中国药典2020 高效液相色谱
2020年中国药典运用高效液相色谱法测定含量的品种
2020年我国药典是一部权威的药品标准，其中包含了大量的药品、原料药和药用辅料的规范。
药品的质量和安全性对于人们的生命健康至关重要，而药典中的含量测定方法是评价药品质量的重要手段之一。
而高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）作为一种快速、准确的分析方法，在药典中得到了广泛的应用。
本文主要介绍了2020年我国药典中运用高效液相色谱法测定含量的品种。
一、什么是高效液相色谱法高效液相色谱法是一种利用溶液在固定相载体上进行分配平衡的色谱分析方法。
它利用流动相的不同速度使样品中的成分在固定相上分离出来，再通过检测器对各个成分进行检测和定量。
该方法具有分离效率高、灵敏度高、准确性高、重现性好等优点，因此被广泛应用于药品质量控制领域。
二、2020年我国药典中运用高效液相色谱法测定含量的品种1.对乙酰氨基酚片对乙酰氨基酚片是一种用于退烧和镇痛的常用药品，其含量测定需要高效液相色谱法进行。
根据2020年我国药典，对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量可以采用高效液相色谱法进行测定，并以此作为评价药物质量的重要指标。
2.阿莫西林胶囊阿莫西林是一种广谱抗生素，常用于治疗呼吸道、泌尿生殖系统和消化道感染等疾病。
2020年我国药典规定，阿莫西林胶囊中阿莫西林的含量可以采用高效液相色谱法进行测定，以确保药品的质量。
3.复方甘草酸苷片复方甘草酸苷片是一种常用的抗炎、抗过敏药品，其含量测定也需要采用高效液相色谱法进行。
2020年我国药典规定，复方甘草酸苷片中甘草酸二钾的含量可以采用高效液相色谱法进行测定，并以此作为评价药物质量的重要指标。
4.硫酸链霉素滴眼液硫酸链霉素滴眼液是一种用于治疗眼部感染的药品，其含量测定也需要采用高效液相色谱法进行。
2020年我国药典规定，硫酸链霉素滴眼液中链霉素的含量可以采用高效液相色谱法进行测定，以确保药品的质量。
5.丙溴定胶囊丙溴定是一种中枢神经系统调节药，常用于治疗癫痫等疾病。
2020版《中国药典》通则0512HPLC如何优化色谱方法
2020版《中国药典》通则0512HPLC如何优化⾊谱⽅法2020版《中国药典》通则0512 HPLC 如何优化⾊谱⽅法随着超⾼效液相技术（⼩粒径⾊谱柱的应⽤）的发展，药典在适应新技术的使⽤，指导企业如何去优化⽅法，达到缩短分析时间、节省流动相的⽬的。
今天，我们⼀起来分析在保持与现有⽅法相似的分离效果的前提下，如何选择合适的⾊谱柱和相应的⾊谱参数。
⼀、2020版药典与2015版药典0512参数调整对⽐表1：2020版药典与2015版药典0512参数调整对⽐（其余参数，如流动相⽐例、缓冲盐浓度、柱温、pH等改变，本⽂不涉及，此处不细说）上表1中A/B/C三项，扩充了⾊谱柱的选择范围，⽽D/E/F则针对具体的每⼀个参数调整提供计算⽅式。
下⾯，我们⽤具体的案例进⾏推导。
⼆、案例推导1、改变柱长L和粒径dp假设当前⼀个⾊谱⽅法为：⽬标：保持分离度R基本不变，缩短分析时间和流动相。
过程：根据公式1：其中，k为保留因⼦，α为选择因⼦。
当⾊谱柱固定相、流动相的组成及⽐例、柱温不变，则α和k不变。
因此，分离度R仅与理论塔板数N相关。
⽽N∝L/dp（正⽐），只要保持L/dp基本不变，则R基本不变。
当前⾊谱柱Column1的L1/dp1=250/5=50，所以需要从当前市场上常⽤的⾊谱柱中选择L/dp≈50的⾊谱柱，例如柱长为100mm，粒径dp为1.8µm的⾊谱柱，则L2/dp2=100/1.8=56，与当前⾊谱柱Column1的L1/dp1基本⼀致（⽐Column1的L1/dp1值50变化+12%，在药典规定的-25%~+50%范围内。
有⼀定程度的增加，但有利于分离度R）。
注：此处粒径1.8µm是全多孔填料，产⽣的柱压⽐较⾼，因此，可选择表⾯多孔填料，例如2.7µm粒径的表⾯多孔填料⾊谱柱，因为其特殊的填料技术，实际的硅胶粒径仍只有约1.8µm（如下图1）。
图1：全多孔填料和表⾯多孔填料⽰意图。
高效液相色谱荧光检测法测定药物中的氯乙酰氯
化学分析计量CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGE第30卷，第1期2021年1月V ol. 30，No. 1Jan. 202159doi ：10.3969／j.issn.1008–6145.2021.01.012高效液相色谱荧光检测法测定药物中的氯乙酰氯汤加园，陈向明(滨州医学院药学院，山东烟台 264003)摘要 建立测定药物中氯乙酰氯含量的高效液相色谱–荧光检测方法。
以吖啶酮乙酰肼为荧光标记试剂，对氯乙酰氯进行柱前衍生。
在室温下反应15 min ，衍生产率达到最大。
衍生溶液在XDB–C 18柱上，以水和乙腈为流动相进行分析，激发波长和发射波长分别为255 nm 和429 nm 。
氯乙酰氯浓度在1～1 000 nmol ／L 范围内与色谱峰面积具有良好的线性关系，线性相关系数r =0.999 9。
方法的检出限为0.35 nmol ／L ，仪器精密度和方法精密度分别为0.52%和0.67%(n =6)。
样品加标回收率为92.5%～95.6%。
该方法简单、准确，精密度良好，可用于测定药物中氯乙酰氯的残留量。
关键词 高效液相色谱；荧光检测；氯乙酰氯中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：1008–6145(2021)01–0059–04Determination of chloroacetyl chloride in drug substance by high performanceliquid chromatography with fluorescence detectionTang Jiayuan ， Chen Xiangming(School of Pharmacy ， Binzhou Medical University ， Yantai 264003， China)Abstract A high performance liquid chromatography method coupled with fluorescence detection to determine chloroacetyl chloride in drug substance was developed. Acridone acetyl hydrazine was used as fluorescence labeling reagent and chloroacetyl chloride was derived before column. Optimum derivatization was obtained at room temperature for 15 min. The derivative was separated on a reversed-phase XDB–C 18 column in conjunction with water and acetonitrile as mobile phase. The excitation and emission wavelengths were 255 nm and 429 nm respectively. The concerntration of chloroacetyl chloride had good linear ralationship with the chromatographic peak area in the range of 1–1 000 nmol ／L, the linear correlation coefficient r =0.999 9. The instrument precision and method precision were 0.52%, 0.67%(n =6)，respectively. The detection limit of the method was 0.35 nmol ／L ，and the recoveries were in the range of 92.5%–95.6%. The method is simple ，accurate and showed good repeatability ，which can be used to determine the content of chloroacetyl chloride in drug substance.Keywords high performance liquid chromatography; fluorescence detection; chloroacetyl chloride药物中的遗传毒性杂质是一类能损伤细胞遗传物质并引起基因突变或体内诱变的物质，较少的摄入量就能够对身体健康产生严重的损害［1–2］。
《中国药典》2020版—单抗 N 糖谱测定法
单抗N 糖谱测定法
第一法亲水相互作用色谱法
本法系通过N糖苷酶F（PNGase F）对单抗N糖进行酶切、对酶切的N 糖进行标记衍生，然后用超高液相色谱法对单抗N糖谱进行测定。
照高效液相色谱法（通则0512）测定。
试剂
(1)N 糖苷酶F（PNGase F）
(2)2-氨基苯甲酰胺(2-AB)标记溶液: 取 350μl 二甲基亚砜（DMSO）和 150 μl 乙酸，混均。
精密称取 25 mg 2-AB 加入上述溶液中，充分溶解。
精密称取 30 mg 氰基硼氢化钠加入上述溶液中，充分溶解（可适当加热）。
(3)系统适用性对照品。
色谱条件
用酰胺基键合硅胶填充色谱柱，柱长 150mm，内径 2.1mm，粒度 1.7 μm，或等效色谱柱；柱温为 60℃，供试品保存温度为 2～8℃；以
50 mmol/L 的甲酸铵溶液（pH4.5）为流动相 A 液，以乙腈为流动相
B 液，梯度洗脱 60.0 分钟（梯度表）；荧光检测器检测，检测波长为：激发波长 330nm，发射波长 420nm，增益 10。
系统适用性对照品溶液的制备
( 1 )N糖的酶切。
2020年版,中国药店中贝母食用的分子鉴定方法(一)
2020年版,中国药店中贝母食用的分子鉴定方法(一)2020年版中国药店中贝母食用的分子鉴定介绍中国药店中的贝母作为一种常用药材，被广泛用于药膳和中药制剂中。
然而，由于贝母的外表与其他植物相似度较高，因此需要进行分子鉴定以确保其纯正度和质量。
本文将介绍一些常用的方法，用于2020年版中国药店中贝母食用的分子鉴定。
方法一：核磁共振波谱（NMR）•优点：核磁共振技术是一种非破坏性的分析方法，可以提供关于物质结构和组成的详细信息。
对于贝母的分子鉴定来说，核磁共振波谱具有高分辨率和高灵敏度的优势。
•操作步骤：1.提取贝母样品中的化合物。
2.使用核磁共振仪获取样品的核磁共振波谱。
3.通过比对已知结构的标准谱图，确定贝母中存在的化合物。
方法二：液相色谱质谱联用（LC-MS）•优点：液相色谱质谱联用是一种常用的化学分析方法，可以在复杂基质中准确地分析出化合物。
对于贝母的分子鉴定来说，液相色谱质谱联用具有高准确度和高灵敏度的优势。
•操作步骤：1.提取贝母样品中的化合物。
2.使用液相色谱质谱联用仪器进行分析。
3.通过比对已知化合物的质谱图和色谱图，确定贝母中存在的化合物及其相对含量。
方法三：DNA条形码•优点：DNA条形码是一种基于物种特异性基因序列的分析方法，可以快速、准确地鉴定物种。
对于贝母的分子鉴定来说，DNA条形码可以识别植物的特异性序列，确认是否为贝母及其品种。
•操作步骤：1.从贝母样品中提取DNA。
2.选择合适的DNA条形码序列进行扩增。
3.通过测序和与数据库比对，确定贝母样品中的物种和品种。
方法四：高效液相色谱（HPLC）•优点：高效液相色谱是一种常用的分离和分析技术，可以在复杂混合物中分离出化合物。
对于贝母的分子鉴定来说，高效液相色谱可以鉴定贝母中的化合物及其相对含量。
•操作步骤：1.提取贝母样品中的化合物。
2.使用高效液相色谱仪进行分析。
3.通过比对标准品的保留时间和峰形，确定贝母中存在的化合物及其相对含量。
[医学]中国药典-高效液相色谱
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二、系统适用性试验
色谱系统的适用性试验通包括 理论板数 分离度 重复性 拖尾因子 分离度和重复性是尤为重要。
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色谱柱
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积 、键合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等）以 及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离 效果。分析分子量小于2000的化合物应选择孔径在 15nm以下的填料，分析分子量大于2000的化合物则应 选择孔径在30nm以上的填料。
普通分析柱的填充剂粒径一般在3~10µm之间。粒径 更小（约2µm）的填充剂常用于填装微径柱（内径约 2mm）。
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二极管阵列检测器 （diode array detector，DAD）
特点：在任一时间内，均可同时得到 物质在不同波长下的吸收情况，即三 维图谱
多组分混合物的三维图谱
流动相
反相色谱系统的流动相首选甲醇-水系统（采用紫外末 端波长检测时，首选乙腈-水系统），如经试用不适合 时，再选用其他溶剂系统。应尽可能少用含有缓冲液 的流动相
紫外、荧光、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与供 试品溶液的浓度有关，还与化合物的结构有关；
示差折光检测器和蒸发光散射检测器为通用型检测器，对所有的 化合物均有响应；
蒸发光散检测器对结构类似的化合物，其响应值几乎仅与供试品 的质量有关；
二极管阵列检测器可以同时记录供试品的吸收光谱，故可用于供 试品的光谱鉴定和色谱峰的纯度检查。
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注意
2020版《中国药典》高效液相色谱法检验操作规程
2020版《中国药典》⾼效液相⾊谱法检验操作规程⼀、⽬的：制订详尽的⼯作程序，规范检验操作，保证检验数据的准确性。
⼆、范围：本操作规程适⽤于⾼效液相⾊谱法的检验操作。
三、职责：1、检验员：严格按操作规程操作，认真、及时、准确地填写检验记录；2、化验室负责⼈：监督检查检验员执⾏本操作规程。
四、内容：简述：⾼效液相⾊谱法系采⽤⾼压输液泵将规定的流动相泵⼊装有填充剂的⾊谱柱，对供试品进⾏分离测定的⾊谱⽅法。
注⼊的供试品，由流动相带⼊⾊谱柱内，各组分在柱内被分离，并进⼊检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理⾊谱信号。
1、对仪器的⼀般要求和⾊谱条件⾼效液相⾊谱仪由⾼压输液泵、进样器、⾊谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
⾊谱柱内径⼀般为2.1～4.6mm,填充剂粒径为2～10µm。
超⾼效液相⾊谱仪是耐超⾼压、⼩进样量、低死体积、⾼灵敏度检测的⾼效液相⾊谱仪。
1.1⾊谱柱1.1.1⾊谱柱的类型1.1.1.1反相⾊谱柱：以键合⾮极性基团的载体为填充剂填充⽽成的⾊谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常⽤的填充剂有⼗⼋烷基硅烷键合硅胶、⾟基硅烷键合硅胶和苯基硅烷键合硅胶等。
1.1.1.2正相⾊谱柱：⽤硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充⽽成的⾊谱柱。
常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可⽤作反相⾊谱。
1.1.1.3离⼦交换⾊谱柱：⽤离⼦交换填充剂填充⽽成的⾊谱柱。
有阳离⼦交换⾊谱柱和阴离⼦交换⾊谱柱。
1.1.1.4⼿性分离⾊谱柱：⽤⼿性填充剂填充⽽成的⾊谱柱。
1.1.2⾊谱柱的内径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表⾯积、键合基团的表⾯覆盖度、载体表⾯基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响⾊谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的⾊谱柱。
1.1.3温度会影响分离效果，品种正⽂中未指明⾊谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
《中国药典》2020年版四部通则修订内容培训课件
且极性差异较小时，可采用等温
小时，可采用等温法。
法。
有机溶剂数量较多，且极性差异较大时，可采
有机溶剂数量较多，且极性差异
用系统程序升温法。
较大时，可采用系统程序升温法。
1、测定法第一法：流速为1.0-
2.0ml/min（一般适用于内径
为0.32mm或0.25mm类的色谱
柱。
2.【附注】有机溶剂数量不多，
调整后, 系统适用性应符合要求, 且色谱峰出峰顺序不变。若减小 进样体积, 应保证检测限和峰面 积的重复性；若增加进样体积, 应使分离度和线性关系仍满足要 求。
应评价色谱参数调整对分离和检测的 影响, 必要时对调整色谱参数后的方 法进行确认。若调整超出表 1 中规定 的范围或品种项下规定的范围, 被认 为是对方法的修改, 需要进行充分的 方法学验证 。
2.系统适用性
（1）色谱柱理论塔板数（n）
用于评价色谱柱的分离效能。由于不 同物质在同一色谱柱上的色谱行为不 同, 采用理论板数作为衡量色谱柱效 能的指标时, 应指明测定物质, 一般 为待测物质或内标物质的理论板数。
（2）分离度（R）
用于评价待测物质与被分离物质之间 的分离程度, 是衡量色谱系统分离效 能的关键指标。除另有规定外, 待测 物质色谱峰与相邻色谱峰之间的分离 度应大于不小于 1.5。
调整梯度洗脱色谱参数时应比调整等度洗脱色谱参数时更加谨 慎, 因为此调整可能会使某些峰位置变化, 造成峰识别错误, 或者 与其他峰合并。
当对调整色谱条件后的其测定结果产生异议时, 应以品种项下 规定的色谱条件的测定结果为准。
在品种项下一般不宜指定或推荐色谱柱的品牌, 但可规定色谱 柱的填充剂（固定相）种类（如键合相, 是否改性、封端等）、粒 径、孔径, 色谱柱的柱长或柱内径；当耐用性试验证明必须使用特 定牌号的色谱柱方能满足分离要求时, 可在该品种正文项下注明。
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中国药典2020 高效液相色谱
高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离、检测、定量化合物的分析技术。
它通过样品在固
相填充柱（也称为色谱柱）中与流动相相互作用，达到物质的分离和
检测的目的。
高效液相色谱的主要设备包括进样器、泵、检测器和色谱柱。
进
样器负责将样品注入到色谱柱中，泵则负责向色谱柱内注入流动相，
检测器则负责检测和记录某特定物质的浓度，并把数据传回计算机。
色谱柱则是样品分离的关键部分，它由一种或多种材料组成，使样品
能够在流动相中以一定速率流过。
高效液相色谱通常用在检测复杂样品中的化合物，如食品、药品、生物样品等。
它的主要特点是高分离能力、高灵敏度、高准确性和高
重现性。
它能够检测到微量量级以下的化合物，并且很容易从复杂矩
阵中提取所需的物质。
高效液相色谱的工作原理是基于化学物质的亲性性质。
样品经过
某种预处理后，以一定的注入速度进入色谱柱中。
在色谱柱中，样品
物质会和填充柱内固定的某种材料作用，根据化合物的特性不同，有些化合物会与某些色谱柱材料形成亲和作用，有些则会与其他材料发生反应，并根据这些作用发生时的瞬间不同时刻，生成不同的荧光信号。
高效液相色谱的流动相包括两种，一种叫极性流动相，即水相。
另一种叫做非极性流动相，即有机溶剂。
在高效液相色谱的运用过程中，这两种流动相经常会互相使用，互相搭配，以达到更好的分离效果。
总结来说，高效液相色谱是一种分离、检测和定量化合物的重要技术，其优点包括高分离能力、高灵敏度、高准确性和高重现性等。
在现代科学和工业生产中，高效液相色谱不仅在药品、食品、生物样品分析方面得到广泛应用，而且还在环保、冶金、化工等其他关键领域起到了巨大的作用，使科技更加先进，生产更为精准。