高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量-药学论文-基础医学论文-医学论文
高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林含量
高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林含量本文采用高效液相色谱法（HPLC-VWD）对阿司匹林肠溶片中成分阿司匹林进行测定，对方法的系统适用性试验、特异性试验、精密度试验、检测限、定量限、线性关系和线性范围考察、重复性试验、准确度试验（加样回收试验）进行验证，证实本方法确实可靠。
本方法可测定浓度在0.999862mg/mL-0.01999724 mg/mL间的阿司匹林，检测下限可达0.1ug/mL。
标签：阿司匹林;HPLC-VWD;方法验证阿司匹林肠溶片的质量标准中，监测阿司匹林肠溶片中的阿司匹林含量是一项重要指标[1]。
本文采用高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中的阿司匹林，分别对系统适用性试验、特异性试验、精密度试验、检测限、定量限、线性关系和线性范围考察、重复性试验、准确度试验（加样回收试验）进行验证[2]。
一、仪器与材料1.1 样品阿司匹林肠溶片（25mg）市售样品。
1.2 仪器及试药高效液相色谱仪：Thermo Fisher Ultimate 3000（VWD检测器）。
超声仪：上海科导SK7210LHC超声仪，35KHz。
色谱柱：Welch Xtimate C18（5um，150×4.6mm）。
0.45um有机性样品滤膜。
天平：赛多利斯电子天平（BSA224S-CW）（100g，0.01mg;220g，0.1g）;梅特勒-托利多电子天平（MX5）（3g，0.001mg）。
试剂：甲醇，色谱级，德国默克，I866432 601。
乙腈：色谱纯，德国默克，JA050820。
四氢呋喃，色谱纯，德国默克，I826801615。
冰醋酸，分析纯，国药集团化学试剂有限公司，20140326。
水，为GB/T6682中规定的一级水。
阿司匹林，中国食品药品检定研究院，批号：100113-201405，纯度：99.8%。
水杨酸，中国食品药品检定研究院，批号：100106-201104，纯度：99.9%。
高效液相法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林含量
ｒ ｐｄ，ａ ｃ ｒ ｔ ａｉ ｃ ｕ ａｅ，ａ ｄ ｇ ｏ ｘ ｌ ｓｖｔ ． ｎ ｏ ｄ ｅ ｃｕ ｉｉｙ
Ｋ ｅ ｗ ｏ ｄｓ ａ ｐｉｉ ｙ ｒ ｓ ｒｎ；ｃ ｎ ｅ ｔｍｅ ｓ ｒ ｍｅ ； ｈ — ｅ ｏ ｍａ ｃ ｉｕｉ ｈ ｏ ｔｇ ａ ｈ ｏ ｔ ｎ ａ ｕ ｅ ｎｔ ｉｐ ｒ ｒ ｎ ｅ ｌｑ ｄ ｃ ｒ ｍａｏ ｒ ｐ ｙ ｆ
Ａｂｓｒ ｃ Ｉ ｏ ｄ ｒ ｏ ｓａ ｌｓ ａ ｔａ ｔ ｎ ｒ ｅ ｔ ｅ ｔｂ ｉｈ ｍ ｅｈ ｄ ｏ ｔ ｏ ｔ ｍｅ ｓ ｒ ａ ｐ ｒｎ ｏ ｅ ｔ ａ ｕ ｅ ｓ ｉｉ ｃ ｎｔｎ ｗｉｈ ｔ ｈｉｐ ｒｏｍａ ｅ ｉ ｕ ｄ ｈ ｏ ｔｇ ａ ｈｙ － ｅ ｆｒ ｎｃ ｌｑ ｉ ｃ ｒ ｍａｏ ｒ ｐ
郑 凯 ，潘延 宁
（ 阳 市 药 品检 验 所 ， 宁 朝 阳 １２０ 朝 辽 ２ ００）
摘 要 建 立 阿 司 匹林 片 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ含 量 测 定 方 法 。采 用 Ｋ ｏ ａ ｉ Ｃ ８ １ ０ ｍｍ× ． ｍ， ） ｒｍ ｓ ｌ（ １ ５ ４ ６ｍ ５ 色谱 柱 ， 乙腈 ． 以 四氢 呋 喃 一 醋 酸 一 （ ３： ５： １ 为 流动 相 ； 测 波 长 为 ２ ０ ｎ 流速 １ ０ ｍ ／ ｎ 进 样 量 ２ Ｌ， 温 ： 冰 水 ２ ５： ６ ） 检 ８ ｍ； ． Ｌ ｍｉ ； ０ 柱 室
ｗｉｈ ＨｉＰｅ ｆ ｒ ａ ｃ ｑｕ ｄ Ｃｈｒ ｍ ａ ｏ ｒ ｐｈ ｔ － ｒ ｏ ｍ ｎ ｅ Ｌｉ ｉ ｏ ｔｇ ａ ｙ
Ｚ ＥＮＧ Ｋａ ，ＰＡＮ Ｙａ ｎ ｎｇ Ｈ ｉ ｎ— ｉ
（ｎｔ ｆＤ ｕ ｎ ｅｔ Ｄｅｃ ｆＣ ａｙｎ ｉ ， ｈ ｏａ ｇ１２ ０ ，Ｌａｎｎ ｒ ． Ｉｓ ．ｏ ｒｇＩｓ ｃ ｐ ．＆ ｔ ｔ ｅ ．ｏ ｈ ｏａｇＣｔ Ｃ ａｙｎ ２ ０ ０ ｉｏ ｉ Ｐｏ ） ｙ ｇ ｖ
高效液相色谱法测定阿司匹林片的含量
高效液相色谱法测定阿司匹林片的含量
一、目的
1.熟悉HPLC法测定的原理及操作。
2.掌握外标法测定阿司匹林片含量。
二、仪器与试药
1.仪器
美国PE型高效液相色谱仪Mettler AL204电子天平
容量瓶规格：50mL、100mL 刻度移液管规格：5mL
漏斗定量滤纸（直径10cm）
超声仪
2.试药
阿司匹林片规格：0.3g 阿司匹林对照品冰醋酸
氢氧化钾色谱甲醇超纯水
三、实验内容
1.色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%冰醋酸（50：50）为流动相；流速为每分钟约1.0mL；检测波长280nm。
理论板数按阿莫西林峰计算应不低于1500。
2.对照溶液配制：取阿莫西林对照品适量，精密称定后，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含50μg的溶液
3.样品测定：精密称取细粉适量（约相当于阿司匹林细粉0.05g），置50mL量瓶中，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取续滤液3mL,置50 mL量瓶中，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，取续滤液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿司匹林对照溶液同法测定。
按外标法以峰面积计算出样品中阿司匹林（C9H8O4）的含量。
本品含阿莫西林（C9H8O4）应为标示量的93.0%～107.0%。
四、注意事项：
1.高效液相色谱仪严格按照仪器操作规程操作。
2.小心进样操作，以免进样失败或损坏进样器。
五、思考题
高效液相色谱仪操作的注意事项有哪些？
六、参考文献
《中国药典》2010年版二部，285，化学工业出版社。
谈如何采用高效液相色谱测定药物中阿莫西林含量
４ 、 研 究者应该将含有阿莫西林 的标准溶液 放入到测定 的药物 中， 配置 过 程 中， 浓度 必须进行达 到精确 的程度 ， 按照浓度 的高、 中、 低 来区分药物 样 品， 此外， 研究者还需要将样 品根据指定 的规范标准来展开测定工作 。
５ 、 研究者按照指定 的配制方法来配 制阿莫西林血浆 ， 也需要控 制好浓 度， 另外 ， 研究者应该将等 到测量 却未 知的血浆样品添加蒸馏水 ， 通 常要添
通常情况下都会选择应用 高效液相色谱法来 测定阿莫西林含量 ， 以此为依 据进行进一步 的研究 。
一
具有 比较强 的流动 性， 因此研 究者应该添 加一定量 的乙腈 ， 这样 能够提 高 色谱柱的稳定性 ， 也可 以确保测定的最终结果稳定。 在添加 乙腈时 ， 研究者 必须控制好用量 ， 不宜过大 ， 否则阿莫 西林 出峰时 间将 会大受影 响， 此外 ， 样品也会 出现大量 的杂质 ，这使得杂质峰与林 峰会 出现严 重的分离情况 。 为 了可能避 免这一 问题 ， 研 究者还需要 在样品溶液 中， 添加一定 量的三 乙 胺， 这 样 就 能 够 确 保 出峰 完 整 ， 降 低 测 定 结 果 误 差 。 另外 ， 研 究 者 测 定 过 程 中， 还需要控制 流动相， 以此 确 保 流 动 相 Ｐ Ｈ值保持在 指定的范围之 内， 进 而使得流动 相能够进行分离 ， 更加 明确 的区分阿莫 西林主峰 ， 使 得主峰停 留超 过 ｌ ｍｉ ｎ 。 在空 白药物 中加入阿莫西林标准液 ， 不 同浓度 的样 品会呈现 出不 同的
钾一０ ． １ ｍｏ ｌ ｌ三 乙 胺 一 乙 腈 （ ８ ０ ０ ： １ ２ ０ ： ７ ） ， 用 磷酸调 ｐ Ｈ至 ２ ． ５ ； 流速 １ ． ０ ｍＩ ／ ｍｉ ｎ ； 柱温 ３ ０ ｏ Ｃ； 检测波长 ２ ２ ０ ｎ ｍ。
阿司匹林药物的高效液相色谱法测定
实验四阿司匹林药物的高效液相色谱法测定[目的要求]1、了解高效液相色谱法分离有机化合物的基本原理及操作条件；2、知道高效液相色谱仪的基本结构及作用；3、掌握色谱定量、定性分析的方法。
[基本原理]高效液相色谱法是20世纪70年代急剧发展起来的一项高效、快速的分离分析技术。
液相色谱法是指流动相为液体的色谱技术。
在经典的液体柱色谱法基础上，引入了气相色谱法的理论基础，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化。
这种柱色谱技术称做高效液相色谱法。
它可用来作液固吸附，液液分配，离子交换和空间排阻色谱（即凝胶渗透色谱）分析，应用非常广泛。
据估计，世界上几百万种化合物中除20%宜用气相色谱(Gc) 分离分析外，其余80%的化合物，包括大(高)分子化合物、离子型化合物、热不稳定化合物以及有生物活性的化合物都可以用不同模式的HPLC ( ~ HiE相HPLC、反相HPLC、离子交换色谱和离子色谱、体积排除色谱、亲合色谱等等) 进行分离分析。
而且高效液相色谱法还具有以下几个突出的特点:（1）分离效能高由于新型高效微粒固体相填料的使用，液相色谱填充柱的柱效可达5000~30000块/m理论塔板数，远远高于气相色谱填充柱的1000块/m 理论塔板数的柱效；（2）选择性高由于液相色谱具有高柱效，并且流动相可以控制和改善分离过程的选择性，因此高效液相色谱不仅可以分析不同类型的有机化合物及其同分异构体，还可以分析在性质上极为相似的旋光异构体；（3）检测灵敏度高高效液相色谱法使用的检测器大多数都具有较高的灵敏度，紫外检测器灵敏度可达10-9g，荧光检测器灵敏度可达10-12g；（4）分析速度快由于高压泵的使用，相对于经典液相（柱）色谱法其分析时间大大缩短。
高效液相色谱仪器系统的主要部件:储液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理装置（色谱工作站）：(1) 输液系统输液系统要为HPLC仪器提供流量恒定、准确、无脉冲的流动相，流量的精度和长期的重复性要好，同时还要提供精度好、准确度高、重现性好的多元溶剂梯度。
高效液相色谱法在阿司匹林检验中的应用及对不确定度标准的估算
检测认证高效液相色谱法在阿司匹林检验中的应用及对不确定度标准的估算■ 马文学（甘肃省临夏州药品检验检测中心）摘 要：目的：研究利用高效液相色谱法检验阿司匹林的具体应用，并且分析不确定度的标准。
方法：在阿司匹林的检验中应用高效液相色谱法，选择的仪器为岛津安捷伦液相色谱仪。
结果：阿司匹林肠溶片在1.964min为峰值。
此外可知，重复性测定结果RSD是0.68%，阿司匹林浓度处于0.01mg/mL到0.05mg/mL范围之间具有良好的线性关系，平均回收率是101.80%。
结论：由此可知，高效液相色谱法测定阿司匹林含量方便简单、操作便捷，省时省力，结果准确可靠，专属性高，重复性好，稳定性高，回收率高，适用范围广，所以可以在临床上进行推广。
关键词： 高效液相色谱法，阿司匹林，检验，应用，不确定度标准，估算DOI编码：10.3969/j.issn.1002-5944.2021.04.040The Application of HPLC in Aspirin Test and Uncertainty StandardAssessmentMA Wen-xue(Linxia Drug Test and Inspection Center, Gansu）Abstract: Objective: To study the application of high-performance liquid chromatography (HPLC) in the test of aspirin and analyze uncertainty standards. Method: Shimadzu and Agilent liquid chromatograph was adopted for the test of aspirin. Result: Aspirin enteric-coated tablets reached the peak after 1.964 min. RSD was 0.68%. Good linear relation showed at the aspirin concentration of 0.01-0.05 mg/mL. Average recovery was 101.80%. Conclusion: HPLC is simple to operate in the test of aspirin, with reliable results, high repeatability, specificity, stability and recovery. It is worthy of clinical promotion.Keywords: high-performance liquid chromatography, aspirin, test, application, uncertainty standard, assessment阿司匹林在临床上的应用率很高，而且应用范围很广，在临床上占据非常重要的地位[1]。
[药物分析] 实验6 高效液相色谱法用于阿司匹林肠溶片中游离水杨酸检查和阿司匹林含量测定
![[药物分析] 实验6 高效液相色谱法用于阿司匹林肠溶片中游离水杨酸检查和阿司匹林含量测定](https://img.taocdn.com/s3/m/7a906d70b9d528ea80c779d5.png)
【思考题】1.供试品溶液制备中，为什么要选用1%冰醋酸甲醇溶液作为溶剂？为什么供试品溶液需要临用新制？为什么供试品溶液需要过滤，取续滤液使用？除滤膜过滤外，还有什么方法可以达到同样的目的？①防止阿司匹林水解。
②由于供试品溶液室温下不稳定, 因此需要临用新制。
③过滤是为了除去其中的不溶性辅料等杂质。
续滤液指过滤时去掉前几滴后的滤液，可以保证待测药物的浓度与均一度。
前面的部分溶液需要对滤膜润洗，因而影响了药物的浓度，最终影响峰面积或峰高。
④………………2.为什么流动相需要过滤和超声波脱气？过滤是为了除去流动相中的杂质，保护系统和柱子。
主要是过滤掉不溶性微粒和气体，（尤其是有机相和水相混合的时候，会产生大量的气泡），防止堵住仪器和色谱柱。
脱气是为了除去溶解在流动相中的气泡。
防止气泡影响色谱柱的分离效率、检测器的灵敏度、基线的稳定性。
此外，溶解在流动相中的氧可以与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）发生反应。
溶解气体也会引起溶剂pH值的变化，从而导致分离或分析结果的误差。
3.系统适用性试验的目的是什么？系统适应性试验参数和合格标准是建立基础是：仪器，电子元件，分析操作和待测样品是个不可分割的整体。
系统适应性实验确保系统在样品分析的时候能很好地运行。
在分析方法中应当要包括适当的系统适应性合格标准。
按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子。
色谱分析做系统适用性试验主要是为了确定分析使用的色谱系统是有效的、适用的。
系统适用性通常用四个参数来确定系统的适用性：分离度，柱效，重复性和拖尾因子。
其中分离度和柱效是两个最重要，也更具有实用意义的参数。
分离度是判断两物质在一个方法中分离的程度，虽然与柱效相关，但在衡量系统适用性时，强调的应该是分离度，只有当色谱图中仅有一个色谱峰或测定微量成分时，规定柱效才有其特殊重要性。
谈如何采用高效液相色谱测定药物中阿莫西林含量
关键 词 ： 高效液相色谱； 测定； 阿莫西林； 含量
阿莫西林是一 种常用 的抗生 素， 其在 临床 中有着广泛 的应 用 ， 具有 较 强的杀菌性， 可以穿透 细胞膜 ， 可以抑制细 菌的新陈代谢， 阿莫西林属于青 霉素药 品， 是一种内酰胺 类抗 生素， 也是药 品研制部 门重 点研究 的对象部 门还 未建立 完善的阿莫西林含量分析体 系， 使得药物中阿莫西林含 量 的研 究受到了制约。 本文对高效液相色谱法测 定药物 中阿莫西林的含量 进行 了研究， 希望对相 关药品研 究人 员提供一定帮助
１ 、 材料 与 方 法
１ ． １ 仪 器 与试 剂
Ａ ｇ ｉ ｌ ｌ ｅ ｎ ｔ １ １ ０ ０高效液相色谱 仪， 包括 Ｇ１ ３ ７ ９ Ａ脱气机 ， Ｇ１ ３ １ １ Ａ四元泵 ，
Ｇ１ ３ １ ３ Ａ 自动 进 样 器 ， Ｇ１ ３ １ ６ Ａ柱 温 箱 ， Ｇ１ ３ １ ５ Ａ Ｄ ＡＤ检 测 器 ， Ａ ． １ Ｏ ． Ｏ ２色 谱 工
作站 。阿莫西林标准 品， 批号 Ｋ ０ ２ ２ ０ ７ ０ ３ ， 含量 ８ ６ ． ８ ％， 中国兽医药 品监察所 提供 。乙腈 ， 色谱 纯； 其他试 剂均为分析纯 ； 超纯水 。
一
ｍｉ ｎ ； 柱温 ３ Ｏ ℃； 检测波长 ２ ２ ０ ｎ ｍ。
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高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量-药学论文-基础医学论文-医学论文
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阿司匹林肠溶片为非甾体类抗炎药，临床可用于抗血栓，也可用于治疗不稳定性心绞痛，是《国家基本药物目录》列入的品种。
本文采用高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量，该方法简单，快速，重现性好，回收率高，可用于该制剂的质量控制。
1 仪器与试药
1.1 仪器：大连依利特P230 型高效液相色谱仪；UV230+紫外可见检测器；手动进样器；超声仪（型号KQ5200E，功率200W，频率40KHz）；电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司，0.0001g）。
1.2 试药：阿司匹林对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100113）；阿司匹林肠溶片（亚宝药业太原制药有限公司，批号：131210；石家庄康力药业有限公司，批号：121037；神威药业集团有限公司，批号：1306072），甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱为Hypersil ODS2 柱（250mm4.6mm，5m）；流动相：甲醇∶0.5%乙酸溶液（37∶63）；流速：0.8mlmin-1；柱温：25∶；检测波长：267nm；理论板数按阿司匹林计不得少于3000。
2.2 溶液的制备：对照品溶液的制备：精密称取一定量阿司匹林对照品，置100ml 量瓶中，加1%醋酸甲醇溶解并定容制成100gml-1的对照品溶液。
供试品溶液的制备：取供试品（石家庄康力药业有限公司，批号：121037）约0.03g，精密称定，置100ml 量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液溶解并定容，过滤，取续滤液，作为供试品溶液。
阴性样品溶液的制备：按处方比例取辅料制成空白制剂，按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。
2.3 专属性实验：在2.1色谱条件下，分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各10L，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果显示阿司匹林与其他组分色谱峰可完全分离，且阴性样品无干扰，色谱图见图1。
【图1略】
2.4 线性范围：精密吸取对照品溶液（100gml-1）2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、15.0ml，分别置于10ml 量瓶中，用1%醋酸甲醇稀释至刻度，摇匀。
浓度分别为20、40、60、80、100、120 和150gml-1，在上述色谱条件下分别进样10L，测定峰面积A 积分值，以浓度（Cgml-1）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：A=5.0611C－11.278，r2=0.9991。
试验结果表明:阿司匹
林在20～150gml-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验：分别精密吸取对照品溶液（100gml-1）和供试品溶液（石家庄康力药业有限公司，批号：121037）各10L，连续进样6 次，分别测定其峰面积A，结果对照品溶液RSD 为1.4%，供试品溶液RSD 为1.5%。
结果表明：该方法精密度良好，符合含量测定要求。
2.6 稳定性试验：取供试品溶液（石家庄康力药业有限公司，批号：121037），分别于0、2、4、6、8、10h 进样，进样量为10L，测定峰面积，RSD 为1.2%。
结果表明：供试品溶液在10h 内稳定性良好，符合含量测定要求。
2.7 重复性试验：取供试品（石家庄康力药业有限公司，批号：121037）约0.03g，精密称定，共 6 份，分别按供试品溶液制备方法制备，并测定含量，平均含量，RSD 为1.1%。
结果表明：该方法的重复性好，符合含量测定要求。
2.8 加样回收试验：取已知含量的供试品（石家庄康力药业有限公司，批号：121037）6 份，每份约0.015g，精密称定，置量瓶中，分别精密加入阿司匹林对照品
3.6、
4.5、
5.4mg 各两份，按上述供试品溶液制备方法制备，分别测定，计算回收率。
结果平均加样回收率为101.2%，RSD 为0.94%。
结果表明：该方法的准确度良好，符合含量测定要求，见表1。
【表1】
2.9 供试品的测定：分别取三个不同批号供试品约0.03g，各两份，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备溶液，分别测定，记录峰面积，计算阿司匹林的含量。
供试品标示量均为25mg/片-1，按照《中国药典》2010 版二部的规定，阿司匹林肠溶片含阿司匹林应为标示量的95%～105%。
结果见表2。
【表2】
3 讨论
3.1 提取时间的选择：实验对超声提取的时间进行了考察，比较了30min、40min、50min 结果，实验结果显示，超声40min 已基本提取完全，故确定超声提取时间为40min。
3.2 流动相的选择：通过参考文献，比较了不同的流动相：甲醇∶0.5％乙酸溶液（20∶80）、甲醇∶0.2％磷酸溶液（27∶73）、甲醇∶乙腈∶0.7％磷酸溶液（26∶2∶72），结果表明：用甲醇∶0.5％乙酸溶液（37∶63）为流动相保留时间适合，分离效果好。
参考文献
[1]李克庆.测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量及游离水杨酸[J].中国药师，2006，9（10）：925-927.
[2]李飞玲.HPLC 与UV 法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林及
水杨酸含量[J].长治医学院学报，2011，25（1）：11-12.
[3]郑凯，潘延宁.高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林含量[J].微生物学杂志，2009，29（1）：110-112.
[4]徐新，廖思嘉，廖先智，等，高效液相色谱法测定阿司匹林含量[J].广州化工，2012，40（8）.。