层析技术及原理
层析技术及原理
思考题 1. 血清r-球蛋白分离与纯度鉴定的原理?
层析可分哪几类？
3．简述离子交换层析和凝胶层析的原理? 4．主要有哪几个操作步骤?
图3-2 Rs计算示意图
图3-3 垂直线法计算Rs示意图
若Rs=1，则组分定会分离；Rs<1，则组分部分分离；Rs=0，组分不能分离或分离极差。
四.分配系数
在层析分离过程中，物质既进入固定相，又进入流 动相，此过程称分配过程。无论哪一种层析法，在一定条 件下，物质在固定相和流动相达到平衡时，它在两相中平 均浓度的比值称分配系数(K)。 分配系数是由溶质的性质(分子大小、电荷、分子量等) 所决定的。不同的层析机制，其K值涵义不同。吸附层析 中，K值表示吸附平衡常数；分配层析中，表示分配系数； 离子交换层析中，表示交换常数；亲和层析中，表示亲和 常数。K值大表示其溶质在固定相中浓度大，在洗脱过程 中，溶质出现较晚。K值小表示其溶质在流动相中浓度大， 故在洗脱液中出现较早。 若两组分在同一条件下具有相似的K值，则表明两组 分层析峰重叠大，分离效果差。为达到分离目的，需重新 选择实验条件，包括层析方式和流动相的改变。
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实际计算理论塔板数时，只要在层析图谱 上测出某组分的保留值和在一定纸速下相应的 峰宽，就可计算出在某一实验条件下的理论塔 板数的近似值，以衡量柱效。若要得到真正的 塔板数时，必需扣除未被固定相所占有的空间 死体积(如柱的接口、连接柱接口的管路体积) 和流动相为充满死体积时所需的时间，此时得 到的塔板数称为有效塔板数(neff)。故上述公 式可转化为：
层析中的常用术语
一、保留值(Retention Value)
保留值表示样品中各组分 在层析柱中停留时间的长短或 组分流出时所需流动相体积的 多少。它用来描述层析峰在层 析图上的位置(图3-1)
生物化学实验层析技术和原理
生物化学实验层析技术和原理一、引言层析技术是一种常用的分离和纯化生物化学物质的方法。
它基于样品中不同成分在固定相和流动相之间的差异，通过分离和收集这些成分来实现纯化的目的。
层析技术包括多种类型，其中层析柱技术是最常用的一种。
本文将重点介绍层析柱技术的原理和应用。
二、层析柱技术的原理层析柱技术基于样品中成分在固定相和流动相之间的差异，通过固定相的选择和流动相的控制来实现成分的分离。
其原理主要包括以下几个方面：1. 固定相的选择固定相是层析柱中的填料，根据所需分离的物质特性选择不同类型的固定相。
常见的固定相包括硅胶、葡聚糖、高效液相色谱柱等。
不同的固定相具有不同的亲疏水性、分子尺寸和表面性质，可以选择合适的固定相来实现目标物质的分离。
2. 流动相的选择流动相是层析柱中用于洗脱样品成分的溶液。
根据目标物质的性质和固定相的特性选择合适的流动相。
常见的流动相包括纯水、有机溶剂和缓冲液等。
流动相的选择要考虑到目标物质的溶解性、稳定性和分离度等因素。
3. 样品的处理在进行层析柱实验前，需要对样品进行适当的处理。
例如，可以通过离心、过滤或稀释等方式去除杂质、浓缩样品或调整样品的浓度。
样品处理的目的是为了提高样品的纯度和分离效果。
4. 层析柱的操作层析柱的操作包括样品的进样、流动相的流动和目标物质的洗脱。
进样时，样品通过注射器或自动进样器加入到层析柱中。
流动相通过柱床时，样品成分会在固定相上发生吸附和解吸作用，从而实现分离。
目标物质的洗脱是通过改变流动相的性质或梯度浓度来实现的。
三、层析柱技术的应用层析柱技术在生物化学实验中具有广泛的应用，常见的应用领域包括：1. 蛋白质纯化层析柱技术可以根据蛋白质的特性进行选择性分离和纯化。
例如，通过离子交换柱可以根据蛋白质的电荷特性进行分离；通过亲和层析柱可以根据蛋白质与配体的特异结合进行分离。
2. 核酸纯化层析柱技术可以通过选择性吸附和洗脱来实现核酸的分离和纯化。
例如，通过亲和层析柱可以根据核酸与配体的特异结合进行分离；通过凝胶过滤柱可以根据核酸的大小进行分离。
生物化学实验层析技术和原理
生物化学实验层析技术和原理层析技术是一种常用的分离和纯化生物化学物质的方法，它基于不同化学物质在固定相和流动相之间的差异，通过分离、迁移和重新结合来实现分离和纯化的目的。
层析技术广泛应用于生物化学、药物研发、环境监测等领域。
一、层析技术的分类根据不同的分离原理和操作方式，层析技术可以分为多种类型，常见的有：1. 柱层析：将样品溶液通过填充在柱中的固定相，利用样品在固定相和流动相之间的相互作用进行分离。
2. 薄层层析：将样品溶液涂布在薄层层析板上，利用样品在固定相和流动相之间的分配系数进行分离。
3. 纸层析：将样品溶液滴在纸上，利用样品在纸和流动相之间的相互作用进行分离。
二、层析技术的原理层析技术的原理基于样品在固定相和流动相之间的相互作用差异。
这些相互作用可以是吸附、分配、离子交换、凝胶渗透等。
1. 吸附层析吸附层析是利用样品在固定相上的吸附作用进行分离的方法。
固定相通常是一种多孔性材料，如硅胶、活性炭等。
样品中的化合物会与固定相表面发生吸附作用，不同化合物的吸附能力不同，从而实现分离。
2. 分配层析分配层析是利用样品在固定相和流动相之间的分配系数进行分离的方法。
固定相可以是液相或固相，流动相可以是液相或气相。
样品中的化合物在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现分离。
3. 离子交换层析离子交换层析是利用样品中离子与固定相上的离子交换作用进行分离的方法。
固定相通常是一种具有离子交换基团的树脂，如阴离子交换树脂、阳离子交换树脂等。
样品中的离子与固定相上的离子交换，不同离子的交换能力不同，从而实现分离。
4. 凝胶渗透层析凝胶渗透层析是利用样品中的大分子在凝胶固定相中的渗透作用进行分离的方法。
凝胶固定相通常是一种具有孔隙结构的材料，如琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等。
样品中的大分子在凝胶固定相中的渗透速率不同，从而实现分离。
三、层析技术的步骤层析技术的基本步骤包括样品制备、填充柱或涂布固定相、样品加载、洗脱和收集。
层析分离技术
层析分离技术层析分离技术是一种重要的分离方法，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
它基于物质在不同相之间的分配差异，通过多次分配和分离步骤，将混合物中的组分分离开来。
本文将从层析分离技术的原理、类型和应用方面进行介绍。
一、层析分离技术的原理层析分离技术基于物质在不同相中的分配差异，利用不同相中物质的亲疏水性、极性、分子尺寸等特性进行分离。
其原理可以概括为：当混合物通过固定相（静相）时，不同组分会因其与固定相的相互作用力不同而以不同速度通过固定相，从而实现分离。
1. 柱层析：柱层析是最常见的层析分离技术，其主要包括液相层析和气相层析两种形式。
液相层析是在液相中进行分离，常见的有凝胶层析、离子交换层析、亲和层析等；气相层析则是在气相中进行分离，常见的有气相色谱层析、气体吸附层析等。
2. 纸层析：纸层析是一种简单易行的层析分离方法，主要用于分离和鉴定有机化合物。
通过将样品溶液滴到纸上，然后在纸的一端浸入溶剂中，溶剂在纸上上升时，样品中的组分会因其与纸或溶剂的相互作用力不同而以不同速度迁移，从而实现分离。
3. 薄层层析：薄层层析是将样品溶液均匀涂布在薄层层析板上，然后将其浸入溶剂中进行分离。
薄层层析具有操作简便、分离效果好的特点，广泛应用于药物分析、天然产物分离等领域。
三、层析分离技术的应用1. 生物化学：层析分离技术在生物化学研究中得到广泛应用，如蛋白质纯化、核酸提取、酶活性分析等。
2. 药物分析：层析分离技术是药物分析中常用的方法之一，可以用于药物的纯化和分离、药物代谢产物的分析等。
3. 环境监测：层析分离技术可以用于环境中有机物、无机物和杂质的分离和测定，如水质检测、土壤污染分析等。
4. 食品安全：层析分离技术在食品安全领域也有广泛应用，可以用于食品中有害物质的检测和分离，如农药残留、重金属含量等。
层析分离技术作为一种重要的分离方法，具有原理简单、分离效果好、应用广泛的特点。
通过不同类型的层析分离技术，可以实现对混合物中不同组分的高效分离和纯化。
五种层析方法和原理
五种层析方法和原理五种层析方法和原理1. 列点 1•新华字典定义：层析方法是一种通过分析物质内部不同成分在不同条件下的分布情况，从而推断物质组成、性质和结构的方法。
•原理：层析方法基于物质成分在固定相和流动相之间的分配行为。
固定相通常是固体或涂覆在固体上的物质，而流动相则是向上或向下流动的溶剂。
2. 列点 2•薄层层析法：–原理：薄层层析法是一种将样品溶解在溶剂中后涂覆在薄层板的表面上，然后通过毛细作用将溶剂上升至薄层表面，样品成分分离的方法。
根据样品成分的亲疏水性质和与固定相的相互作用，不同成分会以不同的速度在薄层板上移动，从而实现分离。
–应用：薄层层析法常用于化学品分析、食品检测和药物分析等领域。
3. 列点 3•气相层析法：–原理：气相层析法是利用气体（流动相）和涂覆在固体或涂覆在固体上的涂层（固定相）之间的分配作用，使样品成分在涂层上分离的方法。
样品经过蒸发后进入气化室，在高温和惰性气体的作用下，样品成分分解为气体状态，然后进入色谱柱，通过不同成分与固定相的相互作用，实现分离。
–应用：气相层析法广泛应用于环境监测、食品安全检测和生物医药领域。
4. 列点 4•液相层析法：–原理：液相层析法是通过溶液中样品成分与固定相之间的相互作用，实现样品分离的方法。
当溶液通过柱子时，样品成分会根据其与固定相的相互作用力的强度和性质不同，在固定相上停留的时间也不同，从而实现分离。
–应用：液相层析法广泛应用于药物分析、食品检测和环境监测等领域。
5. 列点 5•离子交换层析法：–原理：离子交换层析法利用带电粒子（离子）之间的静电相互作用，在一定条件下，使样品中的离子与固定相中的带电粒子发生相互作用，从而实现分离。
不同离子会在不同条件下被吸附或释放，从而实现分离。
–应用：离子交换层析法常用于水质分析、药物分析和环境监测等领域。
通过以上列点方式，我们对五种层析方法的原理和应用作了简要的介绍。
这些层析方法在不同领域的分析和检测中扮演重要角色，为我们获取准确的数据和信息提供了有效手段。
层析技术概念、原理、分类(凝胶层析和离子交换层析)
层析技术概念、原理、分类（凝胶层析和离子交换层析）一．概念利用混和物中各组分理化性质（吸附力、分子形状、大小、分子极性、分子亲和力以及分配系数）的差异，在物质经过两相中进行分离的一种技术。
本世纪初（1903年），俄国植物学家M.C.Jber发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素，还含有其他色素，实际上他使用的吸附层析。
现在层系法已成为生化、分子生物学及其它学科领域有效的分离、分析工具之一。
二．原理具体过程：可分离物质：糖类、有机酸、氨基酸、核苷酸。
三．分类1．按两相所处物理状态分类气相层析：气液层析（固定相为液体）和气固层析（固定相为固体），流动相为气体液相层析：液液层析（固定相为液体）和液固层析（固定相为固体），流动相为液体2．按层析方式分类柱层析：固定相装于柱内，使样品沿着一个方向移动而分离薄层层析：将适当粘度的固定相均匀铺在薄板上，点样后，用流动相展开纸层析：用滤纸作液体的载体，点样后用流动相展开3．影响凝胶柱层析的主要因素①层析柱的选择与装填层析柱的大小应根据分离样品量的多少及对分辨率的要求而定。
凝胶柱填装后用肉眼观察应均匀、无纹路、无汽泡。
②流动相�D�D洗脱液的选择：是含有一定浓度盐的缓冲液，目的是为了防止凝胶可能有吸附作用。
其选择主要取决于待分离样品，一般来说只要能溶解洗脱物质，并不使其变性的缓冲液都可用于凝胶层析。
③加样量：加样量的多少应根据具体的实验而定：一般分级分离时加样量约为凝胶柱床体积的1％－5％，而分组分离时加样量约为凝胶柱床体积的10%-25%.④凝胶再生：葡聚糖凝胶再生使用NaOH（0.2M）和NaCl(0.5M)混合液处理。
五．离子交换层析离子交换层析是利用固定相偶联的离子交换基团和流动相解离的离子化合物之间发生可逆的离子交换反应而进行的分离方法。
1．原理离子交换交换层析是利用离子交换剂对各种离子的亲和力不同，借以分离混和物中各种离子的一种技术。
其主要特点是依靠带有相反电荷的颗粒之间的吸引力的作用。
常见层析法
层析技术的应用一、层析技术的原理和分类（一）层析技术的原理层析法是目前广泛应用的一种分离技术。
本世纪初俄国植物学家M。
Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。
现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。
层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术.所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，它或者是固体物质或者是固定于固体物质上的成分;另一是流动相，即可以流动的物质，如水和各种溶媒。
当待分离的混合物随溶媒（流动相）通过固定相时，由于各组份的理化性质存在差异,与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等)的能力不同,在两相中的分配(含量对比）不同,而且随溶媒向前移动，各组份不断地在两相中进行再分配。
与固定相相互作用力越弱的组份，随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移动的速度快.反之，与固定相相互作用越强的组份，向前移动速度越慢。
分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组份，从而达到将各组份分离的目的.（二）层析法分类见表16-5～7（三)层析法的特点与应用表16—5 按两相所处状态分类层析法是根据物质的理化性质不同而建立的分离分析方法.根据层析峰的位置及峰高或峰面积，可以定性及定量。
层析法与光学、电学或电化学仪器连用,可检测出层析后各组份的浓度或质量，同时绘出层析图。
层析仪与电子计算机联用,可使操作及数据处理自动化,大大缩短分析时间。
由于层析法具有分辨率高、灵敏度高、选择性好、速度快等特点,因此适用于杂质多、含量少的复杂样品分析,尤其适用于生物样品的分离分析。
近年来，已成为生物化学及分子生物学常用的分析方法。
在医药卫生、环境化学、高分子材料、石油化工等方面也得到了广泛的应用。
表16—6 按层析原理分类名称分离原理吸附层析法组份在吸附剂表面吸附固定相是固体吸附剂，各能力不同分配层析法各组份在流动相和静止液相（固相）中的分配系数不同离子交换层析法固定相是离子交换剂，各组份与离子交换剂亲和力不同凝胶层析法固定相是多孔凝胶，各组份的分子大小不同，因而在凝胶上受阻滞的程度不同亲和层析法固定相只能与一种待分离组份专一结合，以此和无亲和力的其它组份分离表16—7 按操作形式不同分类名称操作形式柱层析法固定相装于柱内，使样品沿着一个方向前移而达分离薄层层析法将适当粘度的固定相均匀涂铺在薄板上，点样后用流动相展开，使各组份分离纸层析法用滤纸作液体的载体，点样后用流动相展开，使各组份分离薄膜层析法将适当的高分子有机吸附剂制成薄膜,以类似纸层析方法进行物质的分离二、层析法实验技术（一)凝胶层析法凝胶层析又称分子筛过滤、排阻层析等。
层析技术基本原理及应用
层析技术（Chromatography）是一种用于分离混合物中不同成分的重要方法，广泛应用于化学、生物化学、药学等领域。
以下是层析技术的基本原理及应用：
基本原理：
1. 分离原理：
-层析技术利用不同物质在固定相（stationary phase）和移动相（mobile phase）之间的分配系数不同来实现分离。
-样品在固相上受到吸附力和解吸力的影响，在移动相的推动下，不同组分以不同速度迁移，最终实现分离。
2. 类型：
-按照相对位置可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
-常见的层析技术包括气相色谱、液相色谱、离子色谱、薄层色谱等。
应用领域：
1. 生物化学：
-在蛋白质纯化、药物筛选、基因分析等方面广泛应用。
-用于分离和鉴定生物样品中的蛋白质、氨基酸、核酸等生物分子。
2. 制药工业：
-用于药物分析、药物提取和纯化等环节。
-常用于药物配方中主成分和杂质的分离和检测。
3. 环境监测：
-用于水质、大气、土壤等环境样品中有害物质的检测与分析。
-能够帮助监测环境中的污染物并进行有效处理。
4. 食品安全：
-在食品中添加剂、残留农药、重金属等的检测和分析中发挥作用。
-有助于确保食品安全和合规。
总的来说，层析技术通过精密的分离原理和操作流程，可以对复杂混合物进行高效分离和分析，为科学研究和工业生产提供了重要的技术支持。
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实际计算理论塔板数时，只要在层析图谱 上测出某组分的保留值和在一定纸速下相应的 峰宽，就可计算出在某一实验条件下的理论塔 板数的近似值，以衡量柱效。若要得到真正的 塔板数时，必需扣除未被固定相所占有的空间 死体积(如柱的接口、连接柱接口的管路体积) 和流动相为充满死体积时所需的时间，此时得 到的塔板数称为有效塔板数(neff)。故上述公 式可转化为：
层析中的常用术语
一、保留值(Retention Value)
保留值表示样品中各组分 在层析柱中停留时间的长短或 组分流出时所需流动相体积的 多少。它用来描述层析峰在层 析图上的位置(图3-1)
图3-1 A、B两组分的保留值 A保留值tR1’=tR1-tm B保留值tR2’=tR2-tm
二、层析峰区域宽度(Peak Width)
三.分离度(Rs)
指相邻两峰的保留差值是两峰宽平均值的几倍(图3-2)。
Rs tR 1 2
2
tR
1
(W 1 W 2 )
W1 W 2Rs Nhomakorabea tR W
若 Rs愈大，说明分离效果愈好。在实际分离过程中，各组分含量 不同，因而峰面积和峰宽在绝大多数情况下是不一致的，故一般用垂直 线法来计算。具体是连接两峰顶，再从两峰间的峰谷向基线作一垂线， f Rs g 此线和上述连线交于3处。从3到峰谷的距离为f，从3到基线距离为g (图 3-3)。
图3-2 Rs计算示意图
图3-3 垂直线法计算Rs示意图
若Rs=1，则组分定会分离；Rs<1，则组分部分分离；Rs=0，组分不能分离或分离极差。
四.分配系数
在层析分离过程中，物质既进入固定相，又进入流 动相，此过程称分配过程。无论哪一种层析法，在一定条 件下，物质在固定相和流动相达到平衡时，它在两相中平 均浓度的比值称分配系数(K)。 分配系数是由溶质的性质(分子大小、电荷、分子量等) 所决定的。不同的层析机制，其K值涵义不同。吸附层析 中，K值表示吸附平衡常数；分配层析中，表示分配系数； 离子交换层析中，表示交换常数；亲和层析中，表示亲和 常数。K值大表示其溶质在固定相中浓度大，在洗脱过程 中，溶质出现较晚。K值小表示其溶质在流动相中浓度大， 故在洗脱液中出现较早。 若两组分在同一条件下具有相似的K值，则表明两组 分层析峰重叠大，分离效果差。为达到分离目的，需重新 选择实验条件，包括层析方式和流动相的改变。
(二) 脱盐 1. 装柱：取1.515cm 层析柱1 支（若底部无烧结板，用一小块海绵或 棉花堵住下端）装入约1/3柱高的蒸馏水，排除底部死腔气泡，至剩余约 2～3cm柱高的水时关闭出口。沿柱内壁缓慢灌入稀糊状葡聚糖凝胶G25 悬液至2/3柱高，严防气泡及断层。待分层后打开出口，当水全部进入床 面以后，沿柱内壁缓慢加入PBS液共约8ml，平整床面，待液面恰好与床 面重合时，关闭出口。 2. 加样与洗脱：用细长滴管吸取球蛋白溶液，在靠近床面处沿柱内壁 缓缓加入（注意勿破坏床面），打开出口，调节流速为5滴/分。待球蛋 白液完全进入床面后，先加少量PBS液（约1ml），待其全部进入床面， 再用PBS液进行洗脱。 3. 收集：取小试管6支编号。依次立即收集上述洗脱液，每管收集0.5ml （约12滴），共收集6管，关闭出口。 4. 检测：准备干净的白瓷板两块，分别于各凹槽内依次放相应管收集液 各1滴。向其中一块板各凹槽内加钠氏试剂1滴，有NH4+者出现棕红色沉 淀；向另一白瓷板各凹槽内加双缩脲试剂1滴，有蛋白质者呈现双缩脲颜 色（蓝紫色）反应。均以“+”或“”号记录之。 双缩脲反应呈色深且不含NH4+的收集管液即为已脱盐的球蛋白液。取 该液浓缩（每0.5ml加葡聚糖凝胶G25颗粒0.1g，摇匀后静置分层）备用。
有3种表示方法： 1、标准差 因分离过程中流出的曲线是正态分布曲线， 两侧拐点之间的距离为2个标准差。的计算：流 出峰到基线的距离为峰高的0.607倍，所以点峰 高0.607倍处为层析峰宽度的一半。大，说明组 分流出分散，层析峰宽度也大，是柱效不高的表现。 反之，小，表示组分在层析柱中集中，层析峰就 窄，柱效也高。 2、半峰宽() =2.354 3、峰宽(Wb) 是指通过层析峰两拐点作切线交于基线上 的截距。Wb=4。
tR n 5 .54 1 W 2
2
本实验采用硫酸铵分段盐析法将家兔免疫血清中 的球蛋白与其它蛋白质分离，再经凝胶过滤法除盐 即可得到比较纯的球蛋白，最后用醋酸纤维薄膜电 泳法鉴定纯度，纯度较高者只出现一条球蛋白区带 并观察免疫前后球蛋白的变化。 三、操作步骤 (一) 盐析 1. 取免疫家兔血清及正常家兔血清各2.0ml分别加 入一支口径较粗的小试管中，加PBS液2.0ml摇匀。 再逐滴加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2.0ml，边加边摇匀。 静置15min后，3000rpm离心10min。倾去上清液。 2. 将沉淀用1.0ml PBS液搅拌溶解，再逐滴加入饱 和硫酸铵液0.5ml，混匀。静置15min，3000rpm离心 10min。倾去上清液。沉淀用PBS液10滴搅拌溶解， 即为初步纯化的球蛋白溶液。
家兔免疫血清 球蛋白分离与纯度鉴定
一、目的要求
1. 了解层析原理 2. 掌握醋酸纤维薄膜电泳技术
二、实验原理
层析技术是近代生物化学最常用的分离技术之一。 它是利用混合物中各组分的理化性质(吸附力、分子形状 和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)的差异， 在两相运动中，不断地进行交换、分配、吸附及解吸附 等过程，可将各组分间的微小差异经过相同的重复过程 而达到分离。配合相应的光学、电学和电化学检测手段， 可用于定性、定量和纯化某种物质，其纯度高达99%。 层析法的特点是分离率、灵敏度(pg-fg级)、选择性均高 的一种分离方法。尤其适合样品含量少，而杂质含量多 的复杂生物样品的分析。 无论哪种层析均由固定相和流动相组成。固定相可 以是固体也可以是液体，但这个液体必须附载在某个固 体物质上，该物质称载体或担体(Support)。同样流动相 可以是液体也可以是气体。
五.柱效
无论哪一种层析过程都是一个连续过程，各组分 在流动相和固定相之间不断进行分配，但无法具体计 算在某一点上的平衡情况。现以柱层析为例说明，某 一组分随流动相经过一定距离后，流动相中某组分的 平均浓度与固定相的平均浓度达到分配平衡，完成这 一平衡所需要的层析柱的柱长称为板高或理论塔板等 效高度，用H表示。一定柱长(L)中含有多少板高(H)称 为理论塔板数(n)，即： (n：理论塔板数，L：柱长，H：板高) 显然，H愈小，n就愈大，表明组分在两相间分 配次数也愈多，分离效果就好，柱效就高。因而习惯 上以塔板数的多少来衡量柱效的高低。塔板数的理论 推导和计算较复杂，已有专门书籍介绍。其最终以数 学公式表示： (tR：保留值，：标准差，W：峰宽)
二、按操作方式不同分类
纸层析(Paper Chromatography) 以滤纸作为液体的载体， 点样后，用流动相展开，以达到组分分离目的。 薄层层析(Thin Layer Chromatography) 以一定颗粒度的 不溶性物质，均匀涂铺在薄板上，点样后，用流动相展 开，使组分达到分离。 柱层析(Column Chromatography) 将固定相装柱后，使样 品沿一个方向移动，以达到分离目的。
(三) 鉴定： 按醋酸纤维薄膜电泳的操作步骤，用小滴管吸取浓缩上清液8～10l点 样。并与血清样品同时电泳。将两种电泳图谱进行比较，判断纯度。 四、结果与计算 (一) r-球蛋白分离后6管收集液经检测结果记录如下： 双缩脲反应呈色深且不含NH4+的收集管液即为已脱盐的球蛋白液， 留作电泳鉴定。 (二) 蛋白质醋酸纤维薄膜电泳鉴定r-球蛋白纯度（与血清蛋白电泳对 照）。 五、注意事项 (一) 盐析时应逐滴加入饱和硫酸铵，边加边摇，静置要充分； (二) 装柱时柱内要严防断层与气泡，凝胶床面要平整； (三) 样品进入床内，打开出口应立即收集； (四) 作电泳时应注意的事项请参见第7章实验2。
思考题 1. 血清r-球蛋白分离与纯度鉴定的原理?
层析可分哪几类？
3．简述离子交换层析和凝胶层析的原理? 4．主要有哪几个操作步骤?
层析技术的分类
一、按层析原理分类
吸附层析(Absorption Chromatography) 固定相是固体吸附 剂，利用各组分在吸附剂表面吸附能力的差别而进行分 离。 分配层析(Partition Chromatography) 固定相为液体，利用 各组分在两液相中分配系数的差别或溶解度不同使物质 分离。 离子交换层析(Ion Exchanger Chromatography) 固定相为 离子交换剂，利用各组分对离子交换剂的亲和力不同而 进行分离。 凝胶层析(Gel Chromatography) 固定相为多孔凝胶，利用 各组分在凝胶上受阻滞的程度不同而进行分离。 亲和层析(Affinity Chromatography) 根据生物特异性吸附进 行分离，固定相只和一种待分离组分有高度特异性的亲 和能力而结合，而与无结合能力的其他组分分离。