金银花的HPLC药效指纹图谱研究
中药金银花GC法指纹图谱分析
中药金银花GC法指纹图谱分析摘要：指纹图谱的分析可以全面反映中药成分化学特征，并体现内在整体质量，有效弥补对少数成分控制质量的不足，对金银花指纹图谱进行研究，通过GC法能够确定不同环境、栽培条件对金银花内部成分含量的影响，实验证明该方式便利性较高，重现性良好，能够作为对中药金银花药材的质量控制方式之一，可以被运用于药物检测工作中。
关键词：中药；金银花；GC法；指纹图谱引言：金银花又名忍冬花、双花等等，是忍冬科忍冬属植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花。
金银花是一种重要的中药药材，有多种有效成分能够治疗多种疾病，比如其成分中含有的金银花精油等，能够在卷烟、食品、化妆品等行业产品中添加，具有很高的经济价值。
为此应该严格做好对金银花成分的质量控制测试，可运用GC法分析其指纹图谱，弥补传统检测中的不足，为金银花药材的质量评价提供重要的科学依据。
一、研究中药金银花指纹图谱的意义中药金银花并不是单一的化合物，其化学成分较为复杂，难以清晰判断其结构性质，因此传统检测方式中通过某一成分的含量作为指标，难以准确反映药物的状况。
同时金银花在使用中还应确保安全性、有效性，工作人员应严格做好金银花质量检测，若不做好稳定性检测，将会直接影响药品的安全性，只有做好全面的质量控制，才能够确保药品使用中不会引发其他问题，而通过指纹图谱则可较为全面地反映出金银花药材内部成分含量及相关比例关系。
指纹图谱实验在中药成分检测中拥有重要的作用。
①工作人员可通过观察色谱指纹图谱的特征，分辨中药材的真伪。
②指纹图谱可被用于区分植物药材的不同部位，严格做好药物使用。
③指纹图谱可被用于观察药材的成品制剂的质量，确保药材能够更为合理地被运用。
④指纹图谱使用价值较高，可以更为标准地反馈药物制剂化学成分的变化，做好动态性跟踪。
⑤指纹图谱在应用中，可检测到药材原料与药剂成品之间，以及药材原料与批量药剂质量的稳定性，确保药物使用的合理性及科学性，降低各类药物问题的出现几率[1]。
金银花不同干燥技术HPLC指纹图谱研究
金银花不同干燥技术HP LC 指纹图谱研究熊 艳,高慧敏,王智民,朱晶晶(中国中医科学院中药研究所,北京100700)[摘要] 目的:对不同干燥技术所得金银花进行HP LC 指纹图谱的比较研究。
方法:Kr omasil C 18色谱柱(4.6mm ×250mm,5μm ),乙腈-0.4%的磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长238n m,柱温30℃,流速1mL ・m in -1。
结果:建立了不同干燥技术处理的金银花高效液相指纹图谱,确定了17个共有峰,但是成分的相对含量有明显差异。
结论:利用HP LC 指纹图谱分析法可较全面的反映不同干燥技术处理的金银花间的差异。
[关键词] 金银花;干燥技术;绿原酸;木犀草苷;HP LC 指纹图谱[收稿日期] 2008-09-21[基金项目] 国家“十一五”科技支撑计划项目(2006BA I 09B05-9);国家自然科学基金项目(30672601)[通信作者] 3王智民,Tel/Fax:(010)84014128,E -mail:zhmw123@[作者简介] 熊艳,湖南中医药大学药学院2006级研究生 金银花(Fl os Lonicerae )为忍冬科植物忍冬L onicera japonica Thunb .的干燥花蕾[1],是药食两用的大宗中药材,富含绿原酸等有机酸类,木犀草苷等黄酮类,环烯醚萜及其苷类化合物等多种有效成分[2]。
在忍冬生长发育过程中,金银花的最佳采收时间的确定和初加工方法的选择是花类药材G AP 实践中的关键问题之一。
由于忍冬品种多、开花次数多(可达4～6次)、花期长,采摘鲜运困难,因此金银花的产地加工,直接影响到药材的产量、品质以及深度开发。
目前金银花的干燥方法以晒干或阴晾干最为常见,但其理论依据是什么,以上2种技术是否为最佳干燥方法,不同干燥技术对金银花有效成分究竟有多大影响,这些问题亟待解决。
鉴于此,本研究以二白期金银花为材料,通过HP LC 指纹图谱和绿原酸、木犀草苷等成分含量测定,比较不同干燥技术对山东、河南2个道地产地金银花品质的影响,在此基础上对其内在质量进行比较分析,以期筛选适于金银花产地加工的干燥技术,为提高和控制金银花药材质量提供理论依据。
不同产地金银花药材HPLC指纹图谱的研究
不同产地金银花药材HPLC指纹图谱的研究宋九华;张艳明;成英【期刊名称】《化学研究与应用》【年(卷),期】2018(030)005【摘要】研究并建立不同产地的金银花药材的指纹图谱,并应用系统聚类分析和主成分分析建立金银花药材的化学模式识别方法,以期为金银花药材品质评价与质量控制提供参考.CP-C18色谱柱(5 μm,4.6mm×150 mm),以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,柱温25℃,检测波长为254 nm.16批不同产地的金银花药材有13个共有峰,相似度在0.916~0.990.聚类分析能对不同产地的金银花药材进行有效识别,主成分分析结果与聚类分析结果类似.建立的方法能够成功应用于金银花药材的质量控制与评价及产地识别,可为制定金银花药材质量控制与评价模式提供新的参考依据.%To study and establish the fingerprints of Lonicera japonica from different producing places by HPLC.The fingerprints of L.japonica were established by using CP-C18 as analytical column and acetonitrile-0.2%H3PO4aqueous in gradient as a mobile phase.The flow rate was 1.0 mL·m-1and the detecting wavelength was set at 255 nm.The temperature of column was at 25℃.There were 13 common peaks in 16 batches of honeysuckle in different producing areas,with a similarity of 0.916~0.990.Cluster analysis can be used to identify L.japonica in different habitats.The results of principal component analysis are similar to those of cluster analysis.The fingerprints ofL.japonica from different producing places by HPLC were established inthis experiment.It can be used to analyze and compare the content of active compounds of L.japonica.【总页数】5页(P823-827)【作者】宋九华;张艳明;成英【作者单位】乐山师范学院化学学院,四川乐山614004;乐山师范学院化学学院,四川乐山614004;乐山师范学院化学学院,四川乐山614004【正文语种】中文【中图分类】O657.7【相关文献】1.不同产地防己药材HPLC指纹图谱的研究 [J], 李全生;张正杰;杨世海2.不同产地夏枯草药材HPLC指纹图谱研究 [J], 张俊侠;马玉;肖禾;焦小珂3.不同产地苦杏仁药材及其饮片水提液HPLC指纹图谱研究 [J], 胡祥昊;李亚男;孙志强;高鹏;代龙4.不同产地蟾酥药材HPLC指纹图谱及模式识别研究 [J], 成小兰; 庞中化; 王志刚; 胡春萍; 吕章明; 曹鹏5.不同产地白芍药材及其提取物HPLC指纹图谱相关性研究 [J], 朱如彩;蔡萍;刘亚刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
金银花药材指纹图谱研究-上海药学会
上海市食品药品检验所 季 申
2013.04
Address: 1500 Zhang Heng Road, Shanghai 201203, China Email: jishen2008@
1
报告内容
整体控制中药质量的必要性 应用一测多评等技术的问题和解决方案 整体控制中药质量的展望
小分子成分总量约占干燥提取物近10%。
12
连翘苷（C27H34O11） 连翘酯苷C及其同分异构体（C29H36O16）
连翘酚1（C29H36O15）
在蓝圈处咖啡酰基取代位置发 生互换，或空间上立体构型发 生变化，都会产生异构体。
芦丁(C27H30O16)
suspensaside A及其同分异构体（C29H34O15）
9
金银花提取物物质基础的研究
明确了金银花提取物中的11个成分
1、新绿原酸 2、绿原酸 3、隐绿原酸 4、未指认 5、咖啡酸 6、獐牙菜苷 7、裂环马钱氧苷 8、木樨草苷 9、3,4-二咖啡酰奎尼酸 10、3,5-二咖啡酰奎尼酸 11、4,5-二咖啡酸奎尼酸 12、咖啡酸乙酯
1 23 4 5 6 7
医药理论创新及新药的研发
5
中药注射液质量控制的模式(案例1）
阐明注射液总固体中的成分
黄芩 熊胆粉 山羊角 金Байду номын сангаас花 连翘
明确5味提取物的物 质基础
明确注射液总固体含有的大类成分 和单体成分
建立专属性的分析方法
方法学认证
注射剂质量标准 提取物质量标准 药材质量标准
保证中药注射剂的安全性、稳定性、有效性
13
山羊角提取物
研究方法
HPLC法检测金银花中的绿原酸和黄酮类物质的研究
3.4、 3.4、样品的测定
表3
木犀草素 66.76 绿原酸 1345.91
样品的含量测定（ g/g 样品的含量测定（µg/g )
芦丁 17.65 阿魏酸 33.65 新绿源酸 59.85
四、结论
本实验研究建立了用高效液相色谱法同时测定金银花中 的五种物质， 的五种物质，采用乙醇提取法和超声波萃取对金银花粗粉进 行了预处理。实验结果表明，采用80%乙醇浸泡和超声波萃取 行了预处理。实验结果表明，采用80%乙醇浸泡和超声波萃取 80% 能够有效的提取金银花中的五种有效成分，样品中的绿原酸 能够有效的提取金银花中的五种有效成分， 含量最高，五种组分的加标回收率为93.3%-98.9%， 含量最高，五种组分的加标回收率为93.3%-98.9%，相对标准 93.3% 偏差RSD≤3.02%。该方法提取率高，操作简单，重复性好， 偏差RSD≤3.02%。该方法提取率高，操作简单，重复性好， RSD≤3.02% 可同时分析金银花中的有机酸和黄酮类成分等有效成分， 可同时分析金银花中的有机酸和黄酮类成分等有效成分，改 变了把有机酸和黄酮类等分开的传统方法， 变了把有机酸和黄酮类等分开的传统方法，同时也提高了金 银花中的有效成分的提取率。
2.2、 2.2、样品的预处理
准确称取金银花粗粉5.064g， 准确称取金银花粗粉5.064g，置具塞锥形 5.064g 瓶中，准确加入80%乙醇50ml，浸泡24h， 瓶中，准确加入80%乙醇50ml，浸泡24h，转移 80%乙醇50ml 24h 至容量瓶中，然后在通风橱中超声波萃取 至容量瓶中， 30min，抽滤，合并滤液，再在60° 30min，抽滤，合并滤液，再在60°C下旋转蒸 60 发浓缩，并用石油醚脱脂， 0.45 m微孔滤膜。 发浓缩，并用石油醚脱脂，过0.45µm微孔滤膜。
HPLC法测定金银花的花、叶、茎中绿原酸和木犀草苷的含量
摘要： 目的 比较金银花的花、 叶、 茎中绿原酸和木犀草苷的含量。方法 采用２ ０ １ ０ 年版中国药典一部收载的提取方法， 采用 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法测定金银花的花、 叶、 茎中绿原酸和木犀草苷的含量。结果 绿原酸在金银花的花、 叶、 茎中含量分别为 １ ． ５ ５ ％、 １ ． ６ ８ ％、 ０ ． ７ １ ％； 木犀草苷在金银花的花、 叶、 茎中含量分别为０ ． ０ ６ ５ ％、 ０ ． ２ ０ ０ ％、 ０ ． ０ ３ ６ ％。结论 金银花叶中所含绿原酸和木犀草苷高于
图 １ ， 图 ２ 。
Ｔ ｈ ｕ ｎ ｂ ． ） 的干燥 花蕾 或 带初 开 的花 。在 我 国分 布 甚 广， 北 起 辽宁 ， 西 至陕西 ， 南 达湖南 ， 西 南至 云南 、 贵州， 资源 极 为丰 富 。其味 甘 ， 性寒 ， 具有清热解毒 、 疏 散 风热 之 功效 ， 是中医临床上清热解毒 的首选药 物， 有 “ 中药之 中 的青霉 素 ” 之称 。 金 银花 具有 重要 的经 济 价 值 ， 但 长 期 以来 仅 是 花 蕾 和茎 作 为药用 ， 而全 开 的花 和叶却 未得 到利 用 ， 为 了 合 理利 用金银 花 资 料 ， 笔 者对 金 银 花 的花 、 叶、 茎 中功
Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎａ ｔ ｉ ｏｎ ｏ ｆ Ｃｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ Ａｃ ｉ ｄ ａ ｎｄ Ｌｕ ｔ ｅ ｏｌ ｏ ｓ ｉ ｄｅ ｉ ｎ Ｆｌ ｏ ｗｅ ｒ，Ｌｅ ａ ｖ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ Ｓ ｔ ｅ ｍ ｏ ｆ Ｈｏ ｎｅ ｙ ｓ ｕ ｃ ｋｌ ｅ ｂ ｙ Ｈ ＰＬＣ
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金银 花为忍冬 科植物 忍冬 （ Ｌ ｏ ｎ ｉ ｃ ｅ ｒ ａ ｊ ａ ｐ ｏ ｎ ｉ ｃ ａ
(不相关)基于指纹图谱的金银花物质组纯化工艺研究_李守信
Abstract: Objective To optimize the technological parameters in the purification process of Lonicerae Japonicae Flos (LJF) materiomic with HPLC fingerprint technique. Methods Using the established HPLC fingerprint of LJF, the macroporous resin type, adsorption conditions, and elution requirements were optimized using the similarity and recovery rate of fingerprints of eight components (neochlorogenic acid, chlorogenic acid, cryptochlorogenin acid, vogeloside, luteoloside, isochlorogenic acid A, isochlorogenic acid B, and isochlorogenic acid C) as indexes. Results XDA-8 type resin possessed the highest recovery rates of eight components. The optimized purification process was as follows: The sample concentration was 0.25 g/mL, the ratio of sample to resin was 0.9 g/g, pH value was 3.5, and 40% ethanol (four times of resin volume) and 80% ethanol (four times of resin volume) were used as eluant, respectively. After being purified, the recovery rates of eight components were 78%—96%, and the similarity of fingerprint was higher than 0.98. These components could get balanced recovery. Conclusion Based on HPLC fingerprint technique, the optimized purification process of LJF materiomic with macroporous resin can ensure that the main components are consistent with the crude extract of LJF. Key words: fingerprint; Lonicerae Japonicae Flos; materiomic; macroporous resin; balanced recovery; neochlorogenic acid; chlorogenic acid; cyclohexanecarboxylic acid; vogeloside; luteoloside; isochlorogenic acid
金银花中绿原酸含量测定和指纹图谱研究进展①
的总 绿原酸的含量． 其平均回 收率为１ ０ ０ ． ４ ％ ，
变异系数为 １ ． ８ ２ ％。方法简便， 快速， 准确。 ， ． ３导数极谱法
２ ０ ｋ Ｖ． 毛细管柱温２ ５ ℃； 检测波长 ３ ４ ０ｎ ｍ （ 绿 中， 绿原酸不稳定， 易分解， 导致较大的分析误 原酸） 和２ ７ ０ ｎ ｍ（ 芦丁、榭皮素） 同时分离和测 差。而在柠檬酸钠介质中， 对金银花浸取液 定金银花中芦丁、绿原酸和榭皮素的含量， 和银黄注射液进行绿原酸含量的测定， 获得令 为全面有效控制金银花药材质量提供一种简 人满意的结果。 便、快速方法； 龙虹｛ ’ ｊ ｏ 等提出了 一种测定金银 花和含金银花的八种中成药中绿原酸标志物 ， ． ４薄层色谱扫描法 徐 强 等 囚 以 薄 层 扫 描 法 测 定 咽 爽 袋 泡 剂 中 的毛细管区带电泳分析方法。所用的背景电 ０ ｎ ｌ ｍ ｆ ／Ｌ ｏ 磷酸盐和２ ｎｌ ０ ｏｌ ｍ ／ 金银花中的绿原酸的含量， 用薄层扫描仪进行 解质为含有１ 硼酸盐的ｐ Ｈ ７ ． ０ 的缓冲溶液， 并含有５ ％的 光谱扫描后， 确定以三氯甲 烷一醋酸乙醋一甲 Ｌ 酸（ ２ ： ２ ： ） １ 为展开剂， 双波长反射法锯齿扫描， 乙醇以提高样品的溶解度。测定的线性范围 ７ ． ７ ６ ５ 一 ６ ６ ５ ｕ ｇ／ｍＬ ， 相关系数ｒ ＝ ０ ． 入 ， ＝ ３ ２ ５ ｎ ｍ ， 入 。 ＝ ３ ２ ７ ｎ ｍ ， ５ 、 ＝３ ， 此方 法简 在２ ９ ９ ６ 。派 Ｊ Ｉ 定金银花和含金银花的８ 种中成药 便， 测定淮确； 魏云等１ １ ６ 也采用了 薄层扫描法对 ９ 金银花中绿原酸进行了测定， 样品提取条件经 中的绿原酸可以在 巧ｍ ｎ 内完成。这种分析 ｉ 试验表明， 甲醇、７ ０ ％乙醉使斑点容易扩散， 方法简单 、快速 、适用面广。 １ ． ７高效液相色 谱法 使用乙醇提取效果较好， 薄层条件经比较， 选 用氯仿一醋酸乙醋一甲酸（ ４ ： ４ ： ）为展开剂能 ２ 目前测定金银花中绿原酸含量的主要方 达到较好的分离效果， 锯齿形反射法双波长扫 法还是高效液相色谱法。刘明斌等［ 川用流动 乙睛一０ ． １ ％磷酸（ ２ ０ ： ８ ０ ， ｖ／ｖ ）； 流速： ０ ． 描， 入 ， ３ ２ ５ ｎ ｍ ， 入 Ｒ ４ ０ ｏ ｎ ｍ ， 扫 描 速度２ ０ ｍ ｍ／ 相： ｌ ／ ｍｉ ｎ ， 检测波长： ３ ２ ７ ｎ ｍ， 进样量： １ ０“１ 。 ｍ ｎ， ｉ 狭缝１ ． ２ ５ ｍ ｍ ｘｌ ． ２ ５ ｍ ｍ， 记录仪灵敏度 ｓｍ 室温， 在Ｏ Ｄ Ｓ 柱上比较三种不同产地的 ｘＺ ， 线性参数ｘ３ ； 李宗等１ ７ ｝ 用聚酸胺薄膜分 柱温： 离绿原酸， 用薄层扫描法测定其含量， 为金银 金银花中绿原酸的含量， 并鉴别出含绿原酸含 量较高的品种， 结果发现隆回县金银花绿原酸 花及其制剂海菊冲剂的质量控制提供了一个 新的方法。利用聚酸胺薄膜对绿原酸进行分 含量较高， 河南密县金银花绿原酸含量较低， 离和定量， 色谱峰形好， 消除了 绿原酸在硅胶 山东临沂地区平邑县金银花绿原酸含量更低 ， 薄层上的拖尾现象。 刘恩荔等１ ’ ２ ］ 采用Ｈ ｙ ｅｒ ｐ ｓ ｉ ｌ Ｏ Ｄ Ｓ Ｚ 色谱柱， 以乙 ， ． ５ 阻抑一催化褪色光度法 睛： 水： 冰醋酸（ １ ５ ： ５： ８ ０ ． ）为流动相， ２ 流速０ ． ８ｍ ｌ ／ ｍ ｎ， ｉ 检测波长３ ７ｎ ２ ｍ， 柱温２ ５ ℃建立 在盐酸介质中， 铁（ １） 能灵敏地催化过氧 化氢还原亮绿ｓ Ｆ 的反应， 绿原酸对催化反应有 测定金银花有效部位中绿原酸含量的高效液 相色谱法， 作者比较 了 不同比例的冰醋酸， 结 灵敏的阻抑作用， 耿玉珍等１ １ ８ 据此建立了测定 当冰醋酸的浓度为０ ． ２ ％时， 可得到较 痕量绿原酸的阻抑一催化动力学光度分析方 果表明， 王天志等１ ’ ３ １ 建立了用反相高 法。该方法测定绿原酸的线性范围为０ 一 ０ ． 好的色谱峰峰形， 同时测定金银花 １ ２ ｍ ｇ／Ｌ ． 检出限为４ ． Ｚｘｌ ０６ ｇ／Ｌ 。对 效液相色谱内标法梯度洗脱， ， ５一二咖啡酞奎尼酸 浓度为０ ． ８ｍ ０ ｇ／Ｌ 绿原酸标准溶液６ 次平 中绿原酸、咖啡酸、３ 行测定的相对标准偏差为 ３ ． ８ ％。 回收率为 含量的方法， 并对４ 个产地 ３ 种金银花中上述 ３种化合物进行定晕分析。方法： 采用岛津 ９ ３ ． ４ ％一１ ０ ５ ％， 同时考察了反应的最佳条 Ｃ Ｌ Ｃ一Ｏ Ｄ Ｓ 柱（ ６ ． ｏ ｍｍ ｘｌ ５ ０ ｌ ｎ ｍ） ， 甲醇一 １ ０ 件和动力学参数， 探讨了反应机理， 该方法用 ％的磷酸氢二钠和醋酸缓冲液流动相不同比 于测量金银花浸取液中绿原酸的含量 ， 取得了 例进行梯度洗脱， 内标物为水杨酸 ， 检测波长 较 为满意的结果。 ３ ０ ４ ｎ ｍ。结果发现西南地区金银花药材主流 ， ． ６毛细管区带电泳法 商品灰毡毛忍冬、细毡毛忍冬干燥花蕾中绿 毛细管电泳分析具有分辨率高、分析速 ， ５一二咖啡酸奎尼酸含量 度快及 环境友好等优点， 近年来已 成为中药质 原酸、咖啡酸、３ 量研究中的一种广泛、 有效的分析技术。 颜流 高于山东、河南产金银花。本法灵敏快速， 准确可靠 。 水等１ ９ １ 采用微波辅助萃取金银花中的有效成 分， 用熔融石英毛细管柱（ ６ ４ ． ｃｍ ｘ５ ｓ ０林ｍ，
不同产地金银花药材的HPCE指纹图谱分析
不同产地金银花药材的HPCE指纹图谱分析容蓉;闫斌;吕青涛;杨勇;孙玉波【摘要】以40 mmoL/L硼砂溶液为缓冲液,利用高效毛细管电泳(HPCE)法,建立不同产地金银花的HPCE指纹图谱并测定其中绿原酸的含量.工作电压为17 kV,温度为25℃,压力进样时间为6 s.不同产地金银花药材中绿原酸的含量为3.2%～4.4%.通过对HPCE指纹图谱共有峰数据进行判别分析和聚类分析,可以将不同产地的金银花进行判别分类.HPCE指纹图谱可以用于较全面地考察金银花药材的质量.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2006(015)006【总页数】3页(P66-68)【关键词】金银花;绿原酸;高效毛细管电泳;指纹图谱【作者】容蓉;闫斌;吕青涛;杨勇;孙玉波【作者单位】山东中医药大学天然药物省重点实验室,济南,250014;山东中医药大学天然药物省重点实验室,济南,250014;山东中医药大学天然药物省重点实验室,济南,250014;山东中医药大学天然药物省重点实验室,济南,250014;山东中医药大学天然药物省重点实验室,济南,250014【正文语种】中文【中图分类】R2金银花(Flos Lonicerae Japonicae)为忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb)的干燥花蕾或带初开的花，具清热解毒，凉散风热之功效。
中药指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴定手段，其基本属性是“整体性”和“模糊性”[1]。
以指纹图谱对成分复杂的中药材进行分析测定，可以有效地获得其组成的信息。
笔者采用高效毛细管电泳法(HPCE)测定金银花的指纹图谱，并对金银花的主要有效成分绿原酸进行含量测定。
1 实验部分1.1 主要仪器与试剂高效毛细管电泳仪：Beckman 5500型，配二极管阵列检测器，美国贝克曼公司；电子天平：Mettler AE24型，瑞士Mettler公司；医用超声波清洗器：KQ-500E型，昆山市超声仪器有限公司；绿原酸：批号0753-200111，中国药品生物制品检定所；其它试剂均为分析纯；实验用水为超纯水。
金银花提取物中绿原酸的HPLC测定
２ ４ 标 准曲线 的绘制 。
法， 与文献 报道方法相 比简便快速。
１ 仪器 与试剂
精密 量 取 绿 原 酸 对 照 品 溶 液 适 量 ， 别 置 于 分
１ ｍＬ容量 瓶 中 ， ５ ％ 甲醇 稀 释 到刻 度 ， ０ 加 ０ 制成 系列
贝克曼型高效液相色谱仪 （ １ １０泵，６ １３可变波 长检 测器 ） 美 国 ） Ｎ ０ ０色谱 工作 站 （ 江大 学智 （ ； ２０ 浙
２ ３ 供 试液 的制备 ．
菌有显著的抑制作用。金银花提取物是采用金银花 药材经 水提 、 缩 、 燥 而 成 的粉 末状 干浸 膏 粉 ， 浓 干 通
常作为处 方原 料药 用 于含 金 银 花 复方 制 剂 的 生产 ， 因此 绿原 酸含 量测定对 于金 银花 药材及 其复方 制 剂 的质 量控制 具有 重要 意义 。本文 采用 反相 ＨＰ Ｃ建 Ｌ
维普资讯
２ ６
牙
膏
工
业
２ ０ 第 ４期 ０７年
金银 花 提 取 物 中绿 原 酸 的 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ测定
魏 英 勤 刘 晓 辉 何 军’
（。 １ 山东轻工业学 院 化学工程学 院， 山东 济南 ２０ ５ ；。 ５３ ２ ２ 山东省科学 院 情报研究所 ，
山东 济南 ２０ １ ３ 山东润华药业有 限公 司， ５０ ４；． 山东 济南 ２ ０ ） ５ １ ７ １
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Table 1 D eterm ina tion of sch isandr in and sch isandr in B in serum and pla sma (n= 2)
样
五味子醇甲
五味子乙素
样
五味子醇甲
五味子乙素
品 质量浓度 (Λg·mL - 1) R SD %
1
111998 6
2
111682 1
的对照品溶液 (含五味子醇甲、五味子乙素分别为 68125% 和 58101%、55151%、54168%。
10124 和 7196、30172 和 23188、51120 和 39180 Λg
218 样品测定: 取含药血清、含药血浆各 5 份, 制备
mL ) , 分别进样10 ΛL , 测定峰面积并计算平均值, 作 含药血清、含药血浆供试品溶液, 20 ΛL 注入液相色
分量的角度看, 推测用含药血浆研究中药药理学可 能更为合理。
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R SD % 4149
质量浓度 (Λg·mL - 1) 111991 4 131720 8 121853 8 131918 7 101469 4
R SD % 11121
3 讨论 本实验结果表明, 复方五仁醇胶囊主要入血成 分五味子醇甲、五味子乙素在血浆中的量均高于血 清, 尤其是极性较小的五味子乙素在血浆中的量是 血清的 1168 倍, 这可能是由于在凝血形成过程中, 纤维蛋白及其网罗的血细胞可能吸附或结合一些中 药成分, 特别是极性较小成分的缘故, 所以采用含药 血浆进行该制剂药效研究似乎比含药血清更好; 而 且理论上讲, 血浆药理学也不违背“中药虽成分众 多, 但只有那些被消化吸收进入血液的成分或其代 谢产物才有产生药效的可能”的观点。因此从药效成
表 1 小鼠耳肿胀抗炎实验结果 (x±s, n= 10) Table 1 Results of an ti- inf lamma tion of m ice
ear edema (x±s, n= 10)
药典》2005 年版一部性抗炎药物阿斯匹
绿原酸的薄层鉴别及定量测定, 仍采用了对化学药 林, 研细, 加蒸馏水及少量羧甲基纤维素钠配制成
品质量控制的模式, 不能全面地反映金银花的内在 6125 m g mL 的溶液。
质量。因金银花具有较强的抗炎作用, 故本实验对其 不同提取部位进行抗炎实验研究, 同时又制定出金 银花不同提取部位的指纹图谱, 揭示了化学信息与 药理活性之间的关系[2], 找出了与药效成正相关的 成分, 并制定出能代表金银花有效性的指纹图谱。 1 仪器与试药 日本岛津 2010A 高效液相色谱仪; PDA 检测 器; Sa rto riu s 分析天平; KQ —100 型超声波清洗器; HH 1S11—2 型水浴锅。 金银花采自河南省封丘县金银花 GA P 基地的 10 个自然村, 经河南中医学院曹继华教授鉴定; 绿 原酸对照品购自中国药品生物制品检定所 (批号 1107532200212) ; 乙腈为色谱纯, 甲醇、冰醋酸等试 剂均为分析纯, 双蒸水 (自制)。 2 方法与结果 211 抗炎活性研究 21111 溶液的制备 水部位溶液的制备: 取金银花粗粉适量, 加水浸 泡30 m in, 煎煮15 m in, 滤过, 浓缩, 制成每毫升相当 于 500 m g 药材的药液。 其余部位溶液的制备: 取金银花粗粉, 分别加各
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中草药 Ch inese Trad itiona l and Herba l D rugs 第 37 卷第 10 期 2006 年 10 月
Pharmacodynam ic f ingerpr in t of F los L on icerea by HPLC L IAN G Sheng2w ang1, CU I Yong2x ia2, W AN G Shu2m ei2, W U M ing2x ia2
21112 小鼠耳肿胀抗炎实验: 取昆明种雄性小鼠180 只, 随机分成18 组, 即为16 个提取部位的有效剂量组
( 根据临床用量和动物有效剂量筛选结果确定为
18715 m g 生药 只)、空白组 (011% 羧甲基纤维素钠 溶液)、阳性对照组(215 m g 只)。各组连续以有效剂 量 ig 给药 4 d, 于末次给药 1 h 后, 以二甲苯 0105 mL 涂抹每只小鼠右耳两面, 115 h 后, 脱颈椎处死小鼠, 以直径 9 mm 打孔器, 将小鼠双耳同部位等面积切 下, 电子天平称定质量, 左耳为对照, 计算左右耳质量 差值为肿胀度, 分别得出 18 组小鼠的肿胀度, 结果见 表 1, 以甲醇提取部位的抗炎活性最强。
中草药 Ch inese Trad itiona l and Herba l D rugs 第 37 卷第 10 期 2006 年 10 月
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摇匀, 分别量取 012、016、110 mL , 蒸干, 分别精密量 峰面积比较, 得低、中、高 3 个水平五味子醇甲、五味
取甲醇 015 mL 充分溶解, 配制成低、中、高 3 个水平 子 乙 素 的 绝 对 回 收 率 分 别 为 68111%、68134%、
Abstract: O bjective L ook ing fo r the chem ica l com ponen t s w h ich have po sit ive co rrela t ion s w ith an t i2 inflamm a t io ry act ivity of F los L on icerea to set up p ha rm acodynam ic2fingerp rin t1M ethods To ga in the fin2 gerp rin t s of d ifferen t p a rt s by H PL C and to detect the p ha rm aco log ica l act ivit ies of an t i2inflamm a t ion, then
金银花的 HPLC 药效指纹图谱研究
梁生旺1, 崔永霞2, 王淑美2, 吴明侠2Ξ
(11 广东药学院中药学院, 广东 广州 510024; 21 河南中医学院, 河南 郑州 450008)
摘 要: 目的 找出金银花中与抗炎活性成正相关的化学成分, 并以此建立金银花的药效指纹图谱。 方法 采用 H PL C 法分析, 获得金银花不同提取部位的指纹图谱, 同时选择小鼠耳肿胀抗炎实验测定不同提取部位的药理活 性, 以线性回归解释化学信息和药理活性的相关关系。 结果 以甲醇提取部位的药理活性最强, 故以此部位的 H PL C 图谱来制定金银花的“药效谱”。 结论 采用该方法制定得到的金银花的药效指纹图谱更为科学、合理。 关键词: 金银花; 抗炎; 药效指纹图谱; 高效液相色谱 中图分类号: R 286102 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670 (2006) 10 1489 05
3
101097 7
6198
4
101874 0
5
101663 5
质量浓度 (Λg·mL - 1) 61974 5 81979 5 81128 2 71163 5 61208 8
R SD % 品 1 2
14138 3 4 5
质量浓度 (Λg·mL - 1) 121327 5 121238 9 131268 3 131034 6 131549 4
Ξ 收稿日期: 2005212206 作者简介: 梁生旺, 男, 教授, 从事中药质量控制研究。 T el: (020) 39352172 E2m ail: sw liang371@ 163. com © 1994-2013 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
and serum p harm aco log ic m ethod s in evaluating the effect of D ahuang Zhechong Cap su le on p latelet agg regation [J ]1 Ch in J T h rom b H em ost (血栓与止血学) , 2005, 11 (1) : 5281
为对照组, 同时用216 项下制备的低、中、高3 个水平 谱仪, 测定峰面积, 计算五味子醇甲、五味子乙素的
的对照品溶液分别进样 10 ΛL , 测定峰面积, 每个水 质量浓度, 结果见表 1。
平重复 5 次, 作为样品组, 将样品组峰面积与对照组
表 1 血清和血浆中五味子醇甲和五味子乙素的测定 (n= 2)
(11 Co llege of Ch inese M a teria M ed ica, Guangdong Co llege of Pha rm acy, Guangzhou 510024, Ch ina; 21 H enan Co llege of T rad itiona l Ch inese M ed icine, Zhengzhou 450008, Ch ina)