黄酮提取
中药中黄酮提取

中药中的黄酮提取是一种具有广泛应用价值的天然药物提取技术。
黄酮类化合物是一类存在于植物中的天然化合物,具有多种生物活性,如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
因此,从中药中提取黄酮类化合物对于医药、食品等领域具有重要意义。
一、中药中黄酮的种类和分布中药中的黄酮类化合物主要包括黄酮、黄酮醇、异黄酮等。
这些化合物主要分布在植物的根、茎、叶、花和果实中。
一些常见的中药,如甘草、黄芪、柴胡等,都含有丰富的黄酮类化合物。
二、黄酮提取的方法1. 溶剂提取法:溶剂提取法是黄酮提取中最常用的方法之一。
该方法主要是利用黄酮类化合物易溶于有机溶剂的性质,采用乙醇、甲醇等有机溶剂进行提取。
其中,乙醇提取法应用最为广泛,因为乙醇对黄酮类化合物的溶解度较大,同时又具有较为良好的安全性。
2. 超声波辅助提取法:超声波辅助提取法是一种利用超声波破碎植物细胞,加速黄酮类化合物释放的方法。
该方法具有操作简便、提取效率高等优点,但需要使用大量的有机溶剂。
3. 微波辅助提取法:微波辅助提取法是一种利用微波能加速黄酮类化合物提取的方法。
该方法具有提取时间短、提取效率高等优点,但需要使用较为昂贵的设备。
4. 酶解法:酶解法是一种利用酶分解植物细胞壁,加速黄酮类化合物释放的方法。
该方法具有操作条件温和、提取效率高等优点,但需要使用较为昂贵的酶制剂。
三、黄酮提取的应用中药中黄酮的提取技术在医药、食品等领域具有广泛的应用价值。
例如,从银杏叶中提取的黄酮类化合物可以用于治疗心血管疾病;从甘草中提取的黄酮类化合物可以用于治疗肝炎、糖尿病等疾病;从黑芝麻中提取的异黄酮类化合物可以用于治疗骨质疏松等疾病。
此外,黄酮类化合物还具有抗氧化、抗炎等作用,可以作为保健食品的添加剂。
总之,中药中黄酮的提取技术对于医药、食品等领域具有重要意义。
随着科学技术的不断发展,相信未来还会有更多的黄酮类化合物被发现和应用。
黄酮提取方法

总黄酮的提取方法1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法2、2.1 微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异,使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热,从而使被提取物质从基体或体系中分离,进入介电常数较小,微波吸收能力相对差的提取剂[1]。
这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单[2]。
2.2 超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质,是目前比较新的方法。
原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取,另外,还利用其次效应,如机械振动、扩散、击碎等,使其加速被提取成分的扩散、释放。
超声波提取法具有设备简单,操作方便,提取时间短,产率高,无需加热,同时有利于保护热不稳定成分,省时,节能,提取率高的优点。
2.3 超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上,兼有气体和液体的双重特点,对物质具有良好的溶解能力,从而作溶剂进行萃取分离。
可做超临界流体的物质很多,一般为低分子量的化合物,如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。
目前多采用CO2 做萃取剂,因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。
但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力,对大多数极性较强的组分则不起作用,因此,在其中加入夹带剂,通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。
超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点:过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。
但它所需要的设备规模较大,技术要求高,投资大,安全操作要求高,难以用于较大规模的生产。
黄酮提取方法

黄酮提取方法
黄酮是一种具有多种生物活性的天然化合物,常用于抗氧化、抗炎、抗菌、心血管治疗等领域。
以下是常用的黄酮提取方法:
1. 溶剂萃取法:该方法是将黄酮原料通过溶剂将黄酮化合物溶解出来,从而达到提取黄酮的目的。
常用的溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿等。
2. 结晶法:该方法是通过加热将黄酮原料转化为黄酮晶体,然后再将其过滤、结晶、洗涤等方法提取出来。
常用的结晶方法有溶剂热法、超声波法、氯仿热法等。
3. 超声波法:该方法是利用超声波的能量将黄酮原料中的水分蒸发,从而将黄酮提取出来。
4. 微流控技术法:该方法是利用微流控技术控制温度、压力等参数,将黄酮从原料中直接提取出来。
5. 真空萃取法:该方法是通过真空泵将黄酮化合物从原料中抽出,从而达到提取黄酮的目的。
以上是常用的黄酮提取方法,不同的提取方法适用于不同的原料
和提取需求,可以根据具体情况选择合适的方法。
举例说明黄酮的提取分离方法

举例说明黄酮的提取分离方法组长:宁组员:翟雪王璐璐子涵子惠罗春雨红成1.提取方法1.1热水提取法热水提取法一般仅限于提取苷类. 在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间与煎煮次数等因素. 此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产。
以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍) ,可以明显提高芦丁的产率。
实例桑叶:采用热水提取法测定桑叶中各有效成分含量,发现黄酮类化合物含量为1%以上,其中霜后桑叶黄酮类化合物含量最高为1.54% ,其次是晚秋桑叶,春季桑芽和后期桑叶含量最低。
甘草:过去甘草黄酮的提取主要为水提法,其主要原理通过甘草粉与水按一定配比,加热混合至80~95 ℃浸提甘草粉,利用甘草黄酮的水溶性进而提取甘草黄酮。
此法虽然要求设备简单,但因提取杂质多、提取时间长、提取液存放易腐败变质、后续过滤操作困难、收率较低等缺点,现已不常使用。
1.2有机溶剂萃取法其原理是利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同的溶剂萃取。
常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,一般采取乙醇为提取溶剂。
高浓度的乙醇(如90 %~95 %) 适于提取苷元,浓度60 %左右的乙醇适于提取苷类。
提取次数一般为2~4 次,提取方法有热回流提取和冷浸提取两种方式。
实例桑叶:使用乙醇提取桑叶中总黄酮的最正确工艺条件为:乙醇的浓度为70%,料液比为1:15,在80℃的条件下浸泡3h。
使用多种有机溶剂提取发现桑叶中黄酮类化合物的最正确提取溶剂是60%丙酮。
西芹:使用无水乙醇为提取剂,按西芹鲜重与提取剂的比例(W/ V) 1∶2 ,在80 ℃下回流提取2~4h ,制备西芹总黄酮。
银杏叶:从银杏叶中提取总黄酮时, 随乙醇浓度的增加总黄酮提取率逐渐上升, 当乙醇浓度增至70% 时提取率最高, 之后反而下降, 应选用70% 的乙醇作浸提剂最正确。
生:生黄酮提取用40倍原料的90%甲醇溶液, 在60 ~ 65℃条件下提取4 h 为其优化组合, 而其试验组合中以用40倍原料的75%甲醇溶液,在60~ 65 ℃条件下提取2 h的提取效果最好。
黄酮的提取 三种方法

黄酮的提取三种方法黄酮的提取三种方法辣木叶中黄酮的提取具体操作流程1.1材料与试剂辣木叶,老师提供;芦丁标准品、分析纯无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝,氢氧化钠等。
1.2仪器与设备kq-300de型数控超声波清洗器;电子分析天平;anketdl-5-a离心机;紫外/可见分光光度计。
1.3辣木叶总黄酮的抽取方法取干燥的辣木叶,粉碎过40目筛。
准确称取辣木叶粉1.0g,置于100ml烧杯中,加入体积分数为80%的乙醇溶液超声提取,提取液离心分离,测定总黄酮的含量。
具体操作流程:辣木叶→潮湿→磨粉→过40目筛→超音波抽取→Vergt→上清液→测量总黄酮含量。
1.4总黄酮的测定方法1.4.1芦丁标准曲线的绘制精确称取潮湿至恒重的芦丁标准品20mg,用体积分数为80%的乙醇溶液熔化,定容至25ml,酿制获得质量浓度为0.80mg/ml的芦丁标准溶液。
精确汲取崭新酿制的芦丁标准溶液0、125、250、500、625、750、1500μl于10ml的比色管中,重新加入体积分数80%的乙醇溶液至9ml,重新加入5%的na-no2溶液300μl,容器,置放6min。
重新加入10%的al(no3)3溶液300μl,容器,置放6min,再重新加入1mol/l的naoh溶液500μl,容器,静置10~15min。
以80%的乙醇溶液为试剂空白作参比液,于510nm波长处测量吸光值。
以芦丁浓度(mg/ml)为横坐标,喷光度值a为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程y=ax-b,r2=x,得线性关系。
1.4.2辣木叶总黄酮含量的测定精确汲取适度辣木叶黄酮提取液,按照芦丁标准曲线制作方法测量喷光度。
由喷光度根据回归方程排序出来原提取液中总黄酮的质量浓度(c),测量获得辣木提取液体积(v),然后排序出来辣木叶中总黄酮的抽取率为。
辣木叶中总黄酮抽取率为(以芦丁计)%=c×vm×100其中:c为样液经喷光度求出的原提取液中总黄酮的质量浓度(g/ml);v为提取液的总体积(ml);m为称取的辣木叶粉质量(mg)。
黄酮提取方法

黄酮提取方法黄酮是一类天然植物化合物,具有多种生物活性和药理作用。
以下是黄酮的一种常用提取方法:材料和试剂:-植物材料(如花朵、果实、叶子等)-乙醇或丙酮(有机溶剂)-蒸馏水(无机溶剂)-丙酮-水混合溶液(可选,用于分离黄酮类化合物)步骤:1. 准备植物材料:选择新鲜的植物材料,并将其洗净、晾干,去除杂质和不需要的部分。
根据具体植物材料的性质,可以选择使用花朵、果实、叶子等部位。
2. 粉碎植物材料:将植物材料切碎或研磨成细粉,以增加提取效率。
可以使用搅拌器、研钵或研磨机等设备进行粉碎。
3. 提取溶剂选择:选择适当的有机溶剂,如乙醇或丙酮,作为黄酮的提取溶剂。
这些溶剂具有良好的溶解性,能够高效地提取黄酮类化合物。
4. 溶剂提取:将粉碎后的植物材料与适量的有机溶剂混合,放入容器中,并密封。
让溶剂与植物材料充分接触,并进行提取。
可以选择常温静置提取、加热提取或超声波提取等方法,以增加提取效果。
5. 过滤:将提取液过滤,去除植物材料残渣和固体颗粒,得到澄清的提取液。
6. 浓缩提取液:使用浓缩设备(如旋转蒸发仪)将提取液中的溶剂蒸发掉,使其浓缩。
得到浓缩后的提取物,其中包含了黄酮类化合物。
7. 可选步骤:如果需要分离和纯化特定的黄酮类化合物,可以使用进一步的分离技术,如液相色谱(HPLC)或柱层析等方法。
这可以根据目标黄酮类化合物的性质和目的来选择。
以上是一般黄酮提取的常用方法,但需要根据具体的植物材料和实验条件进行调整和优化。
提取黄酮的方法可以因不同的植物种类和黄酮化合物的特性而有所差异。
因此,在实际操作中,建议参考相关的科学文献、专利或咨询专业人士的建议,以获取更详细和准确的提取方法。
此外,为确保实验操作的安全性和可靠性,请在进行实验之前仔细阅读和遵守相关实验室安全操作规程,并使用适当的个人防护设备。
在进行黄酮提取实验时,应注意溶剂的挥发性和易燃性,确保实验室通风良好,并遵循实验室废弃物管理规定。
最后,对于黄酮的提取和应用,建议与专业领域的研究人员、科学家或专业医疗人员进行深入讨论和咨询,以获取更准确和专业的指导。
黄酮类化合物有哪些提取方法

黄酮类化合物有哪些提取方法
黄酮类化合物是一类具有丰富生物活性的天然产物,常用的提取方法有以下几种:
1. 浸提法:将含有黄酮类化合物的植物材料浸泡在适当的溶剂中,通过浸泡时间和温度来促使黄酮类化合物溶解于溶剂中,最后采用蒸馏或浓缩方法得到提取物。
2. 水蒸气蒸馏法:将含有黄酮类化合物的植物材料放入水蒸气蒸馏器中,通过水蒸气的温度和压力作用使植物材料中的黄酮类化合物挥发出来,再通过冷凝器冷却收集得到提取物。
3. 超声波辅助提取法:将植物材料与提取溶剂放入超声波提取器中,利用超声波作用使黄酮类化合物充分溶解于溶剂中,提高提取效率。
4. 微波辅助提取法:将植物材料与提取溶剂放入微波提取器中,通过微波辐射加热,使黄酮类化合物迅速溶解于溶剂中,提高提取效率。
5. 超临界流体提取法:利用超临界流体(如二氧化碳)具有较高的溶解能力和较低的粘度,在适当的温度和压力下将黄酮类化合物提取出来,再通过减压蒸发或蒸馏得到提取物。
这些方法可以根据不同黄酮类化合物的特性和需求进行选择和优化。
同时,需要
注意提取条件的选择,如溶剂的选择、温度和时间控制等,以达到最佳的提取效果。
提取黄酮类的方法

提取黄酮类的方法
黄酮类是一类具有广泛生物活性的天然化合物,常用于药物和保健品的研究和开发。
提取黄酮类化合物的方法通常包括以下几个步骤:
1. 样品预处理:将待提取的植物材料(如花朵、叶片、茎皮等)进行洗涤、破碎或粉碎处理,以增加提取效果。
2. 溶剂选择:根据黄酮类化合物的特性,选择适合提取的溶剂,常用的有乙醇、甲醇、乙酸乙酯等。
不同的黄酮类化合物可能在不同的溶剂中具有不同的溶解性,因此溶剂的选择需根据具体化合物而定。
3. 固液提取:将预处理后的植物材料与选择的溶剂混合,进行固液提取。
可以采用浸泡法、回流法或超声波法等。
4. 过滤:将提取的混合物进行过滤,去除固体杂质,得到纯净的提取液。
5. 浓缩:将提取液通过蒸发或减压浓缩,浓缩至一定的体积,以增加目标化合物的浓度。
6. 结晶或萃取:根据黄酮类化合物的特性,可以通过结晶或萃取等方法将目标化合物进一步纯化。
7. 干燥:将提取得到的黄酮类化合物进行干燥处理,去除溶剂和水分,得到干燥的黄酮类化合物。
需要注意的是,以上提取方法仅为一般性的步骤,具体的提取方法还需根据目标化合物的性质和样品的特点进行优化和调整。
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实验项目 木芙蓉花中有效成份提取与性能研究【课前预习】1.预习植物中有哪些有效成份。
2.预习植物中有效成份的提取及其测定方法基本原理。
3.预习抑制亚硝化反应的基本原理。
【目的要求】1.了解植物中有效成份的药用价值。
2.掌握植物中有效成份的提取及其测定方法。
3.掌握抑制亚硝化反应的操作与方法。
【基本原理】黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环(A-与B-环)通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物,其基本母核为2-苯基色原酮。
是一大类以苯色酮环为基础的酚类化合物。
植物中由苯丙氨酸产生的肉桂酰辅酶A ,经碳链延长环化生成的查耳酮,再衍生成的各种α-苯基衍生物。
OO A B2-苯基色原酮黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。
此外,它还常与糖结合成苷。
天然黄酮类化合物多以苷类形式存在,并且由于糖的种类、数量、联接位置及联接方式不同可以组成各种各样黄酮苷类。
组成黄酮苷的糖类包括单糖、双糖、三糖和酰化糖。
黄酮苷固体为无定形粉末,其余黄酮类化合物多为结晶性固体。
黄酮类化合物不同的颜色为天然色素家族添加了更多色彩。
这是由于其母核内形成交叉共轭体系,并通过电子转移、重排,使共轭链延长,因而显现出颜色。
黄酮苷一般易溶于水、乙醇、甲醇等极性强的溶剂中;但难溶于或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。
糖链越长则水溶度越大。
黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基,故显酸性。
酸性强弱因酚羟基数目、位置而异。
黄酮类化合物广泛存在于天然产物中,大多具有明显的抗炎、抗菌、生物抗氧化性、抗衰老、降血脂、治疗心血管疾病等功能。
其中有些可用于心血管病的治疗。
植物单宁(Vegetable tannins),又称植物多酚(Plant Polyphenol)为多羟基苯,如苯二酚、苯三酚等,是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。
在维管植物中的含量仅次于纤维素、半纤维素和木质素,广泛存在于植物的皮、根、叶、果中,含量可达20%。
植物单宁是植物的次生代谢产物,属于天然有机化合物。
常是植物及微生物中产生的酚类次生代谢产物。
具有抗氧化性、抗肿瘤、抗动脉硬化、防冠心病与中风等心脑血管病以及抗菌等多种生理功能,是自然界和人类的“健康卫士”。
2l世纪随着抗氧化剂理论及研究工作的深入,以及消费者对食品安全性意识的提高,天然抗氧化剂的应用越来越受到人们的重视,回归大自然已是目前一个大趋势。
木芙蓉(Hibiscus mutabilis L.)为锦葵科植物,又名拒霜花、木莲、醉芙蓉,为落叶灌木或小乔木。
其花大色艳,花色一日三变,在寒凉的深秋傲霜怒放,观赏价值极佳。
其花、叶、根富含生化药物成分,是极优良的中药材。
中医认为,木芙蓉性平味辛,有清热、凉血、解毒、消肿、排毒之功效,适用于肺热咳嗽、月经过多、白带过多、痈疽肿毒、疔疮、水火烫伤等疾病。
《本草纲目》言其“治一切大小痈疽,肿毒恶疮,消肿,排脓,止痛”。
木芙蓉花、叶中含有多酚、黄酮类化合物。
1.测定总黄酮的原理:在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮类化合物先与亚硝酸钠发生氧化还原反应,再加硝酸铝络合,最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环,生成 2-羟基查耳酮而显红橙色,在510 nm波长处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律,一般与芦丁标准系列比较定量(它的显色原理发生在黄酮醇类成分邻位无取代的邻二酚羟基部位,不具有邻位无取代邻二酚羟基的黄酮醇类成分加入上述试剂时是不显色的)。
2.多酚测定原理:总多酚的测定采用Folin-Ciocalteu法测定总多酚含量,其反应原理为酚类化合物在碱性条件下可以将钨钼酸还原,生成蓝色的化合物,颜色的深浅与酚类化合物含量呈正相关,在波长760 nm左右有最大吸收,一般与没食子酸标准系列比较定量。
3.总黄酮对亚硝酸钠清除率的测定亚硝酸钠在弱酸性条件下,与对氨基苯磺酸重氮化,然后再与盐酸萘乙二胺偶合生成红色化合物,用分光光度计测出该化合物的吸光度,就可知道反应液中亚硝酸钠含量多少。
据此可以通过测定相同条件下亚硝酸钠含量的变化反映总黄酮清除能力的强弱,亚硝酸钠含量少,总黄酮清除能力就强,反之则弱。
4.总黄酮对亚硝胺合成阻断率的测定二甲胺与亚硝酸钠在模拟人体胃液的条件下(pH 3.0,温度37℃),可适宜地生成二甲基亚硝胺。
当往样品溶液中依次加入二甲胺与亚硝酸钠时,样品溶液优先同亚硝酸钠作用,使得二甲胺不能与亚硝酸钠反应,达到阻止亚硝胺生成的目的。
据此可以通过比较相同条件下生成亚硝胺量的多少反映总黄酮阻断能力的强弱,生成亚硝胺量少,总黄酮的阻断能力就强,反之则弱。
在紫外灯照射下,二甲基亚硝胺可分解成二甲基仲胺和亚硝酸根,亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后,再与1-萘胺偶合生成红色化合物,用分光光度计测出该化合物的吸光度,就可知道上述反应液中亚硝胺含量多少。
【实验用品】(一)实验室提供下列仪器和试剂1、仪器:电子分析天平;粉碎机;数显恒温水浴锅;三用紫外仪;真空泵;分光光度计;电热套;比色管;常用玻璃仪器。
2、试剂:木芙蓉花采自湖北师范学院校区;芦丁(上海展云化工有限公司);对氨基苯磺酸(分析纯);柠檬酸(分析纯);磷酸氢二钠(分析纯);盐酸萘乙二胺(分析纯);二甲胺(分析纯);1-萘胺(分析纯);钨酸钠(分析纯);钼酸钠(分析纯);没食子酸(分析纯);(分析纯);乙醇(分析纯);A1(NO3)3(分析纯);盐酸(分析纯);NaOH(分析纯);浓H2SO4(分析纯);磷酸(分析纯)。
(二)学生自配试剂1、乙醇溶液:60 %、80 %乙醇溶液。
2、10% A1(NO3)3溶液。
3、1 %三氯化铝溶液。
4、2%FeCl3溶液。
5、5 % NaNO2溶液。
6、4 % NaOH 溶液;1 % NaOH 溶液。
7、5%的醋酸铅溶液。
8、1%KMnO4溶液。
9、10 % 、0.5% Na2CO3溶液。
10、pH3.0 的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液:4.11 mL0.2 mol/L磷酸氢二钠与15.89 mL0.1 mol/L 柠檬酸混合即可。
11、1 mmol/L 的二甲胺溶液。
12、1% 、0.4 %对氨基苯磺酸溶液。
13、0.1% 1-萘胺溶液。
14、0.2% 盐酸萘乙二胺溶液。
【方法步骤】一、样品的处理及提取1. 处理:新鲜木芙蓉花水洗后,于60℃烘干,粉碎机粉碎,过筛备用。
2. 提取:精密称取干燥、粉碎的木芙蓉花粉末1.0000 g置于锥形瓶中,加入60 %乙醇溶液30mL,于60℃浸提2 h,滤去残渣,残渣洗涤2-3次,定容至100 mL,即得提取液。
二、样品测定1. 黄酮测定1.1 黄酮类物质的鉴定方法(1)盐酸一镁粉反应:取待测液1.0 mL放在测试瓶中,加入少许镁粉振摇,滴加几滴浓盐酸,观察反应现象。
(2)氨水反应:取待测液1.0 mL放在测试瓶中,滴加几滴氨水振摇,观察反应现象。
(3)硝酸铝反应:取待测液1.0 mL放在测试瓶中,滴加几滴硝酸铝振摇,观察反应现象。
(4)三氯化铝反应:取待测液1.0 mL放在测试瓶中,滴加几滴1 %三氯化铝振摇,观察反应现象。
(5)氯化铁反应:在试管中加1 mL提取物,再加入1.0 mL的2%FeCl3,观察反应现象。
(6)浓硫酸反应: 在样品液中滴加少量浓H2SO4溶液,观察反应现象。
(7)碱性试剂显色反应在样品液中加入5 % NaNO2溶液; 摇匀,旋转6 min 后,加入等体积10% A1(NO3)3溶液,6 min 后再加入4 % NaOH 溶液,混匀,用60 %乙醇稀释,观察反应现象。
(8)与5%的醋酸铅反应:在5%的醋酸铅溶液中滴加数滴提取物,观察反应现象。
(9)与1%高锰酸钾溶液反应:在试管中加1.0 mL 1%KMnO4,滴入3~4滴提取物,观察KMnO4溶液是否褪色。
(10)与碱性试剂(1%NaOH)反应:在1 mL提取物中加入0.5 mL的1%NaOH,观察颜色变化。
1.2 黄酮类物质定量测定1.2.1 标准曲线的制备精密称取芦丁对照品10 mg,置50 mL量瓶中,加80%乙醇溶解至刻度,摇匀即得对照品溶液。
分别精密吸取1.0 mL,2.0 mL,3.0 mL,4.0 mL和5.0 mL置于10mL比色管中,各加80%乙醇至5 mL,加5% NaNO2溶液0.5 mL,摇匀放置6 min,再加10 % A1(NO3)3。
溶液0.5 mL,摇匀,再放置6 min,加4 % NaOH溶液4mL,摇匀放置15min,在510 nm波长处,以同法配制空白对照,测定吸光度值,得回归方程。
1.2.2 样品黄酮含量测定精密吸取提取液1.0 mL于10 mL比色管中,按“各加80 %乙醇至5 mL”起依法进行操作,同时精密吸取黄酮提取液1.0 mL于10 mL比色管中,加80 %乙醇至5 mL,再加1mL水,4 mL4 %NaOH 溶液,作样品空白测定吸光度值。
按回归方程计算样品黄酮提取得率。
2.多酚测定2.1 福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂的配制称取100 g钨酸钠和25 g钼酸钠置于2L的磨口圆底烧瓶中,用700 mL蒸馏水溶解,再缓慢加入50 mL 85 %的磷酸和100 mL的浓盐酸,充分混匀,放入数粒玻璃珠,连接回流冷凝装置,文火回流10 h。
用50mL蒸馏水冲洗冷凝管上的附着物,拆开冷凝管后加入150 g无水硫酸锂和几滴溴水(边加边摇晃),开口继续加热沸腾15 min,使溴水完全挥发为止,终点颜色为黄绿色。
冷却后定容至1000 mL,过滤,储存于棕色瓶中,放入冰箱中保存备用。
2.2 制作没食子酸标准曲线精确称取0.070 g的干燥没食子酸标准品,用蒸馏水溶解,定容于100 mL的容量瓶中,配成浓度为700 mg/L的没食子酸溶液。
然后分别精密吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0和4.0 mL没食子酸标准溶液定容于50 mL容量瓶内,配成浓度为0-56 mg/L的系列标准溶液。
再从各系列标准溶液中吸取1mL于25 mL比色管内,加10 mL蒸馏水,摇匀,再加1.5 mL Folin- Ciocalteu试剂,充分摇匀,立即加入6 mL 10 % Na2CO3溶液,混匀,加水定容,再混匀,然后在30℃下避光放置反应2 h,以试剂样为空白,在波长760 nm处测定吸光值,以吸光度值为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。
2.3 多酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu反应比色法取1mL提取稀释液(样液稀释10倍)于25mL比色管内,加10 mL蒸馏水,摇匀,再加1.5 mL Folin- Ciocalteu试剂,充分摇匀,立即加入6 mL10 % Na2CO3溶液,混匀,加水定容,再混匀,然后在30℃下避光放置反应2 h,以试剂样为空白,在波长760 nm处测定吸光值,根据绘制的标准曲线方程计算提取液中多酚含量(以没食子酸计),经进一步计算即得多酚提取得率。