质粒DNA的提取及电泳检测
质粒DNA的提取与电泳鉴定_百替生物
质粒DNA的提取与电泳鉴定质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术，但提取方法有很多种，以下介绍一种最常用的方法：碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。
方法如下：1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。
2、37℃振荡培养过夜。
3、取1.5ml菌体于Ep管，以4000rpm离心3min，弃上清液。
4、加0.lml溶液I(1％葡萄糖，50mM/L EDTA pH8.0，25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合。
5、加入0.2ml溶液II(0.2 mM/L NaOH，1％SDS)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。
6、加入0.15m1预冷溶液III(5 mol/L KAc，pH4.8)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。
7、以10，000rpm离心20min，取上清液于另一新Ep管8、加入等体积的异戊醇，混匀后于?0℃静置10min。
9、再以10，000rpm离心20min，弃上清。
10、用70％乙醇0．5ml洗涤一次，抽干所有液体。
11、待沉淀干燥后，溶于0．05mlTE缓冲液中煮沸法1、将1.5ml培养液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ离心30秒。
2、弃上清，将管倒置于卫生纸上几分钟，使液体流尽。
3、将菌体沉淀悬浮于120ml STET溶液中, 涡旋混匀。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 涡旋振荡3秒钟。
5、将eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量离心机4℃下12000g离心10分钟。
7、用无菌牙签从eppendorf管中去除细菌碎片。
8、取20ml进行电泳检查。
质粒DNA的大量提取和纯化在制作酶谱、测定序列、制备探针等实验中需要高纯度、高浓度的质粒DNA,为此需要大量提取质粒DNA。
大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化,常用柱层析法和氯化绝梯度离心法。
实验八质粒DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测
当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复 pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两 条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准 确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此 已完全分开，复性就不会那么迅速而准确， 它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体 DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复 合物等一起沉淀下来而被除去。
2.简要叙述酚氯仿抽提ＤＮＡ体系后出现的现象及其成 因?
3.沉淀ＤＮＡ时为什么要用无水乙醇及在高盐、低温条 件下进行？
质粒3种构型
1.超螺旋的共价闭合环状质粒DNA(covalelltly closed circular DNA，简称cccDNA); 2.开环质粒DNA，即共价闭合环状质粒DNA的一条链 断裂，(open circular DNA，简称ocDNA); 3.线形质粒DNA，即共价闭合环状质粒DNA 两条链发 生断裂(linear DNA，简称LDNA)。
2. 琼脂糖凝胶电泳检测DNA
一、实验目的
通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测 DNA的方法和技术。
二、实验原理
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子 筛效应。DNA分子在高于等电点的pH 溶液中带负 电荷，在电场中向正极移动。由于糖—磷酸骨架在 结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有 等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方 向移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速 度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构 型。具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度 不一样，可进行分离。DNA分子的迁移速度与相对 分子质量的对数值成反比关系。
２．取1.4 ml培养液至Eppendorf管中，12000rpm离心30 秒，弃上清，取沉淀。
３．将细菌沉淀悬浮于100µl预冷溶液Ⅰ中，振荡混匀。 ４．加入200µl溶液Ⅱ，缓慢颠倒离心管，混匀（勿剧烈
质粒dna提取及电泳检测实验报告
质粒dna提取及电泳检测实验报告质粒DNA提取及电泳检测实验报告引言质粒DNA提取及电泳检测是生物学实验中常用的技术手段，用于分离和检测质粒DNA样本中的目标序列。
本实验旨在通过提取质粒DNA并进行电泳检测，验证提取的质粒DNA的纯度和完整性。
材料与方法1. 材料：- 质粒DNA样本- 细菌培养液- 细菌裂解液- 氯仿- 异丙醇- TE缓冲液- 琼脂糖- TAE缓冲液- DNA分子量标记物2. 方法：1. 质粒DNA提取：a. 将细菌培养液中含有质粒DNA的细菌进行离心，收集细菌沉淀。
b. 加入适量的细菌裂解液，裂解细菌细胞，释放质粒DNA。
c. 加入氯仿，离心分离上清液和有机相。
d. 收集上清液，加入异丙醇，使DNA沉淀。
e. 用TE缓冲液溶解DNA，得到质粒DNA提取物。
2. 质粒DNA电泳检测：a. 准备琼脂糖凝胶，加入TAE缓冲液，制备电泳槽。
b. 加载质粒DNA提取物和DNA分子量标记物于琼脂糖凝胶孔中。
c. 连接电源，进行电泳分离。
d. 观察电泳结果，记录质粒DNA的迁移情况和分子量。
结果与讨论通过质粒DNA提取及电泳检测实验，我们成功地提取到质粒DNA，并进行了电泳分离和检测。
在电泳结果中，我们观察到质粒DNA 片段在凝胶中呈现出带状分布，且迁移距离与分子量呈正相关关系。
根据电泳结果，我们可以初步判断质粒DNA的纯度和完整性。
如果质粒DNA在电泳过程中呈现单一的清晰带状分布，且没有明显的附加杂带，说明质粒DNA的纯度较高，没有明显的污染物。
而如果质粒DNA呈现模糊或多条不清晰的带状分布，可能存在其他DNA片段或杂质的污染。
通过电泳结果中质粒DNA片段的迁移距离，我们可以估算出质粒DNA的大致分子量。
通过与DNA分子量标记物的比对，我们可以初步判断质粒DNA的大小和可能的构造。
这对于进一步的研究和应用具有重要意义。
结论通过质粒DNA提取及电泳检测实验，我们成功地提取到质粒DNA，并验证了其纯度和完整性。
实验一质粒DNA提取纯化、DNA电泳检测
实验⼀质粒DNA提取纯化、DNA电泳检测实验⼀质粒DNA提取纯化、DNA电泳检测⼀、实验⽬的1．掌握质粒DNA的制备的原理和⽅法2．了解质粒琼脂糖凝胶电泳分离⼆、实验原理1．质粒DNA的制备⽅法质粒(Plasmid)是独⽴存在于染⾊体外、能⾃主复制并能稳定遗传的⼀种环状双链DNA 分⼦，分布于细菌、放线菌、真菌以及⼀些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。
细菌质粒⼤⼩介于1～200Kb之间，是应⽤最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利⽤宿主细胞的复制机构合成质粒⾃⾝的DNA。
质粒DNA的制备包括3个步骤：①培养细菌，使质粒DNA⼤量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒DNA。
主要⽅法包括：碱裂解法：0.2molNaOH+1%SDS；煮沸裂解法：沸⽔煮沸40秒；SDS裂解法：10%SDS，⼀般⽤于质粒⼤量提取。
在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分⼦⼤⼩、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的⽤途进⾏选择。
本实验选择碱裂解法提取质粒DNA。
2．碱裂解法质粒DNA具特定的形态结构，在特殊的环境条件下，如加热、极端pH值、有机溶剂、尿素、酰胺试剂等会导致质粒DNA变性，去除变性条件⼜可以使DNA复性。
碱裂解法根据共价闭合环状质粒DNA和线性染⾊体DNA在拓扑学上的差异来分离质粒DNA。
SDS是⼀种阴离⼦表⾯活性剂，它既能裂解细菌细胞，⼜能使细菌蛋⽩质变性。
SDS 处理细菌细胞后会导致细菌细胞壁破裂，从⽽使质粒DNA及细菌基因组DNA从细胞中同时释放出来。
细菌环状基因组DNA在操作过程中会断裂成线状DNA分⼦，在pH值介于12.0～12.5这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开⽽被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕结合在⼀起。
当加⼊pH4.8⼄酸钾缓冲液时，pH恢复⾄中性，因为共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在⼀起，因此复性迅速⽽准确，⽽线性的染⾊体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那么迅速⽽准确，它们相互缠绕形成不溶性⽹状结构，⽽复性的质粒DNA恢复原来构型，保持可溶性状态。
质粒dna的提取与鉴定实验报告
质粒DNA的提取与鉴定实验报告引言质粒DNA的提取与鉴定是分子生物学实验中常用的技术之一。
质粒DNA是一种圆形的DNA分子，广泛存在于细菌和真核生物中。
提取和鉴定质粒DNA能够帮助研究人员进行基因克隆、基因表达调控等实验。
本实验旨在介绍质粒DNA的提取与鉴定步骤，以供初学者了解和学习。
实验材料•细菌培养物•质粒DNA提取试剂盒•去离子水• 1.5 mL离心管•微量离心管•离心机实验步骤步骤一：培养细菌并收获培养物1.取一支含有目标质粒的细菌培养物，将其接种至含有适当抗生素的培养基中。
2.在37℃恒温摇床上培养过夜，确保细菌得到充分生长。
步骤二：收获细菌培养物1.将培养基离心机中以12000转/分钟离心2分钟，以沉淀细菌细胞。
2.弃去上清液，将细菌细胞沉淀保留在离心管中。
步骤三：质粒DNA的提取1.选择一款质粒DNA提取试剂盒，按照说明书中的步骤操作。
不同试剂盒所用方法有所差异，详细操作请参照试剂盒说明书。
2.在质粒DNA提取试剂盒提供的试剂中加入细菌细胞，充分混合。
3.通过离心将细菌细胞裂解，释放出质粒DNA。
不同试剂盒所用离心条件有所不同，一般为高速离心1-3分钟。
4.弃去上清液，留下含有裂解细胞的混悬液。
步骤四：质粒DNA的纯化1.将质粒DNA混悬液转移到新的离心管中。
2.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
3.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
4.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
5.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
6.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
7.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
8.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
9.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
10.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
11.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
12.使用去离子水溶解沉淀的质粒DNA，使其浓度适宜。
步骤五：质粒DNA的鉴定1.使用紫外可见光分光光度计测定溶解后的质粒DNA的浓度。
2.准备一份对照组，即只含有去离子水的样品。
质粒dna提取及电泳检测实验报告(一)
质粒dna提取及电泳检测实验报告(一)质粒DNA提取及电泳检测实验报告实验目的•提取质粒DNA并检测其纯度和浓度•进行电泳检测，分析质粒DNA的大小和完整性实验材料•培养基含有质粒DNA的细菌培养物•高纯度DNA提取试剂盒•离心管、移液器、显微镜等常规实验仪器设备实验步骤1.收取 mL培养基含有细菌的培养物样品，放入离心管中。
2.将离心管置于高速离心机中，以12000 rpm离心5分钟，使细菌沉淀于离心管底部。
3.弃掉上清液，轻轻地加入合适的缓冲溶液悬浮沉淀的细菌细胞。
4.加入适量的裂解液使细菌细胞裂解，使质粒DNA释放到溶液中。
5.加入蛋白酶K进行蛋白质降解，使DNA更易提取。
6.加入冷乙醇混合液，沉淀DNA。
7.使用离心机离心，将沉淀的DNA分离出来。
8.用缓冲液洗涤提取的DNA，去除杂质。
9.使用专门的仪器或试剂盒检测提取的质粒DNA的浓度和纯度。
10.备取质粒DNA样品，进行电泳检测。
结果与分析•通过电泳检测，可以观察到质粒DNA的带状图案。
•根据带状图案的迁移距离，可以初步判断质粒DNA的大小。
•如果带状图案清晰且没有模糊的杂带，说明质粒DNA的完整性良好。
•通过测量提取的质粒DNA的浓度和纯度，可以进一步评估实验结果的可靠性。
结论•本实验成功提取并检测了质粒DNA，并通过电泳检测初步分析了其大小和完整性。
•经测量，质粒DNA的浓度和纯度符合实验要求。
•本实验结果可应用于后续实验或研究中，为进一步分析质粒DNA 的功能提供了基础。
实验注意事项•操作过程需严格遵守实验室安全规范，避免接触有毒或有害物质。
•仪器设备使用前需检查并确保正常工作。
•实验室内要保持清洁，避免污染样品。
•测量和记录数据时，要仔细操作，确保准确性和可重复性。
参考文献（如果有的话，请列出相关参考资料）。
质粒DNA的提取纯化与电泳检测
法、羧基磷灰石柱层析法、质粒DNA释放
法、酸酚法等。
1 .碱裂解法提取质粒DNA
1.1原理
共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓
扑学上的差异来分离它们。
在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内，线
性的DNA双螺旋结构解开而被变性，共价闭合
接种含pUC-mT质粒的大肠杆菌到1.5ml含有60μg/ml Amp抗生素
的LB 液体培养基
37℃摇培过夜（10~12h）12000rpm,
3min
弃去上清液，倒立于滤纸之上，尽量去净上清。
加100μl Ⅰ液，涡旋震荡，充分混匀
配制适量的Ⅱ液
加200μl Ⅱ液，迅速轻轻混匀（以颠倒EP管5-10次为宜），
电泳介质相同（电泳液和凝胶）：
• 分子在电场中迁移的速度主要取决于
分子本身的大小和形状。
• 形状相似的分子的迁移速度主要与分
子量相关: 分子量越大，移动越慢。
凝胶板
（二）琼脂糖凝胶电泳介绍
琼脂糖:
是一种线性多糖聚合物，从红色海藻产物
琼脂中提取而来。
琼脂糖凝胶:
琼脂糖在水里（或电泳液）中加热到沸点
电泳缓冲液的组成。
5.溴化乙锭染料
Biblioteka EB:溴化乙锭（ 3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶溴盐
Ethidium Bromide，EB），EB能插入DNA分子碱基
对之间，导致EB与DNA结合。DNA吸收的260nm的紫
外光传递给EB，或者结合的EB本身在300和360吸收的
射线，均可在可见光区以590波长发射出来，呈橙红色。
离子交换层析法
质粒dna的提取及电泳检测实验报告
质粒dna的提取及电泳检测实验报告一、实验目的本实验的主要目的是学习质粒DNA的提取方法和电泳检测技术，并通过实验观察质粒DNA的提取情况和电泳检测结果。
二、实验原理质粒DNA的提取方法主要采用碱裂解法，通过将细胞裂解后，用酸性物质中和碱性物质，使DNA分离出来，最后用酒精沉淀纯化。
电泳检测是通过将DNA 样品置于琼脂糖凝胶上，加上电场后，DNA在凝胶中移动，通过电泳带电的原理，将DNA分离出来，从而观察DNA的大小和形状。
三、实验步骤1.准备样品：将含有目标DNA的菌落挑出放入EP管中，加入100μl TE缓冲液（10mmol/L Tris-HCl,1.0mmol/L EDTA,pH8.0），用微量移液器均匀混合。
2.制备裂解液：取10μl 0.25mol/L NaOH加入菌液中，轻轻摇匀，并立即加入200μl 1%SDS（十二烷基硫酸钠）液，翻转混匀。
3.裂解DNA：加入150μl NaOH-SDS溶液，翻转10次，置于80℃水浴中裂解细胞壁和细胞膜，20min后取出，加入150μl冷KAc/EDTA溶液（3mol/L KAc，pH5.2，0.5mol/L EDTA），翻转混匀，冰上静置5min。
4.离心沉淀：10000r/min离心10min，将上清液移至新的96孔板中，加入0.6倍体积的冰凉乙醇，反复翻转，置于-20℃上进行冷却，离心12000r/min 10min，去掉上清液，用95%乙醇洗涤沉淀物，最后用300μl TE缓冲液溶解沉淀DNA。
5.电泳检测：取相同浓度的DNA样品，加入琼脂糖，混合后加入电泳槽中，通电检测10min。
四、实验结果经过实验操作后，取出DNA样品，通过电泳检测，观察到有一条长度合适的条带，证明质粒DNA已经成功提取，并且检测结果与对照组差异不大，说明实验操作规范，结果可信。
五、实验结论本次实验通过碱裂解法成功提取了质粒DNA，并通过电泳检测技术检测到了DNA条带，证明提取质粒DNA的方法可行，同时也说明电泳检测是一种可靠的分子生物学技术，对于DNA分离和检测有着重要的应用价值。
质粒提取、纯化、电泳检测
质粒DNA的提取、纯化和电泳检测【实验目的】1、掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用；2、掌握碱变性法提取质粒DNA的方法；3、学习并掌握凝胶电泳进行DNA分离纯化的实验原理；4、学习并掌握凝胶的制备方法；5、学习并掌握凝胶中DNA的分离纯化方法；6、验证E.coli DH5α与E.coli DH5α（pUC19）在含有氨苄培养基上的生长情况并了解其原理。
【实验原理】1、携带外源基因并将外源基因导入宿主细胞，使之进行扩增和表达的媒介称为载体。
在基因工程操作中载体具有以下性质：A.具有自主复制的起点；B.具有多个限制性核酸内切酶的单一识别位点（多克隆位点）；C.具有可供选择的遗传标记；D.具有高拷贝数。
2、质粒 DNA 是原核生物除类核中的染色体 DNA以外 ,细胞质中含有的一个或多个能独立复制并稳定遗传的小环状双链 DNA 分子。
除酵母的杀伤质粒为RNA 外 , 迄今发现的所有质粒均为双链环状DNA 。
多数质粒只有几千个 bp但也有一些质粒达105bp 以上 ,一般分子量在 ( 4～100) × 106道尔顿范围内。
不同的质粒在细胞内的拷贝数不同。
细胞内含有1-3个拷贝的质粒为低拷贝质粒（严紧型复制），当质粒数在10个拷贝以上，为高拷贝质粒（松弛型复制），用于载体构建质粒多为松弛型。
3、pUC19质粒大小约为2.69kb，含有以下构件：来自于E.coli质粒ColE1的松弛型复制起点；氨苄青霉素抗性基因（Amp r）；E.coliβ-半乳糖苷酶基因（LacZ）的启动子及编码β-半乳糖苷酶的DNA序列；多克隆位点（MCS）区段。
图1.pUC18/pUC19质粒图谱4、质粒在细胞内以共价闭合环状DNA的形式存在，呈超螺旋状态（cccDNA）。
在抽提质粒DNA的过程中，由于各种因素影响，使超螺旋的共价闭合环状结构的质粒DNA的一条链断裂，变成开环DNA(ocDNA)，若两条链发生断裂则转变为线状DNA（L DNA）。
实验六、大肠杆菌质粒DNA的提取与电泳检测
实验步骤
2.质粒DNA的提取（碱裂解法） ①将收集的细菌沉淀悬浮于100μ l冰预冷的溶液Ⅰ中，强
烈振荡混匀； ②加入200ul新配的溶液Ⅱ于细菌悬液中，迅速颠倒离心管
5次（不应振荡），以混合内容物，室温放置5min或冰上 放置3min. ③加入150μ l预冷的溶液Ⅲ，盖紧管口，颠倒离心管5～10 次，使溶液Ⅲ在黏稠的细菌裂解物中分散均匀，随后将 管置于冰上5～10min。
实验原理
同一质粒DNA的不同构型尽管相对分子质量相同， 但在琼脂糖凝胶电泳中的电泳迁移率却是不同的。一 般情况下，泳动速率由快至慢依次为：超螺旋质粒 （SC）、线性质粒（L）、开环质粒（OC）。 质粒DNA的提取方法较多，要根据宿主菌和质粒的 特性选择适合的提取方法。目前常用的质粒提取方法 有：碱裂解法、煮沸法。 几种方法的提取流程是一样的：培养细菌扩增质粒 →收集菌体裂解细胞→分离和纯化质粒DNA。
（2）溶液Ⅱ：0.2mol/L NaOH 1% SDS（pH值12.6）
（3）溶液Ⅲ：5mol/L KAc 60ml 冰乙酸 11.5ml 水28.5ml（pH4.8）
（4）LB培养基 （5）琼脂糖 （7）1×TAE电泳缓冲液（pH 8.0）：10 mmol/LTris·Cl
1 mmol/L EDTA （8）上样缓冲液（溴酚蓝 （9） 溴化乙锭（1mg/ml）
电泳结束后取出胶膜，使用凝胶成像系统拍照,观察。对 比标准DNA条带和未知DNA条带，观察其带型和迁移距离， 即可获得未知样品的浓度、纯度和相对分子质量大小。
质粒DNA 电泳检测过程示意图称脂糖加TAE灌胶
凝固
点样
电泳
加热溶解
加EB
放入电泳槽
加溴酚蓝
观察拍照
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实验质粒DNA的提取及电泳检测
一实验目的
通过本实验学习掌握碱裂解法提取细菌质粒DNA。
二实验原理
1. 细菌中有两种DNA，即染色体DNA和质粒DNA。
2. 质粒DNA的提取方法有三种：碱裂解法，煮沸法，去污剂（如Triton和SDS）裂解法。
3. 碱裂解法比较剧烈，可破坏碱基配对，使宿主细胞DNA变性，共价闭合环状DNA由于空间缠绕，两条链不会彻底分开。
当外界条件到达复性条件时，质粒DNA的双链又迅速恢复原状，而较大的线性染色体DNA难以复性。
三实验材料：转化后的细菌(含有质粒的大肠杆菌)
四、实验用具和药品
1. 实验用具:
摇床，离心机，移液器及枪头，玻璃试管（15mL）及塞子，离心管（）
2. 实验试剂：
（1）溶液I
50 mmol/L 葡萄糖
25 mmol/L 三羟甲基氨基甲烷（Tris）Tris·HCl（）
10 mmol/L 乙二胺四乙酸（EDTA）（）
（2）溶液II
L NaOH，2%SDS，用前等体积混合
（3）溶液III 5 mol/L 乙酸钾60ml
冰乙酸
水
（4）TE 缓冲液
10 mmol/L Tris·HCl（）
1 mmol/L EDTA（）
（5）70%乙醇（放-20℃冰箱中，用后即放回）
（6）加样缓冲液（6X）：40%蔗糖、%溴酚兰
（7）电泳缓冲液：L Tris-硼酸 L EDTA （TBE buffer）
电泳缓冲液贮存液：5X：54g Tris碱、硼酸、20ml L EDTA（）
五实验步骤
（一）细菌繁殖
挑取白色的单菌落若干，转移到3mL液体LB培养基(附加100mg/ml Amp ),37℃过夜振荡（200r/min）培养。
（二）菌体收集
将过夜培养的菌体转入离心管，离心30sec 5000r/min；弃上清提取质粒
（三）质粒提取
方法一：碱裂解法提取质粒DNA
1．.将上述沉淀重悬于250μL冰预冷的溶液Ⅰ中，剧烈震荡；
2．加入250μL溶液Ⅱ，盖紧管口，快速颠倒离心管5~10次；
3．加入350μL冰预冷的溶液Ⅲ，盖紧管口，温和地颠倒离心管5~10次；9000r/min 离心5min上清转移到另一新离心管中；
4．加等体积氯仿，振荡混合，静置，9000r/min离心5min，上清转移到另一新离心管中；
5．加入1/10体积3mol/L的醋酸钠和2倍体积的乙醇，充分混匀，静置5min；9000r/min离心5min；
6．弃上清，用70％ethanol洗涤；
7．加30μLTE溶解，-20 ℃保存。
方法二：试剂盒提取方法
1.离心收集的菌体中加入含RNAase的溶液Ⅰ250μL，重悬菌体，不应留有小的菌块；
2. 加溶液Ⅱ250μL，轻轻颠倒离心管4-6 次，使菌体充分裂解，至溶液澄清；
3. 加入350μL冰预冷的溶液Ⅲ，温和并充分地上下翻转混合6-8 次；
4. 12000r/min离心10min；
5. 将上清转移到DNA结合管（置于2 ml 离心管中），12000r/min离心1min，弃滤液；
6. 将制备管置回离心管，加入去蛋白试剂500μL，12000r/min离心1min，弃滤液；
7.将制备管置回离心管，加洗涤液700μL，12000r/min离心1min，弃滤液；以
同样的方法再用700μL洗涤液洗涤一次，弃滤液。
8. 将制备管置回2 ml 离心管中，12,000×g 离心1 min，去除残余的洗涤液；
10 将DNA结合柱放入另一个新的离心管中，在制备管膜中央加60-80μL洗脱液或去离子水，室温静置1 min。
12,000×g 离心1 min。
（四）检测提取DNA质量的电泳检测。
取4ul质粒DNA+2ul加样缓冲液+6ul ddH2O；
配制1%的琼脂糖凝胶
电泳30min，EB染色，拍照。
注意事项：氯仿对眼睛、皮肤、粘膜及呼吸道都有刺激作用，它是致癌剂并可损伤肝脏和肾脏，操作时需戴手套、口罩。
六实验作业
1. 思考本实验的关键步骤是什么
2. 琼脂糖电泳鉴定质粒DNA时，能看到几条带，快慢顺序是什么
3. 附上电泳图片。