养条件优化
大白栓菌中3-氢化松苓酸B含量的测定
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王 星琴 汪錾 植 郭 志 勇 王 海 燕 邓 改 改 邹 坤
（ ．天然 产物研 究与利 用 湖北省 重 点 实验 室 （ １ 三峡 大学）三峡 大 学化 学与生命 科 学 院 ，湖 北 宜 昌
宜 昌 市 中 医 院 ，湖 北 宜 昌 ４ ３０ ） ４ ０ ０
４ ３ ０ ；２ ４ ０２ ．
５ ７ ， 工培 养 物 中 ３氢化 松苓 酸 Ｂ的含量 为 ０ ５ ，－ ．１ 人 － ． ３ ３ 氢化松 苓酸 Ｂ在 ２ ￣２ ０ ０ ４ ｍｇ・ 呈 良 Ｉ
好 的线性 关 系（ Ｒ一０ ９ ９ ） 平 均 回收率 为 ９ ． （ Ｄ一３ ０ ． 论 ： 用 高 效 液 相色 谱 法 测定 ． ９ ， ９ ９ ２ ＲＳ ．）结 采 大 白栓 菌 中 ３氢 化松 苓酸 Ｂ的含量 简便 快速 ， － 结果 可靠 ， 可用 于大 白栓 菌 的质量控 制．
菌种扩大培养的一般流程
菌种扩大培养的一般流程菌种扩大培养是微生物学实验中常见的一项操作，其目的是在较小的培养基中培养并扩大菌种数量，以满足后续实验的需要。
下面将介绍一般的菌种扩大培养流程，以帮助读者了解和掌握这一技术。
第一步：选择适当的培养基菌种扩大培养的第一步是选择适当的培养基。
不同的菌种对培养基的要求不同，因此选择合适的培养基是非常重要的。
一般来说，培养基应包含适当的营养物质，如碳源、氮源、矿物质和水等，以满足菌种生长的需要。
第二步：制备培养基制备培养基是菌种扩大培养的关键步骤之一。
一般情况下，制备培养基需要将适量的培养基粉末溶解在适量的蒸馏水中，并进行加热煮沸，以杀灭其中的细菌和其他微生物。
然后，将煮沸的培养基倒入无菌培养皿或试管中，并在冷却后加入适量的菌种。
第三步：接种菌种接种菌种是菌种扩大培养的关键步骤之一。
接种菌种时，首先需要将菌种从原始培养基中转移到新的培养基中。
这可以通过采用无菌的接种环、接种针等工具，将菌种从原始培养基中接种到新的培养基中完成。
为了确保接种的无菌性，可以在接种后进行密封和贴标。
第四步：培养菌种在接种菌种后，需要将培养基置于适当的环境条件下进行培养。
一般来说，菌种的生长需要适宜的温度、湿度和氧气条件。
因此，在培养过程中需要注意保持适宜的培养环境，并定期观察菌落的生长情况。
第五步：检测菌种的生长情况在培养一定时间后，需要检测菌种的生长情况。
这可以通过肉眼观察菌落的形态、颜色和大小等特征来判断。
同时，也可以采用显微镜观察菌落的细胞形态和结构，以进一步确定菌种的生长情况。
第六步：收获菌种在菌种生长到一定程度后，可以进行菌种的收获。
一般来说，菌种可以通过离心、过滤和冻干等方法进行收获。
收获后的菌种可以用于后续的实验操作或保存在冷冻库中。
菌种扩大培养的一般流程包括选择适当的培养基、制备培养基、接种菌种、培养菌种、检测菌种的生长情况和收获菌种等步骤。
通过掌握和熟练操作这一流程，可以有效地扩大菌种数量，并满足后续实验的需要。
发酵菌种扩大培养的一般工艺流程
发酵菌种扩大培养的一般工艺流程
发酵菌种扩大培养是生物制药、食品工业和农业等领域中常见的一项技术。
下面是一般的发酵菌种扩大培养的工艺流程。
1. 菌种前处理：选择合适的菌株并进行预处理。
这包括接种菌株到适宜的培养基中，以及优化培养条件，如温度、pH值和培养基成分等。
预处理的目的是为了提高菌种的生长速度和产量。
2. 发酵罐的选择：根据菌种的特性和生产需求选择合适的发酵罐。
常见的发酵罐有批式发酵罐、连续式发酵罐和固定床发酵罐等。
3. 发酵罐装载和接种：将预处理好的菌种接种到发酵罐中。
接种时要注意保持无菌操作，以避免杂菌的污染。
4. 发酵过程的控制：在发酵过程中，需要对温度、pH值、氧气供应、搅拌速度和营养物质等进行控制和调节。
这些参数的控制可以通过自动化系统进行，以保证菌种的最佳生长条件。
5. 发酵罐内的生物反应：菌种在发酵罐中进行生长和代谢活动，产生所需的物质。
不同的菌株和产品需要不同的发酵时间，一般需要几天到几周不等。
6. 产物的回收和纯化：发酵结束后，需要对发酵液进行回收和纯化。
这包括离心、过滤、浓缩和柱层析等步骤，以获得纯度较高的产物。
7. 发酵罐的清洗和消毒：发酵结束后，需要对发酵罐进行清洗和消毒，以准备下一轮的发酵。
以上是发酵菌种扩大培养的一般工艺流程。
在实际应用中，还需要根据具体的菌株和产品进行优化和调整。
发酵菌种扩大培养技术的发展，为生物制药和食品工业的发展提供了强大的支持，也为我们生活带来了更多的便利和好处。
污水处理培养菌种方法
污水处理培养菌种方法污水处理是一项重要的环境保护工作，有效的污水处理可以减少对自然环境的污染，保护水资源。
在污水处理过程中，菌种的选取和培养是关键的步骤之一。
本文将介绍一种常用的污水处理培养菌种方法。
一、菌种选取在污水处理中，常用的菌种有好氧菌、厌氧菌和硝化菌等。
好氧菌主要用于有机物的降解，厌氧菌主要用于有机物的发酵和产气，硝化菌主要用于氨氮的氧化。
根据不同的污水处理工艺和处理要求，选择适合的菌种非常重要。
二、菌种培养方法1. 好氧菌的培养方法：（1）制备培养基：将适量的葡萄糖、氮源和矿物盐等溶解在蒸馏水中，加热煮沸，然后冷却至室温。
调节pH值为7.0左右。
（2）接种菌种：将选取的好氧菌接种到培养基中，接种量一般为原液的1%。
（3）培养条件：将接种好的培养基放入恒温摇床中，温度控制在30℃左右，转速控制在150 r/min左右。
（4）培养时间：培养时间一般为24小时，过程中要进行观察和记录。
2. 厌氧菌的培养方法：（1）制备培养基：将适量的有机物、氮源和缺氧环境所需的添加剂等溶解在蒸馏水中，加热煮沸，然后冷却至室温。
调节pH值为7.0左右。
（2）接种菌种：将选取的厌氧菌接种到培养基中，接种量一般为原液的1%。
（3）培养条件：将接种好的培养基放入恒温培养箱中，温度控制在37℃左右，同时保持缺氧环境。
（4）培养时间：培养时间一般为48小时，过程中要进行观察和记录。
3. 硝化菌的培养方法：（1）制备培养基：将适量的氨氮、磷酸盐和矿物盐等溶解在蒸馏水中，加热煮沸，然后冷却至室温。
调节pH值为7.0左右。
（2）接种菌种：将选取的硝化菌接种到培养基中，接种量一般为原液的1%。
（3）培养条件：将接种好的培养基放入恒温摇床中，温度控制在25℃左右，转速控制在120 r/min左右。
（4）培养时间：培养时间一般为72小时，过程中要进行观察和记录。
三、菌种培养后的应用培养好的菌种可以应用于实际的污水处理工程中。
根据处理工艺的不同，可以选择合适的菌种投放到污水处理系统中，通过菌种的作用，加速有机物的降解和氮的去除，提高污水处理效果。
污水处理培养菌种方法
污水处理培养菌种方法污水处理是一项重要的环保工作，其目的是将污水中的有害物质去除或者降低到安全的水平，以保护环境和人类健康。
而污水处理的关键之一就是培养菌种，这是实现高效处理的基础。
本文将从五个大点来阐述污水处理培养菌种的方法。
引言概述：污水处理是一项复杂的过程，要达到理想的处理效果，需要使用适宜的菌种。
培养菌种的方法有不少种，包括传统的培养方法和现代的生物技术方法。
下面将详细介绍这些方法。
正文内容：1. 传统培养方法1.1 选择合适的培养基：根据污水的成份和特性，选择适合菌种生长的培养基。
常用的培养基有富营养培养基、无机盐基础培养基等。
1.2 菌种的分离和筛选：将污水中的细菌进行分离，筛选出适合处理特定污水的菌种。
常用的方法有平板分离法、液体分离法等。
1.3 菌种的纯化和培养：将分离出的菌种进行纯化，得到纯种菌株。
然后，将纯种菌株进行培养，以扩大菌种数量。
2. 现代生物技术方法2.1 基因工程技术：通过基因工程技术，改造菌种的代谢途径，使其具有更高的降解能力。
这包括基因克隆、基因转移等技术。
2.2 蛋白质工程技术：通过改变菌种中特定酶的结构和功能，提高其对特定污染物的降解效率。
这包括蛋白质工程、酶工程等技术。
2.3 微生物组群调控技术：通过调控不同菌种的比例和相互作用，实现协同降解特定污染物。
这包括菌种共培养、菌种共生等技术。
3. 培养条件的优化3.1 温度和pH值的调控：根据不同菌种的生长特性，调节培养条件中的温度和pH值，使其适应菌种的生长要求。
3.2 氧气供应的控制：根据菌种的需氧性或者厌氧性，控制培养条件中的氧气供应，以满足菌种的生长需求。
3.3 营养物质的添加：根据菌种的需求，添加适量的营养物质，以提供菌种生长所需的能量和营养。
4. 培养菌种的监测和评估4.1 菌种的数量监测：通过菌落计数、聚合酶链反应等方法，监测培养过程中菌种的数量变化，以评估培养效果。
4.2 菌种的活性评估：通过测定菌种对特定污染物的降解率、酶活性等指标，评估菌种的降解能力和活性。
菌种扩大培养的一般流程
菌种扩大培养的一般流程菌种扩大培养是微生物学中的重要实验技术，用于大规模生产菌种或菌株，以满足不同领域的研究和应用需求。
本文将介绍菌种扩大培养的一般流程。
一、菌种的保存与激活菌种的保存是保证后续扩大培养的重要步骤。
常见的保存方式包括冷冻保存和冻干保存。
在开始扩大培养之前，需要将保存的菌种进行激活，使其恢复生长活力。
二、菌种的预培养为了保证扩大培养的成功，需要进行菌种的预培养。
首先，从保存的菌种中挑取一部分菌落，接种到适宜的培养基上，进行预培养。
预培养的时间一般为16-24小时，使菌种处于快速生长期，为后续扩大培养做好准备。
三、选择合适的培养基菌种的扩大培养需要选择合适的培养基。
不同的菌株对培养基的要求有所不同，一般包括碳源、氮源、无机盐等。
根据菌株的需求，选择适当的培养基，以提供充足的营养物质，促进菌种的快速繁殖。
四、扩大培养的条件控制菌种的扩大培养需要控制一系列的条件，包括温度、pH值、氧气供应等。
一般情况下，细菌的培养温度为37℃，真菌的培养温度为25℃。
同时，要根据菌种的特性，调节培养基的pH值，以提供最适宜的环境。
对于需氧生长的菌种，需要提供充足的氧气供应。
五、菌种的扩大培养策略菌种的扩大培养可以采用不同的策略，包括液体培养和固体培养。
液体培养适用于大规模生产菌液，可以采用摇瓶培养或发酵罐培养。
固体培养适用于大规模生产菌落，可以采用平板培养或培养瓶内的固体培养。
根据具体情况选择合适的培养策略，以满足菌种扩大培养的需求。
六、菌种的收获与保存扩大培养结束后，需要收获菌液或菌落，并进行保存。
对于菌液，可以通过离心分离菌体，得到菌体沉淀，并进行冷冻保存。
对于菌落，可以进行冷冻保存或进行冻干保存。
保存菌种的目的是为了后续的实验和应用。
总结起来，菌种扩大培养的一般流程包括菌种的保存与激活、菌种的预培养、选择合适的培养基、扩大培养的条件控制、菌种的扩大培养策略，以及菌种的收获与保存。
通过合理控制每个环节，可以有效地扩大培养菌种，满足科研和实际应用的需求。
《图说食用菌生态栽培技术》笔记
《图说食用菌生态栽培技术》读书随笔目录一、前言 (2)1.1 《图说食用菌生态栽培技术》的背景与意义 (3)1.2 本书的目的和内容概述 (4)二、食用菌生态栽培技术的基本原理 (5)2.1 食用菌的生物学特性 (6)2.2 食用菌生态栽培的环境条件 (8)2.3 食用菌生态栽培的原料选择 (10)2.4 食用菌生态栽培的病虫害防治 (11)三、食用菌生态栽培的主要技术环节 (12)3.1 菌种选择与优化 (13)3.2 栽培基配制与消毒 (14)3.3 种植、管理、采收等关键技术 (15)四、食用菌生态栽培的设施与设备 (17)4.1 栽培设施的选择与构建 (18)4.2 设施设备的运行与管理 (19)五、食用菌产品的质量安全与认证 (20)5.1 食用菌产品的质量安全标准 (22)5.2 食用菌产品的认证程序与流程 (24)六、食用菌生态栽培的经济效益分析 (25)6.1 食用菌生态栽培的成本构成与效益分析 (26)6.2 食用菌生态栽培的市场风险与防范 (28)七、食用菌生态栽培的产业政策与发展趋势 (29)7.1 国家相关政策对食用菌产业的支持与推动 (31)7.2 食用菌产业的发展前景与挑战 (32)八、结论 (33)8.1 对食用菌生态栽培技术的总结与评价 (35)8.2 对未来食用菌生态栽培技术发展的展望 (36)一、前言当我翻开这本《图说食用菌生态栽培技术》时，内心充满了期待和好奇。
这本书以其独特的视角和丰富的信息，让我对食用菌生态栽培技术有了更深入的了解。
在阅读这本书的过程中，我不仅获取了专业知识，更被书中传达的对自然的敬畏和对生命的尊重所感动。
在开始阅读之前，我想先谈谈为何我对这本书产生了浓厚的兴趣。
随着现代农业的发展，人们对食品安全和环境保护的意识日益增强。
食用菌作为一种营养丰富、生态友好的食品来源，其栽培技术的关注度也日益提高。
这本书以图文并茂的方式，详细介绍了食用菌生态栽培的各个环节，包括菌种选择、环境控制、病虫害防治等，让我看到了这一领域的魅力和挑战。
临床医学检验技术(师)：细菌感染的病原学诊断考试资料(题库版)
临床医学检验技术(师)：细菌感染的病原学诊断考试资料（题库版）1、单选下列细菌在人工营养培养基上繁殖速度最慢的是（）A.大肠埃希菌B.链球菌C.脑膜炎奈瑟菌D.结核分枝杆菌E.变形杆菌正确答案：D参考解析：大多（江南博哥）数细菌分裂一代需要的时间是20~30分钟，个别细菌繁殖速度较慢，如结核分枝杆菌需要18~20小时。
2、单选做细菌培养时，采集标本的最佳时间是（）A.应用抗菌药物之前采集标本B.应用抗菌药物之后采集标本C.一边应用抗菌药物一边采集标本D.采集标本与是否应用抗菌药物没有关系E.应用抗菌药物一天后采集标本正确答案：A参考解析：标本采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时，而且必须在使用抗生素或其他抗菌药物之前采集。
3、单选可以用类毒素预防的疾病是（）A.百日咳B.痢疾C.伤寒D.白喉E.结核病正确答案：D参考解析：百日咳、痢疾、结核病主要是用减毒的活疫苗进行预防，伤寒可以用灭活的疫苗或荚膜多糖疫苗，注射白喉类毒素是预防白喉的重要措施。
4、单选怀疑伤寒感染，进行肥达试验，病程中逐周复查，若效价依次递增或恢复期效价增加多少倍时有意义（）A.≥2B.≥4C.≥8D.≥16E.≥32正确答案：B参考解析：多数血清学诊断需取患者急性期和恢复期双份血清标本，若后者的抗体效价比前者升高4倍或4倍以上才有诊断意义。
5、单选用于血清学鉴定确定细菌种、型的常用方法是（）A.对流免疫电泳B.协同凝集试验C.直接凝集试验D.玻片凝集试验E.乳胶凝集试验正确答案：D参考解析：玻片凝集试验是细菌学检验中鉴定菌种和确定菌型的常规方法。
6、单选在制备培养基时，为有利于检出病原菌而抑制非病原菌，常加入一定量的抑制剂，下列属于抑制剂的有（）A.维生素B.氨基酸C.胆盐D.嘌呤E.嘧啶正确答案：C参考解析：抑制剂种类很多，可根据不同的目的选择不同的抑制剂，常用的有胆盐、煌绿、亚硫酸钠、亚硒酸钠及一些染料和某些抗生素等。
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大白栓菌的人工培养条件优化
作者：谭梦华段朝红桂裕成向江涛叶建武张亚雄汪銎植
【摘要】目的探讨大白栓菌的人工大规模培养条件。
方法采用正交实验设计筛选大白栓菌的固体及液体培养条件。
结果固体培养基的最佳配方为栗木屑含量70 g，玉米粉含量35 g，石膏含量2 g，白糖含量1 g;大白栓菌液体培养的最佳条件是玉米粉4. 2 g/100 ml,栗木汁5. 0 g/100 ml,溶氧条件为静置培养。
结论大白栓菌可以采用人工大规模培养，为进一步开发利用创造了条件。
【关键词】大白栓菌人工培养配方
Abstract:ObjectiveTo investigate the artificial rearing condition of Trametes lactinea (Berk.)Pat. MethodThe orthogonal design was used to select the conditions of solid and liquid culture. ResultThe best formula of the solid culture medium was ascertained to be castanea spp particle contents 70 g，corn flour contents 35，gypse contents 2 g, white sugar contents 1 g; the best formula of the liquid culture medium have been ascertained to be corn flour 4.2 g/lOOml ，castanea spp juice 5 g/lOOml, dissolve for oxygen condition static culture, not being put into rocking bed. ConclusionThe artificial rearing condition is applicable to the large-scale culture of Trametes lactinea (Berk.)Pat，which would provide some conditions for further development.
Key words: Trametes lactinea (Berk. )Pat. ； Artificial
rearing； Formula
大白栓菌Trametes lactinea (Berk.)Pat.为多孔菌科真菌，担子果一年生，无柄，木栓质。
它生于活叶树木材上，分布于中国、马来西亚、印度尼西亚、菲律宾、巴基斯坦、印度、斯里兰卡、澳大利亚等国家[1]。
大白栓菌作为天麻等兰科植物种子萌发菌，具有一定的经济价值[2]。
但大白栓菌野生资源较少，不能满足其开发利用的需要。
因此本实验对大白栓菌的人工培养进行了研究。
1材料与仪器
1.1 材料
玉米粉、石膏、白糖、栗木屑、琼脂、95%酒精(天津科密欧化学试剂厂20050801)、无水乙醇(武汉中南化工试剂有限公司20050906)、氯仿（上海宏申化工厂20051116)、醋酸乙酯（天津市东丽区天大化学试剂厂20050608)、薄层板及硅胶（青岛海洋化工有限公司20050911)、柱层析硅胶200-300目
(青岛海洋化丄厂分厂20050311)。
大白栓菌由湖北三峡科技学校提供，经王
绍柏老师鉴定为大白栓菌(Trametes lactinea (Berk.) Pat.)。
1.2仪器
旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂RE-52M)、恒温振荡器（国华企业
CHA-S)、生化培养箱(广东省医疗器械厂LRH-280)、Centrifuge 5810R冷冻离
心机、DZF-6020型真空干燥箱等。
2方法与结果
2.1菌种的纯化(涂布分离法）[3]
2. 1. 1培养基配制先将栗木屑用水加热提取得栗木汁，将玉米粉、石膏、白糖以一定比例混匀，然后加入栗木汁，再加入2%琼脂，用玻棒搅拌均匀后加热至沸，0. 1〜0. 15MPa蒸气高压灭菌30 min。
2.1.2平板的制作及接种各培养皿趁热倒入 5 ml培养基，冷却后即得平板，丁•无菌操作台上进行接种，将菌丝放到75%酒精中冲洗，然后剪碎放入装有无菌水的小三角瓶中，充分摇匀制成孢子悬浮液后涂布到平板上。
2. 1.3菌体培养置28 °C恒温培养箱中培养120 h。
培养皿中分别长出了
2〜4个菌落，通过电子显微镜镜检，确定了大白栓菌。
2.2菌种的斜面保藏
2. 2. 1试管斜面制备使用cp 15X100玻璃试管，趁热倒入2ml培养基，包
扎平放，冷却后即成斜面。
2. 2. 2接种与培养将2. 1培养皿中的各个菌落于无菌操作台上分别接种到
试管中，28°C恒温培养72 ho
2. 2. 3保藏挑选上述生长良好的试管斜面菌种丁•冰箱中冷冻保藏。
2.3大白栓菌的固体培养
2.3.1培养基的确定用松木屑、玉米芯屑、杂木屑、栗木屑作为培养基进
行实验，发现栗木屑的培养效果最佳。
但只用栗木木屑作为培养基，由于其营
养成分不能很好地满足大白栓菌的生长，虽然能生长，但其生长周期长，菌丝
活性较差。
因此，我们对培养基配方进行了研究。
确定用栗木屑，玉米粉，石膏，白糖组成培养基，并对配方进行了优化。
2.3.2培养基的优化采用正交实验对栗木屑、玉米面、石膏、白糖配比进
行优化。
其因素水平见表1,以生长的大白栓菌菌丝干重为考核指标。
结果见
表2。
表1正交实验水平表（略）表2 L9 (34)正交实验方案及结果（略）从各因素水平均值(K值)分析，因素A为K2>K1>K3，因素B为K1>K2>K3，因素C为K2>K3>K1，因素D为K3>K2>K1，其培养条件为A2B1C2D3，对各因素水平的显著性进行方差分析。
结果见表3。
表3 方差分析（略）
表3结果表明，各因素水平差异无显著性，结合实际情况，其优选工艺为
A2B1C2 D3,即栗木屑含量为70 g，玉米粉含量为35 g，石膏含量为2 g,白
糖含量为1 g。
2.4大白栓菌的液体培养
2.4.1培养基的配制玉米粉35 g,石膏2 g,白糖1 g,栗木汁(栗木屑
70 g水煮1. 5 h后过滤），加自来水稀释至700 ml,用玻棒搅拌均匀加热至沸，
最后0. 1〜0. 15MPa蒸气高压灭菌30 min。
2.4.2接种及摇瓶培养三角瓶装入适量培养基灭菌后，于无菌操作台上接
种，28°C恒温培养10cL培养结束后离心，称量菌丝湿重及干重，计算收率，
收率为11%。
2.4.3培养基的优化采用正交实验对玉米粉、栗木汁、溶氧条件进行优化。
因素水平见表4。
以菌丝干重为考核指标，结果见表5，方差分析结果见表6。
表4正交实验因素水平表（略）表5 L9 (33)正交实验设计方案及结果（略)
从各因素水平均值(K值)分析，因素A为K2>K3>K1，因素B为K2>
K1>K3,因素C为K2>K3>K1，其培养条件为A2B2C2，对各因素水平的显著性
进
行方差分析。
结果见表6»表6方差分析（略）
表6结果表明，各因素水平差异无显著性，结合实际情况，其优选工艺为
A2B2C2,即玉米粉用量为 4. 285 7 g/100 ml,粟木汁用量为 5 g/100 ml,溶氧
条件为静置培养，不使用摇床。
3讨论
经过实验研究确定了大白栓菌的人工培养条件，为大白栓菌的大规模人工
繁殖提供了科学依据。
对提高兰科植物种子萌发率，促进天麻生产，兰花培育
等具有重要意义。
进一步对大白栓菌成分分析，促萌发机制进行研究，将有助于更好地利用
大白检菌。
成分分析表明，大白栓菌含有大量三萜类化合物，有待于进一步开发利用。
【参考文献】
[1] 赵继
鼎.中国真菌志，第3卷[M].北京：科学出版社，1998: 365.
[2]汪銎植，王绍柏，刘晓琴，等.栽培条件对无土袋栽天麻种麻质量的影
响[J].中国民族民间医药杂志，2006，4： 243.
[1] 刘吉开.高等真菌化学[M].北京：中国科学出版社，2004: 33.。