应用微量滴定法测定天花疫苗效力

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补体结合实验方阵滴定法

补体结合实验方阵滴定法补体结合实验方阵滴定法，也称为微量化学实验法，是一种用于检测血清中补体结合能力的生化实验方法。

血清中的补体结合能力是一种重要的免疫功能指标，它能够反映机体抵御病原菌及其他异物侵入的能力，因此与许多疾病的诊断和治疗密切相关。

补体结合实验方阵滴定法主要通过底物和试剂的相互作用来检测血清中的抗体与病原体之间的结合情况。

具体操作流程如下：首先根据需要，将需要检测的抗原物质或病原菌按照不同的浓度分别涂在乙烯基化的微孔板表面上。

然后将待测的血清样品和一个已知浓度的抗体样品在不同浓度下依次加入到微孔板中，并让其充分反应。

接下来，将试剂加入到每个孔中，以引发化学反应并产生信号，以便测定血清中的抗体与病原体之间的结合能力。

补体结合实验方阵滴定法具有许多优点，包括高灵敏度、高特异性、简便、快速、可自动化等，因此在免疫学、生物学、医学等研究领域中得到了广泛的应用。

此方法还可以被用于鉴定生物制剂和疫苗的成分和效价、血清学检测、微生物学检测、药理学及毒理学研究等方面。

在使用补体结合实验方阵滴定法时，需要注意以下几个方面：首先是选择正确的底物或试剂，其次是保证操作的无菌和无干扰、准确加药和清洗控制，避免误差；第三，注意仪器的校准和维护，确保实验过程中的准确性；最后，对实验结果进行准确的数据分析和评估，以便得出准确、可靠的结论。

综上所述，补体结合实验方阵滴定法是一种非常重要的生化实验方法，在疾病诊断和治疗、生物医学工程、科学研究等众多领域中得到了广泛的应用。

使用该方法需要注意操作规范、选择正确的底物和试剂、对实验结果进行准确评估等方面，以确保实验结果的准确性和可靠性。

通过科学的实验设计和精确的操作技能，我们可以更好地了解免疫功能，为疾病治疗和预防提供更加准确的指导和帮助。

病毒分离培养的细胞培养法

第18章病毒分离培养的细胞培养法一、细胞培养用于病毒研究的优点：细胞培养在病毒学方面的研究最为广泛，除用作病毒的病原分离外，还可研究病毒的繁殖过程及其细胞的敏感性和传染性（细胞的病理变化及包涵体的形成）。

观察病毒传染时细胞新陈代谢的改变，探讨抗体与抗病毒物质对病毒的作用方式与机制，以及研究病毒干扰现象的本质和变异的规律性，可用于病毒的分离鉴定，抗原的制备及疫苗，干扰素的生产、病毒性疾病诊断和流行病学调查等。

近年来，可用于繁殖病毒载体以用于基因治疗。

应用细胞培养来研究病毒有下列优点：1、没有隐性感染：动物可能带有某些病毒的隐性感染，往往有干扰作用和假阳性出现。

细胞培养一方面是来源于动物部分组织，减少了隐性感染的机会，另一方面组织培养细胞可进行预先检查而加以克服。

2、没有免疫力：动物经隐性感染获得免疫力，对接种病毒会发生抵抗，但由于后天免疫一般不表现在细胞抵抗力的增加，因此离体细胞无免疫力，利于病毒生长。

3、容易选择易感细胞：细胞来源方便，可供作病毒敏感性的筛选，可以从中选择最敏感的细胞以满足实验要求，同时还利于从单一细胞水平上研究病毒的繁殖过程和病毒一细胞的相互关系。

4、接种量大：动物和鸡胚的接种均受数量、年龄、途径的限制，细胞不仅可以大量生产，而且还可较久地持续培养，便于病毒生长，特别是对那些生长缓慢或需在新环境中逐渐适应的病毒更为有利。

5、培养条件易于控制：由于细胞培养可以用人工控制温度、气体、pH、培养基成分，因此可采用大规模生产方式来生产细胞和病毒及其细胞产物。

6、提高了疫苗的产量和质量：细胞的大量生产可满足疫苗产量的需求，而且异性蛋白少，引起变态反应机会少。

疫苗中污染菌少或无，可随制随用，成本低，来源方便，便于贮存，且效力均匀，易标准化。

7、加速病毒分离过程：病毒分离采用细胞培养不仅阳性率高，而且分离过程可显著加速早出结果，但应用对该病毒敏感的细胞。

二、用细胞培养分离病毒(一)接种标本的处理：1、粪便标本：用于分离肠道病毒之粪便标本放入装玻璃珠40ml沉淀管内，大约每2克粪便用15ml Hanks液稀释(其余粪便于-20℃保存备用)，用橡皮塞紧后剧烈振摇，使粪便乳化，经2500r/min沉淀15分钟后，按将上清用无菌八层纱布过滤，于4℃以10000r/min沉淀1小时再取其上清，1.8ml加入0.2ml抗菌素液进行处理(浓度为25000u/ml的双抗及250mg/L二性霉素B)剩下的悬液保存于-20℃备用。

药物分析简答题

药物分析复习题1药典的主要内容是什么？凡例：解释和使用要点的基本原则、规定正文、附录共性问题正文：药品质量标准，制剂质量标准，生物制品质量标准附录：制剂通则、通用检测方法、指导原则。

索引：中文索引、英文索引2什么是鉴别试验？--意义鉴别已知药物与名称的一致性鉴别试验是根据药物的分子结构，理化性质，采用物理，化学或生物学方法来判断药物的真伪。

3什么是药品标准物质？其内涵是什么？是指供药品标准中物理化学测试及生物方法试验用，具有确定特性量值，由于校准设备，评价测量方法或者给供试药品赋值的物质，包括：标准品，对照品，对照药材，参考品。

内涵：①标准品：用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位（或ug）计，以国际标准品进行标定。

②对照品：化学药品的标准物质称为对照品，除另有规定外，均按干燥品（或无水物）进行计算后使用。

③标准物质：对照药材、对照提取物主要为中药检验中使用的标准物质。

④参考品：用于生物制品检验中使用的标准物质。

4什么是恒重？除另有规定外，系指供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在0.3mg以下的重量5什么是空白试验？系指在不加供试品或以等量溶剂替代供试液的情况下，按同法操作所得的结果；6药物含量测定与效价测定有什么不同？凡采用理化方法对药品中特定成分的绝对质量进行的测定称为含量测定。

凡以生物学方法或酶化学方法对药品中特定成分以标准品为对照，采用量反应平行线测定法等进行的生物活性（效力）测定称为效价测定。

7鉴别试验须验证的项目有哪些？专属性，耐用性8什么是特殊杂质？指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质，也称为有关物质9杂质包括哪些种类，来源途经有哪些？杂质种类有：一般杂质（有害杂质，信号杂质），特殊杂质（工艺杂质，降解杂质）杂质来源有：1）生产过程中引入的杂质：来源于制备——原料、溶剂、试剂、中间产品、副产品、器械等等。

2）贮藏过程中引入的杂质：来源于外界条件——包装、运输、保管不妥（受光线、温度、空气、微生物的影响等等）10药物中氯化物检查为什么要硝酸酸性下进行？加硝酸可避免弱酸银盐，如碳酸银，磷酸银及氧化银沉淀的干扰，且可加快氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊。

国家食品药品监督管理局关于印发《预防用疫苗临床前研究技术指导

国家食品药品监督管理局关于印发《预防用疫苗临床前研究技术指导原则》等6个技术指导原则的通知【法规类别】药品管理【发文字号】国食药监注[2005]493号【发布部门】国家食品药品监督管理局(原国家药品监督管理局)（已撤销）【发布日期】2005.10.14【实施日期】2005.10.14【时效性】现行有效【效力级别】部门规范性文件国家食品药品监督管理局关于印发《预防用疫苗临床前研究技术指导原则》等6个技术指导原则的通知（国食药监注[2005]493号）各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局（药品监督管理局）：为规范疫苗研发行为，指导疫苗研究单位科学地开展研究工作，根据《药品管理法》、《药品管理法实施条例》及《药品注册管理办法》，我局组织制定了《预防用疫苗临床前研究技术指导原则》、《生物制品生产工艺过程变更管理技术指导原则》、《联合疫苗临床前和临床研究技术指导原则》、《多肽疫苗生产及质控技术指导原则》、《结合疫苗质量控制和临床研究技术指导原则》和《预防用疫苗临床试验不良反应分级标准指导原则》等6个技术指导原则，现印发给你们，并请转发辖区内各有关单位。

国家食品药品监督管理局二00五年十月十四日由病毒、细菌或其他病原微生物为起始材料，经培养增殖制成的减毒、灭活的病原体，或再经纯化、裂解、亚单位（包括细菌类毒素）等方法处理制备的富含免疫原性，刺激机体产生特异性免疫学反应而达到预防某种疾病的产品，为预防用疫苗。

本指导原则适用于用病毒、细菌或其他病原微生物制备的预防用疫苗，其目的是为该类制剂提供一个共同的原则，指导制定临床前研究的方案，和确定具体的研究内容。

（一）应符合国家《药品管理法》等相关法律法规的要求；（二）对所预防的疾病的流行情况进行研究，包括疾病的危害程度所涉及的人群及病原的型和亚型等；（三）对研制该类制品用于预防疾病的有效性、安全性及必要性进行分析；（四）应对该制品用于预防该疾病的利益风险比进行研究。

肠道病毒71型灭活疫苗

灭活疫苗仍然存在问题
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EV71 免疫保护机制复杂，除体液免疫外，细胞免疫也发挥着重要的作用。然而，灭活疫苗主要诱导的是体液免疫，细胞免疫不够充分。
灭活疫苗生产和运输成本高昂。疫苗效力较高而疫苗价格较低的常规免疫才符合我国的成本效益，这可能会制约灭活疫苗的应用。
EV71 本身存在抗体依赖性增强感染现象，不恰当的疫苗接种有可能会增加重症病例的风险。
Enterovirustype71inactivatedvaccine
课程：生物技术制药
班级：2013生技一班
肠道病毒71型灭活疫苗
EV71图片
肠道病毒 71 型( enterovirus 71， EV71) 为单股正链ＲNA病毒，是小ＲNA 病毒科肠道病毒属中的重要成员之一。EV71 基因组由 7400 多个核苷酸构成，包含一个开放读码框，编码大约 2200 个氨基酸的多聚蛋白。该多聚蛋白可被进一步水解成 P1、 P2 和 P3 三个前体蛋白，P1 前体蛋白编码VP1、 VP2、 VP3 和 VP4 四种结构蛋白，P2、 P3 前体蛋白编码 7种非结构蛋白( 2A ～ 2C 和 3A ～ 3D) EV71 包括 A、 B 和C 3 种基因型，11 个基因亚型，每种亚型感染均可引起手足口病( hand， foot and mouth disease， HFMD
EV71 疫苗除能诱导中和抗体外，还能诱导细胞免疫应答，其也具有免疫保护作用。
EV71疫苗可行性
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全病毒灭活疫苗
减毒活疫苗
基因工程疫苗
病毒样颗粒( VLPs)疫苗
肠道病毒 71 型疫苗分类

国家流感中心标准操作规程

国家流感中心标准操作规程
（修订版）
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所二○○七年三月
前言
为规范国家流感中心的实验技术和操作步骤，保证实验结果的准确性和可重复性，并作为国家流感中心所有工作人员使用指南。依据《中华人民共和国传染病防治法》、《中华人民共和பைடு நூலகம்国家标准实验室生物安全通用要求（GB 1989-2004）》及相关法律法规，参考世界卫生组织《实验室生物安全手册（第三版）》以及流感/禽流感相关推荐方案，并根据《流行性感冒诊断标准》、《人禽流感诊断标准》和《禽流感实验室检测技术方案》中的相关内容制定了本标准操作规程（SOP）。在国家流感中心标准操作规程（2004 年版）的基础上，增补了大量内容，制定本标准操作规程。
本版标准操作规程包括基本生物学实验 SOP、标本采集 SOP、病毒分离 SOP、病毒鉴定 SOP、病毒核酸检测 SOP、血清学检测 SOP、动物学实验 SOP、耐药性监测 SOP 以及标本及毒株管理 SOP 等。并且根据近年来的工作需要和进展，建立了许多实验方法，如分子鉴别诊断技术、禽流感 H5N1 NASBA 检测方法、流感/禽流感抗体单放射免疫扩散溶血技术（SRH）等以及研究工作中实验的操作规程。
第五章核酸检测 SOP......................................................................................101
流感/禽流感病毒 RT-PCR 引物制备 ..........................................................................103 流感/禽流感病毒 Real-time PCR 引物探针制备........................................................105 禽流感病毒 RT-PCR 检测 ...........................................................................................107 人禽流感实时荧光定量 PCR 检测 .............................................................................113 禽流感病毒 H5N1 NASBA 检测 ................................................................................119 分子鉴别诊断技术.......................................................................................................125

2015版中国药典部（生物制品）凡例

凡例总则一、《中华人民共和国药典》简称《中国药典》，依据《中华人民共和国药品管理法》组织制定和颁布实施。

《中国药典》一经颁布实施，其同品种的上版标准或其原国家标准即同时停止使用。

《中国药典》由一部、二部、三部及其增补本组成，内容分别包括凡例、正文和附录。

除特别注明版次外，《中国药典》均指现行版《中国药典》。

本部为《中国药典》三部。

二、国家药品标准由凡例、通则与正文及其引用的附录共同构成。

本部药典收载的凡例、附录对药典以外的其他生物制品国家标准具同等效力。

三、凡例是为正确使用《中国药典》进行药品质量检定的基本原则，是对《中国药典》正文、附录及与质量检定有关的共性问题的统一规定。

四、凡例和附录中采用的“除另有规定外”这一用语，表示存在与凡例或附录有关规定不一致的情况时，则在正文中另作规定，并按此规定执行。

五、正文所设各项规定是针对符合《药品生产质量管理规范》（Good Manufacturing Practices，GMP）的产品而言。

任何违反GMP或有未经批准添加物质所生产的药品，即使符合《中国药典》或按照《中国药典》没有检出其添加物质或相关杂质，亦不能认为其符合规定。

六、《中国药典》的英文名称为Pharmacopoeia of The People’s Republic of China；英文简称Chinese Pharmacopoeia；英文缩写为Ch.P.。

正文七、正文系根据生物制品自身的理化与生物学特性，按照批准的原材料、生产工艺、贮藏运输条件等所制定的、用以检测生物制品质量是否达到用药要求并衡量其质量是否稳定均一的技术规定。

八、正文内容根据品种和剂型不同，按顺序可分别列有：（1）品名（包括中文通用名称、汉语拼音与英文名）；（2）定义、组成及用途；（3）基本要求；（4）制造；（5）检定（原液、半成品、成品）；（6）保存、运输及有效期；（7）使用说明（预防类制品）。

附录九、附录主要收载制剂通则、通用检测方法和指导原则。

全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)

附件1全国艾滋病检测技术规范National Guideline for Detection of HIV/AIDS（2015年修订版）中国疾病预防控制中心二○一五年十二月全国艾滋病检测技术规范National Guideline for Detection of HIV/AIDS（2015年修订版）中国疾病预防控制中心二○一五年十二月前言艾滋病在我国的流行已数十年，随着感染者和临床病人的不断增加、感染人群的变化，艾滋病检测工作量逐渐加大，对监测和检测的需求也不断增加，承担艾滋病检测的实验室已遍及全国各级医疗、疾病预防控制、采供血、妇幼保健机构，出入境检验检疫、军队等各个系统。

为了尽早发现HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨询、治疗，同时为适应基层艾滋病检测工作需求，在新的形势下，根据《关于艾滋病抗病毒治疗管理工作的意见》、《中国预防与控制艾滋病中长期规划（1998—2010年）》、《中国遏制与防治艾滋病十二五行动计划的通知（国办发[2012]4号）》、“四免一关怀”等国家艾滋病防治重要方针政策和十三五防治工作重点，在广泛征求各省、市疾病预防控制机构和医疗机构意见的基础上，在中华人民共和国卫生和计划生育委员会艾滋病专家及省级专家的参与下，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心对《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》进行修改、增补和完善，制定出《全国艾滋病检测技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》），使其既能满足目前艾滋病检测工作的实际需求，又能体现检测技术的发展。

本次《规范》修订工作立足于我国目前检测状况，结合发达国家使用的指南，主要对以下几个方面内容进行了修改、增补和完善：（1）完善了不同的检测策略，并将其整合为独立的一章；（2）增加了HIV-1新发感染检测一章；（3）新增补充试验概念,其内容包括抗体确证试验（WB，RIBA/LIA等）和核酸试验（定性和定量试验）；（4）增加了第4代试剂（抗原抗体联合检测试剂）的检测流程；(5)增加核酸检测流程；(6)完善了检测报告。

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２００７年第３５卷第１期
１５ＮｏＰｏｃｏｉｍｕｏＦｅ．２０７，Ｖｏ．３．１ｒｇｉＭｉｂｏＩｎｒ —
应用微量滴定法测定天花疫苗效力
董小曼，董翊，陈秀珍（北京天坛生物制品股份有限公司，北京
摘
１０２）００４
要：微量滴定法代替血球吸附法测定天花疫苗效力。通过对Ｖｒｅｏ细胞接种浓度和细胞病变判定时间的优化，
确定了微量滴定法测定天花疫苗效力的方法，Ｖｒ细胞微量滴定法和血球吸附法测定ｌ用ｅｏ４批天花疫苗。两种滴
ＤｔｔｎｏｈｏｅｃｆｍａｌｏａｃｅｂｃｏｉａｉｎＤＮｉ－ａｌＤＮＧＹ，ＨＮＸｕｚｅ（ｅｅｅｉｆｔｅｔｎｙｏｌｘｖｃｉｙｍｉｒｔｒｔＯＧＸａｍｌＯｉＣＥｉ－ｎＢｉｃｏｐｓｐｎｔｏｏ，。ｈ－ｊ，ＴａｔｎＢｏｇｃｌｒｕｔＣ．Ｄ．￣Ｏｇ１０２Ｃｉｉｇｉａｉｏｉｏｃｏ，ｄ，＇００４，ｈｎ，ｎｌａＰｄｓ／ｎａ）
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ｏｒｔ・ｅｐａｅ
Ｋｅｒｓ：Ｓｌｏａｃｎ；ｒｓｔｒｔｎ；ｃｏｉａｉｎｙｗｏｄｍａｌｘｖｃｉｅＶｉｕｉａｉＭｉｒｔｒｔｐｔｏｔｏ
天花疫苗于１８９０年停止使用，０１年美国遭２０受９１恐怖袭击事件后，花疫苗的研究重新成为．１天世界范围内用于反生物武器的研究和使用的重点。
ｔｅｎｔｅ，＝４６ｗｅｈｍ．１＋０．５．Ｃｏｃｏｉａｉｎｉｉａｇ．５～２８％．Ｔｅｅｏ，ｍｉｒｔｒｔｎＣｐａｅ４ｘＶｆｍｉｒｔｒｔｓｎａｒｅ１２％ｔｏｎ．９ｈｒｆｒｅｃｏｉａｉａｒｌｃｔｏｎｅｈｍａｓｒｔｎｅａｓｔｅｓｉｉ，ｒｌｂｌｙｎｄｒｐｔｏｒｅｔｒｔａｏｅｏｅｄｏｐｉｎ，ａｄｉｉｅｓｏｅｄｏｐｉ，ｂｃｕｅｉｓｎｉｖｔｅｉｉｉ，ａｅｅｔｎａｅｂｔｈｔｓｆｈｍａｓｒｔｏｓｔｙａｔｉｉｅｎｈｏｎｔｓａｙｔ
因此，微量滴定法敏感、可靠、操作简单、重复性好，可以代替血球吸附法。关键词：天花疫苗；病毒滴定；微量滴定法
中图分类号：３３１７．１１文献表识码：Ａ文章编号：０５５７（０７Ｏ－０５０１０－６３２０）１０３－５
ｔｍｅｉａｃａｏｆｔｅｖｒｓｔｔａｉｎ．ＦｏｒｅｎｌｔｍａｌｘｖｃｉｅｗｅｅｔｔａｅｙｍｉｒｔｔａｉｎｎＶｅｏｃｉｓａｄｉｎｃｌｕｔｎｏｈｉｕｒｔｏｌｉｉｕｔｅｏｓｏｓｌｐａｃｎｒｉｒｔｂｃｏｉｒｔｆｏｄｏｏｒｅｌｎ
ｈｍａｓｒｔｎｏＥｓｈｅｄｆｒｎｅｉｓｎｃｔｅｅｎｔｅｒｓｔｏｔｏｍｔｏｓ（＜００）ｈｅｒｐｓｅｄｏｐｉｎＣＦ．ＴｉｅｅｃｓｉｉａｔｅｕｓｆｈｔｅｄＰｏｇｆｎｂｗｉｈｅｌｅｗｈ．５．Ｔｒａｅｏｉｅ－ｔｅｃｒｌｏｒ＝０７，．０ｉｏｅａｎ（ｖｒｔｉ．６００１＜Ｐ＜００）ａｄｌｅｒｇｓｉｌｏｓｉｂ＝０４，．０．５，ｎａｒｓｎｒａｎｈｐ（ｎｉｅｒｅｏｅｔｉ．５００１＜Ｐ＜００）ｅ．５ｂ－
定方法的检测结果差异有显著意义（＜００）二者存在正相关（Ｐ．５，ｒ＝０７，．０．６００１＜Ｐ＜００）和直线回归（．５ｂ＝
０４，．０．５００１＜Ｐ＜００）．５关系，直线回归方程为；４６＋．５。微量滴定法变异系数Ｃ＝．１０４ｘＶ为１２％～．９．５２８％。